Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen ở cây đậu nho nhe (vigna umbellata)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM VŨ THU TRANG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Ở CÂY ĐẬU NHO NHE (VIGNA UMBELLATA) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM VŨ THU TRANG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Ở CÂY ĐẬU NHO NHE (VIGNA UMBELLATA) Ngành: Di truyền học Mã số: 8.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hoàng Mậu Thái Nguyên - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ ii thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan nội dung trình bày luận văn kết nghiên cứu hướng dẫn trực tiếp GS.TS Chu Hoàng Mậu Các số liệu, kết sử dụng luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Vũ Thu Trang Xác nhận BCN Khoa Xác nhận cán hướng dẫn Nguyễn Thị Tâm GS.TS Chu Hồng Mậu Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới GS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện tốt giúp thực nghiên cứu hoàn thành luận văn thạc sĩ Tôi xin chân thành cảm ơn hỗ trợ Đề tài khoa học-công nghệ cấp Bộ Giáo dục & Đào tạo mang mã số B2017-TNA-38 GS.TS Chu Hồng Mậu làm chủ nhiệm Tơi xin cảm ơn thầy cô cán Bộ môn Sinh học đại & Giáo dục sinh học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu để hồn thành khóa học Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Tác giả luận văn Vũ Thu Trang Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ ii thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Lời đoan………………………………………………………… Lời ơn…………………………………………………………… Mục lục………………………………………………………………… Danh mục hình………………………………………………… Danh bảng……………………………………………………… Danh tắt……………………………………………… Mở ……………………………………………………………… Đặt vấn đề …………………………………………………… Mục tiêu nghiên cứu ……………………………………………… Nội dung nghiên cứu………………………………………… Chương Tổng quan tài liệu……………………………………… 1.1 Cây đậu Nho nhe………………………………………………… 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại, đặc điểm sinh học đậu Nho nhe…… 1.1.2 Giá trị dinh dưỡng giá trị sử dụng đậu Nho nhe 1.2 Nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học kỹ thuật nuôi cấy in vitro mô tế bào thực vật 1.2.2 Môi trường nuôi cấy tế bào thực vật……………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 1.2.3 Các yếu tố đảm bảo thành cơng q trình ni cấy mơ tế bào thực 13 vật………………………………………………………………… 1.3 Hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen họ Đậu 15 Chương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 18 2.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên 18 cứu……………………… 2.1.1 Vật liệu thực vật………………………………………………… 2.1.2 Hóa chất, 18 bị……………………………………………… thiết 18 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ iv thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 2.2 Phương pháp nghiên cứu………………………………………… 19 2.2.1 Phương pháp khử trùng hạt, tạo nuôi cấy in vitro 19 2.2.2 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ mô sẹo………………… 20 2.2.3 Tái sinh đa chồi đậu Nho nhe từ mầm chồi ngọn… .21 2.2.4 Môi trường rễ……………………………………………… .22 2.2.5 Ra chế độ chăm sóc……………………………………… 23 2.2.6 Phương pháp xử lý kết tính tốn số liệu………………… 24 Chương Kết thảo luận……………………………… 25 3.1 Kết nghiên cứu khử trùng hạt đậu Nho nhe………………… .25 3.2 Tái sinh in vitro đậu Nho nhe…………………………………… 28 3.2.1 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ mô sẹo………………………… 28 3.2.2 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ nách mầm chồi ngọn… 29 3.2.3 Ảnh hưởng BAP đến tái sinh chồi từ chồi in vitro 33 3.2.4 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi in vitro……… 37 3.3 Chuyển in vitro môi trường tự nhiên……………………… 39 Kết luận đề nghị………………………………………………… 42 Kết luận…………………………………………………………… .42 Đề nghị…………………………………………………………… 42 Tài liệu tham khảo…………………………………………… 43 Phụ lục ……………………………………………………… 48 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Hình nhe…………………………………………… Hình quát Hình 3.1 Hạt đậu Nho nhe nảy mầm mơi trường GM…………… Hình 3.2 Hình ảnh mơ sẹo từ mảnh sau tuần nuôi cấy mơi trường có bổ sung 2,4-D 1mg/l………………………………………… Hình tuần…………… Hình 3.4 Nách mầm ni cấy mơi trường cảm ứng chồi SIM…………………………………………………………………… Hình 3.5 Hình ảnh đa chồi từ chồi sau tuần nuôi cấy………… Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ tạo đa chồi chồi tác động tuần………………………………… Hình 3.7 Tái sinh chồi từ chồi mơi trường SIM sau tuần…………………………………………………………………… … Hình 3.8 Hình ảnh chồi đậu Nho nhe môi trường chứa BAP 1,5mg/l.……………………………………………………………… … Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN Hình 3.9 Cụm chồi nuôi cấy môi trường tái sinh chồi với BAP 1,5mg/l sau tuần …………………………………………………… Hình 3.10 Cây đậu Nho nhe mơi trường chứa IBA 0,3mg/l………… Hình 3.11 Cây tái sinh in vitro hoàn chỉnh để bầu đất……………… Hình 3.12 Cây tái sinh in vitro hồn chỉnh trồng bầu đất chứa giá thể đất thịt, trấu hun tỷ lệ 2:1 sau tuần…………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Thành phần loại môi trường nuôi cấy dùng cho hệ thống tái ngọn………………………………………………… Bảng Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ Javen thời gian khử trùng đến nảy mầm hạt đậu Nho nhe sau ngày nuôi cấy…………………… 26 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi đậu Nho nhe… 35 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ IBA tới khả tạo rễ chồi tái sinh……………………………………………………………………… 38 Bảng 3.4 Ảnh hưởng giá thể tới sức sống đậu Nho nhe tái sinh in vitro…………………………………………………………………… Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN 40 http://lrc.tnu.edu.vn 2.2.2 Chiều dài rễ Descriptives IBA sore Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Kết Test Ducan chieudaire Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30.000 2.3 Kết phân tích sau tuần 2.3.1 Số rễ /mẫu sau tuần Descriptives IBA sore Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN Kết Test Ducan sore Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000 2.3.2 Chiều dài rễ Descriptives IBA sore Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN IBA Duncana Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000 2.4 Kết phân tích sau tuần 2.4.1 Số rễ /mẫu sau tuần Descriptives IBA sore Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Kết Test Ducan sore Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000 2.4.2 Chiều dài rễ Descriptives 1.00 chieudaire Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Kết Test Ducan chieudaire Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30.000 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ... sĩ là: ? ?Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe (Vigna umbellata)? ?? Mục tiêu nghiên cứu Xác định hệ thống tái sinh đa chồi in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe Nội... Kết nghiên cứu khử trùng hạt đậu Nho nhe? ??……………… .25 3.2 Tái sinh in vitro đậu Nho nhe? ??………………………………… 28 3.2.1 Tái sinh chồi đậu Nho nhe từ mô sẹo………………………… 28 3.2.2 Tái sinh chồi đậu Nho nhe. .. SƯ PHẠM VŨ THU TRANG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Ở CÂY ĐẬU NHO NHE (VIGNA UMBELLATA) Ngành: Di truyền học Mã số: 8.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn