Khảo sát rối loạn số lượng nhiễm sắc thể ở phôi 5 ngày tuổi thụ tinh trong ống nghiệm​

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Phùng Thị Mùi KHẢO SÁT RỐI LOẠN SỐ LƯỢNG NHIỄM SẮC THỂ Ở PHÔI NGÀY TUỔI THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Phùng Thị Mùi KHẢO SÁT RỐI LOẠN SỐ LƯỢNG NHIỄM SẮC THỂ Ở PHÔI NGÀY TUỔI THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 842010121 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Nguyễn Thị Hồng Vân TS Nguyễn Thanh Tùng Hà Nội – Năm 2018 LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành luận văn này, may mắn nhận nhiều giúp đỡ quý báu vật chất, tinh thần thầy cô, bạn bè Lời đ ầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu s ắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Hồng Vân (ĐHKHTN - ĐHQGHN) TS Nguyễn Thanh Tùng (Học Viện Quân Y), người trực tiếp hướng dẫn nhiệt tình bảo tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Đồng thời gửi lời cám ơn chân thành tới cán thuộc Trung tâm Hỗ trợ sinh sản Bệnh viện Tâm Anh, Bệnh viện Nam Học Hiếm muộn Hà Nội Viện Mô phôi lâm sàng Quân đội – Học viện Quân Y giúp sinh thiết phân loại mẫu phôi bào sử dụng nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới BS Đặng Tiến Trường (Học viện Quân Y) người tận tình hướng dẫn tơi kinh nghiệm làm việc tạo điều kiện thuận lợi động viên, giúp đỡ nhiều suốt thời gian học tập, nghiên cứu phịng ADN – Bộ mơn Giải Phẫu, Học viện Quân Y Tôi muốn gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo môn Di truyền học, Khoa Sinh học, Trường ĐHKHTN tạo điều kiện thuận lợi động viên tơi q trình học tập Bộ môn Qua đây, xin cám ơn Bộ môn Giải Phẫu Học viện Quân Y tạo điều kiện thuận lợi trang thiết bị sở vật chất cho tơi q trình học tập thực luận văn phịng thí nghiệm ADN Cuối cùng, muốn gửi lời cám ơn chân thành tới gia đình, người thân, bạn bè em sinh viên, bên cổ vũ động viên tơi vượt qua khó khăn trình học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng 11 năm 2018 Học viên Phùng Thị Mùi i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa tiếng Anh a-CGH ADN ARN Bp BT SLNST dNTP FISH GTT IVF Mbp NGS NST PCR PGS TTTON WGA MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Thụ tinh ống nghiệm (TTTON) 1.2 Sự phát triển phôi trước làm tổ 1.2.1 Phôi giai đoạn tiền nhân 1.2.2 Phôi giai đoạn phân chia (2-3 ngày sau thụ tinh) 1.2.3 Phôi dâu 1.2.4 Phôi nang 1.3 Bất thường số lượng NST chế hình thành 1.3.1 Cơ chế phát sinh bất thường số lượng NST 1.3.2 Phân loại dạng bất thường số lượng NST 10 1.3.3 Các bất thường số lượng NST giai đoạn phôi 10 1.3.4 Tỷ lệ rối loạn nhiễm sắc thể phôi noãn 13 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng tới bất thường NST TTTON 15 1.5 Các phương pháp phân tích NST phôi 18 1.5.1 Phương pháp lai huỳnh quang chỗ - FISH 18 1.5.2 Phương pháp lai so sánh hệ gen (a-CGH) 20 1.5.3 Phương pháp sàng lọc di truyền truyền trước chuyển phơi sử dụng giải trình tự gen hệ thứ hai NGS 23 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 27 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 27 2.2.3 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 28 2.2.4 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 29 2.2.5 Sinh thiết phôi bào rửa phôi bào 30 iii 2.2.6 Khuếch đại toàn hệ gen 31 2.2.7 Kiểm tra nồng độ ADN sau q trình khuếch đại tồn hệ gen 33 2.2.8 Chuẩn bị thư viện 33 2.2.9 Giải trình tự 35 2.2.10 Phương pháp phân tích số liệu 35 2.3 Các tiêu nghiên cứu 39 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 40 2.5 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 40 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Kết phân tích rối loạn nhiễm sắc thể phôi ngày tuổi thụ tinh ống nghiệm (TTTON) kỹ thuật giải trình tự gen hệ thứ hai – Next generation sequencing (NGS) 41 3.2 Đánh giá mối tương quan rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi ngày tuổi thụ tinh ống nghiệm yếu tố tuổi người mẹ 52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 Kết luận 61 Kiến nghị 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Sự phát triển hợp tử từ giai đoạn phôi bào đến giai đoạn phơi nang Hình Cơ chế khơng phân ly hình thành dạng lệch bội Hình Cơ chế hình thành thể khảm theo Delhanty Hình Sơ đồ giải thích ngun lý kỹ thuật FISH 19 Hình Sơ đồ minh họa bước kỹ thuật array CGH 22 Hình Giới thiệu cơng nghệ giải trình tự gen hệ thứ hai hãng Illumina24 Hình Kết khuếch đại tồn hệ gen 603 mẫu nghiên cứu 41 Hình Chất lượng liệu giải trình tự máy Miseq 42 Hình Kết kiểm định Binomial test tỷ lệ bất thường NST phôi ngày tuổi TTTON 43 Hình 10 Mức độ lệch bội NST phôi TTTON ngày tuổi 48 Hình 11 Phơi TTTON ngày tuổi không phát bất thường NST 49 Hình 12 Phơi TTTON ngày tuổi phát lệch bội NST 49 Hình 13 Phơi TTTON ngày tuổi phát lệch bội NST 50 Hình 14 Phơi TTTON ngày tuổi phát lệch bội NST 50 Hình 15 Phơi TTTON ngày tuổi phát lệch bội nhiều NST 50 Hình 16 Phôi TTTON ngày tuổi phát bất thường cấu trúc NST 51 Hình 17 Tần suất bất thường cấu trúc NST 578 mẫu phôi TTTON 52 Hình 18 Mối tương quan tuổi mẹ tỷ lệ bất thường số lượng NST 56 Hình 19 Đường hồi quy tuyến tính thể mối tương quan tuổi mẹ tỷ lệ bất thường số lượng NST 57 Hình 20 Đặc điểm rối loạn số lượng NST phân bố theo độ tuổi người mẹ 59 v DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng Kết sàng lọc phôi sử dụng kỹ thuật CGH E Fragouli D Wells 11 Bảng Tần suất bất thường NST phát phôi ngày tuổi sử dụng kỹ thuật CGH theo nghiên cứu E Fragouli D Wells 12 Bảng Hóa chất sử dụng nghiên cứu 29 Bảng Thiết bị sử dụng nghiên cứu 30 Bảng Thành phần phản ứng ly giải tế bào 32 Bảng Thành phần phản ứng tiền khuếch đại toàn hệ gen 32 Bảng Thành phần phản ứng khuếch đại toàn hệ gen 32 Bảng Tỷ lệ bất thường nhiễm sắc thể 578 mẫu nghiên cứu 43 Bảng Đặc điểm bất thường phôi ngày tuổi TTTON 44 Bảng 10 Tỷ lệ rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi ngày tuổi TTTON 45 Bảng 11 Đặc điểm rối loạn cấu trúc nhiễm sắc thể phôi TTTON ngày tuổi .51 Bảng 12 Sự phân bố số lượng phôi ngày TTTON theo độ tuổi người mẹ 53 Bảng 13 Kết phân tích 578 phơi phân chia theo độ tuổi người mẹ 54 Bảng 14 Đặc điểm bất thường NST phân chia theo độ tuổi người mẹ .58 ĐẶT VẤN ĐỀ PGS (Preimplantation genetic screening) - sàng lọc di truyền trước chuyển phôi, kỹ thuật di truyền thực phôi quy trình thụ tinh ống nghiệm (TTTON – In Vitro Fertilization) Kỹ thuật giúp phát sàng lọc để lựa chọn phơi bình thường mặt di truyền giúp làm tăng hội thụ thai sinh trẻ bình thường Tất phụ nữ có nguy tạo phơi bất thường nhiễm sắc thể (NST) Đặc biệt phụ nữ trì hỗn việc sinh ngồi 30 tuổi, xác suất cho phôi bất thường nhiễm sắc thể tăng lên đáng kể, số lượng phôi tạo ra, dẫn tới làm tăng tỷ lệ thất bại TTTON sau chuyển phôi [7] Trước thách thức hội mang lại, có nhiều kỹ thuật PGS đời Đầu tiên phải kể đến kỹ thuật FISH - fluorescence in situ hybridization, kỹ thuật phổ biến với việc sử dụng đầu dị (probe) có gắn huỳnh quang gắn với số vị trí vài nhiễm sắc thể Do số lượng màu huỳnh quang hạn chế, FISH sàng lọc vài nhiễm sắc thể lần thực Tuy nhiên, tình trạng lệch bội (aneuploidy) xảy nhiễm sắc thể với tỷ lệ xấp xỉ [16, 20, 72] Do đó, FISH khơng phải kỹ thuật tồn diện để lựa chọn phôi tốt cho việc chuyển Trong số công nghệ PGS tiên tiến khác, việc kỹ thuật lai so sánh hệ gen (array CGH - Comparative Genomic Hybridization) cơng nghệ kiểm tra toàn 24 nhiễm sắc thể người (nhiễm sắc thể bình thường, X Y) [18, 20] Cách vài năm, a-CGH phổ biến trở thành tiêu chuẩn vàng cho PGS toàn giới Ngày nay, phát triển cơng nghệ giải trình tự (GTT) gen hệ thứ hai (NGS- Next Generation Sequencing) ứng dụng chúng mang lại giải pháp hữu hiệu Thừa hưởng tính a-CGH, NGS có tính vượt trội việc sàng lọc bất thường số lượng NST phôi với độ phân giải độ xác cao cung cấp thêm thơng tin cho phân tích sâu gene liên quan tới hội chứng bệnh Bên cạnh đó, phân tích lúc nhiều mẫu lần chạy giúp giảm chi phí cho người bệnh Đáng ý theo hai nghiên cứu Yang cộng năm 2012 2015, cho thấy sử dụng phương pháp đánh giá hình thái kết hợp với kỹ thuật giải trình tự gen để đánh giá lựa chọn phôi làm tăng tỷ lệ thành công TTTON lên 74,7% cao nhiều so với phương pháp khác [73, 74] Vì vậy, chúng tơi thực nghiên cứu: “Khảo sát rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi ngày tuổi thụ tinh ống nghiệm” với mục tiêu: • Xác định tỷ lệ rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi thụ tinh ống nghiệm ngày tuổi kỹ thuật PGS-NGS • Đánh giá mối tương quan rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi thụ tinh ống nghiệm ngày tuổi yếu tố tuổi người mẹ Nghiên cứu nằm đề tài “Nghiên cứu ứng dụng phát triển công nghệ tiên tiến phục vụ bảo vệ chăm sóc sức khỏe cộng đồng” mã số KC.10.09/16-20 thực Phịng phân tích ADN – Bộ mơn Giải phẫu – Học viện Quân Y 11 Collins F S., M Morgan and A Patrinos (2003), "The Human Genome Project: lessons from large-scale biology", Science 300(5617), pp 286-290 12 Debec A., W Sullivan and M Bettencourt-Dias (2010), "Centrioles: active players or passengers during mitosis?", Cellular and molecular life sciences 67(13), pp 2173-2194 13 Demko Z P., A L Simon, R C McCoy, D A Petrov and M Rabinowitz (2016), "Effects of maternal age on euploidy rates in a large cohort of embryos analyzed with 24-chromosome single-nucleotide polymorphism–based preimplantation genetic screening", Fertility and sterility 105(5), pp 1307-1313 14 Drut R (1997), "In situ hybridization protocols KHA Choo, ed Totowa, New Jersey: Humana Press, 1994", American Journal of Medical Genetics 69(2), pp 222-222 15 Fasolino M., A Ferraretti, V Farfalli, E Feliciani, M Arcarese, L Gianaroli and M Magli (2007), Oral Incidence of oocyte aneuploidy by first polar body FISH analysis in relation to the type of GnRH analogue, Human Reproduction, OXFORD UNIV PRESS GREAT CLARENDON ST, OXFORD OX2 6DP, ENGLAND, tr I82-I82 16 Fiorentino F (2012), "Array comparative genomic hybridization: its role in preimplantation genetic diagnosis", Current Opinion in Obstetrics and Gynecology 24(4), pp 203-209 17 Fiorentino F., A Biricik, S Bono, L Spizzichino, E Cotroneo, G Cottone, F Kokocinski and C.-E Michel (2014), "Development and validation of a next-generation sequencing–based protocol for 24chromosome aneuploidy screening of embryos", Fertility and sterility 101(5), pp 1375-1382 e2 18 Fiorentino F., S Bono, A Biricik, A Nuccitelli, E Cotroneo, G Cottone, F Kokocinski, C.-E Michel, M G Minasi and E Greco (2014), "Application of next-generation sequencing technology for comprehensive aneuploidy 63 screening of blastocysts in clinical preimplantation genetic screening cycles", Human Reproduction 29(12), pp 2802-2813 19 Fragouli E., M Katz-Jaffe, S Alfarawati, J Stevens, P Colls, N.-n Goodall, S Tormasi, C Gutierrez-Mateo, R Prates and W B Schoolcraft (2010), "Comprehensive chromosome screening of polar bodies and blastocysts from couples experiencing repeated implantation failure", Fertility and sterility 94(3), pp 875-887 20 Fragouli E., M Lenzi, R Ross, M Katz-Jaffe, W Schoolcraft and D Wells (2008), "Comprehensive molecular cytogenetic analysis of the human blastocyst stage", Human reproduction 23(11), pp 2596-2608 21 Fragouli E and D Wells (2011), "Aneuploidy in the human blastocyst", Cytogenetic and genome research 133(2-4), pp 149-159 22 Fragouli E., D Wells, A Thornhill, P Serhal, M Faed, J Harper and J Delhanty (2006), "Comparative genomic hybridization analysis of human oocytes and polar bodies", Human Reproduction 21(9), pp 23192328 23 Genetic N Y.-M.-A C f and N S Services (2009), Understanding genetics: a New York, mid-Atlantic guide for patients and health professionals, Lulu com 24 Gilbride K (2013), "Molecular methods for the detection of waterborne pathogens", Waterborne Pathogens, Elsevier, tr 231-290 25 Gutierrez-Mateo C., J Benet, D Wells, P Colls, M Bermudez, J Sanchez-Garcia, J Egozcue, J Navarro and S Munné (2004), "Aneuploidy study of human oocytes first polar body comparative genomic hybridization and metaphase II fluorescence in situ hybridization analysis", Human Reproduction 19(12), pp 2859-2868 26 Gutiérrez-Mateo C., P Colls, J Sánchez-García, T Escudero, R Prates, K Ketterson, D Wells and S Munné (2011), "Validation of microarray comparative genomic hybridization for comprehensive chromosome analysis of embryos", Fertility and sterility 95(3), pp 953-958 27 Hardy K., A H Handyside and R Winston (1989), "The human blastocyst: cell number, death and allocation during late preimplantation development in vitro", Development 107(3), pp 597-604 28 Huret J.-L., C Léonard and J R Savage (2000), "Chromosomes, chromosome anomalies" 29 Kahraman S., Ç Beyazyürek, H A Taỗ, C Pirkevi, M Cetinkaya and N Gỹlỹm (2015), "Recent advances in preimplantation genetic diagnosis", Advances in Genomics and Genetics 5, pp 189-203 30 Kahraman S., Y Kumtepe, S Sertyel, E Dönmez, M Benkhalifa, N Fındıklı and P Vanderzwalmen (2002), "Pronuclear morphology scoring and chromosomal status of embryos in severe male infertility", Human Reproduction 17(12), pp 3193-3200 31 Kim S Y., S W Nam, S H Lee, W S Park, N J Yoo, J Y Lee and Y.-J Chung (2005), "ArrayCyGHt: a web application for analysis and visualization of array-CGH data", Bioinformatics 21(10), pp 2554-2555 32 Kim Y J., J E Lee, S H Kim, S S Shim and D H Cha (2013), "Maternal age-specific rates of fetal chromosomal abnormalities in Korean pregnant women of advanced maternal age", Obstetrics & gynecology science 56(3), pp 160-166 33 Kline J., A Kinney, B Levin and D Warburton (2000), "Trisomic pregnancy and earlier age at menopause", The American Journal of Human Genetics 67(2), pp 395-404 34 Knuutila S., A.-M Björkqvist, K Autio, M Tarkkanen, M Wolf, O Monni, J Szymanska, M L Larramendy, J Tapper and H Pere (1998), "DNA copy number amplifications in human neoplasms: review of comparative genomic hybridization studies", The American journal of pathology 152(5), pp 1107 35 Kuliev A., J Cieslak, Y Ilkevitch and Y Verlinsky (2003), "Chromosomal abnormalities in a series of 6733 human oocytes in preimplantation diagnosis 65 for age-related aneuploidies", Reproductive biomedicine online 6(1), pp 5459 36 Majumdar G., A Majumdar, I C Verma and K C Upadhyaya (2017), "Relationship between morphology, euploidy and implantation potential of cleavage and blastocyst stage embryos", Journal of human reproductive sciences 10(1), pp 49 37 Mansour G., R K Sharma, A Agarwal and T Falcone (2010), "Endometriosis-induced alterations in mouse metaphase II oocyte microtubules and chromosomal alignment: a possible cause of infertility", Fertility and sterility 94(5), pp 1894-1899 38 Mantzouratou A and J Delhanty (2011), "Aneuploidy in the human cleavage stage embryo", Cytogenetic and genome research 133(2-4), pp 141148 39 Martín J., A Cervero, P Mir, J A C Martinez, A Pellicer and C Simón (2013), "The impact of next-generation sequencing technology on preimplantation genetic diagnosis and screening", Fertility and sterility 99(4), pp 1054-1061 e3 40 Martin R H., E Ko and A Rademaker (1991), "Distribution of aneuploidy in human gametes: comparison between human sperm and oocytes", American journal of medical genetics 39(3), pp 321-331 41 Munné S., S Chen, P Colls, J Garrisi, X Zheng, N Cekleniak, M Lenzi, P Hughes, J Fischer and M Garrisi (2007), "Maternal age, morphology, development and chromosome abnormalities in over 6000 cleavage-stage embryos", Reproductive biomedicine online 14(5), pp 628634 42 Munné S., K R Held, C M Magli, B Ata, D Wells, E Fragouli, V Baukloh, R Fischer and L Gianaroli (2012), "Intra-age, intercenter, and intercycle differences in chromosome abnormalities in oocytes", Fertility and sterility 97(4), pp 935-942 43 Munné S., M Sandalinas, T Escudero, C Márquez and J Cohen (2002), "Chromosome mosaicism in cleavage-stage human embryos: evidence of a maternal age effect", Reproductive biomedicine online 4(3), pp 223-232 44 York Pansky B (1982), Review of medical embryology, Macmillan New 45 Payne J F., D J Raburn, G M Couchman, T M Price, M G Jamison and D K Walmer (2005), "Relationship between pre-embryo pronuclear morphology (zygote score) and standard day or embryo morphology with regard to assisted reproductive technique outcomes", Fertility and sterility 84(4), pp 900-909 46 Pellestor F (1991), "Frequency and distribution of aneuploidy in human female gametes", Human genetics 86(3), pp 283-288 47 Pinkel D., R Segraves, D Sudar, S Clark, I Poole, D Kowbel, C Collins, W -L Kuo, C Chen and Y Zhai (1998), "High resolution analysis of DNA copy number variation using comparative genomic hybridization to microarrays", Nature genetics 20(2), pp 207 48 Rabinowitz M., A Ryan, G Gemelos, M Hill, J Baner, C Cinnioglu, M Banjevic, D Potter, D A Petrov and Z Demko (2012), "Origins and rates of aneuploidy in human blastomeres", Fertility and sterility 97(2), pp 395-401 49 Rubio C., J Bellver, L Rodrigo, E Bosch, A Mercader, C Vidal, M J De los Santos, J Giles, E Labarta and J Domingo (2013), "Preimplantation genetic screening using fluorescence in situ hybridization in patients with repetitive implantation failure and advanced maternal age: two randomized trials", Fertility and sterility 99(5), pp 1400-1407 50 Rubio C., L Rodrigo, P Mir, E Mateu, V Peinado, M Milán, N Al-Asmar, I Campos-Galindo, S Garcia and C Simón (2013), "Use of array comparative genomic hybridization (array-CGH) for embryo assessment: clinical results", Fertility and sterility 99(4), pp 1044-1048 67 51 Rubio C., C Simon, F Vidal, L Rodrigo, T Pehlivan, J Remohi and A Pellicer (2003), "Chromosomal abnormalities and embryo development in recurrent miscarriage couples", Human Reproduction 18(1), pp 182-188 52 Russell S., L A Meadows and R R Russell (2008), Microarray technology in practice, Academic Press 53 Sanger F., S Nicklen and A R Coulson (1977), "DNA sequencing with chain-terminating inhibitors", Proceedings of the national academy of sciences 74(12), pp 5463-5467 54 Schoolcraft W B., E Fragouli, J Stevens, S Munne, M G Katz-Jaffe and D Wells (2010), "Clinical application of comprehensive chromosomal screening at the blastocyst stage", Fertility and sterility 94(5), pp 1700-1706 55 Scott Jr R T., K M Upham, E J Forman, K H Hong, K L Scott, D Taylor, X Tao and N R Treff (2013), "Blastocyst biopsy with comprehensive chromosome screening and fresh embryo transfer significantly increases in vitro fertilization implantation and delivery rates: a randomized controlled trial", Fertility and sterility 100(3), pp 697-703 56 Scott L A and S Smith (1998), "The successful use of pronuclear embryo transfers the day following oocyte retrieval", Human Reproduction (Oxford, England) 13(4), pp 1003-1013 57 Selva J., B Martin-Pont, J Hugues, P Rince, C Fillion, F Herve, A Tamboise and E Tamboise (1991), "Cytogenetic study of human oocytes uncleaved after in-vitro fertilization", Human Reproduction 6(5), pp 709713 58 Shaffer L G and T H Bui (2007), Molecular cytogenetic and rapid aneuploidy detection methods in prenatal diagnosis, American Journal of Medical Genetics Part C: Seminars in Medical Genetics, Wiley Online Library, tr 87-98 59 Sher G., L Keskintepe, M Keskintepe, M Ginsburg, G Maassarani, T Yakut, V Baltaci, D Kotze and E Unsal (2007), "Oocyte karyotyping by comparative genomic hybrydization provides a highly reliable method for selecting “competent” embryos, markedly improving in vitro fertilization outcome: a multiphase study", Fertility and sterility 87(5), pp 1033-1040 60 Shi Q., E Ko, L Barclay, T Hoang, A Rademaker and R Martin (2001), "Cigarette smoking and aneuploidy in human sperm", Molecular Reproduction and Development: Incorporating Gamete Research 59(4), pp 417-421 61 Shi Q and R Martin (2000), "Aneuploidy in human sperm: a review of the frequency and distribution of aneuploidy, effects of donor age and lifestyle factors", Cytogenetic and Genome Research 90(3-4), pp 219-226 62 Snijders A M., N Nowak, R Segraves, S Blackwood, N Brown, J Conroy, G Hamilton, A K Hindle, B Huey and K Kimura (2001), "Assembly of microarrays for genome-wide measurement of DNA copy number", Nature genetics 29(3), pp 263 63 Solinas-Toldo S., S Lampel, S Stilgenbauer, J Nickolenko, A Benner, H Döhner, T Cremer and P Lichter (1997), "Matrix-based comparative genomic hybridization: biochips to screen for genomic imbalances", Genes, chromosomes and cancer 20(4), pp 399-407 64 South S T., Z Chen and A R Brothman (2008), "Genomic medicine in prenatal diagnosis", Clinical obstetrics and gynecology 51(1), pp 62-73 65 Spandorfer S D., O K Davis, L I Barmat, P H Chung and Z Rosenwaks (2004), "Relationship between maternal age and aneuploidy in in vitro fertilization pregnancy loss", Fertility and sterility 81(5), pp 12651269 66 Tesarik J and E Greco (1999), "The probability of abnormal preimplantation development can be predicted by a single static observation on pronuclear stage morphology", Human reproduction 14(5), pp 1318-1323 67 Traversa M V., J Marshall, S McArthur and D Leigh (2011), "The genetic screening of preimplantation embryos by comparative genomic hybridisation", Reprod Biol 11(Suppl 3), pp 51-60 69 68 Tubbs R R., J D Pettay, M Skacel and D Kandil (2004), "Array- Based Comparative Genomic Hybridization as a Tool for Survey of Genomic Alterations in Human Neoplasms", Molecular Morphology in Human Tissues, CRC Press, tr 145-154 69 Vorsanova S G., Y B Yurov and I Y Iourov (2008), "Maternal smoking as a cause of mosaic aneuploidy in spontaneous abortions", Medical hypotheses 71(4), pp 607 70 Warburton D (1989), "The effect of maternal age on the frequency of trisomy: change in meiosis or in utero selection?", Progress in clinical and biological research 311, pp 165-181 71 Weghofer A., S Munne, S Chen, D Barad and N Gleicher (2007), "Lack of association between polycystic ovary syndrome and embryonic aneuploidy", Fertility and sterility 88(4), pp 900-905 72 Wells D., S Alfarawati and E Fragouli (2008), "Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH", Molecular human reproduction 14(12), pp 703-710 73 Yang Z., J Lin, J Zhang, W I Fong, P Li, R Zhao, X Liu, W Podevin, Y Kuang and J Liu (2015), "Randomized comparison of nextgeneration sequencing and array comparative genomic hybridization for preimplantation genetic screening: a pilot study", BMC medical genomics 8(1), pp 30 74 Yang Z., J Liu, G S Collins, S A Salem, X Liu, S S Lyle, A C Peck, E S Sills and R D Salem (2012), "Selection of single blastocysts for fresh transfer via standard morphology assessment alone and with array CGH for good prognosis IVF patients: results from a randomized pilot study", Molecular cytogenetics 5(1), pp 24 75 Zenzes M T and R F Casper (1992), "Cytogenetics of human oocytes, zygotes, and embryos after in vitro fertilization", Human genetics 88(4), pp 367-375 Trang Web 76 Illumina I (2016), An introduction to next-generation sequencing technology, truy cập ngày December 1, 2018 , trang web https://www.illumina.com/content/dam/illuminamarketing/documents/products/illumina_sequencing_introduction.pdf 77 Illumina I (2017), MiSeq® Reporter Software Guide, truy cập ngày December 1, 2018, trang web https://support.illumina.com/content/dam/illuminasupport/documents/documentation/software_documentation/miseqreporter/ miseq-reporter-software-guide-15042295-05.pdf 78 Matthews D R (December 5, 2016), Embryo Development - Days in the IVF Lab, truy cập ngày December 1, 2018, trang web https://www.fertilitysmarts.com/embryo-development-6-days-in-the-ivflab/2/1016 71 ... nghiên cứu: ? ?Khảo sát rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi ngày tuổi thụ tinh ống nghiệm” với mục tiêu: • Xác định tỷ lệ rối loạn số lượng nhiễm sắc thể phôi thụ tinh ống nghiệm ngày tuổi kỹ thuật... [19] Trong số 43% phôi bị bất thường số lượng nhiễm sắc thể từ phụ nữ có độ tuổi trung bình 37,7 có tới 55 % rối loạn nhiễm sắc thể xảy nhiễm sắc thể 41% hai nhiễm sắc thể, 7% phức tạp xảy ≥ nhiễm. .. bị rối loạn nhiễm sắc thể Kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm ảnh hưởng đến tỷ lệ lệch bội nhiễm sắc thể phôi thụ tinh ống nghiệm Ở giai đo ạn phân chia, có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến nhiễm sắc thể phôi,