Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước của một số loại cây thuốc dân gian tại vườn quốc gia bidoup núi bà, tỉnh lâm đồng​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CAO CHIẾT NƯỚC CỦA MỘT SỐ LOẠI CÂY THUỐC DÂN GIAN TẠI VƯỜN QUỐC GIA BIDOUP – NÚI BÀ, TỈNH LÂM ĐỒNG Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: Th S Phạm Minh Sinh viên thực hiện: Nhựt Phạm Thị Thảo MSSV: 1151110516 Lớp: 11DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2015 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án nghiên cứu riêng thực sở lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực tiễn hướng dẫn ThS Phạm Minh Nhựt Các số liệu, kết nêu đồ án trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên Phạm Thị Thảo i Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Đầu tiên xin cảm ơn quý thầy cô khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường truyền đạt kiến thức thật quý báu cho suốt q trình học tập trường Đại học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Đặc biệt xin chân thành cảm ơn thầy Thạc sĩ Phạm Minh Nhựt tận tình hướng dẫn tơi suốt thời gian làm luận văn tốt nghiệp Thầy bên, quan tâm, giúp đỡ việc gợi ý tưởng trình làm luận văn cung cấp tài liệu sách liên quan suốt q trình nghiên cứu Ngồi tơi xin cám ơn bạn sinh viên nhóm thầy Tâm, Hằng, Hồng Vân, Nhân, Vân Anh, Tuấn, Trí, Hiền tất bạn phịng thí nghiệm trường giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình hồn thành luận văn tốt nghiệp Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình ln bên cạnh, động viên lúc khó khăn, nản lịng suốt thời gian học tập, nghiên cứu sống Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên Phạm Thị Thảo ii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC TRANG LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU NỘI DUNG NGHIÊN CỨU PHẠM VI NGHIÊN CỨU CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU………………… …………………… 1.1 Sơ lược số loại thuốc dân gian có khả trị tiêu chảy vườn quốc gia Bidoup 1.1.1 Cây Podocarpus sp 1.1.2 Cây Polygala sp 1.1.3 Cây Medinilla sp 1.1.4 Cây Elephantopus sp 1.1.5 Cây Eupatorium sp 1.2 Đại cương số nhóm chất hữu có cao chiết nước .8 1.2.1 Carbohydrate 1.2.2 Flavonoid 1.2.3 Tannin 10 1.2.4 Alkaloid 11 1.2.5 Saponin 12 iii Đồ án tốt nghiệp 1.2.6 Anthraglyc 1.3 Tổng quan chế kháng khuẩn c 1.3.1 Khái niệm hoạt tính kháng khuẩn thực vật 1.3.2 Cơ chế kháng khuẩn chung hợp chất từ thực vật 1.4 Nhóm vi khuẩn gây bệnh tiêu ch 1.4.1 Đại cương họ vi khuẩn đường ruột 1.4.2 Một số vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy 1.4.3 Nhóm vi khuẩn gây bệnh da CHƢƠNG NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 2.2 Vật liệu nghiên cứu 2.2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 2.2.2 Vi sinh vật thị 2.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 2.3.1 Thiết bị dụng cụ 2.3.2 Hóa chất 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Phương pháp tách chiết cao nước thuốc 2.4.2 Phương pháp nuôi cấy bảo quản vi sinh vật thị 2.4.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước thực vật 2.4.4 Phương pháp xử lí số liệu 2.5 Bố trí thí nghiệm 2.5.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá hiệu suất thu hồi cao nước loại thuốc 2.5.2 số loại thuốc 2.5.3 Thí nghiệm 3: Định tính thành phần hóa học cao chiết nước số loại thuốc dân gian CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi cao nước số loại thuốc dân gian iv Thí nghiệm Đồ án tốt nghiệp 3.1.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước số loại thuốc dân gian 39 3.2 Kết định tính thành phần hóa học cao chiết nước số loại thuốc 50 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54 4.1 Kết luận 54 4.2 Đề nghị 54 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TSB: Trypton Soya Broth TSA: Trypticase Soya Agar DMSO: Dimethyl sulfoxide pABA: p – aminobenzoic acid mRNA: RNA thông tin tRNA: RNA vận chuyển DNA: Deoxyribonucleic acid RNA: Ribonucleic acid vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao nước số loại thuốc số chủng vi sinh vật 48 Bảng 3.2 Kết định tính thành phần hóa học cao chiết nước số loại thuốc 51 vii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1.1 Cây Podocarpus imbricartus Hình 1.2 Cây Polygala paniculata Hình 1.3 Cây Medinilla septentrionalis Hình 1.4 Cây Elephantopus mollis Hình 1.5 Cây Eupatorium odoratum Hình 1.6 Các điểm tác động PSMs lên vi khuẩn Gram dương, Gram âm nấm 16 Hình 2.1 Sơ đồ tổng quát bố trí thí nghiệm 30 Hình 2.2 Sơ đồ chung đánh giá hiệu suất thu hồi cao nước số thuốc dân gian 31 Hình 2.3 Sơ đồ đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước số loại thuốc dân gian 32 Hình 2.4 Định tính sơ thành phần hóa học cao chiết nước loại thuốc Hình 3.1 Hiệu suất thu hồi cao nước số loại thuốc dân gian 38 Hình 3.2 Màu sắc dịch lọc cao chiết nước Elephantopus sp qua lần ngâm mẫu 38 Hình 3.3 Khả kháng khuẩn cao chiết nước Podocarpus sp 39 Hình 3.4 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước Polygala sp 41 Hình 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước Medinilla sp 43 Hình 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước Eupatorium sp 45 Hình 3.7 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước Elephantopus sp 47 Hình 3.8 Kết kháng khuẩn cao nước Medinilla sp chủng SD (A1) ShB (A2), Polygala sp VH (B1) EC (B2), Eupatorium viii Đồ án tốt nghiệp sp chủng VH (C1) LM (C2), Podocarpus sp với chủng ST (D1) cạy Elephantopus sp chủng ShF (D2) 49 ix 18 19 20 A.4 Kết khảo sát hoạt tínhh kháng khuẩn cao chiết nƣớc Eupatorium sp 20 chủng vi sinh vật thị STT Chủn Đồ án tốt nghiệp 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 A.5 Kết khảo sát hoạt tínhh kháng khuẩn cao chiết nƣớc Elephantopus sp 20 chủng vi sinh vật thị STT Đồ án tốt nghiệp 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 A.6 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn kháng sinh Ciprofloxacin nhóm vi sinh vật thị STT Đồ án tốt nghiệp 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B: HÌNH ẢNH KHÁNG KHUẨN CAO CHIẾT NƢỚC CỦA MỘT SỐ MẪU CÂY THUỐC B.1 Hình ảnh kháng khuẩn cao chiết nƣớc mẫu Polygala sp số chủng vi sinh vật gây bệnh B.2 Hình ảnh kháng khuẩn cao chiết nƣớc mẫu Eupatorium sp số chủng vi sinh vật gây bệnh Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C: KẾT QUẢ XỬ LÍ SỐ LIỆU BẰNG PHẦN MÊM STATGRAPHIC C.1 Kết sử lí thống kê mẫu cao nƣớc Medinilla sp số chủng vi sinh vật thị Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD Col_5 E.coli(K) Cipro-E.coli Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD B.Col_1 Lis.inno Cipro-inno Đồ án tốt nghiệp Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD C.Col_1 S.dublin Cipro-dub Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD C.Col_3 S.typhi Cipro-typhi Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD A.Col_3 0208 Cipro-0208 Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for A.Col_2 by A.Col_1 Method: 95.0 percent Tukey HSD A.Col_1 0157:H7 Cipro-H7 Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD D.Col_1 Cipro-boy Shi.boy Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD D.Col_3 Cipro-flex Shi.flex Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD D.Col_5 Shi.sonnei Cipro-son Bảng One way ANOVA 10 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD E.Col_1 Pseu Cipro-pseu Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD E.Col_3 S.aureus Cipro-aure Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD E.Col_5 E.feacalis Cipro-fea B.2 Kết xử lí thống kê với mẫu Podocarpus sp số chủng vi sinh vật thị Bảng One – Way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Đồ án tốt nghiệp Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD B.Col_1 S.typhi(K) Ciprofloxacin Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD B.Col_1 Shi.sonnei Ciprofloxacin Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD C.Col_1 V.harveyi Ciprofloxacin Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD D.Col_1 S.aureus Ciprofloxacin 12 Đồ án tốt nghiệp B.3 Kết xử lí thống kê hiệu suất thu hồi cao nƣớc số mẫu cao nƣớc thuốc Bảng One way ANOVA Source Between groups Within groups Total (Corr.) Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD Col_1 podocarpus elephantopus medinilla polygala eupatorium 13 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC D: CÁC THUỐC THỬ DÙNG TRONG PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC D.1 Thử nghiệm carbohydrate Thuốc thử Molisch: Hòa tan 5g α- napthol vào ethanol 95% pha loãng thành 100 ml Thuốc thử Fehling: o Fehling A: Hòa tan 34,6g CuSO4.5H2O vào 500 ml nước cất o Fehling B: Hòa tan 125g KOH 173g KaliNatritartrate.7H2O vào 500 ml nước cất Thuốc thử Barfoed: Thêm 10 ml acid acetic glacial vào 1000 ml nước cất Cân 66,5g copper (II) acetate monohydrate, đổ hỗn hợp vào đem đun, khuấy tan hoàn toàn D.2 Thử nghiệm alkaloid Thuốc thử Mayer : Hòa tan 1,358g HgCl 60 ml nước, sau đổ vào dung dịch 5g KI pha 10 ml nước Định mức hỗn hợp lên 100 ml Thuốc thử Dragendorff: Gồm dung dịch o Dung dịch A: Hòa tan 0,5g Bismuth nitrate (Bi(NO3)3.5H2O) 20 ml acid acetic 20% o Dung dịch B: Dung dịch KI 40% pha nước cất o Khi sử dụng trộn 20 ml dung dịch A với ml dung dịch B 70ml nước Thuốc thử Hager: Hòa tan 1g acid picric vào 100 ml nước cất Thuốc thử Wagner: Hòa tan 2g Iodine 6g KI vào 100 ml nước cất D.3 Thử nghiệm cardiac glycosides 14 Đồ án tốt nghiệp Thuốc thử Na nitro prusside: 1g Na nitroferricyanide bổ sung 10 ml nước cất 15 ... tính kháng khuẩn cao chiết nước số loại thuốc dân gian Bước đầu định tính thành phần hóa học cao chiết nước số loại thuốc dân gian Phạm vi nghiên cứu Chỉ khảo sát số thuốc dân gian Podocarpus... hồi cao nước số loại thuốc dân gian iv Thí nghiệm Đồ án tốt nghiệp 3.1.1 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước số loại thuốc dân gian 39 3.2 Kết định tính. .. hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước loại thuốc số chủng vi sinh vật gây bệnh bước đầu định tính thành phần hóa học cao chiết nước số loại thuốc Nội dung nghiên cứu Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn