Khảo sát khả năng đối kháng của nấm trichoderma spp với các nấm gây bệnh phổ biến trên cây hồ tiêu​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA NẤM Trichoderma spp VỚI CÁC NẤM GÂY BỆNH PHỔ BIẾN TRÊN CÂY HỒ TIÊU Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực TRẦN HÀ PHƯƠNG MSSV: 1211100073 : HẢO Lớp: 12DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi tên: TRẦN HÀ PHƢƠNG HẢO Sinh ngày 26 tháng 10 năm 1994 tỉnh Tiền Giang Quê quán: Xã Tân Lập – huyện Tân Phước – tỉnh Tiền Giang MSSV: 1211100073 Lớp: 12DSH02 Trường Đại học Công Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh Tơi xin cam đoan: - Đồ án tốt nghiệp thành từ nghiên cứu hoàn toàn thực tế sở số liệu thực tế thực theo hướng dẫn giáo viên hướng dẫn - Đồ án thực hoàn toàn mới, thành riêng tôi, không chép theo đồ án tương tự - Mọi tham khảo sử dụng đồ án trích dẫn nguồn tài liệu báo cáo danh mục tài liệu tham khảo - Mọi chép không hợp lệ, vi phạm quy chế nhà trường, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tp.HCM, ngày 30 tháng 07 năm 2016 Sinh viên TRẦN HÀ PHƢƠNG HẢO LỜI CẢM ƠN Qua năm học tập rèn luyện trường Trường Đại học Công Nghệ TP.HCM, bảo giảng dạy nhiệt tình q thầy cơ, đặc biệt q thầy cô khoa Môi Trường – Công Nghệ Sinh Học truyền đạt cho kiến thức lý thuyết thực hành suốt thời gian học tập Và thời gian thực đồ án Công Ty TNHH Điền Trang, tơi có nhiều hội áp dụng kiến thức học trường vào môi trường thực tế công ty, đồng thời học hỏi nhiều kinh nghiệm làm việc anh chị công ty Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc Công ty TNHH Điền Trang tạo điều kiện thuận lợi cho để tơi thực đề tài tốt nghiệp công ty Em cảm ơn anh, chị phòng Nghiên cứu Phát triển Công ty TNHH Điền Trang hỗ trợ, chia giúp đỡ cho em thời gian thực đề tài Em xin chân thành cám ơn Tiến sĩ Nguyễn Thị Hai, người hết lòng hướng dẫn, bảo tận tình giúp đỡ suốt trình thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, nơi chỗ dựa vững cho suốt thời gian học tập Trong trình viết luận văn báo cáo, kiến thức cịn hạn hẹp nên khơng tránh khỏi thiếu sót cách hiểu lỗi trình bày, tơi mong nhận ý kiến đóng góp quý thầy cô Ban lãnh đạo nhà trường, anh chị công ty để giúp báo cáo tốt nghiệp đạt kết tốt Tp.HCM, ngày 30 tháng 07 năm 2016 Sinh viên TRẦN HÀ PHƢƠNG HẢO Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Các kết đạt đƣợc đề tài Kết c ấu Đồ án Tốt nghiệp Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổ ng quan hồ tiêu 1.1.1 Nguồn g ốc v 1.1.2 Phân bố địa 1.1.3 Tình hình sả 1.1.3.1 Tình hình sản xuất 1.1.3.2 Tình hình tiêu thụ 1.1.4 1.2 Tình hình n Một số nấm bệnh phổ biến hồ tiêu 1.2.1 Nấm Phytop i Đồ án tốt nghiệp 1.2.1.2 1.2.1.3 Phytophthora gây bệnh hồ tiêu 1.2.2 Nấm Fusarium spp 1.2.2.1 Đặc điểm sinh học nấm Fusarium spp 1.2.2.2 1.2.2.3 Fusarium gây bệnh hồ tiêu 1.2.3 Nấm Colletotrichum s pp 1.2.3.1 Đặc điểm sinh học nấm Colletotrichum spp 1.2.3.2 1.2.3.3 Colletotrichum gây bệnh hồ tiêu 1.3 Biện pháp sinh học quản lý bệnh hại trồng 1.3.1 Lịch sử biện pháp sinh học 1.3.1.1 1.3.1.2 1.3.2 Khái niệm 1.3.3 Ưu nhược điểm biện p 1.3.3.1 1.3.3.2 1.3.4 Các ứng d ụng sinh học quản lý bệnh hại hồ tiêu 1.4 Nấm Trichoderma spp quản lý bệnh trồng 1.4.1 Nấm Trichoderma spp 1.4.1.1 1.4.1.2 Sự phân bố nấm Trichoderma spp 1.4.1.3 1.4.1.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa, sinh học 1.4.1.5 Cơ chế đối kháng nấm gây bệnh trồng 1.4.2 Ứng dụng nông nghiệp c ii Đồ án tốt nghiệp 1.4.2.1 1.4.2.2 1.4.2.3 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 2.1.Thời gian địa điểm thực đề tài 2.2.Vật liệu 2.2.1 Nguồn g ốc nấm đố 2.2.1.1 2.2.1.2 2.2.2 Trang thiết bị hó 2.2.3 Mơi trường ni cấ 2.3.Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp thu mẫu 2.3.1.1 2.3.1.2 2.3.2 Phân lậpTrichode 2.3.2.1 2.3.2.2 2.3.2.3 2.3.2.4 2.3.3 Phương pháp quan sát hình thái sợi nấ m 2.3.4 Xác định hoạt tính cellulose: Phương pháp khuếch tán thạch 2.3.5 Xác định khả đối kháng 2.3.6 Đánh giá khả năn bệnh phổ biến hồ tiêu 2.3.6.1 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderm Phytophthora sp (phân lập mẫu đất trồng tiêu) iii Đồ án tốt nghiệp 2.3.6.2 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderm Fusarium sp (phân lập từ rễ tiêu bị bệnh chết chậm 2.3.6.3 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderm Colletotrichum sp (phân lập từ hồ tiêu bị bệnh th 2.3.7 Phương pháp phân tích số liệu Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết phân lập nấm Trichoderma spp 3.2 Kết phân lập nấm bệnh 3.2.1 Kết phân lập nấm Phytophthora sp 3.2.2 Kết phân lập nấm Fusarium sp 3.2.3 Kết phân lập nấm Colletotrichum sp 3.3 Khảo sát khả sinh enzyme cellulase ch 3.4 phân lập Đánh giá khả đối kháng Trichoderma spp với 3.4.1 Khả o sát khả n 3.4.2 Trichoderma sp nhanh hồ tiêu 3.4.3 Trichoderma sp hồ tiêu 3.4.4 Trichoderma sp thư tiêu 3.4.5 Tổng hợp khả bệnh phổ biến hồ tiêu KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VPA: Hiệp Hội hồ tiêu Việt Nam IAA: Acid indolacetic EU: Liên minh châu Âu (European Union) USD: Đô la Mỹ (United States dollar) ITC: Trung tâm thương mại quốc tế CABI: Tổ chức phi lợi nhuận PDA: Potato Dextro Agar CMC: Carboxy methyl cellulose DRBC: Dichoran Rose Bengal Chloramphenicol WA: Water agar NPK: Nitơ photpho kali (Ure – lân – kali) ĐK: Đối kháng ĐC: Đối chứng NSC: Ngày sau cấy v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Diện tích, suất sản lượng hồ tiêu năm 2014 Bảng 1.2: Giá tổng hợp c tiêu đen tiêu trắng (Đơn vị: USD) 10 Bảng 1.3: Tần suất xuất sâu bệnh hại hồ tiêu t ại ba vùng điều tra .12 Bảng 3.1: Mật số nấm Trichoderma đất Bình Phước 52 Bảng 3.2: Số chủng Trichoderma bắt vườn 52 Bảng 3.3: Các chủng Trichoderma spp phân l ập từ mẫu đất tỉnh Bình Phước 54 Bảng 3.4: Bán kính t ản nấm Trichoderma spp sau ngày ni cấy 64 Bảng 3.5: Tỷ lệ (%) đối kháng Trichoderma spp Phytophthora sp .68 Bảng 3.6: Tỷ lệ (%) đối kháng Trichoderma spp Fusarium sp .73 Bảng 3.7: Tỷ lệ (%) đối kháng Trichoderma spp Colletotrichum sp .78 Bảng 3.8: Tỉ lệ đối kháng (%) chủng Trichoderma với Phytophthora sp sau NSC Fusarium sp., Colletotrichum sp sau NSC 83 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 1.1: Tăng trưởng số lượng hồ tiêu Đông Nam Á quốc gia khác Biểu đồ 1.2: Nhập hồ tiêu 28 quốc gia EU từ số nước Đông Nam Á 11 giai đoạn 2010 – 2014 (đơn vị: USD) 11 Biểu đồ 3.1 Đường kính phân gi ải cellulose chủng Trichoderma spp 61 Biểu đồ 3.2: Tỷ lệ (%) đối kháng Trichoderma spp với Phytophthora sp NSC .70 Biểu đồ 3.3: Tỷ lệ (%) đối kháng Trichoderma spp với Fusarium sp NSC 75 Biểu đồ 3.4: Tỷ lệ (%) đối kháng Trichoderma spp với Colletotrichum sp 7NSC 80 vii Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Hình thái đại thể hình thái vi thể chủng Trichoderma spp phân l ập đất Bình Phƣớc Hình thái đại thể BP1_01.1 BP1_01.3 BP1_02 Đồ án tốt nghiệp BP1_02.3 BP1_04.1 BP1_04.3 BP1_B Đồ án tốt nghiệp BP2_02.4 BP2_03.3 BP2_03.4 BP2_03.5 Đồ án tốt nghiệp BP2_04.2 BP2_04.3 BP2_04.4 BP2_B.1 Đồ án tốt nghiệp BP2_B.2 BP3_01.1 BP3_01.2 BP3_01.3 Đồ án tốt nghiệp BP3_02.1 BP3_02.2 BP3_02.3 BP3_02.4 Đồ án tốt nghiệp BP3_02.5 BP3_03.3 BP3_03.4 BP3_04.2 Đồ án tốt nghiệp BP3_04.3 BP3_04.5 BP3_B.4 BP3_B.7 Đồ án tốt nghiệp BP4_01.1 BP5_03 BP5_B.2 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Các chủng Trichoderma có khả đối kháng cao với nấm Phytophthora sp sau ngày theo dõi 10 Đồ án tốt nghiệp Các chủng nấm Trichoderma có khả đối kháng cao với Colletotrichum sp sau 11 ngày theo dõi 11 Đồ án tốt nghiệp 12 Đồ án tốt nghiệp Bán kính tản nấm Trichoderma sau ngày nuôi cấy NGAY NUOI CAY 09:50 Thursday, August 17, 2016 The GLM Procedure t Tests (LSD) for D NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different 13 Đồ án tốt nghiệp A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A B B B C C C C C C C C C D D D D D E E E 14 Đồ án tốt nghiệp Môi trƣờng trƣờng Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol Thành phần môi trƣờng Glucose Peptone K2HPO4 MgSO4 Dichloran (0,2% W/v ethanol) Rose Bengal Chloramphenicol Agar Nước cất Môi trƣờng PDA (Potato Dextrose Agar) Thành phần: Dịch chiết khoai tây: Dextrose: Agar: Nước cất: Môi trƣờng CMC (Carboxy methyl cellulose) Thành phần: NaNO3: K2HPO4: MgSO4: KCl: CMC: Agar: Nước cất: Môi trƣờng WA (Water Agar) Thành phần: Agar: 20 g Nước cất: 15 1000 ml ... Fusarium sp gây bệnh chết chậm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư Khảo sát đối kháng nấm Trichoderma spp phân lập đất với nấm Phytophthora sp., Fusarium sp Colletotrichum sp gây bệnh phổ biến hồ tiêu... tài, nguồn gốc nấm đối kháng, nấm gây bệnh Phương pháp nghiên cứu tập trung phần thu mẫu, phân lập nấm Trichoderma spp nấm bệnh, đánh giá khả đối kháng nấm Trichoderma spp nấm bệnh phương pháp... phân lập nấm Trichoderma spp nấm bệnh Qua đó, đánh giá khả đối kháng nấm Trichoderma với nấm bệnh phổ biến hồ tiêu phân lập Đồ án tốt nghiệp Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan hồ tiêu