Xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng trên thanh long và bước đầu nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến tác nhân gây bệnh​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG TRÊN THANH LONG VÀ BƯỚC ĐẦU NGHIÊN C ỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN TÁC NHÂN GÂY BỆNH Ngành: CÔNG NGH Ệ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGH Ệ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Hai Sinh viên thực MSSV: 1051110144 : Võ Thị Lan Thanh Lớp: 10DSH2 TP Hồ Chí Minh, 2014 PHÒNG XÉT NGHIỆM NK-BIOTEK 793/58 TRẦN XUÂN SỌAN, P TÂN HƯNG, Q.7, TP HCM ÑT: (08) 37715818, (08) 37752252 Email: phhvan.nkbiotek@gmail.com, namkhoa.biotek@gmail.com GP soá: 41G8005341 KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM THƠNG TIN V Ề MẪU THỬ Nơi gởi mẫu: Mẫu thử: Yêu cầu: PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN  Giải trình tự gen 28 S rRNA tra cứu BLAST SEARCH Kết SAB Kết giải trình tự gen 28S CACACCATAAACCTTTTTTATGCAGTTGCAATCAGCGTCAGTATAACAAATGTAAATCAT TTACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGC GATACGTAGTGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGC CCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTGTACCCTCAAGCTTTGCTTG GTGTTGGGCGTTTTGTCTTTGCATCAAAGACTCGCCTTAAAACGATTGGCAGCCGGCCTA CTGGTTTCGGAGCGCAGCACATTTTTGCGCTTGCAATCAGCAAGAGGTCGGCAATCCATC AAGTCCATTTCTCACTTTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATA TCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCCTAGTAACGGCGAGTGAAGCGG CAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCTTTCAGAGTCCGAGTTGTAATTTGCAGAGGGCG CTTTGGCTTTGGCAGCGGTCCAAGTTCCTTGGAACAGGACGTCACAGAGGGTGAGAATCC CGTACGTGGTCGCTAGCTATTGCCGTGTAAAGCC Kết tra cứu BLAST SEARCH Cochliobolus lunatus internal transcribed spacer 1, partial sequence; 5.8S ribosomal RNA gene and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 28S ribosomal RNA gene, partial sequence Sequence ID: gb|JF798505.1|Length: 929Number of Matches: Related Information Range 1: 77 to 716GenBankGraphicsNext MatchPrevious Match Alignment statistics for match #1 Score Expect Identities Gaps Strand 1083 bits(586) 0.0 623/640(97%) 6/640(0%) Plus/Plus Query CACACCATAAACCTTTTTTATGCAGTTGCAATCAGCGTCAGTATAACAAATGTAAATCAT | Sbjct Query 77 60 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CACATCATAAACCTTTTTTATGCAGTTGCAATCAGCGTCAGTATAACAAATGTAAATCAT 61 136 TTACAACTT ||||||||| Sbjct 137 TTACAACTT Query 121 GATACGTAG ||||||||| Sbjct 197 GATACGTAG Query 181 CCTTTGGTA ||||||||| Sbjct 257 CCTTTGGTA Query 241 GGTGTTGGG ||||||||| Sbjct 317 GGTGTTGGG Query 297 GCCTACTGG ||||||||| Sbjct 377 GCCTACTGG Query 355 ATCCATCAA ||||||||| Sbjct 437 ATCCATCAA Query 415 AAGCATATC ||||||||| Sbjct 497 AAGCATATC Query 475 AAGCGGCAA ||||||||| Sbjct 557 AAGCGGCAA Query 535 AGGGCGCTT ||||||||| Sbjct 617 AGGGCGCTT Query 595 GAATCCCGT ||||||||| Sbjct 677 GAATCCCGT KẾT LUẬN TP Hồ Chí Minh, ngày 04 tháng 06 năm 2014 TRƯỞNG PHÒNG TS.BS.Phạm Hùng Vân LỜI CAM ĐOAN Tôi xin “CAM ĐOAN”, luận văn tốt nghiệp đƣợc thực dƣới hƣớng dẫn TS Nguyễn Thị Hai, giảng viên khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng, trƣờng Đại học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Tơi cam đoan nội dung, số liệu trích dẫn đồ án tốt nghiệp hồn tồn trung thực Tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Võ Thị Lan Thanh LỜI CÁM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, nổ lực thân, em nhận đƣợc hổ trợ, giúp đỡ nhiệt tình q thầy cơ, gia đình bạn bè, em xin chân thành gửi lời “CÁM ƠN” tới: Em xin gửi lời cám ơn đến tồn thể thầy trƣờng Đại học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, quý thầy cô khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trƣờng truyền đạt kiến thức quý báu làm tảng để em thực khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn, lời tri ân sâu sắc đến TS.Nguyễn Thị Hai, Cô tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt nhiều kiến thức, kinh nghiệm để em hồn thành khóa luận thật tốt Con xin gửi lời cảm ơn, lòng biết ơn sâu sắc đến ba, mẹ, gia đình, ngƣời thân ln bên cạnh con, cổ vũ, động viên tạo điều kiện tốt để hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cám ơn đến q thầy, bạn phịng thí nghiệm giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để em hồn thành đồ án tốt nghiệp cách tốt Trong trình làm đồ án tốt nghiệp, khó tránh khỏi sai sót; đồng thời, trình độ nhƣ kinh nghiệm thực tiễn hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp q Thầy, Cơ để em có thêm nhiều kiến thức nhƣ kinh nghiệm công việc tới Em xin chân thành cảm ơn ! Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Võ Thị Lan Thanh Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích nghiên cứu đề tài Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu long 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm phân bố 1.1.4 Đặc điểm chung long 1.2 Thành phần bệnh hại sản xuất long 1.2.1 Tình hình dịch hại long 1.2.2 Các bệnh thường gặp long 10 1.2.2.1 Bệnh thối đầu cành 10 1.2.2.2 Bệnh đốm nâu cành 10 1.2.2.3 Bệnh rám cành 10 1.2.3 Côn trùng gây hại long 10 1.2.3.1 Kiến 10 1.2.3.2 Bọ xít 11 1.2.3.3 Ruồi vàng hay ruồi trái 11 1.2.4 Các tượng sinh lý thường gặp long 11 1.2.4.1 Hiện tượng rụng nụ 11 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.4.2 Hiện tượng nứt vỏ trái 11 1.3 Một số bệnh hại 11 1.3.1 Bệnh thán thư 12 1.3.1.1 Đặc điểm gây hại 12 1.3.1.2 Phổ ký chủ 13 1.3.1.3 Phương pháp phòng trừ 14 1.3.2 Bệnh đốm trắng 16 1.3.2.1 Thời gian xuất 17 1.3.2.2 Tác hại 17 1.3.2.3 Các nghiên cứu bệnh đốm trắng long 18 1.3.2.4 Một số biện pháp phòng trừ bệnh đốm trắng 20 1.4 Giới thiệu nấm Cochliobolus lunatus 22 1.4.1 Phân loại 22 1.4.2 Đặc điểm hình thái, sinh hóa 23 1.4.3 Phổ ký chủ 23 1.4.4 Cơ chế xâm nhập gây bệnh 24 1.4.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm Cochliobolus lunatus 24 1.4.5.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 24 1.4.5.2 Ảnh hưởng nguồn cacbon 25 1.4.5.3 Ảnh hưởng ion kim loại 25 1.4.5.4 Ảnh hưởng pH 25 1.4.5.5 Ảnh hưởng nguồn nitơ 26 1.5 Sử dụng nấm Trichoderma phòng trừ bệnh đốm trắng 26 1.5.1 Giới thiệu nấm đối kháng Trichoderma 26 1.5.1.1 Đặc điểm phân loại 26 1.5.1.2 Nguồn gốc 26 ii Đồ án tốt nghiệp 1.5.1.3 Đặc điểm hình thái nấm 26 1.5.1.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 27 1.5.2 Cơ chế đối kháng nấm Trichoderma 28 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Địa điểm thời gian 34 2.1.1 Địa điểm 34 2.1.2 Thời gian 34 2.2 Vật liệu 34 2.2.1 Nguyên liệu 34 2.2.1.1 Trái cành long 34 2.2.1.2 Chủng nấm mốc 35 2.2.2 Hóa chất 35 2.2.3 Dụng cụ thiết bị 35 2.2.3.1 Dụng cụ 35 2.2.3.2 Thiết bị 35 2.2.3.3 Môi trường nuôi cấy 36 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 37 2.3.1 Phương pháp vi sinh 37 2.3.1.1 Phương pháp thu thập, phân lập xác định tác nhân gây bệnh 37 2.3.1.2 Phương pháp khảo sát ảnh hưởng số yếu tố đến tốc độ phát triển kích thước khuẩn lạc 42 2.3.1.3 Phương pháp đánh giá khả đối kháng nấm bệnh với chủng Trichoderma 43 2.3.2 Phƣơng pháp xử lý số liệu 46 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 3.1 Kết nhận dạng, phân lập xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng cành long 48 iii Đồ án tốt nghiệp 3.1.1 Kết phân lập 48 3.1.1.1 Chủng nấm N1 48 3.1.2.2 Chủng nấm N2 51 3.1.1.3 Chủng nấm N3 53 3.1.2 Kết lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch 55 3.2 Khảo sát ảnh hƣởng số yếu tố đến kích thƣớc tăng trƣởng nấm Cochliobolus lunatus 60 3.2.1 Ảnh hưởng ánh sáng đến kích thước tăng trưởng nấm Cochliobolus lunatus 60 3.2.2 Ảnh hưởng pH đến tăng trưởng kích thước nấm Cochliobolus lunatus 62 3.2.3 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến tăng trưởng kích thước nấm Cochliobolus lunatus 64 3.3 Khảo sát khả đối kháng chủng nấm Trichoderma với nấm Cochliobolus lunatus 67 3.3.1 Khả đối kháng chủng nấm Trichoderma virens với nấm Cochliobolus lunatus 67 3.3.2.Khả đối kháng chủng nấm Trichoderma harzianum với nấm Cochliobolus lunatus 69 3.3.3 Khả đối kháng nấm Trichoderma virens, Trichoderma harzianum với nấm Cochliobolus lunatus 70 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 4.1 Kết luận 73 4.2 Kiến nghị 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 iv Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by muc anh sang Method: 95.0 percent LSD Muc anh sang SLT 12S:12T Ảnh hƣởng mức ánh sáng đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus trƣớc Koch thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by muc anh sang Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by muc anh sang Method: 95.0 percent LSD Muc anh sang Slt 12s12t Đồ án tốt nghiệp Ảnh hƣởng mức ánh sáng đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus sau Koch thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by muc anh sang Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by muc anh sang Method: 95.0 percent LSD Muc anh sang SLT 12S:12T Ảnh hƣởng mức ánh sáng đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus sau Koch thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by muc anh sang Source Between groups Within groups Total (Corr.) Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by muc anh sang Method: 95.0 percent LSD Muc anh sang SLT 12S:12T Ảnh hƣởng mức ánh sáng đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus sau Koch thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duongkinh tan nam by mucanh sang Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by muc anh sang Method: 95.0 percent LSD Muc anh sang SLT 12S:12T Ảnh hƣởng mức ánh sáng đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus sau Koch thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by muc anh sang Source Between groups Within groups Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by muc anh sang Method: 95.0 percent LSD Muc anh sang SLT 12S:12T B.2 Ảnh hƣởng pH đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by pH Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by pH Method: 95.0 percent LSD pH Count pH8 pH6 pH7 pH5 Đồ án tốt nghiệp Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by pH Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by pH Method: 95.0 percent LSD pH Cou pH8 pH6 pH5 pH7 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by pH Source Between groups Within groups Total (Corr.) 10 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by pH Method: 95.0 percent LSD Ph Cou pH8 pH6 pH5 pH7 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by pH Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by pH Method: 95.0 percent LSD pH Cou pH8 pH5 pH6 pH7 B.3 Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến tốc độ tăng trƣởng kích thƣớc nấm C luantus Lƣợng nitơ 0,28 g/ l Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito 11 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguon nito khongbo sung Ure (NH4)2SO4 KNO3 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito Source Between groups Within groups Total (Corr.) 12 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguon nito khongbo sung Ure (NH4)2SO4 KNO3 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguonnito khongbo sung (NH4)2SO4 Ure KNO3 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito 13 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguon nito Khong bo sung (NH4)2SO4 Ure KNO3 Lƣợng nitơ 0,14 g/ l Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito Source Between groups Within groups Total (Corr.) 14 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguon nito khongbo sung Ure KNO3 (NH4)2SO4 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguonnito Khong bo sung Ure (NH4)2SO4 KNO3 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito 15 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguon nito Khong bo sung (NH4)2SO4 Ure KNO3 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for duong kinh tan nam by nguon nito Source Between groups Within groups Total (Corr.) 16 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by nguon nito Method: 95.0 percent LSD Nguon nito Khong bo sung (NH4)2SO4 Ure KNO3 So sánh lƣợng nitơ 0,28 g/l 0,14 g/l ANOVA Table for duong kinh tan nam by luong nito Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for duong kinh tan nam by luong nito Method: 95.0 percent LSD Luong nito 0.14 0.28 B.4 Đánh giá khả đối kháng chủng T virens T harzianum với chủng nấm C lunatus Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for PIGM by CHUNG 17 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by CHUNG Method: 95.0 percent LSD CHUNG T1 T2 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for PIGM by CHUNG Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by CHUNG Method: 95.0 percent LSD CHUNG T1 T2 Thời điểm ngày sau cấy ANOVA Table for PIGM by CHUNG 18 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by CHUNG Method: 95.0 percent LSD CHUNG T1 T2 Thời điểm 10 ngày sau cấy ANOVA Table for PIGM by CHUNG Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for PIGM by CHUNG Method: 95.0 percent LSD CHUNG T1 T2 19 Đồ án tốt nghiệp 20 ... long bƣớc đầu nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng đến tác nhân gây bệnh? ?? Đồ án tốt nghiệp Mục đích nghiên cứu đề tài Xác định đƣợc tác nhân gây bệnh đốm trắng long, yếu tố ảnh hƣởng đến nấm gây bệnh làm... loại bệnh Nội dung nghiên cứu Xác định tác nhân gây bệnh lạ long Ảnh hƣởng yếu tố đến phát triển nấm gây bệnh đốm trắng Đánh giá khả đối kháng chủng Trichoderma với tác nhân gây bệnh đốm trắng long. .. Nam giám định số mẫu bệnh đốm trắng cành long Chi cục Bảo vệ thực vật Bình Thuận gửi đến Qua kết phân lập giám định xác định tác nhân gây bệnh đốm trắng long nấm Neoscytalidium dimidiatum gây Kết