Bước đầu nghiên cứu quy trình nuôi nấm đông trùng hạ thảo (cordyceps militaris) có nguồn gốc từ nhật bản tại trà vinh

QT6.2/KHCN - BM3 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC ISO 9001 : 2008 BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CÓ NGUỒN GỐC TỪ NHẬT BẢN TẠI TRÀ VINH Chủ nhiệm đề tài: Chức danh: Đơn vị: Nguyễn Ngọc Trai Giảng viên Bộ môn Trồng trọt & PTNT Khoa Nông nghiệp - Thủy sản Trà Vinh, ngày……tháng… năm 2017 QT6.2/KHCN - BM3 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC ISO 9001 : 2008 BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CÓ NGUỒN GỐC TỪ NHẬT BẢN TẠI TRÀ VINH Xác nhận quan chủ quản (Ký, đóng dấu, ghi rõ họ tên) Chủ nhiệm đề tài (Ký, ghi rõ họ tên) Nguyễn Ngọc Trai Trà Vinh, ngày……tháng… năm 2017 TÓM TẮT Mucc̣ tiêu của đề tài nhằm xác đinḥ môṭ số yếu tố ảnh hưởng đến sư c̣sinh trưởng vàphát triển quảthểnấm Đông trùng c̣thảo (Cordyceps militaris) đươcc̣ nuôi môi trường nhân taọ (gaọ lức bổsung dinh dưỡng hoăcc̣ nhôngc̣ tằm xay) và kýchủnhôngc̣ tằm Kết quảnghiên cứu đaṭđươcc̣ sau : (1) Nhiêṭđô c̣250C và cường đô c̣ chiếu sáng 500 lux làphù hơpc̣ cho sư c̣ hinhh̀ thành vàphát triển quảthể nấm C militaris ; (2) Đối với môi trường nuôi làgaọ lức huyết rồng bổsung dinh dưỡng, 20 g gaọ lức đươcc̣ bổ sung 30 ml dung dicḥ dinh dưỡng gồm 18,56 g/l glucose; 14,55 g/l peptone; 1,42 g/l KH2PO4; 1,5 g/l MgSO4 và1,0 mg/l NAA, pH = 5,6 100% keo nuôi cónấm C militaris hinhh̀ thành quảthểvới trongc̣ lươngc̣ quảthể đaṭ8,01 g/keo; (3) Trên môi trường gaọ lức (50 g/hôpc̣ nuôi) bổsung 50 ml nước cất vànhôngc̣ tằm g/hôpc̣ nuôi, sau 60 ngày chủng giống sốlươngc̣ quảthể/hôpc̣ nuôi là 20,11 quả thể và trongc̣ lươngc̣ quả thể đaṭ 10,14 g, hàm lươngc̣ Cordycepin và Adenosine phân tichh́ đươcc̣ quảthểlần lươṭ là10,08 mg/g và0,57 mg/l và với chất nuôi (gaọ lức có chứa tơ nấm) đaṭ lần lươṭ 3,44 mg/g và0,09 mg/g ; (4) Nấm C militaris đươcc̣ nuôi taọ quả thểthành công nhộng tằm ngày tuổi với sốquảthểđaṭtrung binhh̀ 1,69 quảthể/nhôngc̣ ii MỤC LỤC Trang THÔNG TIN CHUNG VỀ ĐỀ TÀI i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii LỜI CẢM ƠN ix MỞ ĐẦU - 1 Tính cấp thiết đề tài - Tổng quan nghiên cứu - 2.1 Giới thiêụ chung vềnấm Cordyceps militaris - - 2.2 Tình hình nghiên cứu nấm Đơng trùng c̣thảo (C militaris) nước- 2.3 Tình hình nghiên cứu nấm Đơng trùng c̣thảo (C militaris) ngoài nước- Mục tiêu đề tài - Đối tương,,̣ phaṃ vi vàphương pháp nghiên cứu - 4.1 Đối tương,c̣ điạ điểm va thơi gian nghiên cưu - h̀ h̀ 4.2 Qui mô nghiên cưu - h́ 4.3 Phương pháp nghiên cứu - NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Chương Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ cường độ ánh sáng đến khả hình thành thể thể nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) nuôi môi trường gạo lức bổ sung dinh dưỡng - 1.1 Mục đích nghiên cưu - 9h́ 1.2 Bốtrithinghiêṃ - 9h́ h́ 1.3 Phương pháp thực 1.4 Kết quả nghiên cứu iii - 9- 10 - Chương Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng glucose, peptone, MgSO4, K2HPO4 NAA bổ sung vào môi trường gạo lức lên phát triển thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) -152.1 Mục đích nghiên cưu -152.2 Bốtrithinghiêṃ -15h́ h́ 2.3 Phương pháp thực -152.4 Kết quả nghiên cứu -17Chương Tới ưu hóa mơi trường ni cấy nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) môi trường gạo lức bổ sung dinh dưỡng 3.1 Mục đích nghiên cưu h́ Phương pháp thực 3.2 3.4 Kết quả nghiên cứu -25-25-25-27- Sau 60 chung giống tiến hanh thu hoach qua thể -32̀ ̉ ̀ ̉ Chương Nuôi tạo thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) môi trường gạo lức bổ sung nhộng tằm xay 4.1 Mục đích nghiên cưu h́ -33-33- 4.2 Bốtrithinghiêṃ h́ h́ 4.3 Phương pháp thực 4.4 Kết quả nghiên cứu -33-33-34- Sau 60 chung giống tiến hanh thu hoach qua thể.Chương Nuôi tạo ̀ ̉ thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) kýchủnhộng tằm -385.1 Mục đích nghiên cứu -395.2 -39Bốtrith́ hinh́ ghiêṃ 5.3 Phương pháp thực -395.4 Kết quả nghiên cứu -40-47KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ KẾT LUẬN ́ KIÊN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt -47-47-48-48- Tiếng Anh -48PHỤ LỤC -52- iv 1.Các thành viên tham gia thực đề tài -522.Phân tích phương sai -52- v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CV C militaris Coefficient of variation Cordyceps militaris ĐTHT Đông trung c̣thao et al g/l et alia Gram/lit LSD Least significant difference mm milimet mg miligam µg microgam Ns Non Significan NAA Naphthalene acetic acid NBRC Biological resourse center, Nite P Probability h̀ ̉ vi DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng Ảnh hưởng của nhiệt độ và cường độ chiếu sáng lên tỷlê hc̣ inhh̀ thành quả thể - 11 - Bảng Ảnh hưởng của nhiệt độ và cường độ chiếu sáng lên số lượng quả thể nấm ĐTHT -12Bảng Ảnh hưởng của nhiệt độ và cường độ chiếu sáng lên chiều cao quả thể nấm ĐTHT/keo nuôi -12Bảng Ảnh hưởng của nhiệt độ và cường độ chiếu sáng lên đương kinh qua thể h́ ̉ 13 Bảng Ảnh hưởng của nhiệt độ và cường độ chiếu sáng lên trọng lượng quả thể nấm ĐTHT/keo nuôi Bang Gia tri c̣ma hoa, gia tri tc̣ hưcc̣ nghiêm,c̣ ̉ h́ ̃ -14khoang gia tri c̣biến thiên cua yếu tố h́ ̉ h́ ̉ đươcc̣ sư dungc̣ đểthiết kếtối ưu theo mô hinh Box-Behnken Design (BBD)- 25 ̉ h̀ Bang Ma trâṇ thưcc̣ nghiêṃ vơi yếu tốglucose, peptone va KH 2PO4 -26̉ h́ h̀ Bang Ma trâṇ thưcc̣ nghiêṃ vơi yếu tốglucose, peptone va KH2PO4 va kết qua ̉ h́ h̀ h̀ -27thínghiêṃ Bang Bang phân tich phương sai tối ưu hoa mô hinh cac yếu tố -28̉ ̉ h́ h̀ h́ Bang 10 Kết qua phân tich sư c̣phu hơpc̣ cua mô hinh vơi thưcc̣ nghiêṃ -29 ̉ ̉ h̀ Bang 11 Ảnh hương cua lươngc̣ nhôngc̣ ̉ ̉ ̉ h̀ h́ tằm xay bổsung đến sư hc̣ inh va phat triển cua qua thểnấm ĐTHT h̀ h̀ h̀ ̉ ̉ Bảng 12 Ảnh hưởng của vị trí tiêm và t̉i nhộng tằm lên tỷ lệ nhơngc̣ tằm nhiễm -34- nấm C militaris -40Bảng 13 Ảnh hưởng của vị trí tiêm và t̉i nhộng tằm lên sốlươngc̣ quả thể nấm nấm C militaris hinh nhôngc̣ tằm -41h̀ h̀ Bảng 14 Ảnh hưởng của vị trí tiêm và tuổi nhộng tằm lên chiều cao quả thể nấm nấm C militaris hinh nhôngc̣ tằm -42h̀ h̀ Bảng 15 Ảnh hưởng của vị trí tiêm và t̉i nhộng tằm lên đường kih́nh quả thể nấm nấm C militaris hinhh̀ thành nhôngc̣ tằm - 43 - vii DANH SÁCH HÌNH Trang -2- Hinh Qua thểnấm C militaris ky chu nhôngc̣ h̀ ̉ h́ ̉ Hình Hình thái nấm ĐTHT (C militaris) mơi trường nuôi tạo quả thể - 10 Hinh Biểu đồ thểhiêṇ sư ac̣ nh hương cua ham lươngc̣ Glucose dung dicḥ h̀ ̉ ̉ ̉ h̀ dinh dương bổsung lên sư c̣sinh trương nấm C militaris ̃ ̉ -17- Hinh Qua thểnấm C militaris nghiêṃ thưc (trai) va nghiêṃ thưc (phai) sau h̀ ̉ h́ h́ h̀ h́ 60 chung giống -18 h̀ ̉ Hinh Biểu đồthểhiêṇ sư ac̣ nh hương cua ham lươngc̣ h̀ ̉ ̉ ̉ Peptone dung dicḥ h̀ dinh dương bổsung lên sư c̣sinh trương nấm C militaris ̃ ̉ Hinh Biểu đồ thểhiêṇ sư ac̣ nh hương cua ham lươngc̣ h̀ ̉ ̉ ̉ MgSO4.7H20 dung h̀ dicḥ dinh dương bổsung lên sư c̣sinh trương nấm C militaris ̃ ̉ Hinh Biểu đồ thểhiêṇ sư ac̣ nh hương cua ham lươngc̣ h̀ ̉ ̉ ̉ -21- K2HPO4 dung dicḥ h̀ dinh dương bổsung lên sư c̣sinh trương nấm C militaris ̃ -19- ̉ -22- Hinh Biểu đồthểhiêṇ sư ac̣ nh hương cua ham lươngc̣ NAA dung dicḥ dinh h̀ h̀ ̉ ̉ h̀ dương bổsung lên sư c̣sinh trương nấm C militaris -23̃ Hinh Qua thểnấm ĐTHT (C militaris) môi trương gaọ lưc bổ sung dinh ̉ h̀ dương nghiêṃ thưc tối ưu (trai) va qua thểđươcc̣ gưi phân tich Cordycepin ̃ ̉ h́ h́h̀ ̉ ̉ va Adenosine (phai) -30h̀ ̉ Hinhh̀ 10 Sơ đồtóm tắt qui trinhh̀ nuôi nấm ĐTHT (C militaris) môi trường gaọ lức bổsung dinh dưỡng - 31 Hình 11 Quảthểnấm ĐTHT (C militaris) Trên môi trường gaọ lức bổsung nhôngc̣ tằm xay sau 60 ngày chủng giống - 35 - Hinhh̀ 12 Sơ đồtóm tắt qui trinhh̀ nuôi nấm ĐTHT (C militaris) môi trường gaọ lức bổsung nhôngc̣ tằm xay - 37 Hinh 13 Tằm (Bombyx mori) đươcc̣ nuôi taịtrương Đaịhocc̣ Tra Vinh Giai đoaṇ h̀ h̀ h̀ tằm (trai) va giai đoaṇ nhôngc̣ (phai) -40h́ h̀ ̉ Hinh 14 Nhôngc̣ tằm nhiễm nấm sau tiêm C militaris (trai) va Qua thểnấm h̀ h̀ h́ h̀ C militaris hinh hanh nhôngc̣ tằm sau 60 chung giống (phai) - 41 h̀ h̀ h̀ ̉ ̉ Hinh 15 Sơ đồtom tắt qui trinh nuôi nấm ĐTHT (C militaris) ky chu nhôngc̣ h̀ h́ h̀ h́ -45tằm viii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài này, xin chân thành gởi lời cảm ơn đến: Ban Giám Hiệu, Khoa Nông nghiệp - Thủy sản, Phòng Khoa học Cơng nghệ, Phòng Kế hoạch - Tài vụ Trường Đại học Trà Vinh tạo điều kiện thuận lợi nhất để có điều kiện làm việc và nghiên cứu đề tài Các đồng nghiệp tại Bộ môn Trồng trọt & PTNT, Khoa Nông nghiệp Thủy sản Trường Đại học Trà Vinh hỗ trợ hoàn thành đề tài này Q Thầy Trường Đại học Cần Thơ giảng dạy và truyền đạt kiến thức quý báo làm nền tảng để có thể thực đề tài Các em sinh viên lớp Đại học Khoa học canh tác trồng khóa 2013, Khoa Nông nghiệp - Thủy sản, Trường Đại học Trà Vinh hỗ trợ thực đề tài Chân thành cảm ơn với tấm lòng trân trọng nhất! Nguyễn Ngọc Trai ix Gaọ lưc huyết rồng h́ (50g/hôp)c̣ C militaris - 50 ml nươc cất h́ - g nhôngc̣ tằm xay nhuyên Nuôi sinh khối 100ml môi trương ban h̀ ̉ - Khư trung 1210C, - Che tối,25 C, h̀ - Lắc 150 rpm 25 ml/hôpc̣ ̉ h̀ để Hôpc̣ nuôi Giống Che tối, 25 C Tơ nấm phu kin môi trương ̉ h́ h̀ Kich thich hinh qua thể h́ h́ h̀ h̀ ̉ Qua thểhinh ̉ h̀ h̀ Ni quảthể Thu quảthể Hinh̀ 12 Sơ đồtóm tắt qui trinh̀ nuôi nấm ĐTHT (C militaris) môi trường gaọ lức bổsung nhông,̣ tằm xay Mô tảqui trı̀nh nuôi nấm ĐTHT (C militaris) môi trường gaọ lức bổsung nhông ̣ tằm xay Qui trinhh̀ nuôi nấm ĐTHT (C militaris) môi trường gaọ lức bổ sung nhôngc̣ tằm xay đươcc̣ thưcc̣ hiêṇ sau: Giống nấm C militaris môi trường PSA (Potato succrose agar) đươcc̣ tiếp tục nuôi môi trường bản (20 g/l sucrose, 20 g/l peptone, 0.5 g/l MgSO4.7H2O và 1g/l K2HPO4) ở điều kiện 25 C thời gian ngày máy lắc với tốc đô c̣150 rpm để lấy dịch nuôi 50 g gaọ lức huyết rồng đươcc̣ cho vào các hôpc̣ nhưạ 1000 ml Bổsung g nhôngc̣ tằm đa đ̃ ươcc̣ xay nhuyễn vào hôpc̣ nhưạ - 37 - Sau đó cho 50 ml nước cất vào Trôṇ đều Đâỵ nắp Khử trùng ở nhiêṭ đô c̣ 121 C, thời gian 20 phút Đểngịởnhiêṭđơ c̣phòng 25 ml dicḥ nuôi nấm C militaris đươcc̣ chủng vào hôpc̣ nuôi cóchứa gaọ lức và nước cất đa ̃đươcc̣ khử trùng Sau đónắp đâỵ đươcc̣ thay bằng bicḥ nilon đa ̃đươcc̣ khử trùng Hơpc̣ ni đươcc̣ đưa vào phòng ủtơ cónhiêṭđơ 2c̣ C, điều kiêṇ che tối hoàn toàn cho đến tơ nấm phủkiń bềmăṭmôi trường Đưa hôpc̣ nuôi vào phòng ni vàkichh́ thichh́ hinhh̀ thành quảthểở điều kiên:c̣ 0 23 C, 500 lux 12 giờ vào ban ngày và 17 C 12 giờ ở điều kiện tối hoàn toàn vào ban đêm, ẩm độ điều chỉnh 90-95%, thời gian ngày Khi quảthểnhú mầm bằng ngòi bút bi tiến hành ni quảthểở điều kiêṇ 25 C, 500 lux 14 giờvàđiều kiêṇ tối hoàn toàn ở25 C 10 giờ Sau 60 ngày chủng giống tiến hành thu hoacḥ quảthể -38- Chương Nuôi tạo thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) kýchủ nhộng tằm 5.1 Mục đích nghiên cứu Xác định vị trí tiêm và độ t̉i nhộng tằm phù hợp để nuôi tạo quả thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) kýchủnhơngc̣ tằm 5.2 Bớtrıı́thıı́nghiêm Thínghiêṃ đươcc̣ bớtríhoàn toàn ngẫu nhiên với nhân tớ: nhân tớ A (tuổi nhộng tằm) với mức độ 9; 10; 11; 12 ngày t̉i tính từ lúc tằm bắt nhảtơ; nhân tớ B (vị trí tiêm) với mức độ: phần ngực phần bụng Thí nghiệm gờm nghiệm thức lặp lại lần với lần lặp lại là keo thủy tinh chứa 10 nhôngc̣ tằm chủng dịch nuôi nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) 5.3 Phương pháp thực Viêcc̣ gây nhiễm vànuôi taọ quảthểnấm C militaris kýchủnhôngc̣ tằm đươcc̣ thưcc̣ hiêṇ theo phương pháp đươcc̣ mô tảbởi Hong et al (2010) với mơṭ sớ biến đởi đểphùhơpc̣ điều kiêṇ phòng thínghiêṃ Dịch nuôi nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) lọc qua màng lọc 75 µl dịch ni nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) sau lọc tiêm vào nhộng tằm ở các nghiệm thức khác Nhộng tằm sau tiêm đặt keo lót giấy ở điều kiện 20 C cho đến thể nhộng tằm trở nên cứng và bao bởi tơ nấm màu trắng bên ngoài Nuôi tạo quả thể: các nhộng tằm nhiễm nấm C militaris chuyển sang keo nuôi cólót giấy thấm vàthêm nước taọ ẩm để tạo điều kiện cho quả thể hinhh̀ thành vàphát triển Các keo ni này đươcc̣ đưa vào phòng ni đểđiều chỉnh nhiêṭ đô 0 c̣vàánh sáng (23 C, 500 lux 12 giờ vào ban ngày và 17 C 12 giờ ở điều kiện tối hoàn toàn vào ban đêm) cho đến quảthểnhúlên từ nhôngc̣ tằm Đến lúc này, nhiêṭđơ c̣phòng ni quảthểđươcc̣ điều chinh̉ 25 C, cường đô cc̣ hiếu sáng 500 lux 14 giờ/ngày và25 C điều kiêṇ che tối hoàn toàn thời gian 10 giờ/ngày, ẩm độ điều chỉnh 90-95% đểquảthểphát triển Nhộng tằm ở nghiệm thức có tỷ lệ nhộng tằm tạo quả thể nhiều nhất gởi phân tích hàm lượng Cordycepin vàAdenosine Chỉ tiêu theo dõi Tỷ lệ (%) nhộng tằm bị nhiễm nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) ở các nghiêṃ thức Số lượng quả thể/nhộng tằm sau 60 ngày nhộng tằm nhiễm nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) -39- Chiều cao trung bình quả thể (mm) sau 60 ngày nhộng tằm bị nhiễm nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) Đường kính trung bình quả thể (mm) sau 60 ngày nhộng tằm bị nhiễm nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) Hàm lươngc̣ Cordycepin vàAdenosine quảthểvànhôngc̣ tằm ở nghiêṃ thức đươcc̣ choṇ 5.4 Kết quả nghiên cứu Hinh̀ 13 Tằm (Bombyx mori) đươc,̣ nuôi taịtrường Đaịhoc,̣ TràVinh Giai đoaṇ tằm (trái) vàgiai đoaṇ nhông,̣ (phải) Sau thời gian -5 ngày tiêm dicḥ nuôi nấm C militaris nhôngc̣ tằm đa ̃bi nhịễm nấm với biểu hiêṇ tơ nấm màu trắng đucc̣ hinhh̀ thành ởvi c̣trítiêm vàcác lỗkhíhai bên thành bungc̣ vànhơngc̣ trởnên cứng sau 7-10 ngày tiêm nấm (hinhh̀ 14) Bảng 12 Ảnh hưởng vị trí tiêm t̉i nhộng tằm lên tỷ lệ nhông,̣ tằm nhiễm nấm C militaris Vị trí tiêm (B) Phần ngực Phần bụng 43,33 43,33 Trung bình (%) F (A) F (B) F (A x B) 43,33 Tuổi nhộng (ngày) (A) 10 11 53,33 56,67 c 47,89 CV (%) 56,67 63,33 b ab 50,81 ** ns ns 12 Trung bình (%) 66,67 63,33 47,93 48,89 53,88 a 7,0 Ghi chú: Trong cùng mơṭ hàng, sớcóít môṭ chữcái theo sau giống thìkhác biêṭ không cóýnghiã thớng kê dùng phép kiểm đinḥ LSD, (ns): khác biêṭkhơng cóýnghia ̃ thớng kê; (**): khác biêṭởmức ýnghiã 1% Các giá tri t ̣ rong bảng trung bình của các lần lăp ̣ laị -40- Không cósư c̣tương tác vi tc̣ rítiêm vàt̉i nhơngc̣ tằm lên tỷlê c̣nhôngc̣ tằm nhiễm nấm C militaris Ơ hai vi tc̣ rítiêm dicḥ ni nấm C militaris khác (phần ngưcc̣ hoăcc̣ phần bung)c̣ tỷlê c̣nhôngc̣ tằm nhiễm nấm C militaris khác biêṭ không cóýnghiã thống kê vàdao đôngc̣ từ 47,93% đến 48,89% Tuy nhiên, cósư c̣ khác biêṭlớn vềtỷlê nc̣ hôngc̣ nhiễm nấm C militaris ở các tuổi nhôngc̣ khác (bảng 12) Nhôngc̣ tằm 12 ngày tuổi cótỷlê nc̣ hiễm cao nhất (53,88%) vàđaṭthấp nhất (43,33%) nhôngc̣ tằm cótuổi đời ngày Tuy nhiên, đối với nhôngc̣ 12 ngày tuổi đươcc̣ ghi nhâṇ cóhơn 50% nhôngc̣ đa h̃ óa bướm Hinh̀ 14 Nhông,̣ tằm nhiêm̃ nấm sau ngày tiêm C militaris (trái) vàQuảthể nấm C militaris hinh̀ hành nhông,̣ tằm sau 60 ngày chủng giống (phải) Kết quảnày tương tư c̣ nghiên cứu đươcc̣ báo cáo bởi Hong et al (2010) nghiên cứu sư c̣ hình thành quảthểcủa chủng nấm C militaris kýchủnhơngc̣ tằm làvới vi c̣trítiêm: đầu, ngưcc̣ vàbungc̣ thìtỷlê c̣nhơngc̣ nhiễm nấm cao nhất làphần ngưcc̣ vàphần bungc̣ Bảng 13 Ảnh hưởng vị trí tiêm t̉i nhộng tằm lên sốlương,̣ thể nấm nấm C militaris hinh̀ thành nhơng,̣ tằm T̉i nhộng (ngày) (A) Trung bình Vị trí tiêm (B) (quả 10 11 12 thể/nhơng),̣ Phần ngực Phần bụng Trung bình (qua ̉ 1,68 1,70 1,69 a 1,45 1,47 1,46 thể/nhông),̣ F (A) F (B) F (A x B) b 1,55 1,57 1,56 ab * ns ns CV (%) 12,29 -41- 1,47 1,38 1,43 b 1,53 1,53 Ghi chú: Trong cùng mơṭ hàng, sớcóit́ mơṭ chữcái theo sau giớng thik̀ hác biêṭ khơng cóýnghiã thống kê dùng phép kiểm đinḥ LSD, (ns): khác biêṭkhơng cóýnghia ̃ thớng kê; (*): khác biêṭởmức ýnghiã 5% Các giá tri t ̣ rong bảng làtrung biǹ h của các lần lăp ̣ laị Sau nhiễm nấm C militaris, các nhôngc̣ tằm đươcc̣ chuyển sang các keo khác cóchứa giấy thấm đươcc̣ bổsung nước nhằm giữẩm vàđăṭvào phòng ni taọ điều kiêṇ đểquảthểhình thành vàphát triển nhôngc̣ tằm Sau 12 ngày kichh́ thichh́ hinhh̀ thành quảthểcó 100% nhôngc̣ tằm bi nc̣ hiễm nấm C militaris ở các nghiêṃ thức hinhh̀ thành quảthể Tuy nhiên, sốlươngc̣ quảthểhinhh̀ thành nhôngc̣ tằm ở các nghiêṃ thức rất it,h́ quảthểchỉmocc̣ từ vi tc̣ rítiêm nấm C militaris với số lươngc̣ trung binhh̀ từ 1,38 1,7 quảthể/nhôngc̣ tằm Măcc̣ dùcótỷlê c̣nhiễm nấm C militaris cao nhất sốlươngc̣ quảthểnấm C militaris hinhh̀ thành/nhôngc̣ tằm thấp nhất (chỉđaṭ1,43 quảthể/nhông)c̣ nhôngc̣ cótuổi đời 12 ngày tuổi Nhôngc̣ tằm với tuổi đời ngày nhiễm cho sốlươngc̣ quảthểnấm C militaris/nhôngc̣ tằm làcao nhất đaṭtrung bình 1,69 quảthê ̉/nhơngc̣ tằm (bảng 13) Bảng 14 Ảnh hưởng vị trí tiêm tuổi nhộng tằm lên chiều cao thể nấm nấm C militaris hinh̀ thành nhông,̣ tằm Tuổi nhộng (ngày) (A) Trung bình Vị trí tiêm (B) (mm) 10 11 12 Phần ngực Phần bụng 31,67 30,5 Trung bình (mm) F (A) F (B) F (A x B) 31,08 30,04 27,36 a 28,70 CV (%) ab 26,72 28,20 b 27,46 ** ns ns 26,43 28,33 27,38 28,72 28,60 b 6,36 Ghi chú: Trong cùng mơṭ hàng, sớcóít mơṭ chữcái theo sau giớng thìkhác biêṭ khơng cóýnghiã thớng kê dùng phép kiểm đinḥ LSD, (ns): khác biêṭkhông cóýnghia ̃ thớng kê; (*): khác biêṭởmức ýnghiã 5% Các giá tri t ̣ rong bảng làtrung biǹ h của các lần lăp ̣ laị Kết quảthínghiêṃ trình bày ở bảng 14 cho thấy đô c̣ tuổi nhôngc̣ tằm cóảnh hưởng đến chiều cao quảthểnấm C militaris Chiều quảthểnấm tỷlê c̣nghicḥ với t̉i nhơngc̣ tằm thínghiêṃ Chiều cao quả thể nấm C militaris dao đôngc̣ khoảng 30mm Nhôngc̣ tằm ngày tuổi quảthểnấm C militaris hinhh̀ thành cóchiều cao đaṭcao nhất với trung binhh̀ ởhai vi c̣trítiêm là31,08 mm vàkhác biêṭcóýnghiã thống kê ởmức 1% so với chiều cao quảthểởnhơngc̣ tằm các c̣ t̉i laị Chiều cao quảthểđaṭthấp nhất (27,38) nhôngc̣ tằm 12 ngày tuổi Tuy nhiên, chiều cao trung bình quảthểthu đươcc̣ đới với vi c̣trítiêm của nhơngc̣ tằm ở các c̣t̉i khác -42- không cósư kc̣ hác biêṭýnghiã thống kê vàcũng không cósư tc̣ ương tác vi c̣ trítiêm vàt̉i nhơngc̣ tằm lên chiều cao quảthểnấm C militaris thu đươcc̣ Bảng 15 Ảnh hưởng vị trí tiêm t̉i nhộng tằm lên đường kin ́ h thể nấm nấm C militaris hinh̀ thành nhông,̣ tằm Tuổi nhộng (ngày) (A) Trung bình Vị trí tiêm (B) (mm) 10 11 12 Phần ngực Phần bụng 2,07 2,14 Trung bình (mm) F (A) F (B) F (A x B) 2,10 2,11 1,97 a 2,04 CV (%) ab 2,05 1,91 ab 1,98 ** ns ns 1,82 1,87 1,85 2,01 1,97 b 5,53 Ghi chú: Trong cùng mơṭ hàng, sớcóít mơṭ chữcái theo sau giớng thìkhác biêṭ khơng cóýnghiã thớng kê dùng phép kiểm đinḥ LSD, (ns): khác biêṭkhông cóýnghia ̃ thớng kê; (**): khác biêṭởmức ýnghiã 1% Các giá tri t ̣ rong bảng trung biǹ h của các lần lăp ̣ laị Đường kính quảthểở các nghiêṃ thức thínghiêṃ dao đơngc̣ từ 1,82 - 2,14 mm kết quảcho thấy rằng đường kinhh́ quảthểC militaris tỷlê c̣nghicḥ với tuổi nhôngc̣ tằm, nhôngc̣ tằm có tuổi đời nhỏ thìđường kinhh́ quảthểlớn vàngươcc̣ laị Từ các kết quảthínghiêṃ thu thâpc̣ đươcc̣ phân tichh́ vàtrinhh̀ bày ởcác bảng 15 cóthểthấy rằng nhơngc̣ tằm cót̉i đời nhỏ(9 ngày t̉i) thìtỷlê nc̣ hiễm nấm C militaris thấp các chỉtiêu vềsư c̣ phát triển quảthểnhư: số lươngc̣ quảthể, chiều cao quảthểvàđường kinhh́ quảthểlaịhơn so với nhôngc̣ tằm cóđô c̣ tuổi lớn (10, 11 và12 ngày tuổi) Điều này cóthểgiải thichh́ làdo nhơngc̣ tằm cót̉i đời lớn thìkhảnăng miễm dicḥ ́u nên dễdàng bi c̣nấm xâm nhâpc̣ lây nhiễm vàcó thành phần dinh dưỡng màđăcc̣ biêṭlàhàm lươngc̣ protein giảm nhôngc̣ tằm nhảhết tơ vàchuẩn bi c̣ hóa bướm nên thiếu dinh dưỡng cho sư pc̣ hát triển quảthể Từ kết quảtrinhh̀ bày bên trên, nhôngc̣ tằm ngày tuổi vàvi tc̣ rítiêm phần bungc̣ đươcc̣ choṇ đểnghiên cứu sản xuất nấm ĐTHT kýchủnhôngc̣ tằm Kết quảphân tichh́ thành phần Cordycepin vàAdenosine, hai thành phần cótác dungc̣ dươcc̣ lýchinhh́ ở nấm ĐTHT từ quảthểvàkýchủnhôngc̣ tằm, cho thấy hàm lươngc̣ Cordycepin vàAdenosine đaṭđươcc̣ lần lươṭ là4,28 g/g và0,14 mg/g Hàm lươngc̣ Cordycepin vàAdenosin đươcc̣ phân tichh́ nhỏ ở quảthểnuôi môi trường gaọ lức bổsung nhôngc̣ tằm vàtrên gaọ lức bổsung dinh dưỡng, điều này có thểdo phân tichh́ cảquảthểvànhôngc̣ tằm nên nhôngc̣ tằm hàm lươngc̣ hai chất này ith́ quảthể Tuy nhiên, so với nghiên cứu đươcc̣ báo cáo bởi Huang et -43- al (2009) cho thấy hàm lươngc̣ Cordycepin cao gấp lần và hàm lươngc̣ Adenosin thấp 12 lần Từ kết quảthínghiêṃ đaṭđươcc̣ bên trên, cóthểkhái quát qui trinhh̀ nuôi taọ quảthểnấm ĐTHT (C militaris) kýchủnhôngc̣ tằm theo sơ đồđươcc̣ trinhh̀ bày ở hinhh̀ 15 Mô tảqui trı̀nh nuôi nấm ĐTHT (C militaris) kýchủnhông ̣ tằm Qui trinhh̀ nuôi nấm ĐTHT (C militaris) kýchủnhôngc̣ tằm đươcc̣ thưcc̣ hiêṇ sau: Giống nấm C militaris môi trường PSA (Potato succrose agar) đươcc̣ tiếp tục nuôi môi trường bản (20 g/l sucrose, 20 g/l peptone, 0.5 g/l MgSO4.7H2O và 1g/l K2HPO4) ở điều kiện 25 C thời gian ngày máy lắc với tốc đô c̣150 rpm, dicḥ nuôi đươcc̣ locc̣ qua màng locc̣ đểthu lấy dicḥ tiêm vào nhôngc̣ tằm Nhôngc̣ tằm ngày tuổi (đươcc̣ tinhh́ từ lúc tằm nhảtơ) đươcc̣ cắt khỏi kén và đươcc̣ vê sc̣ inh bềmăṭbằng cồn 70 Tiêm 75 µl dicḥ ni sau đa l̃ occ̣ vào nhôngc̣ tằm ởphần bungc̣ nhôngc̣ tằm Đưa keo chứa nhơngc̣ tằm nhiễm nấm C militaris vào phòng ni đươcc̣ che tối với nhiêṭđô 2c̣ C Sau 10 - 12 ngày nuôi, choṇ nhôngc̣ tằm nhiễm nấm C militaris vào keo nuôi mới cólót giấy thấm Đưa keo ni vào phòng ni vàkichh́ thichh́ hinhh̀ thành quảthểở điều kiên:c̣ 23 C, 500 lux 12 giờ vào ban ngày và 17 C 12 giờ ở điều kiện tối hoàn toàn vào ban đêm, ẩm độ điều chỉnh 90-95%, thời gian 12 ngày Khi quảthểnhú từ nhơngc̣ tằm bằng ngòi bút bi tiến hành ni quảthểở điều 0 kiêṇ 25 C, 500 lux 14 giờvàđiều kiêṇ tối hoàn toàn ở25 C 10 giờ Sau 60 ngày tinhh́ từ lúc tiêm nấm C militaris vào nhôngc̣ tằm tiến hành thu hoacḥ quảthể -44- C militaris Trứng tằm - Nuôi bằng ládâu Nuôi sinh khối - Tằm nhảtơ đươcc̣ ngày 100ml môi trường bản - Cắt nhôngc̣ khỏi kén, vê c̣ - Che tối,25 C, ngày - Lắc 150 rpm Giống sinh bằng cồn 70 Nhôngc̣ Tiêm 75 µl/nhôngc̣ - Cho vào keo thủy tinh cólót giấy, giữẩm - Che tối, 20 C Nhôngc̣ tằm nhiêm̃ nấm C militaris - Chuyển sang keo khác - Kichh́ thichh́ hinhh̀ thành quảthể -Nuôi quảthể Thu quảthể Hinh̀ 15 Sơ đồtóm tắt qui trinh̀ ni nấm ĐTHT (C militaris) kýchủ nhông,̣ tằm Nhóm thực đề tài tổ chức Hội thảo “Đông trùng ̣thảo (C militaris)nguồn dược liệu quý tiềm phát triển Trà Vinh” tại Trường Đại học Trà Vinh ngày 17 tháng năm 2017 với sư tc̣ ham dự của 30 đại biểu đến từ Trung tâm Công nghê S c̣ inh hoc,c̣ Trung tâm Ứng Dungc̣ Tiến Bô K c̣ hoa hocc̣ vàCông nghê,c̣bô c̣ môn Dươc,c̣ Trung tâm Công nghê S c̣ au thu hoacḥ Trường Đaịhocc̣ TràVinh,… Các Đại biểu tham dự hội thảo đánh giá cao về kết quả nghiên cứu đaṭđươcc̣ vàđưa môṭsốhướng nghiên cứu mới nhằm taọ các sản phẩm cógiátri cc̣ ao từ nấm Đông trùng c̣thảo đểphucc̣ vu c̣nhu cầu chăm sóc sức khỏe người dân vàngoài tỉnh Qua các kết quả nghiên cứu cũng qua Hội thảo cho thấy triển vọng để phát triển viêcc̣ nuôi trồng nấm Đông trùng c̣thảo taịTràVinh đểcung cấp sản phẩm cho nghiên cứu sâu cũng chuyển giao công nghê cc̣ ho các đơn -45- vi c̣cónhu cầu làrất lớn Đó cũng là thành công bước đầu của đề tài cũng niềm động viên đối với cán tham gia thực đề tài -46- ́ KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ KẾT LUẬN Nhiêṭđô c̣25 C vàcường c̣chiếu sáng 500 lux làphùhơpc̣ cho sư hc̣ ình thành vàphát triển quảthểnấm C militaris; 20 g gaọ lức đươcc̣ bổ sung 30 ml dung dicḥ dinh dưỡng gồm 18,56 g/l glucose; 14,55 g/l peptone; 1,42 g/l KH2PO4; 1,5 g/l MgSO4 và1,0 mg/l NAA phù hơpc̣ cho viêcc̣ nuôi taọ quảthể Môi trường nuôi chứa 50 g gaọ lức huyết rồng bổ sung 50 ml nước cất và nhôngc̣ tằm g/hơpc̣ có 100% keo ni có nấm hình thành quả thể và đạt trongc̣ lươngc̣ tươi quảthểđaṭcao các nghiệm thức nghiên cứu Nhôngc̣ tằm ngày tuổi đươcc̣ tiêm 75µl dicḥ ni vào phần bungc̣ phùhơpc̣ cho viêcc̣ nuôi taọ quảthểnấm C militaris kýchủnhôngc̣ tằm ́ KIÊN NGHỊ Sản xuất thử nghiêṃ quảthểnấm C militaris các môi trường đa đ̃ ươcc̣ nghiên cứu đểđiều chỉnh các thông sốphùhơpc̣ cho qui mô nuôi công nghiêpc̣ Ly trich,h́ đánh giákhảnăng kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxy hóa vàđiều tri ungc̣ thư của môṭsốhơpc̣ chất từ quảthểnấm C militaris Nghiên cứu sản xuất môṭsốsản phẩm cógiátri giạ tăng từ nấm C militaris Nghiên cứu tối ưu hóa các thành phần mơi trường lỏng đểni cấy chìm nấm C militaris thu Cordycepin vàAdenosin -47- TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Lê Văn Vẻ, Trần Thu Hà, Nguyễn Thi B c̣ ích Thùy vàNgơ Xn Nghiễn 2015 Bước đầu nghiên cứu công nghê nc̣ uôi trồng nhôngc̣ trùng thảo (Cordyceps militaris L.ex Fr.) ởViêṭNam Tap ̣ chíKhoa hoc ̣ Phát triển, tâpc̣ 13, số3: 445454 Tiếng Anh [1] Akaki, J., Matsui Y & Kojima H 2009 Structural analysis of monocyte activation constituents in cultured mycelia of Cordyceps sinensis Fitoterapia, 80, 182–7 [2] Aramwit, P., Bang N., Ratanavaraporn, J., Nakpheng, T & Srichana T 2014 An Anti-Cancer Cordycepin Produced by Cordyceps militaris Growing on the Dead Larva of Bombyx mori Silkworm Journal of Agricultural Science; Vol 6, No [3] Bizarro, A., Ferreira, I C F R., Soković, M., Griensven, L.J L D., Sousa D., Vasconcelos, M.H & Lima R.T 2015 Cordyceps militaris (L.) Link Fruiting Body Reduces the Growth of a Non-Small Cell Lung Cancer Cell Line by Increasing Cellular Levels of p53 and p21 Molecules, 20, 13927-13940 [4] Das, S.K., Masuda, M., Sakurai, A & Sakakibara M 2010a Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: Current state and prospects Fitoterapia, 81, 961–8 [5] Dong, J.Z., Lei, C., Ai, X.R & Wang Y., 2012 Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components Appl Biochem Biotechnol 166: 1215-1224 [6] Gu, Y.X., Wang, Z.S., Li, S.X & Yuan, Q.S 2007 Effects of multiple factors on accumulation of nucleosides and bases in Cordyceps militaris Food Chem, 102, 1304–9 [7] Gao, X.H., Wu, W & Qian, G.C 2000a Study on influences of abiotic factors on fruitbody differentiation of Cordyceps militaris Acta Agric Shanghai 16(Suppl):93–98 [8] Hur, H 2008 Chemical Ingredients of Cordyceps militaris Mycobiology 36(4):233-235 [9] Hong, I.P, Kang ,P.D., Kim, K.Y., Nam, S.H., Lee, M.Y., Choi, Y.S., Kim, N.S, Kim, H.K., Lee, K.G & Humber, R.A 2010 Fruit body formation on silkworm by Cordyceps militaris Mycobiology 38(2): 128-132 - 48 - [10] Jiang, X.L & Sun, Y 1999 The determination of active components in various Cordyceps militaris strains Acta Edulis Fungi, 6, 47–50 [11] Jin, L.Y., Du, S.T & Ma, L 2009 Optimization on mathematical model of basic medium of Cordyceps militaris cultivation J Northwest A F Univ (Nat Sci Ed) 37(11):175–179 [12] Kamble, V.R., & Agre, D.G 2012 Reinvestigation of insect parasite fungus Cordyceps militaris from Maharashtra Bionano Frontier 5(2):224-225 [13] Kim, S.Y., Shrestha, B., Sung, G.H., Han, S.K & Sung J.M 2010 Optimum conditions for artificial fruiting body formation of Cordyceps cardinalis Mycobiology 38(2): 133-136 [14] Kobayashi, Y 1941 The genus Cordyceps and its allies Sci Rep Tokyo Bunrika Daigaku Sect B 5:53-260 [15] Kobayasi, Y., 1981 Revision of the genus Cordyceps and its allies Bulletin of the National Science Museum Tokyo 7:1–13 [16] Kobayasi, Y., 1982 Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Transactions of the Mycological Society of Japan 23:329–364 Herbal, New York [17] Kuo, Y.C, Tasi, W.J & Shiao, M.S 1996 Cordyceps sinesis as an immunomodulatory agent Am J Chin Med, 24, 111–25 [18] Lee, H.H., Lee, S., Lee, K., Shin, Y.S, Kang, H & Cho, H 2009 Anti-cancer effect of Cordyceps militaris in human colorectal carcinoma RKO cells via cell cycle arrest and mitochondrial apoptosis J Acupunct Meridian Stud 2009; (4):294−300 [19] Li, S.P., Yang, F.Q & Tsim, K.W.K 2006 Quality control of Cordyceps sinensis, a valued traditional Chinese medicine J Pharmaceut Biomed, 41, 1571–84 [20] Lim, L.T., Lee, C.Y & Chang, E.T., 2012 Optimization of solid state culture conditions for the production of adenosine, cordycepin, and D-mannitol in fruiting bodies of medicinal caterpillar fungus Cordyceps militaris (L.: Fr.) Link (Ascomycetes), Int J Med Mushrooms, 2: 181-187 [21] Liu, C., Song, J., Teng, M., Zheng, X., Li, X., Tian ,Y., Pan, M., Li, Y., Lee, R.J & Wang D 2016 Antidiabetic and Antinephritic Activities of Aqueous Extract of Cordyceps militaris Fruit Body in Diet Streptozotocin-Induced Diabetic Sprague Dawley Rats Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2016 - 49 - [22] Park, S.E., Kim, J., Lee, Y-W, Yoo, H-S & Cho, C.K 2016 Antitumor Activity of Water Extracts From Cordyceps Militaris in NCI-H460 Cell Xenografted Nude Mice Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2016 [23] Mao, X.B., Eksriwong, T., Chauvatcharin, S & Zhong, J.J 2005 Optimization of carbon source/nitrogen ratio for cordycepin production by submerged cultivation of medicinal mushroom Cordyceps militaris Process Biochem, 40, 1667–72 [24] Paul, M K., Paul, F C., David, W M and Stalpers, J A., 2008 Dictionary of the Fungi; CABI [25] Petch T 1936 Cordyceps militaris and Isaria farinosa Trans Br Mycol Soc; 20:216-224 [26] Reis, F.S., Barros, L., Calhelha, R.C., 2013 The methanolic extract of Cordyceps militaris (L.) Link fruiting body shows antioxidant, antibacterial, antifungal and antihuman tumor cell lines properties Food Chem Toxicol, 62, 91–8 [27] Sato, H and Shimazu, M., 2002 Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative hostinsects Applied Entomology and Zoology 37:85–92 [28] Shrestha, B., Kim, H.K., Sung, G.H., 2004a Bipolar heterothallism, a principal mating system of Cordyceps militaris in vitro Biotechnol Bioprocess Eng 9:440–446 [29] Shrestha, B., Park, Y.J, Han, S.K., 2004b Instability in in vitro fruiting of Cordyceps militaris J Mushroom Sci Prod 2:140–144 [30] Shrestha, B., Choi, S.K, Kim, H.K., 2005a Genetic analý sis of pigmentation in Cordyceps militaris Mycobiology 33:125–130 [31] Shrestha, B, Han, S.K., Lee, W.H 2005b Distribution and in vitro fruiting of Cordyceps militaris in Korea Mycobiology 33:178–181 [32] Sung, J.M 1996 The Insects-born fungus of Korea in color Seoul: Kýohak Publishing Co Ltd.; p 62-72 [33] Sung, J.M., Choi, Y.S, Lee, H.K, Kim, S.H., Kim, Y.O and Sung, G.H., 1999 Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species Kor J Mycol 27:15-9 [34] Sung, J.M, Choi, Y.S, Shrestha, B 2002 Investigation on artificial fruiting of Cordyceps militaris Korean J Mycol 30:6–10 - 50 - [35] Sung, J.M, Park, Y.J, Lee, J.O 2006a Effect of preservation periods and subcultures on fruiting body formation of Cordyceps militaris in vitro Mycobiology 34:196–199 [36] Sung, J.M, Park, Y.J, Lee, J.O 2006b Selection of superior strains of Cordyceps militaris with enhanced fruiting body productivity Mycobiology 34:131–137 [37] Tong, Y.K, Kuang, T., Wu, Y.X, 1997 Comparison of components of Cordyceps mycelium and natural Cordyceps sinensis Shi Pin Yan JiuYu Kai Fa, 18, 40–42 (in Chinese) [38] Ying, J.Z, Mao, X.L, Ma, Q.M., Zong, Y.C., Wen, H.A., 1987 Icones of medicinal fungi from China Beijing: Science Press; p 1-575 [39] Wang, L., Zhang, W.M, and Hu B., 2008 Genetic variation of Cordyceps militaris and its allies based on phylogenetic analý sis of rDNA ITS sequence data Fungal Divers, 31, 147–55 [40] Wang, B.S., Lee, Ch.P., Chen, Z.T., 2012b Comparison of the hepatoprotective activity between cultured Cordyceps militaris and natural Cordyceps sinensis J Funct Foods, 4, 489–95 [41] Wen, T.C., Li, G.R., Kang, J.C., Kang, C., Hyde, K.D., 2014.Optimization of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and Cordycepin Production by Cordyceps militari Chiang Mai J Sci, 41(4): 858-872 [42] Zheng, P., Xia, Y.L., Xiao, Ch.H., 2011a Genome sequence of the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine Genome Biol, 12, R116 [43] Zhao, C.Y., Li, H., Zhang, M 2006 Optimization on conditions of artificial cultivation of Cordyceps militaris J Shenyang Agric Univ 37:209–212 Trang web http://danviet.vn/quan-su http://vnexpress.net/tin-tuc/khoa-hoc http://duocthaothienphuc.vn/ http://dongtrunghathaokimlai.vn/ -51- ... HỌC TRÀ VINH HỘI ĐỒNG KHOA HỌC ISO 9001 : 2008 BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NI NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CÓ NGUỒN... khỏe, đề tài Bước đầu nghiên cứu quy trình ni nấm đơng trùng hạ thảo (C militaris) có nguồn gốc từ Nhật Bản Trà Vinh thực -1- Tổng quan nghiên cứu 2.1 Giới thiêụ chung vềnấm Cordyceps militaris... DUNG NGHIÊN CỨU Chương Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ cường độ ánh sáng đến khả hình thành thể thể nấm đông trùng hạ thảo (C militaris) nuôi môi trường gạo lức bở sung dinh dưỡng 1.1 Mục đích nghiên