Xây dựng quy trình nhân giống hoa hồng vân khôi (rosa souvenir de la malmaison) bằng kỹ thuật nuôi cấy mô​

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH-KTNN *** LÊ THỊ LÂM XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA HỒNG VÂN KHÔI (Rosa “Souvenir de la malmaison”) BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY MƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật HÀ NỘI, 2019 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH-KTNN *** LÊ THỊ LÂM XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA HỒNG VÂN KHƠI (Rosa “Souvenir de la malmaison”) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Ngƣời hƣớng dẫn TS LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI, 2019 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS La Việt Hồng-Khoa Sinh KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin cảm ơn ban giám hiệu Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2, ban chủ nhiệm Khoa Sinh-KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán bộ môn Thực vật, Khoa sinh-KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi thiết bị, phương tiện để tơi hồn thành khóa luận Trong thời gian thực đề tài, nhận giúp đỡ tận tình Mai Thị Hồng-Phịng thí nghiệm Sinh lý học thực vật giúp đỡ, góp ý để tơi hồn thành đề tài khóa luận, nhân tơi xin gửi lời cảm ơn Cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên góp ý cho tơi q trình học tập hồn thành đề tài Hà Nội , ngày 14 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Lê Thị Lâm LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng số cộng khác Các số liệu, kết nghiên cứu khóa luận trung thực nghiên cứu Hà Nội, ngày 14 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Lê Thị Lâm MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc phân bố hoa hồng .4 1.2 Vị trí phân loại hoa hồng 1.3 Đặc điểm hình thái giống hồng Vân Khôi .5 1.4 Điều kiện sinh thái 1.5 Giá trị hoa hồng 1.5.1 Giá trị sử dụng hoa hồng Vân Khôi 1.5.2 Giá trị kinh tế hoa hồng 1.5.3 Giá trị sinh thái hoa hồng 1.6 Tình hình sản xuất hoa hồng giới Việt Nam .9 1.6.1 Tình hình sản xuất hoa hồng giới 1.6.2 Tình hình sản xuất hoa hồng Việt Nam 10 1.7 Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 11 1.7.1 Tình hình nghiên cứu giới 11 1.7.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 13 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 15 2.1.1 Vật liệu thực vật 15 2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 15 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 15 2.3 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 15 2.3.1 Dụng cụ 15 2.3.2 Thiết bị 15 2.4 Môi trƣờng nuôi cấy 15 2.5 Điều kiện phịng ni cấy 16 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.6.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 16 2.6.2 Phương pháp xử lí số liệu thống kê 18 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .19 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu 19 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro 20 3.3 Ra rễ-tạo in vitro hoàn chỉnh 25 3.4 Rèn luyện in vitro thích nghi với điều kiên tự nhiên 26 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 KẾT LUẬN 28 KIẾN NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC Chữ viết tắt ARN BAP Cm Cs CT GA3 IBA Kin KTNN LSD MS NAA NaClO NXB C o DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu lên trình tạo vật liệu khởi đầu .19 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP lên khả tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa hồng Vân Khôi (sau tuần nuôi cấy) .21 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BAP, BAP kết hợp NAA lên khả nhân nhanh chồi hoa hồng Vân Khôi in vitro (sau tuần nuôi cấy) .23 Bảng 3.4 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ-tạo in vitro hồn chỉnh (sau tuần ni cấy) 25 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cây hoa hồng Vân Khôi dùng làm vật liệu nghiên cứu…………5 Hình 3.1 Chồi bật từ đốt thân hồng Vân Khôi sau ngày (a) 14 ngày (b) nuôi cấy môi trường MS 20 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP lên khả tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa hồng Vân Khôi (sau tuần ni cấy) .22 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BAP, BAP kết hợp NAA lên khả nhân nhanh chồi hoa hồng Vân Khôi in vitro (sau tuần ni cấy) .24 Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ-tạo in vitro hồn chỉnh (sau tuần ni cấy) a, b, c, d tương ứng với công thức bổ sung NAA từ 0,25; 0,50; 0,75 1,00 (mg/l) 26 Hình 3.5 Ảnh hưởng giá thể lên khả sống sót, hình thành rễ điều kiện tự nhiên hồng Vân Khôi 26 Hình 3.6 Cây hồng Vân Khơi phát triển ngồi tự nhiên môi trường TS1 + phân chuồng ủ hoại (1:1) tuần (a) tháng (b) 27 Hình 3.7 A: Giá thể TS1 hãng Klasmann-Deilmann (Đức) .27 B: Cây hoa hồng Vân Khôi dùng làm vật liệu nghiên cứu 29 10 Nguyễn Thị Kim Thanh (2005), “Nhân giống hoa hồng kỹ thuật ni cấy invitro”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, 1, 39-41 11 Cao Thị Thanh (2007), “Phân tích tình hình sản xuất tiêu thụ hoa cấp độ nông hộ thành phố Đà Lạt”, Luận văn thạc sĩ Kinh tế, Bộ giáo dục đào tạo, Trường đại học Kinh tế thành phố Hồ Chí Minh 12 Nguyễn Quang Thạch (2000), “Trồng hoa xuất miền Bắc, hội thách thức”, Tạp chí Khoa học Tổ quốc, (12) Tài liệu tiếng Anh 13 Alsemaan T (2013), “Micropropagation of Damask Rose (Rosa damascena Mill.) cv.”, Almarah, International Journal of Agricultural Research, 8(4), 172-177 14 Asad S., Hameed N., Ali A., bajwa R., Vecherko N.A., Mursalieva VK (2010), “Factors affecting the growth and development of roses in vitro”, Biotechnol Theo Prac, 1, 41-52 15 Attia O., Attia, E L., Dessoky S., Dessoky and Adel E (2012), “In vitro propagation of Rosa hybrida L cv Al-Taif Rose plant”, African Journal of Biotechnology Vol, 11(48), 10888-10893 16 Evans A (2009) “Rose imports”, Floraculture Intl, 19, 42-43 17 Hameed N., Shabbir A., Ali A., bajwa R (2006), “In vitro micropropagation of disease free rose (Rosa indica L.)”, Mycopath, 4(2), 3538 18 Hartmann H T., Kester D E., Davies J F T., Geneve R L (2007), “Plant Hormones In: Plant Propagation: Principle and Practices”, 7th edition, Prentice-Hall, New Delhi, 292-320 19 Kapchina A V., Vanntelgen H J., Yakimova E (2000), “Role of phenylurea cytokinin CPPU in apical dominance release in in vitro cultured Rosa hybrida L.”, J Plant Growth Regul, 19, 232-237 20 Kim C J U., Jee S O., Chung J D (2003), “In vitro micropropagation of Rosa hybrida L.”, J Plant Biotechnol, 5, 115-119 21 Kumud S., Hem1 P., Vijay R (2015), “Micropropagation of rose cultivars: biotechnological application to floriculture”, J Environ Res Develop, 10(1), 40-46 30 22 Messeguer J., Mele E (1986), “Acclimatization of in vitro micropropagated roses In: Somers DA, Gegenbrach BG, Biesboer DD, Hackett WP, Grenn CE, editors Abstracts of the VI international congress of plant tissue and cell culture”, Univ Minnesota, 236 23 Murashige T., Skoog F (1962) “A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue cultures”, Physiol Plant, 15, 473-497 24 Naphaporn N U., Kantamaht K and Kamnoon K (2009), “Micropropagation from cultured nodal explants of rose (Rosa hybrida L cv Perfume Delight)”, Songklanakarin Journal of Science and Technology, 31 (6), 583-586 25 Norton M E., Boe A (1982), “In vitro propagation of ornamental Rosaceous plants”, Hort, Sci, 17, 190-191 26 Omidi M., Yadollahi A., Eftekhari M (2016), “Comparative study of Rosa damascenes Mill And R Gallica micro-propagation”, Biological Forum-An International Journal, 8(1), 135 -145 27 Pati P K., Rath S P., Sharma M., Sood A., Ahuja P.S (2006), “In vitro propagation of rose-a review”, Biotechnology Advances, 24, 94-114 28 Rajeshbabu P M., Gopalakrishnan Janarthanan B., Sekar T (2014), “An efficient and rapid generation protocol for micropagation of rose bourboniana from nodal explants”, International Journal of Current Biotechnology, 2(1), 24-29 29 Shabbir A., Hameed N., AlI A and bajwa R (2009), “Effect of different cultural conditionson micropropagation of rose (Rose indica L.)”, Pakitans Journal of biological Sciences, 41 (6), 2877-2882 30 Vijaya N., Satyanarayana G., Prakash J., Pierik R.L.M (1991), “Effect of culture media and Growth Regulators on in vitro Propagation of rose”, Curr Plant Sci Biotechnol Agric, 12, 209-214 31 Vu N H., Anh P H., Nhut D T (2006), “The role of sucrose and different Cytokinin in the in vitro floral morphogenesis of rose (Hybrid tea) cv.”, First Prize, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 87, 315-320 32 Wang G Y., Yuan M F., Hong Y (2002), “In vitro flower induction in roses”, In Vitro Cellular and Developmental Biology Plant, 38: 513-518 31 33 Zeng S J., Liang S., Zhang Y., Wu K L., Teixeirdasilva J A., Duan J (2013), “In vitro flowering red miniature rose”, Biologia Plantarum, 57(3), 401-409 Tài liệu Internet https://www.baotintuc.vn/kinh-te/phat-trien-thuong-hieu-hoa-hong-taime-linh-ha-noi-20141115213105211.htm 34 https://vuonhoaviet.vn/mua-ban-hoa-hong-co-bach-van-khoi-o-dau-uytin-chat-luong 36 https://vi.wikipedia.org/wiki/hoa_h%E1%BB%93ng 35 http://www.thv.vn/ha-noi-phat-trien-thuong-hieu-hoa-hong-gan-voi-vungdat-me-linh-e3987.html 38 http://ceford.vn/tin-tuc/tinh-hinh-san-xuat-hoa-cay-canh-thegioi-2017 37 32 39 PHỤ LỤC Môi trường MS tên loại môi trường tổng hợp pha sẵn, tên viết tắt Murashige and Skoog medium, phát minh nhà khoa học thực vật Toshio Murashige Skoog Folke K vào năm 1962 Murashige tìm kiếm loại hormone Bảng thành phần mơi trường MS Khống vi lượng CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O FeNaEDTA H3BO3 KI MnSO4.H2O Na2MoO4.2H2O ZnSO4.7H2O Khoáng đa lượng CaCl2 KH2PO4 KNO3 MgSO4 NH4NO3 Vitamins Glycine myo-Inositol Nicotinic acid Pyridoxine HCl Thiamine HCl HNUE JOURNAL OF SCIENCE Natural Sciences 2019, Volume 64, Issue 3, pp 133-140 This paper is available online at http://stdb.hnue.edu.vn DOI: 10.18173/2354-1059.2019-0016 NHÂN GIỐNG CÂY HOA HỒNG VÂN KHÔI (Rosa “Souvenir de la malmaison”) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ La Việt Hồng1, Chu Đức Hà2, Trần Thị Thanh Huyền3, Lê Thị Lâm1 Mai Thị Hồng1 Khoa Sinh - Kỹ thuật Nông nghiệp, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Viện Di truyền Nông nghiệp, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tóm tắt Trong nghiên cứu này, gi ng hoa hồng Vân Khôi (Rosa “Souvenir de la malmaison ợc sử dụng làm vật liệu cho thuật nu i c y m ết cho th y, t thân hoa hồng Vân h i dung dịch javel 5% 10 phút cho tỷ lệ mẫu s c ng thức m i tr ờng MS, nh t ể bật chồi từ mắt ngủ hoa hồng M i tr ờng t thích hợp cho nhân nhanh chồi in vitro, s bình chồi 4,7 (cm) sau tuần ni c y MS có bổ sung NAA 0,75 mg/l thích hợp cho tạo rễ in vitro v i tỷ lệ hình thành rễ cao nh t ạt 75, Cây ợc trồng giá thể hỗn hợp TS1 cho tỷ lệ s ng sót cao nh t ạt 68,4% sau tuần rèn luyện Từ khóa: c y m , hoa hồng, thuật, nhân gi ng, Vân h i Mở đầu Hoa hồng loại hoa th ơng mại quan trọng ngành công nghiệp hoa gi i [1] Hoa hồng hoa cịn có mùi thơm, nên hoa hồng cịn lý mà hoa hồng hồng Vân Khôi (Rosa “Souvenir De la Malmaison” to màu hồng ph n, mùi thơm dễ chịu Đây ng ời yêu chuộng Cây hoa hồng th giâm hom, chiết gh p Tuy nhiên, c c ph ơng ph p th ờng Hơn nữa, gi bệnh, từ ó ảnh h cơng cụ tiềm giúp nhân nhanh hiệu s nhân gi ng cảm ứng hoa ch công b nhân gi ng thành công hoa hồng cổ SaPa bằn Ngày nhận bài: 27/12/2018 Ngày sửa bài: 19/3/2019 Ngày nhận Tác giả liên hệ: Trần Thị Thanh Huyền Địa e-mail: tranthanhhuyen@hnue.edu.vn La Việt Hồng, Chu Đức Hà, Trần Thị Thanh Huyền, Lê Thị Lâm Mai Thị Hồng Nội dung nghiên cứu 2.1 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Vật liệu Cây hoa hồng Vân h i năm tuổi thu thập huyện Mộc Châu - tỉnh Sơn La ợc trồng v ờn thực nghiệm sinh học, hoa Sinh thuật n ng nghiệp, Đại học S phạm Hà Nội Giá thể t ợc cung c p hãng Klasmann-Deilmann (Đức) 2.1.2 Phương pháp nghiên cứu * Tạo vật liệu khởi đầu in vitro: Sử dụng n c chảy, sau 5% 5-10-15 phút Rửa lại n Murashige Skoog (MS) có bổ sung nhiễm sau tuần nuôi c y * Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro: Tái sinh chồi in vitro: nuôi c y t thân (dài 2-3 cm chứa mắt ngủ ợc khử trùng bề mặt m i tr ờng MS [7] có bổ sung g/l saccarozơ, g/l agar, bổ sung 6-benzylaminopurine (BAP) nồng ộ khác nhau, kí hiệu SI 1÷8; t ơng ứng v i nồng ộ ,25- ,5- ,75-1, -1,25-1,51,75-2, mg/l Theo dõi c ịnh tiêu, bao gồm s chồi trung bình/mẫu, chiều cao chồi trung bình (cm s trung bình/chồi sau tuần nuôi c y Nhân nhanh chồi in vitro: Sử dụng chồi m i tái sinh cắt thành c c oạn dài cm (chứa mắt ngủ ặt m i tr ờng MS chứa g/l saccaroz v i α-naphthalene acetic acid (NAA) 0,25-0,5 (mg/l), kí hiệu c c c ng thức từ SM1-12 c ịnh tiêu bao gồm s chồi trung bình/mẫu, chiều cao chồi trung bình (cm trung bình/chồi sau tuần ni c y * Tạo in vitro hồn chỉnh: Chồi in vitro có chiều cao 2-3 cm ợc ni c y m i tr g/l agar N ởccn bình ( , s rễ trung bình/chồi, chiều dài rễ trung bình (cm sau tuần ni c y *Rèn luyện in vitro thích nghi mơi trường tự nhiên: Cây in vitro có chiều cao 3-4 cm, có 3-5 rễ ợc sử dụng ể ơm vào gi thể bên gồm: TS1+ t (1:1), TS1, TS1 + phân chuồng ủ hoại (1:1) Theo dõi c ịnh tỷ lệ s ng sót ( sau tuần thí nghiệm *Phân tích thống kê: S liệu thực nghiệm ợc xử lý theo tham s th ng kê kiểm tra sai khác giá trị trung bình ph ơng ph p LSD Fisher phần mềm Excel 2010 [8] S liệu thể bảng giá trị trung bình ± ộ lệch chuẩn, cột, chữ theo sau khác a, b, c… thể sai h c có ý nghĩa th ng kê v i α = 0,05 2.2 Kết thảo luận ế uả nguồn vật liệu khởi đầu Kết cho th y khử trùng bề mặt cồn 70% dung dịch javel 5% có hiệu quả, phụ thuộc vào thời gian xử lý Trong ó c ng thức cho hiệu khử trùng t t nh t xử lý 134 Nhân giống hoa hồng vân khôi (Rosa “Souvenir de la malmaison”) kĩ thuật nuôi cấy mô cồn phút, sau ó lý dung dịch javel 5% 10 phút cho tỷ lệ mẫu s ng cao nh t ạt 79,0% (kết thể Bảng 1) Bảng Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đốt thân cho nuôi cấy in vitro Công thức I1 I2 I3 I4 I5 I6 I7 I8 I9 ế uả * ết tái sinh chồi in vitro BAP loại cytokinin thích hợp nh t ể kích thích hình thành chồi [9], vậy, nghiên cứu này, mẫu chứa mắt ngủ ợc ni c y lên m i tr ờng MS có bổ sung nhằm thúc ẩy qu trình ph t sinh chồi non (Hình Đ ng ý, m i tr chiều cao trung bình chồi s trung bình/chồi ó m i tr ờng chứa BAP 1,0 mg/l thích hợp nh t so v i c c c ng thức lại, cụ thể tiêu s chồi trung bình/mẫu, chiều cao chồi trung bình s trung bình/chồi lần l ợt 2,75; 2,32 3,50 Bảng Tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa hồng Vân Khôi sau tuần nuôi cấy Công thức SI1 SI2 SI3 SI4 SI5 SI6 SI7 SI8 135 La Việt Hồng, Chu Đức Hà, Trần Thị Thanh Huyền, Lê Thị Lâm Mai Thị Hồng LSD0.05 * Môi trường MS, 30 g/l saccarozơ, 7,0 g/l agar (pH 5,8) Hình Tái sinh chồi in vitro từ đốt thân hoa hồng Vân Khôi sau tuần nuôi cấy a hoa hồng Vân Khôi, b-i: tương ứng với công thức bổ sung BAP từ 0,25-2,00 (mg/l) với bước nhảy nồng độ 0,25 * ết nhân nhanh chồi in vitro Bảng Nhân nhanh chồi hoa hồng Vân Khôi in vitro sau tuần nuôi cấy Công thức SM1 SM2 SM3 SM4 SM5 SM6 SM7 SM8 SM9 SM10 SM11 SM12 136 Nhân giống hoa hồng vân khôi (Rosa “Souvenir de la malmaison”) kĩ thuật nuôi cấy mô LSD0,05 * Môi trường MS chứa 30 g/l saccarozơ; 7,0 g/l agar (pH 5,8) M i tr ờng chứa BAP riêng lẻ BAP kết hợp NAA ảnh h ởng rõ rệt ến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Vân Khôi Kết cho th y c ng thức SM4, m i tr ờng MS chứa BAP 2,0 mg/l thích hợp nh t cho nhân nhanh chồi in vitro, s (chồi) v i chiều cao chồi trung bình BAP 1,5 mg/l (SM3) BAP 0,5 mg/l kết hợp N bình, chiều cao trung bình chồi s 3,8 4,4 ( ảng 3, Hình 2c 2e Mặt h c, BAP 0,5 (mg/l), phù hợp nh t Hình 2a ết ợc giải thích hình thành phụ thuộc vào m i tr ghi nhận cyto inin giúp ph ngủ chồi bên tỷ lệ bật chồi in vitro R hybrid [11] Hình Kết nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Vân Khôi a-d: mẫu nuôi cấy môi trường BAP 0,5; 1,0; 1,5 2,0 (mg/l) e-h: mẫu nuôi cấy môi trường BAP 0,5; 1,0; 1,5 2,0 (mg/l) + NAA 0,025( mg/l) i-l: mẫu nuôi cấy môi trường BAP 0,5; 1,0; 1,5 2,0 (mg/l) + NAA 0,5 (mg/l) ế uả đánh giá Sự rễ chồi hoa hồng in vitro th ờng auxin Các ch t iều hịa kích hoạt hình thành phức hệ t c mã hóa cho enzym hình thành rễ rễ, tạo in vitro hoàn chỉnh Theo dõi sau tuần nu rễ chồi hoa hồng Vân Khôi in vitro phụ thuộc vào nồng tr ờng nuôi c y (Bảng 4, Hình Cụ thể, tỷ lệ rễ dao ộng từ NAA, cao nh t công thức La Việt Hồng, Chu Đ 1, mg/l hoàn chỉnh lại, lần l ợt 8, 4,82 (cm ( gây ạt t Bảng Kết Công thức R1 R2 R3 R4 R5 * 5,8) LSD0,05 Mơi trường ½ MS chứa 30 g/l saccarozơ; 7,0 g/l agar (pH Hình Kết rễ - tạo hoa hồng in vitro hoàn chỉnh 0,25; 0,50; 0,75 1,00 (mg/l) a, b, c, d t ơng ứng v i công thức bổ sung NAA ế uả n u ện in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Việc rèn luyện hoa hồng c y m hó hăn m t n c nhanh, nhạy cảm v i ộ ẩm chúng Trong nghiên cứu này, in vitro hoàn chỉnh ợc rửa thạch ơm vào c c gi thể TS1+ t (1:1), TS 1, TS1 + phân chuồng ủ hoại (1:1) Tỷ lệ s ng ( nu i c y m lý c ng thức sau tuần thí nghiệm t ơng i th p, lần l ợt 35,5; 68,4 43,2 (%) (Hình 4) 138 Nhân giống hoa hồng vân khôi (Rosa “Souvenir de la malmaison”) kĩ thuật ni cấy mơ Hình Kết rèn luyện hoa hồng in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên a, b, c tương ứng với giá thể: TS1+đất (1:1), TS1, TS1 + phân chuồng ủ hoại (1:1) Kết luận Đ t thân hoa hồng Vân h i ợc khử trùng bề mặt cồn 70% 10 phút, xử lý tiếp dung dịch javel 5% 10 phút cho tỷ lệ mẫu s ng ạt 79,0 ( M i tr ờng MS, g/l saccarozơ, g/l agar, có bổ sung BAP phù hợp ể bật chồi từ mắt ngủ hoa hồng, ó nồng ộ BAP thích hợp nh t 1,0 mg/l nh t M i tr ờng t ơng tự nh ng bổ sung BAP 2,0 mg/l thích hợp cho nhân nhanh chồi in vitro, cho s chồi trung bình/mẫu ạt 6,0; chiều cao chồi trung bình (cm) 4,70 (cm) sau tuần nuôi c y M i tr ờng MS, g/l saccarozơ, g/l agar, bổ sung NAA (0,75 mg/l) thích hợp cho tạo rễ in vitro, tỷ lệ hình thành rễ cao nh t, ạt 75,0% Cây ợc trồng giá thể hỗn hợp TS1 cho tỷ lệ s ng sót cao nh t 68,4 (%) sau tuần rèn luyện TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Rajeshbabu P., Gopalakrishnan M., Janarthanan B., Sekar T., 2001 An efficient and rapid regeneration protocol for micropropagation of Rosa bourboniana from nodal explants Int J Curr Biotechnol, 2, tr 24-29 [2] Ali J., Chaudhry N.Y., Aftab F., 2014 In vitro development and improvement of chromium (VI)-affected adventitious roots of Solanum tuberosum L with GA3 and IAA application Pakistan J Bot, 46, 2, tr 687-692 [3] Pati P.K., Kaur N., Sharma M., Ahuja P.S., 2010 In vitro propagation of rose Methods Mol Biol, 589, tr.163-176 [4] Bùi Thị Thu H ơng, Đồng Huy Gi i, Nguyễn Thị Trang, Hồ Thị Quyên, 2017 Nhân nuôi hoa hồng cổ SaPa (Rosa gallica L.) kỹ thuật cấy mô in vitro Hội nghị Khoa học toàn qu c Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ tr.1229 - 1235 [5] Nguyễn Thị h ơng Thảo, Đặng Quang Bích, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Thùy Linh, Phạm Thị Thu Hằng, Đặng Thị Thanh Tâm, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Lâm Hải, Nguyễn Thanh Hải, 2015 Nhân nhanh cảm ứng hoa in vitro hoa hồng cơm (Rosa sericea Lindl) Tạp chí Khoa học Phát triển, 13, 4, tr.606 - 613 [6] Trịnh Thị H ơng, Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ, Trần Trọng Tu n, D ơng T n Nhựt, 2018 Nghiên cứu nhân giống vơ tính hoa in vitro hoa hồng tỉ muội (Rosa chinensis Jacq var Minima Redh) Kỷ yếu Hội thảo Khoa học Công nghệ Sinh học toàn qu c, tr 1392-1397 [7]Murashige T.S., Skoog F., 1962 A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures Physiol Plantarum, 15, 3, tr.473-497 [8] Nguyễn Văn M , La Việt Hồng, Ong Xuân Phong, 2013 Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật Nhà xu t Đại học Qu c gia Hà Nội [9] Vijaya N., Satyanarayana G., 1991 Effect of culture media and growth regulators on in vitro propagation of rose In Horticulture - New technologies and applications: Proceedings of the International Seminar on New Frontiers in Horticulture, tr.209-214 [10] Aboelhana E., 2012 In vitro propagation of Rosa hybrida L cv Al-Taif Rose plant African J Biotechnol, 11, 48, pp 10888-10893 [11] Kapchina-Toteva V.V., van Telgen H.J., Yakimova E., 2000 Role of phenylurea cytokinin CPPU in apical dominance release in in vitro cultured Rosa hybrida L J Plant Growth Reg, 19, 2, tr.232-237 139 La Việt Hồng, Chu Đức Hà, Trần Thị Thanh Huyền, Lê Thị Lâm Mai Thị Hồng ABSTRACT Propagation of rosa “souvenir de la malmaison” by tissue culture techniques La Viet Hong1, Chu Duc Ha2, Tran Thi Thanh Huyen3, Le Thi Lam1 and Mai Thi Hong1 Faculty of Biology - Agricultural technology, Hanoi Pedagogical University 2 Agricultural Genetics Institute, Vietnam Academy of Agricultural Sciences Faculty of Biology, Hanoi National University of Education In this study, stem segments of rose were used as explants The results shown that nodal stems were surface disinfected by immersing 70% etanol in 10 minutes, then treating in 5% javel solution, the rate of living-disinfected explants reached 79.0% The medium for in vitro generating shoot from domacy buds of stem was MS, 30 g/l sucrose, g/l agar and added 1.0 mg/l BAP The same medium, which was added 2.0 mg/l BAP, was suitable for shoot multiplication, in which the average shoot number per explant, the average length of shoot were 6.0 and 4.70 (cm), respectively The ½ MS, 30 g/l sucrose, g/l agar and supplemented 0.75 mg/l NAA was effective for in vitro root formation, the rooting percent of microshoots reached 75.0% In vitro plantlets were acclimatized by growing in TS1 mixture substrate which had the highest survival rate (68.4%) after weeks hardening Keywords: Tissue culture, rose, technique, micropropagation, Van Khoi 140 ...TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH-KTNN *** LÊ THỊ LÂM XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG HOA HỒNG VÂN KHÔI (Rosa ? ?Souvenir de la malmaison”) BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY MƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP... , hoa hồng, thuật, nhân gi ng, Vân h i Mở đầu Hoa hồng loại hoa th ơng mại quan trọng ngành công nghiệp hoa gi i [1] Hoa hồng hoa cịn có mùi thơm, nên hoa hồng cịn lý mà hoa hồng hồng Vân Khôi. .. paper is available online at http://stdb.hnue.edu.vn DOI: 10.18173/2354-1059.2019-0016 NHÂN GIỐNG CÂY HOA HỒNG VÂN KHÔI (Rosa ? ?Souvenir de la malmaison”) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ La Việt Hồng1 , Chu