Xác định đồng thời dư lượng kháng sinh nhóm nitrofuran trong một số loại thực phẩm tươi sống trên địa bàn hà nội bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC MS MS

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN THỊ HỒNG XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƢ LƢỢNG KHÁNG SINH NHÓM NITROFURAN TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƢƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ LC/MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN THỊ HỒNG XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƢ LƢỢNG KHÁNG SINH NHÓM NITROFURAN TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƢƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ LC/MS/MS Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60 44 29 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS LÊ THỊ HỒNG HẢO Hà Nội – 2012 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu kháng sinh nhóm nitrofuran 1.1.1 Nhóm nitrofuran gì? 1.1.2 Các chất nhóm nitrofuran 1.2 Tác dụng của chất kháng sinh nhóm nitrofuran……………………… …….6 1.3 Dƣ lƣợng kháng sinh nhóm nitrofuran thực phẩm 1.4.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng với detector UV 1.4.2 Phƣơng pháp phân tích vi sinh (enzyme-linked immunosorbent assayELISA) 1.4.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Đối tƣợng, mục tiêu nội dung nghiên cứu 11 2.1.1 Đối tƣợng, mục tiêu nghiên cứu 11 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 11 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 12 2.2.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ 12 2.2.2 Phƣơng pháp xử lý mẫu 18 2.3 Hóa chất dụng cụ nghiên cứu 23 2.3.1 Dụng cụ, thiết bị 23 2.3.2 Hóa chất, chất chuẩn 24 2.3.3 Pha chế chất chuẩn 25 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Khảo sát điều kiện xác định chất nhóm nitrofuran LC/MS/MS .27 3.1.1 Khảo sát điều kiện khối phổ 27 3.1.2 Lựa chọn cột tách 29 3.1.3 Khảo sát chƣơng trình gradient 30 3.1.4 Khảo sát quy trình chiết mẫu 33 3.2 Thẩm đinḥ phƣơng pháp 38 3.2.1 Tính đặc hiệu 38 3.2.1 Khảo sát lập đƣờng chuẩn 38 3.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng của phƣơng pháp 43 3.2.3 Độ lặp lại độ thu hồi 46 KẾT LUẬN 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng 1.1 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Bảng 3.13 Bảng 3.14 Bảng 3.15 Bảng 3.16 Kết phân tích mẫu thực 51 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.10 Hình 3.11 Hình 3.12 Hình 3.13 Hình 3.14 Hình 3.15 Hình 3.16 Hình 3.17 Hình 3.18 DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt CAD CE CUR CXP DP EP ESI EU GS1 GS2 HPLC IP IS LC–MS LOD LOQ MeOH MRPL RSD% TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyêñ Quốc Ân (2009), Sửdung ̣ kháng sinh chăn nuôi thúy ởViêṭNam , Cục thú y Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2007), Hóa học phân tích, phần 2: Các phương pháp phân tích cơng cụ, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Đức Huệ (2005), Các phương pháp phân tích Hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội, Hà Nội Phạm Luận (2000), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao(HPLC),Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Đình Thành (2011), Giáo trình Các phương pháp tách, khoa Hóa học trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình Thống kê Hóa học phân tích, khoa Hóa học trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Bùi Thị Tho (2003), Thuốc kháng sinh nguyên tắc sử dụng chăn nuôi, Nhà xuất Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2009), Giáo trình Các phương pháp tách, khoa Hóa học trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Số 54/2002/QĐ-BNN, ngày 20 tháng 06 năm 2002 việc cấm sản xuất, nhập khẩu, lưu thông sử dụng số loại kháng sinh hóa chất sản xuất kinh doanh thức ăn chăn nuôi của Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn 10 28 TCN 194:2004,Các chất chuyển hóa thuộc nhóm nitrofuran thủy sản sản phẩm thủy sản – Phương pháp định lượng sắc ký lỏng khối phổ - khối phổ, Bộ Thủy Sản 56 11 Trang web (2008), http//vietbao.vn/Kinh-te/My-kiem-tra-thuy-san-nuoi-TrungQuoc-Viet-Nam-lo-ngai/55154852/93 Việt Báo Tiếng Anh 12 Alexander Leitner, Peter Zollner, Wolfgang Lindner (2001),“Determination of the metabolites of nitrofuran antibiotics in animal tissue by high-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry”, Journal of Chromatography A, Volume 939, pp 49-58 13 Caroline Douny, Joelle Widart, Edwin De Pauw, Frederic sivestre, Packtrick Kestemont, Huynh Thi Tu, Nguyen Thanh Phuong (2012), Development of an analytical method to detect metabolites of nitrofurans: Application to the study of furazolidone elimination in Vietnamese black tiger shrimp (Penaeus monodon), Aquaculture, Volume 376-379, pp 54-58 14 C Bock, C Stachel, P.Gowik (2007), Validation of a confirmatory method for the determination of residues of four nitrofurans in egg by liquid chromatographytandem mass spectrometry with the software interval, Analytica Chimica Acta, Volume 586, pp 348-358 15 C Chang, D.P Peng, J.E Wu, Y.L Wang, Z.H Yuan (2008), Development of an indirect competitive ELISA for the detection of furazolidone marker residue in animal edible tissues Journal of Agricultural and Food Chemistry, Vol.53, pp 89348939 16 Chung-Wei Tsai, chuan-ho tang and Wei-Hsien wang (2010), “Quantitative Determination of Four Nitrofurans and Corresponding Metabolites in the Fish Muscle by Liquid Chromatography-Electrospray Ionization-Tandem Mass Spectrometry”, Journal of Food and Drug Analysis, Vol 18, No 2, pp 98-106 17 D Tyler (2009), Analysis of nitrofurans in animal tissues a food of animal origin by LC/MS/MS, sop FSG341 18 E Horne, A Cadogan, M OKeeffe, Hoogenboo, L.A.P (1996), Analysis of protein-bound metabolites of furazolidone and furaltadone in pig liver by high 57 performance liquid chromatography and liquid chromatography mass spectrometry Analyst, Vol.121, 1463-1468 19 E Verdon, P Couedor, P Sanders (2007), Multi-residue monitoring for the simultaneous determination of five nitrofurans (furazolidone, furaltadone, nitrofurazone, nitrofurantoine, nifursol) in poultry muscle tissue through the detection of their five major metabolites (AOZ, AMOZ, SEM, AHD, DNSAH) by liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry – Inhouse validation in line with Commission Decision 657/2002/EC Analytica Chimica Acta, Vol.586, pp 336-347 20 I Diblikova, K.M Cooper, D.G Kennedy, M Franek (2005), Monoclonal antibody-based ELISA for the quantification of nitrofuran metabolite 3-amino-2oxazolidinone in tissues using a simplified sample preparation Analytica Chimica Acta, Vol.540, 285-292 21 K.M Cooper, P.P Mulder, van Rhijn J.A van Rhijn, L Kovacsics, R.J McCracken, P.B Young, D.G Kennedy (2005), Depletion of four nitrofuran antibiotics and their tissue-bound metabolites in porcine tissues and determination using LC-MS/MS and HPLC-UV Food Additives and Contaminants, pp 405-414 22 Lech Rodziewicz (2008), Determination of nitrofuran metabolites in milk by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry, Journal of chromatography, Vol.864, pp 156-160 23 Mayda I.Lopez (2007), “Determination and confirmation of Nitrofuran residues in honey using LC-MS/MS”, Journal of agricultural and food chemistry, Vol.55, pp 1103-1108 24 M O’Keeffe , A Conneely, K.M Cooper, D.G Kennedy, L Kovacsics, A Fodor, P.P.J Mulder, J.A van Rhijn, G Trigueros (2004), Nitrofuran antibiotic residues in pork the FoodBRAND retail survey Analytical Chimica Acta, Vol.520, 125-131 58 25 M Vass*, K Hruska, M Franek (2008), “Nitrofuran antibiotics: a review on the application, prohibition and residual analysis”, Veterinarni Medicina, Vol.53, pp 469–500 26 Pascal Mottier, Seu-Ping Khong, Eric Gremaud, Janique Richoz, Thierry Delatour, Till Goldmann, Philippe A.Guy (2005), Quantitative determination of four nitrofuran metabolites in meat by isotope dilution liquid chromatographyelectrospray ionization-tandem mass spectrometry, Journal of chromatography A, Volume 1067, pp 85-91 27 P Vinas, N Campillo, L Carrasco, M Hernandez-Cordoba (2007), Analysis of nitrofuran residues in animal feed using liquid chromatography and photodiodearray detection, Chromatographia, Vol.65, pp 85-89 28 Randox laboratory (2008), “Measurement of four nitrofuran metabolites with elisa kits using multi-analyte reagents”, Randox life sciences 29 Sujittra Phongvivat, Bangkok, Thailand (2004), “Nitrofurans Case Study: Thailand’s experience”, Joint FAO/WHO Technical Workshop on, Residues of Substances without ADI/MRL in Food 30 Tao Ding, Jingzhong Xu, Chongyu Shen and Kefei Wang (2007), “Determination of trace level nitrofuran metabolites in crawfish meat by electrospray LC-MS/MS on the TSQ quantum discovery MAX, Thermo fisher scientific, San Jose, CA, USA 31 W Lui, C Zhao, Y Zhang, S Lu, J Liu, R Xi (2007), Preparation of polyclonal antibodies to a derivative of 1-amonihydantoin (AHD) and development of an indirect competitive ELISA for the detection of nitrofurantoin residue in water Journal of Agriculture and Food Chemistry, Vol.55, 6829-6834 32 2002/657/EC implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results 59 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Sắc đồcủa hỗn hơpg̣ chuẩn P 1.1: Sắc đồ hỗn hơpg̣ chuẩn nitrofuran ppb P 1.2: Sắc đồhỗn hơpg̣ chuẩn nitrofuran1,5 ppb P 1.3: sắc đồhỗn hơpg̣ chuẩn nitrofuran ppb P 1.4: sắc đồhỗn hơpg̣ chuẩn nitrofuran ppb Phụ lục 2: Sắc đồmâũ thêm chuẩn P 2.1: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 1g̣ ng/g P 2.2: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 1g̣ ng/g P 2.3: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 1g̣ ng/g P 2.4: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 1g̣ ,5 ng/g P 2.5: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 1g̣ ,5 ng/g P 2.6: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 1g̣ ,5 ng/g P 2.7: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 2g̣ ng/g P 2.8: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng đô 2g̣ ng/g P 2.9: sắc đồmâũ thiṭlơṇ thêm chuẩn hỗn hơpg̣ nitrofuran taịmƣƣ́c nồng 2g̣ ng/g Phụ lục 3: cách tính điểm IP P 3.1: Quan g̣giƣ ̃a kỹthuâṭkhối phổvàsốđiểm IP đaṭđƣơcg̣ P 3.2: Ví dụ số điểm IP đạt đƣợc kỹ thuật khối phổ khác Phụ lục 4: P 4.1: Bảng qui định hệ số biến thiên cấp nồng độ P 4.2: Bảng qui định độ thu hồi cấp nồng độ ... VSATTP, tiến hành nghiên cứu phát triển phƣơng pháp ? ?Xác định đồng thời dƣ lƣợng kháng sinh nhóm nitrofuran số loại thực phẩm tƣơi sống địa bàn Hà Nội phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/ MS/ MS” CHƢƠNG... SEM thực phẩm tƣơi sống kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ LC/ MS/ MS Các mục tiêu cụ thểnhƣ sau: - Xây dựng phƣơng pháp xác định đồng thời chất chuyển hóa của nitrofuran thực phẩm tƣơi sống LC- MS/ MS... QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN THỊ HỒNG XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƢ LƢỢNG KHÁNG SINH NHÓM NITROFURAN TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƢƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƢƠNG