HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY

Reagents for Clinical Chemistry HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY NHÀ SẢN XUẤT: AMS NƢỚC SẢN XUẤT: ITALY NHÀ NHẬP KHẨU VÀ PHÂN PHỐI ĐỘC QUYỀN TẠI VIỆT NAM CÔNG TY TNHH TM & DVKT NGUYỄN LÂM ĐCLH: 52 Bế Văn Đàn, P.14, Quận Tân Bình, TP.HCM ĐT: 08.39491156 – 39491860….Fax: 08 39491157 AMS – MADE IN ITALY HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY Mục lục Danh mục sản phẩm Mục lục HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG α-AMYLASE– L 2 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG ALBUMIN HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG BILIRUBIN Direct – L HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG BILIRUBIN TOTAL 11 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CHOLESTEROL TOTAL – L 14 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CHẤT KẾT TỦA HDL 17 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CREATININE 18 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG γGT 22 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GD-NORM 25 10 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GLUCOSE – L 26 11 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GOT/ AST – L 30 12 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GPT/ ALT – L 34 13 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG TOTAL PROTEINS 38 14 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG TRIGLYCERIDES - L 41 15 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG U-RÊ U.V 45 16 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG ACID URIC – L 49 CÁC KÝ HIỆU 53 XỬ LÝ CHẤT THẢI 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG α-AMYLASE– L Phƣơng pháp đo dịch chuyển màu, xác định hoạt động α-Amylase- L dịch sinh học THÔNG TIN GIỚI THIỆU Tham khảo Kích cỡ thử GA4175 00 x 20 ml KL4175 00 12x 20 ml BK4175 00 x 40 ml CHỈ DẪN α-Amylase chất xúc tác mà ẩn chứa tuyến tụy tuyến nước bọt Nó quan trọng việc tiêu hóa tinh bột tiết qua thận Các giá trị tăng Amylase tìm thấy bệnh viêm tuyến tụy cấp tính, tắc nghẽn ống dẫn tụy tắc nghẽn tuyến mang tai (giữa) Các giá trị giảm Amylase tìm thấy tổn hại gan cấp tính mãn tính NGUYÊN LÝ CỦA PHƢƠNG PHÁP α-Amylase gây xúc tác thủy phân 2-chloro-4-nitrophenyl-- maltotrioside (CNP-G3) để tạo glucose polymers p-nitrophenyl oligosaccharide dây phân tử ngắn tạo 2-chloro-4nitrophenol (CNP) Sự thủy phân tăng lên đo máy đo phổ quang bước sóng 405 nm kết tỉ lệ thuận với hoạt động của-Amylase mẫu phẩm THÀNH PHẦN Thuốc thử A: CNP- G3 mmol/l NaCl 250 mmol/l CaCl2 mmol/l Đệm MES 100 mmol/l Potassium thiocyanate 600 mmol/l NaN3 < 0.1% Sự chuẩn bị: Thuốc thử chất lỏng có sẵn để sử dụng LƢU TRỮ VÀ TÍNH ỔN ĐỊNH Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Thuốc thử có tính ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có hiệu lọ thuốc thử mở lấy thuốc thử đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Nước bọt da có chứa α-Amylase: khơng hút Pipette miệng va dính thuốc thử vào da THIẾT BỊ PHỤ TRỢ  Các pipette tự động  Máy quang kế  Các Cuvette phân tích (độ chia cm)  Nhiệt kế nước  Dung dịch NaCl g/l Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương heparin nước tiểu Ổn định mẫu ngày nhiệt độ 2-8 0C 30 ngày nhiệt độ -200C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên đề nghị theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại huyết với hoạt động- Amylase biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Nhiệt độ thí nghiệm 370C Bước sóng 405 nm (400- 410 nm) Đường quang dẫn cm Sức phản ứng Klnetic (tăng) Cho thuốc thử đạt tới nhiệt độ thí nghiệm 370C trước sử dụng Pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Mẫu thử Blank 1000 µl Mẫu 1000 µl 25 µl - Nước cất Mẫu - 25 µl Trộn ủ nóng khoảng phút nhiệt độ 37 C Đọc độ hấp thụ ban đầu lập lại đọc độ hấp thu sau 1, 2, phút ; đối chứng với mẫu thử Blank Tính A/ phút Tính tốn kết quả: Độ hoạt động (U/I) = A/ phút x 3178 GIÁ TRỊ THAM KHẢO Huyết huyết tương đạt tới 90 U/I Nước tiểu đạt tới 480 U/I Mỗi phịng thí nghiệm nên thiết lập dãy tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu hoạt động xúc tác khác Các kết thu ghi vào bảng sau: Trong vòng phản ứng Mẫu Mẫu huyết Mẫu huyết Mẫu huyết Số trung bình (U/I) 72.50 124.80 175.32 Giữa dịng phản ứng SD %CV SD %CV 0.92 1.19 1.74 1.3 1.0 1.0 1.74 4.94 6.13 2.4 4.0 3.5 Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HĨA CHẤT SINH HĨA ITALY Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 1500 U/I Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ hạn phát giới hạn U/I Sƣ tƣơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.145 x + 1.600 U/I r = 0.9967 Sự can thiệp Hemoglobin Bilirubin Triglycerides > 500 mg/dl > 40 mg/dl > 2000 mg/dl THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Các thuốc thử chứa thành phần không hoạt động chất bảo quản (NaN chất khác), chất bề mặt…Tổng nồng độ thành phần thấp giới hạn cho phép báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mô mềm Việc sử dụng thuốc thử phịng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phịng thí nghiệm chuẩn Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG ALBUMIN Phƣơng pháp đo màu, xác định màu xanh bromocresol (BCG) Albumin huyết huyết tƣơng THÔNG TIN GIỚI THIỆU Tham khảo Kích cỡ thử GA4201 00 10x 50 ml KL2012 00 8x 20 ml BK2012 00 2x 60 ml CHỈ DẪN Nồng độ Albumin số hoạt động tổng hợp gan Khi nồng độ tăng thường nguyên nhân hemoconcentration (tình trạng nước thể, mẫu máu bốc mẫu máu đơng); ngun nhân hypoalbuminemia nhiều thiếu hụt protein (hội chứng thận, bỏng, protein phân tán ruột), hấp thu protein giảm (suy dinh dưỡng, phần ăn protein bệnh gan Đặc biệt, bệnh viêm gan độ giảm tỷ lệ với tiến triển đến bệnh xơ gan, đại diện cho tiên đốn chuyển hóa q trình trao đổi chất Nồng độ Albumin huyết tương trẻ sinh thấp (2.4 – 4.4 g/dl) Trong giá trị tuần người lớn đạt đến (3.5- g/dl); sau sản sinh tăng lên đến 4.5-5.4 g/dl độ tuổi lên giữ nguyên khơng đổi suốt thời xn Khơng có khác đáng kể tìm thấy giới tính nam nữ NGUYÊN LÝ CỦA PHƢƠNG PHÁP Citrate đệm Albumin tạo thành hợp chất có màu xanh bromocresol (BCG) mà cường độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ Albumin có mẫu thử THÀNH PHẦN Thuốc thử A (chất lỏng): Đệm Citrate 7.5 mmol/l BCG ≥ 150 µmol/l NaN3 0.05 % Mẫu chuẩn (chất lỏng): Albumin NaN3 1x3 ml g/dl 0.05% Tài liệu tham khảo đối chứng NIST xác minh Lƣu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 15-250C Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định THIẾT BỊ PHỤ TRỢ  Các pipette tự động  Máy quang kế  Các Cuvette phân tích (độ chia cm)  Dung dịch NaCl g/l Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY MẪU THỬ Huyết huyết tương (heparin EDTA) Ổn định mẫu tháng nhiệt độ 2-80C, tuần nhiệt độ 15-250C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại với nồng độ Albumin biết để kiểm tra độ tương hợp giá trị đạt với liệu đối chứng TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl Mẫu chuẩn - µl - Mẫu - - µl Thuốc thử A Trộn ủ hấp hỗn hợp phút 20-25 C Sau đó, đọc kết hấp thụ A mẫu chuẩn mẫu 546 (520-570) nm đối chứng với mẫu thử Blank Màu sắc ổn định 60 phút nhiệt độ (20-250C) Ghi chú: Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng TÍNH TỐN KẾT QUẢ: Sử dụng công thức đây: Mẫu A Albumin, g/dl = - x Mẫu chuẩn A Các giá trị g/dl chuyển đổi sang g/l cách nhân kết với 10 CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO 3.5 ÷ g/dl Mỗi phịng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dịng phản ứng dịng ghi nhận, tính toán dựa mẫu nồng độ Albumin khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Mẫu Mẫu huyết Mẫu huyết Mẫu huyết Số trung bình (mg/dl) 4.6 4.0 3.3 Giữa dịng phản ứng SD %CV SD %CV 0.03 0.02 0.02 0.7 0.5 0.6 0.14 0.14 0.10 3.0 3.5 3.0 Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HĨA CHẤT SINH HĨA ITALY Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 7g/dl Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy phương pháp kỳ phát giới hạn 0.2 g/dl Sƣ tƣơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 0.624 x + 1.616 g/dl r = 0.9691 Sự can thiệp Trong trường hợp mẫu bị tán máu rõ bị mỡ hóa để nghị thực mẫu trống: trộn 1ml dung dịch nước muối sinh lý 10 µl mẫu, đọc độ hấp thụ đối chứng với nước cất trừ với giá trị hấp thu đo phép thử Hemoglobin đạt tới 20 mg/dl không bị can thiệp THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Các thuốc thử chứa thành phần không hoạt động chất bảo quản (NaN chất khác), chất bề mặt…Tổng nồng độ thành phần thấp giới hạn cho phép báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mô mềm Việc sử dụng thuốc thử phịng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phịng thí nghiệm chuẩn Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG BILIRUBIN Direct – L Phƣơng pháp xác định màu Bilirubin trực tiếp huyết huyết tƣơng THÔNG TIN GIỚI THIỆU Tham khảo Kích cỡ thử GA4256 00 10x15 + 1x 10 ml KL4256 00 10x15 + 1x 10 ml BK4256 00 x (50+5 ml) CHỈ DẪN Sự xác định Bilirubin tổng Bilirubin trực tiếp thường sử dụng để chấn đoán theo dõi bệnh thuộc gan (viêm gan, xơ gan), tán huyết rối loạn đường mật Đặc biệt, mức Bilirubin trực tiếp cao (hoặc Bilirubin “liên hợp”), nói chung vắng mặt hay có mặt với số lượng không đáng kể đưa trường hợp sau:  Các rối loạn đường mật gan (VD như: túi mật, sỏi choledochal, khối u tuyến tụy);  Các rối loạn đường mật gan (VD như: xơ gan, viêm gan khối u gan) NGUYÊN LÝ CỦA PHƢƠNG PHÁP Trong tại, phương pháp Jendrassik sửa đổi, Bilirubin tổng với diện a-xít diazosulphanilic tạo thành hợp chất có màu azobilirubin) Cường độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ bilirubin trực tiếp có mẫu thử THÀNH PHẦN Thuốc thử A: A-xít Sulphanilic A-xít Hydrocloric 30 mmol/l 0.25 mol/l Thuốc thử B: Sodium nitrite  10 mmol/l Sự chuẩn bị: Trộn 15 phần thuốc thử A phần thuốc thử B để tạo thành hỗn hợp thuốc thử sử dụng (VD: 30 ml thuốc thử A + ml thuốc thử B) Tài liệu tham khảo đối chứng NIST xác minh Lƣu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 15-250C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Ổn định hỗn hợp thuốc thử ngày nhiệt độ 2-8 0C THIẾT BỊ PHỤ TRỢ  Các pipette tự động  Máy quang kế  Các Cuvette phân tích (độ chia cm)  Nhiệt kế nước  Dung dịch NaCl g/l Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương sodium heparin EDTA – Na2 Không sử dụng mẫu bị tán huyết Với chất béo lipid, không dùng mẫu tinh chất mà cần dùng mẫu Blank Khi Bilirubin chất sắc tố quang mẫu phải lưu trữ bóng tối tránh nhiệt Các mẫu phải phân tích Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại huyết với nồng độ Bilirubin trực tiếp biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu - - 100 µl 100 µl - - Mẫu chuẩn - 100 µl - Thuốc thử 1000 µl 1000 µl 1000 µl Mẫu Nước cất Trộn hấp hỗn hợp 10 phút 20-250C Sau đọc kết hấp thụ A mẫu 570 (550-580) nm đối chứng với mẫu thử Blank Màu ổn định 30 phút nhiệt độ (20-250C) Ghi chú:  Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng  Với nồng độ > 20mg/dl, nên pha loãng mẫu 1+9 với dung dịch NaCl (0.9 g/l) kết nhân với 10 TÍNH TỐN KẾT QUẢ: Mẫu A Bilirubin trực tiếp, mg/dl = - x mg/dl chất hiệu chuẩn Mẫu chuẩn A Nhân tố chuyển đổi: Bilirubin trực tiếp [mg/dl] x 17.1 = Bilirubin trực tiếp [µmol/l] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO Người lớn: giá trị lên đến 0.25 mg/dl ( 4.3 µmol/l) Mỗi phịng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân Page HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY MẪU THỬ Huyết huyết tương Ổn định mẫu 30 ngày nhiệt độ 2-80C, ngày nhiệt độ 15-250C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại với nồng độ Total Proteins biết Kiểm tra độ tương hợp giá trị đạt với liệu tham khảo đối chứng cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Mẫu thử Blank 1000 µl Mẫu chuẩn 1000 µl Mẫu 1000 µl Chất hiệu chuẩn - 20µl - Mẫu - - 20 µl Trộn ủ hấp hỗn hợp 10 phút 20-250C Sau đó, đọc kết hấp thụ A mẫu chuẩn mẫu 546 (520-570) nm đối chứng với mẫu thử Blank Màu sắc ổn định 60 phút nhiệt độ (20-250C) Ghi chú: Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng TÍNH TỐN KẾT QUẢ: Mẫu A Total Proteins, g/dl = - x Mẫu chuẩn A CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO ÷ 6.8 g/dl Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa mẫu dung dịch hiệu chuẩn nồng độ Proteins khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Page 39 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HĨA ITALY Trong dịng phản ứng Giữa dịng phản ứng Mẫu Số trung bình (mg/dl) SD %CV SD %CV Mẫu huyết 6.52 0.03 0.5 0.20 3.1 Mẫu huyết 5.81 0.02 0.3 0.19 3.3 Mẫu huyết 5.11 0.02 0.4 0.11 3.0 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 10 g/dl Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy phương pháp kỳ phát giới hạn 0.2 g/dl Sƣ tƣơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.0105x + 0.0779 g/dl r = 0.9989 Sự can thiệp Hemoglobin Bilirubin Triglycerides > 200 mg/dl > 20 mg/dl > 1000 mg/dl THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Thuốc thử A chất độc hại (chất ăn mòn), theo báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tham khảo bảng liệu tính an tồn Chất hiệu chuẩn khơng bị xem chất độc hại Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mô mềm Việc sử dụng thuốc thử phịng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phịng thí nghiệm chuẩn Page 40 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY 14 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG TRIGLYCERIDES - L Phƣơng pháp đo màu xúc tác hóa để xác định định lƣợng Triglycerides huyết thanh, huyết tƣơng THƠNG TIN GIỚI THIỆU Tham khảo Kích cỡ thử GA4815 00 12 x 50 ml KL4815 00 x 60 ml BK4815 00 x 60 ml CHỈ DẪN Sự xác định Triglycerides thường dùng chẩn đoán giám sát rối loạn chức mỡ để đánh giá nguy bệnh xơ vữa động mạch Các nghiên cứu gần cho biết mức triglycerides cao tương ứng với tăng mật độ thấp lipoprotein (LDL), tạo nguy cao “bệnh tim mạch vành” (CHD) Nồng độ Triglycerides cao diện nhiều bệnh thận, gan, tuyến tụy NGUYÊN LÝ CỦA PHƢƠNG PHÁP Glycerol tạo từ Triglycerides sau hydro hóa với lipoproteinlipase; sau chất chuyển hóa glycerolkinase tạo glycerol-3-phosphate chất mà tiếp tục oxy hóa glycerolphotphate oxidase tạo dihydroxyacetone phosphate hydrogen peroxide Trong có mặt peroxidase, H2O2 oxi hóa chromogen ESPT (4-aminophenazone/ N-ethylmethylanilin-propan-sulphonate sodic) để tạo thành quinoneimine màu đỏ tía/ đỏ thẳm mà có cường độ màu đo 550 nm tỷ lệ thuận với nồng độ Triglycerides mẫu LPL Triglycerides  Glycerol + A-xít béo GK Glycerol + ATP  Glycerol-3-phosphate + ADP GPO Glycerol-3-phosphate + O2  Dihydroxyacetone phosphate + H2O2 POD H2O2 + Aminoantipirine + ESPT  Quinoneimine + HCl + 4H2O THÀNH PHẦN Thuốc thử A: Chất đệm tốt pH 7.2 ESPT ATP Mg ++ Lipoproteinlipase (LPL) Glycerol kinase (GK) Glycerolphotphate oxidase (GPO) 4-Aminoantipirine Peroxidase (POD) NaN3 50 mmol/l mmol/l mmol/l mmol/l ≥ kU/l ≥ 0.4 kU/l ≥ 1.5 kU/l 0.5 mmol/l > kU/l ≤ 0.095 g/l Chất hiệu chuẩn x ml Glycerol 200 mg/dl NaN3 ≤ 0.095 g/l Tài liệu tham khảo đối chứng NIST xác minh Page 41 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY Sự chuẩn bị Các thuốc thử chất lỏng có sẵn để sử dụng Lƣu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 2-80C Khơng làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có hiệu lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định THIẾT BỊ PHỤ TRỢ  Các pipette tự động  Máy quang kế  Các Cuvette phân tích (độ chia cm)  Nhiệt kế nước  Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương heparin EDTA Tính ổn định: ngày 20-250C ngày 2-80C năm -200C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm soát với nồng độ Triglycerides biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phịng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl 10 µl - - Mẫu chuẩn - 10 µl - Mẫu - - 10 µl Thuốc thử A Nước cất Trộn hấp hỗn hợp 10 phút 20-250C phút 370C Đọc độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn mẫu 550 (540-560) nm đối ngược với ống mẫu thử Blank (khơng có chất chuẩn mẫu) Màu sắc ổn định khoảng 60 phút bóng tối Ghi chú:  Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng Page 42 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY  Đối với nồng độ > 1000 mg/dl (11 mmol/l) mẫu pha loãng 1:5 dung dịch NaCl g/l nhân kết với TÍNH TOÁN KẾT QUẢ * Huyết thanh, huyết tương: Mẫu A Triglycerides, mg/dl = - x 200 Mẫu chuẩn A Nhân tố chuyển đổi: Triglycerides [mg/dl] x 0.01126 = Triglycerides [mmol/l] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO (ngƣời ăn kiêng) * Huyết thanh/ huyết tương Giá trị đề nghị: < 200 mg/dl ( 2.3 mmol/l) Giới hạn trên: 200-400 mg/dl (2.3-4.5 mmol/l) Giá trị cao: > 400 mg/dl ( 4.5 mmol/l) Các nghiên cứu dịch tễ học tìm kết hợp Triglycerides > 180 mg/dl (>2.0 mmol/l) huyết tương cholesterol HDL < 40 mg/dl (< 1.0 mmol/l) gây ran guy cao bệnh CHD Các mức giới hạn (>200 mg/dl) nên đánh giá với yếu tố nguy cao khác bệnh CHD Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu kiểm soát nồng độ cholesterol khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Giữa dịng phản ứng Mẫu Số trung bình (U/I) SD %CV SD %CV Mẫu huyết 125.3 3.22 2.6 3.35 2.7 Mẫu huyết 219.1 4.65 2.1 9.19 4.2 Mẫu huyết 715.3 6.60 0.9 39.94 4.9 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 1000 mg/dl (11.3 mmol/l) Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ phát giới hạn 1mg/dl (0.01 mmol/l) Sƣ tƣơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.1922 x – 6.5745 mg/dl r = 0.9996 Page 43 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA Sự can thiệp Bilirubin Hemoglobin Ascorbic a-xít ITALY > 40 mg/dl > 250 mg/dl > mg/dl THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Thuốc thử chứa thành phần không hoạt động chất bảo quản (NaN chất khác), chất bề mặt…Tổng nồng độ thành phần thấp giới hạn cho phép báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mô mềm Việc sử dụng thuốc thử phịng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phịng thí nghiệm chuẩn Page 44 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY 15 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG U-RÊ U.V Phƣơng pháp xúc tác hóa để xác định định lƣợng U-rê huyết thanh, huyết tƣơng nƣớc tiểu THÔNG TIN GIỚI THIỆU Tham khảo Kích cỡ thử GA4960 00 10x40 + 5x 20 ml KL4960 00 10x40 + 10x 10 ml BK4960 00 x (60+15 ml) CHỈ DẪN Nồng độ U-rê số chức thận Các điều kiện liên quan đến giá trị U-rê cao liên quan đến chứng ni-tơ huyết iperuremia NGUYÊN LÝ CỦA PHƢƠNG PHÁP U-rê thủy phân hóa với phản ứng Urease tạo thành Ammoniac carbon dioxide Glutamate dehydrogenase xúc tác phản ứng ammoniac với 2-ketoglutarate oxi hóa NADH tạo NAD+ Urease Urease + H2O  NH4+ + HCO3GLDH + 2-ketoglutarate + NH4 + NADH  L – Glutamate + NAD + + H2O Độ giảm hấp thụ NADH đo 340 nm, tỷ lệ thuận với U-rê có mẫu THÀNH PHẦN Thuốc thử A: TRIS đệm pH 7.4 150 mmol/l 2-ketoglutarate 8.75 mmol/l ADP 0.75 mmol/l Urease ≥ 7.5 kU/l GLDH (Glutamate- dehydrogenase) ≥ 1.25 kU/l NaN3 ≤ 0.95 g/l Thuốc thử B: NADH 1.32 mmol/l NaN3 ≤ 0.95 g/l Chất hiệu chuẩn x ml U-rê 50 mg/dl Tài liệu tham khảo đối chứng NIST xác minh CHUẨN BỊ CÁC THUỐC THỬ Qui trình hai thuốc thử: Các thuốc thử chất lỏng có sẵn Qui trình đơn thuốc thử: Pha trộn phần thuốc thử A phần thuốc thử B tạo thành hỗn hợp thuốc thử (VD: 20 ml A + ml B) Hãy đưa hỗn hợp thuốc thử đạt tới nhiệt độ phịng 30 phút trước sử dụng Page 45 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HĨA CHẤT SINH HĨA ITALY Lƣu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Ổn định hỗn hợp thuốc thử 28 ngày nhiệt độ 2-8 0C ngày 15-25 0C bóng tối THIẾT BỊ PHỤ TRỢ  Các pipette tự động  Máy quang kế  Các Cuvette phân tích (độ chia cm)  Nhiệt kế nước  Dung dịch NaCl g/l  MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương, nước tiểu 24 Không dùng thuốc chống đơng máu có chứa fluoride ion ammonium Pha loãng nước tiểu tỉ lệ 1:20 với nước cất Tính ổn định: Nhiệt độ 20-25 0C 4-8 0C -20 0C Huyết thanh/ huyết tương năm Nước tiểu tháng Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra với nồng độ U-rê biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Nhiệt độ thử 37 0C Bước sóng 340 nm (334 nm, 365 nm) Đường dẫn tối ưu cm Phản ứng thời gian cố định (hoặc giảm) Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Page 46 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY Qui trình hai thuốc thử: Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Mẫu thử Blank 800 µl Mẫu chuẩn 800 µl Mẫu 800 µl - 10 µl - - - 10 µl Mẫu chuẩn Mẫu Trộn ủ hấp hỗn hợp phút 37 C Sau cho vào thêm: Thuốc thử B 200 µl 200 µl 200 µl Trộn hấp hỗn hợp 30 phút 37 C Sau đọc kết A1 mẫu, mẫu chuẩn mẫu thử Blank Sau xác 60 giây, đọc độ hấp thụ A2 Xác định: A = [(A1 – A2) mẫu mẫu chuẩn] – [(A1 - A2) mẫu thử Blank] Qui trình thuốc thử: Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử Mẫu thử Blank 1000 µl Mẫu chuẩn 1000 µl Mẫu 1000 µl Mẫu chuẩn - 10 µl - Mẫu 10 µl Trộn hấp hỗn hợp 30 phút 37 C Sau đọc kết A1 mẫu, mẫu chuẩn mẫu thử Blank Sau xác 60 giây, đọc độ hấp thụ A2 Xác định: A = [(A1 - A2) mẫu mẫu chuẩn] – [(A1 - A2) mẫu thử Blank] Ghi chú:  Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng  Sự xác định phương pháp cần tối ưu hóa điểm: Cần phải hấp, ủ hoàn toàn thuốc thử Trống, chất hiệu chuẩn Mẫu khoảng thời gian Cần chuẩn bị mẫu trước hấp ủ khoảng thời gian điều cần thiết TÍNH TOÁN KẾT QUẢ * Huyết thanh- huyết tương: A Mẫu U-rê, mg/dl = - x 50 A mẫu chuẩn * Nước tiểu: (khi thu 24 h) A Mẫu U-rê, g/ 24h = - x 10 x 1/24 h Page 47 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY A mẫu chuẩn Nhân tố chuyển đổi: U-rê [mg/dl] x 0.1665 = U-rê [µmol/l] U-rê [mg/dl] x 0.05948 = BUN* [mg/dl] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO Huyết thanh- huyết tương: 18 † 53 mg/dl (người lớn) Nước tiểu 24 giờ: ÷ 17 mg/24h Mỗi phịng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dịng phản ứng dịng ghi nhận tính toán dựa hai mẫu huyết nồng độ U-rê khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong vòng phản ứng Giữa dòng phản ứng Số trung Mẫu SD %CV SD %CV bình (mg/dl) Mẫu huyết 42.8 1.54 3.6 1.50 3.5 Mẫu huyết 161.7 3.60 2.2 7.51 4.6 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 300 mg/dl Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ phát giới hạn mg/dl Sƣ tƣơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.0436 x – 1.1064 mg/dl r = 0.9924 Sự can thiệp Hemoglobin Bilirubin Triglycerides A-xít Ascorbic > 500 mg/dl > 40 mg/dl > 2000 mg/dl > 30 mg/dl THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Thuốc thử chứa thành phần không hoạt động chất bảo quản (NaN3 chất khác), chất bề mặt…Tổng nồng độ thành phần thấp giới hạn cho phép báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mô mềm Việc sử dụng thuốc thử phịng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phịng thí nghiệm chuẩn Page 48 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY 16 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG ACID URIC – L Phƣơng pháp đo màu xúc tác hóa để xác định định lƣợng A-xít Uric huyết thanh, huyết tƣơng nƣớc tiểu THƠNG TIN GIỚI THIỆU Tham khảo Kích cỡ thử GA4865 00 12 x 50 ml KL4865 00 10 x 60 ml BK4865 00 x 60 ml CHỈ DẪN Sự xác định A-xít Uric thường dùng chẩn đốn bệnh Gút, lưu giữ Ni-tơ nhằm giám sát bệnh Thận Nó dùng tất phương pháp điều trị cytolytic NGUYÊN LÝ CỦA PHƢƠNG PHÁP A-xít Uric chuyển hóa phản ứng Uricase tạo thành Allantoine hydrogen peroxide mà ảnh hưởng catalytic peroxidase, tiếp tục phản ứng với 4-aminophenazone Nethyl-N-(hydroxi-3-sulphopropil)- p-toluidine (ESPT) để tạo thành màu tím xanh Uricase A-xít Uric + H2O + O2  Allantonine + CO2 + H2O2 POD ESPT + 4-Aminophenazone + H2O2  Indamine + H2O Cường độ màu đo 550 nm tỷ lệ thuận với a-xít Uric có mẫu Sự diện ascorbate oxidase ngăn cản can thiệp a-xít ascorbic chất khác THÀNH PHẦN Thuốc thử A: Borate đệm pH 7.4 Uricase Cholesterol esterase 4-Aminophenazone ESPT Peroxidase (POD) NaN3 180 mmol/l > 50 U/l > 300 U/l 0.25 mmol/l mmol/l > 100 U/l < 0.095 g/l Chất hiệu chuẩn x ml A-xít Uric mg/dl Tài liệu tham khảo đối chứng NIST xác minh Sự chuẩn bị Các thuốc thử chất lỏng có sẵn Lƣu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Page 49 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY THIẾT BỊ PHỤ TRỢ  Các pipette tự động  Máy quang kế  Các Cuvette phân tích (độ chia cm)  Nhiệt kế nước  Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương EDTA heparin, nước tiểu 24 pha lỗng tỉ lệ 1:10 với nước cất Tính ổn định: Nhiệt độ 20-25 0C 4-8 0C -20 0C Huyết thanh/ huyết tương tháng Nước tiểu ngày - - Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƣợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra với nồng độ a-xít Uric biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl 25 µl - - - 25 µl - - - Thuốc thử A Nước cất Mẫu chuẩn Mẫu 25 µl Trộn hấp hỗn hợp 15 phút 20-25 C khoảng 10 phút 37 C Đọc độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn mẫu 550 (540-560) nm đối chứng với mẫu thử Blank Màu sắc ổn định khoảng 30 phút bóng tối Ghi chú:  Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng  Với nồng độ huyết tương huyết > 20 mg/dl (1190 µmol/l) chất pha lỗng mẫu có tỉ lệ 1:2 với dung dịch NaCl (9 g/l) nhân đơi kết  Với nồng độ nước tiểu > 200 mg/dl chất pha lỗng mẫu có tỉ lệ 1:2 với dung dịch nước cất (9 g/l) nhân kết với Page 50 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY TÍNH TỐN KẾT QUẢ * Huyết thanh, huyết tương: Mẫu A A-xít Uric, mg/dl = - x Mẫu chuẩn A * Nước tiểu: Mẫu A A-xít Uric, mg/ 24h = - x 600 x 1/24 h Mẫu chuẩn A Nhân tố chuyển đổi: A-xít Uric [mg/dl] x 59.48 = A-xít Uric [µmol/l] A-xít Uric [mg/dl] x 0.05948 = A-xít Uric [mmol/l] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO Huyết tƣơng/ huyết Nữ mg/ dl (µmol/l) 2.3-6.1 (137-363) Nam mg/ dl (µmol/l) 3.6-8.2 (214-488) 0-5 ngày 1.9-7.9 (113- 470) 1.9-7.9 (113- 470) 1-4 tuổi 1.7-5.1 (101-303) 2.2-5.7 (131-470) 5-11 tuổi 3.0-6.4 (178-381) 3.0-6.4 (178-381) 12-14 tuổi 15-17 tuổi 3.2-6.1 (190-381) 3.2-6.4 (190-381) Nƣớc tiểu 3.2-7.4 (190-440) 4.5-8.1 (190- 440) Ngƣời lớn Trẻ em  800 mg/24h (4.76 mmol/l) Kiêng cử mức cân  600 mg/24h (5.57 mmol/l) Kiêng cử mức thấp purine Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dịng phản ứng dịng ghi nhận tính tốn dựa hai mẫu kiểm sốt nồng độ a-xít Uric khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Giữa dòng phản ứng Mẫu Số trung bình (U/I) SD %CV SD %CV Mẫu huyết 4.6 0.08 1.8 0.17 3.8 Mẫu huyết 12.1 0.22 1.8 0.53 4.4 Page 51 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 20 mg/dl (1190 mmol/l) Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ phát giới hạn 0.3 mg/dl (17.84 µmol/l) Sƣ tƣơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.1974 x – 0.4471 mg/dl r = 0.9947 Sự can thiệp Bilirubin Hemoglobin Triglycerides A-xít Ascorbic > 20 mg/dl > 50 mg/dl > 2000 mg/dl > 30 mg/dl THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Thuốc thử chứa thành phần không hoạt động chất bảo quản (NaN chất khác), chất bề mặt…Tổng nồng độ thành phần thấp giới hạn cho phép báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mơ mềm Việc sử dụng thuốc thử phịng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phịng thí nghiệm chuẩn Page 52 HƢỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA ITALY CÁC KÝ HIỆU Chỉ sử dụng cho IVD Mã số code Khoảng nhiệt độ lưu trữ Ngày hết hạn sử dụng Cảnh báo, chứng từ kèm theo Đọc hướng dẫn Rủi ro Sinh học XỬ LÝ CHẤT THẢI Vui lòng tham khảo yêu cầu pháp lý địa phương TÀI LIỆU THAM KHẢO Tham khảo tài liệu tiếng anh nhà sản xuất www.ams-analyzers.com www.gdsrl.com Page 53