Thực Hiện Một Số Tiêu Bản Hạch Màng Treo Ruột, Bàng Quang, Dịch Hoàn, Mào Tinh Và Tuyến Mang Tai

TR NG I H C C N TH KHOA NÔNG NGHI P & SINH H C NG D NG PHAN THANH TRÚC TH C HI N M T S TIÊU B N: H CH MÀNG TREO RU T, BÀNG QUANG, D CH HOÀN, MÀO TINH VÀ TUY N MANG TAI TRÊN TH Lu n v n t t nghi p Ngành: BÁC S THÚ Y n Th , 2010 TR NG I H C C N TH KHOA NÔNG NGHI P VÀ SINH H C NG D NG Lu n v n t t nghi p Ngành: BÁC S THÚ Y Tên tài: TH C HI N M T S TIÊU B N: H CH MÀNG TREO RU T, BÀNG QUANG, D CH HOÀN, MÀO TINH VÀ TUY N MANG TAI TRÊN TH : Giáo viên h ng d n: TS Lê Hoàng S Sinh viên th c hi n: Phan Thanh Trúc MSSV: 3064557 L p: Thú Y k32 n Th 2010 TR NG I H C C N TH KHOA NÔNG NGHI P & SINH H C NG D NG MÔN THÚ Y tài: Th c hi n m t s tiêu b n mô ng v t th sinh viên PHAN THANH TRÚC l p Thú Y Khóa 32 th c hi n t i phịng thí nghi m mơ h c thu c b môn Thú Y, Khoa Nông Nghi p & Sinh H c Th t tháng 08 n m 2010 ng D ng, Tr ng ih cC n n tháng 10 n m 2010 C n Th , ngày tháng n m C n Th , ngày tháng n m Duy t B môn Cán b h ng d n Lê Hoàng S C n Th , ngày tháng n m Duy t khoa Nông Nghi p & SH D ii IC M Trong su t th i gian gi ng ng N i h c ba tháng th c hi n lu n v n t t nghi p c a mình, tơi ã g p r t nhi u khó kh n v c nh tơi ln có s ng viên, ng h c a gia ình, ln ng m c nh ng bên c s giúp c a Th y Cô, b n bè, tơi ã c g ng hồn thành t t khóa h c lu n v n t t nghi p c a Xin bày t lịng bi t n sâu s c ã h t lòng h ng d n, quan tâm, n th y Lê Hoàng S th y Tr n Hi n Nh n ng viên em hoàn thành lu n v n t t nghi p V i t t c s kính tr ng em xin bày t lòng bi t n sâu s c môn Thú Y, th y cô c a tr h c t p t i tr ng i h c C n Th ã d y d su t th i gian ng Xin chân thành bi t n xin kính chúc quý Th y Cô, ng c a n quý th y cô B c d i s c kho , có th t nhi u ni m vui công cu c s ng iii t i thân b n bè c th t nhi u thành CL C Trang t a: i Trang t: ii L i c m n: .iii M c l c: iv Danh m c hình: vi Tóm l c: .vii Ch ng 1: tV n Ch ng 2: L 01 c Kh o Tài Li u 02 2.1 T ng quan v ph ng pháp th c hi n tiêu b n hi n vi 2.2 H ch lâm ba 02 2.2.1 C u t o vi th 02 2.2.2 Phân lo i h ch 03 2.2.3 Ch c n ng sinh lý 03 2.3 Bàng quang 04 2.4 D ch hoàn 05 2.4.1.C u t o vi th 05 2.4.2 Ch c n ng sinh lý 05 2.5 Mào tinh 08 2.6 Tuy n n Ch ng 3: Ph 3.1 Ph c b t 08 ng Ti n Ph ng Pháp 13 ng ti n 13 3.1.1 a m th c hi n 13 3.1.2 D ng c , trang thi t b hóa ch t 13 3.2 Ph ng pháp ti n hành 13 3.2.1 L y m u 13 3.2.2 C nh m u 14 3.2.3 L y m u nh 14 iv 3.2.4 R a n c 14 3.2.5 Kh n c 14 3.2.6 T m dung môi trung gian 15 3.2.7 T m paraffin 15 3.2.8 úc khuôn 15 3.2.8.1 Chu n b 15 3.2.8.2 Ti n hành 15 3.2.9 C t m u 15 3.2.9.1 Chu n b 15 3.2.9.2 Ti n hành 15 3.2.10 T i - h p m u 16 3.2.10.1 Chu n b 16 3.2.10.2 Ti n hành 16 3.2.11 Nhu m m u 16 3.2.11.1 Chu n b 16 3.2.11.2 Ti n hành: 16 3.2.12 Dán lamelle - Dán nhãn 18 3.2.12.1 C nh m u b ng Mount – quick 18 3.2.12.2 Dán nhãn 18 Ch ng 4: K t Qu Th o Lu n 19 4.1 H ch màng treo ru t 20 4.2 Bàng quang 22 4.3 D ch hoàn 24 4.4 Mào tinh 25 4.5 Tuy n mang tai 26 Ch ng 5: K t lu n Ngh 29 5.1 K t lu n 29 5.2 ngh 29 v DANH M C HÌNH Hình 1: S c u t o h ch lâm ba .02 Hình 2: S c u t o n n c b t 11 Hình 3: Máy c t vi m u .16 Hình 4: S quy trình nhu m m u 17 Hình 5: C u t o vi th h ch lâm ba c t ngang (X100) 20 Hình 6: C u t o vi th mi n v h ch lâm ba c t ngang (X400) 20 Hình 7: C u t o vi th mi n t y h ch lâm ba c t ngang (X400) 20 Hình 8: C u t o vi th bàng quang c t ngang (X100) 22 Hình 9: C u t o vi th bàng quang c t ngang (X400) 23 Hình 10: C u t o vi th d ch hoàn c t ngang (X100) 24 Hình 11: C u t o vi th d ch hoàn c t ngang (X400) 25 Hình 12: C u t o vi th m ch máu d ch hoàn c t ngang (X400) 25 Hình 13: C u t o vi th mào tinh c t ngang (X100) 25 Hình 14: C u t o vi th mào tinh c t ngang (X400) .26 Hình 15: C u t o vi th n mang tai c t ngang (X100) 26 Hình 16: C u t o vi th n mang tai c t ngang (X400) 27 Hình 17: C u t o vi th ng m ch c a n mang tai c t ngang (X400) 23 Hình 18: C u t o vi th ng m ch c a n mang tai c t ngang (X400) 23 Hình 19: C u t o vi th d ch hoàn c t d y (X100) .27 Hình 20: Bàng quang rách g p n p (v t kính X100) 28 vi TĨM L V i C tài “Th c hi n m t s tiêu b n: h ch màng treo ru t, bàng quang, d ch hoàn, mào tinh n mang tai th ” Nh m t o tiêu b n vi th lo i t ch c c th nêu Trong th i gian t tháng 08 i v i t ng n tháng 10 n m 2010, t i phịng thí nghi m mơ h c - Khoa Nông nghi p & SH D - i h c C n Th trang thi t b hóa ch t c n thi t ã th c hi n c 190 tiêu b n ó có 123 tiêu b n hồn ch nh Qua ó rút m u so v i qui trình chung vii cm ts c m riêng t ng Ch ng TV N th ng i ông v t m t th th ng nh t, toàn v n hoàn ch nh B t kì c u t o i u c ng m nh n ch c n ng nh t u m t ho c m t s c u t o th c hi n, Trong ho t th nh, ng ng th c ti n thú y, c l i b t k ch c n ng phù h p v i tìm hi u v m c u ki n s ng gây h i, t n ng m c ph i, c ch sinh b nh… c a m t lo i b nh ó c th v t ni vi c kh o sát cm c m c t bào không th b qua Nh ng ta mu n kh o sát t bào c a mơ b nh, tr mơ bình th c h t ta ph i kh o sát m c t bào c a ng Do v y, sinh viên ngành Thú y c n hi u bi t rõ v c u t o, t ch c c th ng v t c p vi th Nh vào ki n th c vi th mà có th gi i thích c q trình sinh lý bình th ng c a c th v t ni V i l i ích thi t th c nêu th c hi n tài “ Th c hi n m t s tiêu b n: h ch màng treo ru t, bàng quang, d ch hoàn, mào tinh n mang tai th ” M c tiêu - tài: c mô t v m t t ch c h c tiêu b n ã th c hi n bao g m: h ch màng treo ru t, bàng quang, d ch hoàn, mào tinh n mang tai - Th c hi n nh ng tiêu b n có ch t l nghiên c u ng ph c v cho h c t p, gi ng d y Ch ng C KH O TÀI LI U 2.1 T NG QUAN V PH NG PHÁP TH C HI N TIÊU B N HI N VI Mu n th c hi n nghiên c u t bào mô, ph i dùng lo i kính hi n vi Vì v y ph i th c hi n nh ng tiêu b n có dày thích h p cho phép quan sát d i kính hi n vi Có nhi u ph xét nghi m t p ng pháp làm tiêu b n i; ph ng pháp hóa t bào, hóa mơ; p ng pháp làm tiêu b n c Trong ph nhu m màu ph nghiên c u bao g m: ph ng pháp ng pháp phóng x t ch p; nh nhu m màu ng pháp trên, ph ng pháp làm tiêu b n hi n vi c nh ng pháp ph bi n dùng xét nghi m m u b nh so v i m u i ch ng Ph ng pháp làm tiêu b n c nh nhu m màu Th c hi n tiêu b n hi n vi c nh b ng ph ng pháp tiêu b n c t lát nhu m kép b ng Hematoxylin Eosin Y K thu t mô h c nh m t o c nh ng m nh c t m ng, su t c a mô c quan, cho phép quan sát i kính hi n vi Thêm vào ó m nh c t s cd c nhu m b ng thu c nhu m c hi u, ph n c a m nh c t có màu khác giúp cho vi c quan sát d dàng Tiêu b n hi n vi c nh th c hi n theo ph giai o n Ph i th c hi n t t t t c giai ch t l không ng, n u m t giai t ch t l ng Tóm l ng pháp ph i tr i qua nhi u nm i c tiêu b n có n ó th c hi n khơng t t tiêu b n thu c quy trình nh sau: l y m u - c - nhu m kép b ng Hematoxylin - Eosin Y (Ph m Phan Th m b o thu ng v t có vú nh Lagomorpha, tu i th c a th t cs nh - c t lát m ng ch Tr nh Bình, 1998) c x p vào h Leporidae thu c b n 10 n m, th i k mang thai kho ng 31 ngày 2.2 H CH LÂM BA H ch lâm ba nh ng th nh hình c u ho c hình d a có màu h ng ho c xám, n m ng i c a m ch b ch huy t, có kh p m i n i c th 4.4 MÀO TINH Hình 13: C u t o vi th mào tinh c t ngang (X100) Hình 14: C u t o vi th mào tinh c t ngang (X400) Quan sát t ngồi có c u t o - Tinh trùng - L p bi u mô ph kép tr gi - L p c tr n vịng có ch a s i chun - L p t ch c liên k t m ng 26 4.5 TUY N MANG TAI Hình 15: C u t o vi th n n c b t c t ngang (X100) Hình 16: C u t o vi th n mang tai c t ngang (X400) 27 Hình 17: C u t o vi th n mang tai c t ngang (X400) Hình 18: C u t o vi th n mang tai c t ngang (X400) Quan sát t vào trong: t ch c liên k t d y m ng không quanh nang n (nang n c) ng Bài xu t, 28 u, bao ng m ch t nh m ch M TS TIÊU B N KHƠNG T U C U Hình 19: D ch hồn c t dày (X100) Lý q trình c t ta i u ch nh c vi c p khơng thích h p, lúc nhu m ta ngâm Hematoxylin th i gian lâu, s l p t bào ch ng nhi u lên nên b t màu m, khó phân bi t Hình 20: Bàng quang b rách gâp n p (X100) Lý trình c t ta s d ng dao c t vi m u không bén (dao d ng c t m u nhi u l n) 29 cs Ch ng T LU N VÀ NGH 5.1 K T LU N B ng ph ng pháp tiêu b n c t lát nhu m kép b ng Hematoxylin Eosin Y, m c tiêu c a tài “Th c hi n tiêu b n vi th ng v t th ” ã c th c hi n ó là: ã kh o sát ph ng pháp th c hi n tiêu b n hi n vi c th tìm th t th i gian c Tiêu b n làm áp ng nh mô ng v t nh m u thích h p cho t ng lo i t ch c c yêu c u quan sát c u trúc mô h c, có th ph c v t t cho nhu c u nghiên c u, h c t p gi ng d y 5.2 NGH Th c hi n thêm tiêu b n vi th c a loài khác 30 so sánh s khác bi t TÀI LI U THAM KH O D ng Th Kim Lan 2010 Th c hi n tiêu b n vi th nghi p ng tiêu hóa th Lu n v n t t i h c C n Th ng Ng c Qu nh, 2007 Bài gi ng c th gia súc A, khoa Nông Nghi p sinh h c ng d ng, tr ng i h c C n Th Lâm Th Thu H ng, 2005 Mô phôi gia súc Nhà xu t b n i h c qu c giaThành ph H Chí Minh Lea & Febiger.1974 Atlas of human histology The United Sates of America Lê Hoàng S , Phan Ng c Anh, 2000 T ch c h c Nguy n Hoàng Ph n t t nghi p ng, 1994 Ph ng v t, i H c C n Th ng pháp th c hi n tiêu b n mô ng v t Lu n i h c C n Th Nguy n Quang Mai, 2004 Sinh lý h c ng v t ng i, Nhà xu t b n Khoa h c xã h i k thu t Hà n i Nguy n Xuân Ho t, Ph m c L , 1978 T ch c h c – Phôi thai h c Nhà xu t b n h c trung h c chuyên nghi p Tr ng ình Ki t, Phan Chi n Th ng, 1991 Mô h c Nhà xu t b n y h c 31 PH CH NG B ng 1: Tr ng i, nguyên nhân cách kh c ph c úc m u Tr ng i Nguyên nhân Kh c ph c Block v có nhi u h t Paraffin x u, không tinh Thay l c th t k paraffin t M u b t kh i block Thao tác úc khuôn ch m úc l i m u, thao tác nhanh c t, block có khí n M u khó c t hay v Paraffin c ng Thay paraffin khác m m t ng m nh n T ch c b co rúm l i Nhi t t m Paraffin cao Lo i b m u ó n 65 oC c Paraffin ch a th m hoàn T m l i paraffin lâu h n, Khó c t, t ch c b t toàn vào t ch c, ch a lo i ho c loiaj b m u ó n u có h t c n Xylen m u d tr B ng 2: Tr ng i, nguyên nhân kh c ph c c t m u Tr ng i Nguyên nhân Các m nh c t có dài không b ng Kh c ph c i u ch nh máy c t v i t c không thích h p ng ho c gi m t c quay máy c t i u ch nh dày, m ng c a máy c t M nh c t b cu n l i M t trên, d không x p thành b ng m u l i c a khuôn i u ch nh khuôn m u Dao c t b l c, m , d i dao Lau s ch l thay l M u b n t,v n nát i dao i dao không cho m t c t song song song song M nh c t b rách, th ng nghiêng l M u n c, nhi t i dao ho c i dao m i Chú ý n ng th i paraffin lúc t m cao, gian ngâm c n nhi t t c tay quay không phù t s y lúc t m paraffin 32 h p M nh c t b v t r ng c a Paraffin m m, nhi t C t dày h n, dính vào dao nhi t phịng q nóng i u ch nh c a máy l nh xu ng M nh c t dính l i Dao d , khuôn m u nghiêng c a Thay dao m i, ki m tra dao ch a nghiêng c a dao B ng 3: Tr ng i, nguyên nhân cách kh c ph c t i, h p nhu m m u Tr ng i Nguyên nhân M ub g pn p M u b rách c Kh c ph c ch u t i ng nhi t khơng nóng t i Nhi t n Gi m nhi t c cao ch u ch u t i b ng cách thêm n c l nh vào B tu t m u lúc M nh tay lúc nhu m Thao nhu m tác nhu m ph i ch m, nh nhàng Cơng th c pha ch Formol trung tính 10%: Formalin (37 – 40%) 100 ml cc t 900 ml Sodium phosphat monobasie 4g Sodium phosphat dibasie 6,5 g Ph m nhu m Hematoxylin: Hematoxylin khơng có c tính nhu m mà ph i tr i qua q trình oxy hóa bi n thành Hematein m i nhu m dung d ch nhu m t - tu n d c S oxy hóa Hematoxylin gây nên i ánh sáng m t tr i ho c có th oxy hóa b ng tác nhân hóa h c nh Iodate Sodium, Formanganat…trong khâu nhu m, s d ng ch t oxy hóa mereuride oxide s oxy hóa Hematoxylin thành Hematein x y t c kh c S oxy hóa liên t c c a Hematein s hình thành m t h p ch t không màu làm cho ph m nhu m khơng dùng c lâu Chính v y mà m t s ng i cho r ng s oxy hóa ch m m t cách t nhiên t t h n s oxy hóa b ng ch t hóa h c 33 Hematoxylin m t ph m nhu m gián ti p nên c n dùng thêm ch t g n màu Alumum d i d ng Alum (phèn chua) m i có th n màu vào t ch c Hematoxylin m t ph m nhu m baze m nh Do ó, s c nh acid nucleic acid c a nhân t bào nên Hematoxylin dùng nhu m nhân sau nhu m nhân s có màu tím xanh Pha ch Hematoxylin theo Harris: Tinh th Hematoxylin C n t 5g i 50 ml Phèn chua 100 g cc t 1000 ml Moreuride oxyde Ph 2,5 g ng pháp ti n hành: Hòa tan Hematoxylin c n phèn chua n c c t un sôi, mang kh i b p tr n hai dung d ch l i un sôi nhanh không m t phút khu y Moreuride oxyde vào t t , khu y tím n dung d ch có màu m Mang kh i b p cho vào n l c tr u, un nh l a cho u, t t l a r i cho c l nh làm l nh nhanh, dung d ch ngu i c dùng u ý: Hematoxylin bi n ch t (có c n, nâu ngồi t bào nhu m ) s k t t a màu nâu en bên ki m tra xem dung d ch Hematoxylin có b lỗng bi n ch t hay không b ng cách nh vài gi t Hematoxylin vào n gi t ph m nhu m có màu c m, n u th y m t lúc sau m i chuy n sang màu tím xanh ph m nhu m ã loãng bi n ch t ph i lo i b N u nh gi t ph m nhu m vào có màu tím xanh s d ng c Ph m nhu m Eosin: Eosin d tr : Eosin 1g cc t 20 ml Hòa tan thêm c n 95o 80 ml Eosin nhu m : Eosin d tr ph n C n 80 o ph n 34 Hòa tan vào cho thêm 0.5 ml acide acetic dung d ch tr m c cho 100 ml c dùng Chú ý : l c k Eosin n c cho tan hoàn toàn m i pha vào c n 35 HÌNH M T S 36 BÀNG QUANG HÌNH M T S 37 MÀO TINH HÌNH M T S TUY N N 38 CB T HÌNH M T S H CH MÀNG TREO RU T 39 HÌNH M T S 40 D CH HOÀN ... d ch hoàn, mào tinh n mang tai th ” M c tiêu - tài: c mô t v m t t ch c h c tiêu b n ã th c hi n bao g m: h ch màng treo ru t, bàng quang, d ch hoàn, mào tinh n mang tai - Th c hi n nh ng tiêu. .. ng c a tinh hoàn, thân ph n gi a uôi ph n nh nh t i ti p n i v i ng d n tinh Mào tinh ch a ng mào tinh, ng d mào tinh ng xo n Sau sinh m t th i gian tinh hoàn, tinh trùng chuy n sang mào tinh phát... màng treo ru t, bàng quang, d ch hoàn, mào tinh n mang tai - Loài: th - Chi u h - ng c t: c t ngang, c t d c t tiêu b n vào h p ch a tiêu b n 19 Ch ng T QU VÀ TH O LU N Qua trình th c hi n tiêu