Đánh giá khả năng kháng khuẩn của màng bao gói khí quyển biến đổi (MAP) gắn enterocin E-760

Enterocin E-760 là một bacteriocin thuộc lớp II, có khả năng kháng khuẩn phổ rộng kháng được cả vi khuẩn Gram dương và Gram âm. Gen mã hóa enterocin E-760 được tổng hợp nhân tạo và biểu hiện thành công trong nấm men Pichia pastoris X-33. Enterocin E-760 được thu hồi bằng phương pháp tủa phân đoạn ethanol 70% có độ sạch lên tới trên 90%.

Nghiên cứu khoa học công nghệ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA MÀNG BAO GĨI KHÍ QUYỂN BIẾN ĐỔI (MAP) GẮN ENTEROCIN E-760 Bùi Trung Hiếu1, Tô Lan Anh1, Nguyễn Thị Nhung1, Tô Văn Thiệp1, Trần Vũ Thắng2, Nguyễn Khánh Hồng Việt1* Tóm tắt: Enterocin E-760 bacteriocin thuộc lớp II, có khả kháng khuẩn phổ rộng kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm Gen mã hóa enterocin E-760 tổng hợp nhân tạo biểu thành công nấm men Pichia pastoris X-33 Enterocin E-760 thu hồi phương pháp tủa phân đoạn ethanol 70% có độ lên tới 90% Để tăng khả sử dụng, chất kháng khuẩn thử nghiệm gắn lên màng bao gói khí biến đổi (MAP) chất liệu LDPE (MAP-ent760) màng PE thơng thường (PE-ent760) Kết quan sát qua kính hiển vi điện tử quét (scanning electron microscopy) cho thấy, khả gắn kết dung dịch chất kháng khuẩn chứa enterocin E-760 màng bao gói khí biến đổi có phân bố đồng so với màng PE thông thường Kết đánh giá khả kháng khuẩn màng MAP-ent760 đĩa thạch cho thấy, màng có khả ức chế chủng vi khuẩn thị Gram dương Listeria monocytogenes Gram âm Escherichia coli Như vậy, Enterocin E-760 gắn kết thành cơng lên màng bao gói khí biến đổi Màng gắn enterocin E-760 xác định có hoạt tính kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm có tiềm cho ứng dụng bảo quản thực phẩm Từ khóa: Bacteriocin; Chất kháng khuẩn sinh học; Enterocin E-760; MAP MỞ ĐẦU Vi sinh vật không tác nhân gây nên hư hỏng thực phẩm mà chúng cịn ngun nhân dẫn đến ngộ độc thực phẩm [1] Các lồi vi khuẩn gây bệnh truyền qua thực phẩm bao gồm Salmonella enterica, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Campylobacter jejuni, Bacilluscereus, Vibrio số chủng E coli Hiện nay, thực phẩm nói chung bảo quản theo phương pháp vật lý, hóa học sinh học Trong đó, phương pháp sinh học sử dụng hệ vi sinh vật an toàn sản phẩm trao đổi chất chúng nhằm ức chế vi sinh vật gây thối hỏng gây bệnh có mặt thực phẩm phương pháp có tiềm an tồn [2] Trong số đó, bacteriocin-peptide có khả kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm nhận quan tâm nghiên cứu hàng đầu, điển hình enterocin E-760 Enterocin E-760 bacteriocin thuộc lớp II, có 62 amino acid, số bacteriocin đầy hứa hẹn lĩnh vực bảo quản thực phẩm khả kháng phổ rộng vi khuẩn Gram dương Gram âm [3, 4] S enteritidis, Choleraesuis, E coli O157 H7, Morganella morganii, S aureus, L monocytogenes 20 loài Cambylobacter Bên cạnh vi sinh vật, số yếu tố môi trường oxy khơng khí, ánh sáng, nhiệt độ, q trình hơ hấp, nước,… tác nhân phổ biến gây nên giảm chất lượng thực phẩm Để hạn chế ảnh hưởng yếu tố tới trình bảo quản thực phẩm, việc sử dụng màng bao gói khí biến đổi (MAP) coi giải pháp hiệu nhận nhiều quan tâm nhà sản xuất thực phẩm Màng MAP thiết kế dựa sở thay đổi thành phần khí xung quanh thực phẩm để hạn chế hô hấp thực phẩm hoạt động vi sinh vật, từ trì chất lượng thực phẩm Tại Việt Nam, màng bao gói khí biến đổi (MAP) tổng hợp từ nhựa polyetylene tỷ trọng thấp (LDPE) kết hợp với số chất phụ gia vô silica, zeolite, bentonite nghiên cứu chế tạo thành cơng Viện Hố học/Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam có khả nâng cao hiệu bảo quản rau Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 10 - 2020 323 Hóa học – Sinh học – Mơi trường tươi (vải, nhãn, mận, ) [5] Trong thời gian gần đây, việc kết hợp màng bao gói chất bảo quản sinh học (bacteriocin, hợp chất hữu cơ, tinh dầu, enzyme,…) xem giải pháp tiềm năng, hiệu an toàn bảo quản thực phẩm Các chất kháng khuẩn gắn lên màng giúp hạn chế giảm hoạt tính kháng khuẩn, đặc biệt giúp cho q trình thẩm thấu diễn thời gian dài so với bổ sung trực tiếp dễ bị biến đổi hịa tan vào thực phẩm Trên giới, có số cơng trình nghiên cứu kết hợp chất bảo quản sinh học với màng bao gói để làm tăng hiệu bảo quản thực phẩm [6-10] Trong đó, phương pháp gắn chất kháng khuẩn lên màng bao gói chất liệu polyethylene tỉ trọng thấp LDPE sử dụng chất tạo màng HPMC chất hóa dẻo polyethylen glycol glycerol [6, 7] phương pháp không phức tạp, cho phép kết hợp nhanh chất kháng khuẩn lên màng thời gian ngắn Ở Việt Nam, nghiên cứu kết hợp chất kháng khuẩn với màng bao gói bảo quản thực phẩm cịn hạn chế, chủ yếu thực đối tượng chất kháng khuẩn nisin kết hợp với chất tạo màng sinh học chưa ứng dụng rộng rãi thực tế Do đó, nghiên cứu này, tiến hành thử nghiệm khả gắn enterocin E-760 lên loại màng khác thử nghiệm khả kháng khuẩn màng gắn chế phẩm nhằm lựa chọn màng phù hợp ứng dụng bảo quản thực phẩm tươi sống NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu hóa chất nghiên cứu - Nguyên liệu: Enterocin E-760 có hoạt độ 1500 AU/mL thu hồi tủa phân đoạn ethanol 70% từ dịch lên men Pichia pastoris X-33 tái tổ hợp Màng bao gói khí biến đổi (MAP) độ dày 50 micron Viện Hóa học/Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam cung cấp; màng PE mua ngồi thị trường - Hóa chất: Hydroxypropyl methyl cellolose (HPMC), polyethylene glycol 400, acetic acid, glycerol, ethanol 96%, NaOH hãng Sigma, Merck, BioBasic, - Vi khuẩn kiểm định Listeria monocytogenes ATCC® 35152™ Escherichia coli ATCC® 8739™ lấy từ tập hợp giống vi sinh vật Phịng Cơng nghệ sinh học/Viện Cơng nghệ 2.2 Thiết bị, dụng cụ Các thiết bị thí nghiệm sử dụng chủ yếu như: Cân phân tích Mettler Toledo ME 204E (Thụy Sỹ), máy đo pH Mettler Toledo S220-K, máy khuấy từ gia nhiệt Cole Parmer EW-03407-15 (Malaysia), tủ lắc nuôi vi sinh vật UNIEQUIP UNIHOOD 750 (Đức), tủ an toàn sinh học Esco AC2-4E8 (Singapore) 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp chuẩn bị dung dịch phủ màng Dung dịch phủ màng chuẩn bị theo phương pháp Imran cộng (2010) [8] Tiến hành cân hòa tan g HPMC 35 mL ethanol 96%, sau đó, thêm 65 mL nước cất vào khuấy tan hỗn hợp máy khuấy từ gia nhiệt Sau hỗn hợp tan đồng nhất, điều chỉnh pH môi trường khoảng HCl 0,1 N để dễ hòa tan enterocin E-760 Sau bổ sung enterocin E-760, hỗn hợp tiếp tục khuấy khoảng 40 phút Cuối cùng, chất tạo dẻo bổ sung vào hỗn hợp để làm tăng tính bền, dai màng phủ Trong báo này, sử dụng 30% glycerol 1,2% polyethylene glycol 400 (PEG-400) làm chất hóa dẻo dung dịch phủ màng [6, 7] Dung dịch phủ màng điều chỉnh pH từ đến NaOH acetic acid trước sử dụng 2.3.2 Phương pháp phủ chất kháng khuẩn lên màng Màng phủ theo phương pháp phủ màng cải tiến phương pháp Neetoo cộng 324 B T Hiếu, …, N K H Việt, “Đánh giá khả kháng khuẩn … gắn enterocin E-760.” Nghiên cứu khoa học công nghệ (2008) [7] Đầu tiên, màng phủ đặt cố định kính kích thước 20 x 20 cm Dung dịch phủ màng sau loại bỏ bọt khí dàn gạt thủy tinh lên bề mặt màng phủ có kích thước với lượng thể tích ml dịch phủ màng màng phủ Sau đó, màng để khơ tự nhiên điều kiện nhiệt độ phòng sử dụng tủ hút 2.3.3 Phương pháp đánh giá phân bố enterocin E-760 màng MAP Màng gắn enterocin E-760 cắt thành mảnh có kích thước × mm Sau đó, trải màng lên lam kính chụp ảnh kính hiển vi điện tử quét (SEM) Ảnh SEM màng gắn enterocin E-760 so sánh với ảnh SEM mẫu đối chứng màng MAP không gắn enterocin E-760 để đánh giá phân bố enterocin E-760 màng [8] 2.3.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn màng gắn enterocin E-760 Hoạt tính kháng khuẩn màng gắn enterocin E-760 xác định theo phương pháp khuếch tán mơi trường thạch [7] Theo đó, chủng kiểm định bao gồm E coli nuôi cấy môi trường LB, L monocytogenes môi trường BHI Các mảnh cắt từ màng thử nghiệm có đường kính mm đặt lên mơi trường thạch bán lỏng cấy chủng vi khuẩn kiểm định Các đĩa petri sau giữ nhiệt độ oC giờ, tiếp tục nuôi 12 37 oC E coli 24 oC L monocytogenes Hoạt tính kháng khuẩn màng thử nghiệm xác định thông qua việc đo đường kính vịng vơ khuẩn hình thành quanh mảnh cắt Sử dụng màng gắn hỗn hợp chất phủ màng không chứa enterocin E-760 làm mẫu đối chứng âm 2.3.5 Phương pháp đánh giá sơ hiệu ứng dụng màng bảo quản thực phẩm Mẫu rau sử dụng cần không bị dập nát, héo úa, loại bỏ phần rau bị sâu úa trước tiến hành thí nghiệm bảo quản Sau đó, lượng mẫu khoảng 150 - 200 g đưa vào túi kích thước 20 x 30 cm để bảo quản, miệng túi buộc chặt để hạn chế khơng khí lưu thơng tự màng bảo quản; sau đó, mẫu bảo quản điều kiện nhiệt độ phòng Sau thời gian bảo quản, mẫu đánh giá cảm quan so sánh với mẫu thời điểm trước bảo quản 2.3.6 Phương pháp xác định lượng vi sinh vật tổng số mẫu bảo quản Lấy g mẫu thực phẩm sau bảo quản nghiền mịn cối chày sứ phịng thí nghiệm Sau đó, mẫu nghiền đồng hòa vào mL nước muối sinh lý NaCl 0,9% khử trùng Lấy 100 µL dịch mẫu trải đĩa petri phủ sẵn môi trường LB agar Đĩa petri phủ mẫu nuôi tủ ấm nhiệt độ 30 oC thời gian 24 Quan sát khuẩn lạc hình thành đĩa petri sau nuôi cấy Thực lặp lại 03 lần thí nghiệm cho mẫu KẾT QUẢ 3.1 Kết đánh giá phân bố enterocin E-760 bề mặt màng Kết thử nghiệm gắn kết hỗn hợp chứa enterocin E-760 lên màng cho thấy, tất mẫu màng phủ hỗn hợp chứa enterocin E-760 xuất lớp màng màu trắng đục bề mặt (hình 1a, 1b, 1c) so với mẫu màng đối chứng đồng không phủ hỗn hợp chứa chất kháng khuẩn (hình 1d) Kết quan sát kính hiển vi điện tử quét, bề mặt màng MAP gắn enterocin E760 (MAP-ent760) sử dụng chất hóa dẻo PEG-400 độ phóng đại 500 lần (hình 1a) cho thấy, cấu trúc bề mặt màng MAP-ent760 mạng lưới polymer gồm phần tử không đồng nhất, có xuất hạt trắng nhỏ phân bố tương đối đồng bề mặt Kết ảnh kính hiển vi điện tử quét bề mặt màng MAP-ent760 sử dụng chất hóa dẻo glycerol (hình 1b) màng PE thơng thường gắn enterocin sử dụng chất hóa dẻo Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 10 - 2020 325 Hóa học – Sinh học – Mơi trường PEG-400 (PE-ent760) (hình 1c) cho thấy, cấu trúc bề mặt khơng đồng xuất hạt trắng sáng Tuy nhiên, hạt trắng sáng hai mẫu màng phân bố không đồng mà phân bố cục thành vùng bề mặt màng Trong đó, mẫu màng MAP đối chứng (hình 1d) bề mặt đồng không thấy xuất hạt trắng sáng Từ kết đánh giá trên, lựa chọn màng MAP phủ hỗn hợp enterocin E-760 chứa chất hóa dẻo PEG-400 cho đánh giá Hình Ảnh kính hiển vi điện tử qt (SEM) hình thái bề mặt màng gắn enterocin E760 độ phóng đại 500 lần (a) Màng MAP-ent760 sử dụng 1,2 % (w/v) PEG-400; (b) Màng MAP-ent760 sử dụng 30% glycerol; (c) Màng PE-ent760; (d) Màng MAP đối chứng không phủ enterocin 3.2 Thử nghiệm khả kháng khuẩn màng đĩa thạch Để đánh giá khả ứng dụng bảo quản thực phẩm, màng MAP sau gắn enterocin E-760 xác định hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán đĩa thạch Các chủng vi khuẩn lựa chọn làm chủng thị L monocytogenes ATCC® 35152™ (Gram dương) E coli ATCC® 8739™ (Gram âm) Mẫu màng MAP màng PE phủ hỗn hợp không chứa enterocin E-760 sử dụng làm mẫu đối chứng âm Kết đánh giá khả kháng khuẩn màng gắn enterocin E-760 trình bày bảng hình Kết bảng hình cho thấy, màng MAP-ent760 có khả kháng lại vi khuẩn Gram dương L monocytogenes vi khuẩn Gram âm E coli (đường kính vịng kháng khuẩn đĩa thạch 14 ± mm 11 ± mm) Màng PE-ent760 có khả ức chế L monocytogenes E coli màng MAP-ent760; cụ thể đường kính vịng kháng khuẩn màng PE-ent760 đĩa thạch ± mm (với L monocytogenes) ± mm (với E coli) Điều giải thích phân bố hỗn hợp chất tạo màng chứa enterocin E-760 bề mặt màng PE cục bộ, không 326 B T Hiếu, …, N K H Việt, “Đánh giá khả kháng khuẩn … gắn enterocin E-760.” Nghiên cứu khoa học công nghệ đồng màng MAP-ent760 (theo kết đánh giá mục 3.1), dẫn đến khả kháng khuẩn màng PE-ent760 thử nghiệm thấp Trong đó, hai mẫu màng MAP PE đối chứng phủ hỗn hợp không chứa enterocin E-760 khả kháng khuẩn đĩa thạch Điều chứng tỏ, màng MAP-ent760 PE-ent760 thể hoạt tính kháng khuẩn chất kháng khuẩn enterocin E-760 gắn bề mặt màng Từ kết thấy rằng, enterocin E-760 sau gắn màng MAP giải phóng tiếp xúc bề mặt trực tiếp màng sau gắn enterocin E-760 có khả ức chế vi khuẩn Gram dương Gram âm điển hình L monocytogenes E coli môi trường thạch bán lỏng Bảng Phổ kháng khuẩn màng gắn enterocin E-760 Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Đối chứng Chủng thị L.monocytogenes ATCC® 35152™ E coli 8739™ ATCC® Thí nghiệm Màng MAP Màng PE Màng MAP-ent760 Màng PE-ent760 0 14 ± 9±1 0 11 ± 8±1 Hình Hoạt tính kháng khuẩn màng gắn enterocin E-760 L monocytogenes (a) E coli (b) 3.3 Đánh giá sơ hiệu ứng dụng màng MAP-ent760 bảo quản thực phẩm Kết đánh giá sơ hiệu bảo quản cho thấy, rau muống bảo quản màng MAP-ent760 sau 03 ngày điều kiện nhiệt độ phòng giữ màu sắc xanh tươi ban đầu, khối lượng lại sau 03 ngày bảo quản 98,4 ± 1% (bảng 2, hình 3) Các mẫu rau đối chứng bảo quản màng PE màng MAP không gắn enterocin E760 có dấu hiệu bị hư hỏng sau 03 ngày bảo quản Trong đó, mẫu rau bảo quản màng PE có dấu hiệu bị vàng úa sau 01 ngày bảo quản, sau 03 ngày mẫu có tượng hư hỏng mạnh hơn: rau bị thối hỏng rụng, vàng úa rõ rệt Mẫu rau bảo quản màng PE bị hao hụt khối lượng nhiều nhất, sau 03 ngày khối lượng rau lại 96,5± 1% Mẫu rau bảo quản màng MAP đối chứng bắt đầu xuất bị vàng úa phần sau 02 ngày bảo quản; sau 03 ngày bảo quản, rau bắt đầu bị thối hỏng khối lượng rau cịn lại 97,2± 1% Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 10 - 2020 327 Hóa học – Sinh học – Môi trường Bảng Đánh giá số tiêu cảm quan mẫu rau bảo quản Chỉ tiêu đánh giá mẫu rau sau bảo quản % Khối lượng lại sau Loại Ngoại quan sau thời gian bảo quản thời gian bảo quản màng sử dụng Ban Ngày Ngày Ngày Ban Ngày Ngày Ngày đầu đầu Lá bắt đầu Lá rau bị Xuất Màng PE thối hỏng, thối hỏng 98,5 97,9± 96,5 Xanh bị vàng thông vàng úa rụng, 100 tươi úa ±1 ±1 thường phần vàng úa rõ phần rệt Xuất Lá bắt đầu 98,9 98,3± 97,2 Màng Xanh bị vàng thối hỏng, Xanh tươi 100 MAP tươi úa vàng úa ±1 ±1 phần phần Màng 99,3 99,1± 98,4 Xanh Xanh tươi Xanh tươi Xanh tươi 100 MAPtươi ±1 ±1 ent760 Chúng tiếp tục đánh giá tiêu vi sinh vật tổng số môi trường LB agar mẫu rau sau 03 ngày bảo quản, kết cho thấy mẫu rau bảo quản màng MAPent760 không phát vi sinh vật tổng số, đó, mẫu rau bảo quản màng PE thơng thường màng MAP khơng gắn enterocin E-760 có lượng vi sinh vật tổng số ≥ 106 CFU/g Điều chứng tỏ rằng, màng MAP-ent760 có khả giải phóng enterocin E760 trình bảo quản để ức chế phát triển vi sinh vật a b c Hình Mẫu rau muống sau 03 ngày bảo quản điều kiện nhiệt độ phòng màng (a) PE thông thường; (b) MAP; (c) MAP-ent760 KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, hỗn hợp chất phủ màng chứa chất kháng khuẩn enterocin E760 chất hóa dẻo PEG-400 gắn lên màng bao gói khí biến đổi (MAP) Kết ảnh kính hiển vi điện tử quét (SEM) độ phóng đại 500 lần bề mặt màng MAP sau gắn enterocin mạng lưới polymer có phân tử phân bố tương đối đồng bề mặt Kết kiểm tra đánh giá khả kháng khuẩn màng MAPent760 đĩa thạch cho thấy màng có khả kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm điển hình L monocytogenes E coli Kết đánh giá sơ hiệu ứng 328 B T Hiếu, …, N K H Việt, “Đánh giá khả kháng khuẩn … gắn enterocin E-760.” Nghiên cứu khoa học công nghệ dụng màng MAP-ent760 bảo quản rau muống cho thấy sau thời gian bảo quản 03 ngày điều kiện nhiệt độ phòng, mẫu rau muống giữ độ tươi nguyên, màu sắc ban đầu Kết kiểm tra vi sinh vật tổng số đĩa thạch cho thấy mẫu sau bảo quản màng MAP-ent760 không phát khuẩn lạc đĩa thạch sau 24 nuôi cấy Từ kết đạt được, màng MAP-ent760 tiếp tục nghiên cứu, hoàn thiện nhằm chế tạo màng bảo quản gắn chất kháng khuẩn enterocin E-760 ứng dụng bảo quản thực phẩm tươi sống sử dụng cho lực lượng quân đội tuần tra dài ngày biển Lời cảm ơn: Chúng xin cảm ơn hỗ trợ kinh phí Đề tài cấp Viện KH-CN quân năm 2019: “Nghiên cứu sản xuất enterocin tái tổ hợp để bảo quản thực phẩm tươi sống cho đội Hải quân” TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] O A Odeyemi, O O Alegbeleye, M Strateva, D Stratev, “Understanding spoilage microbial community and spoilage mechanisms in foods of animal origin,” Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety (2020) [2] J.A Reis, A.T Paula, S.N Casarotti et al, “Lactic Acid Bacteria Antimicrobial Compounds: Characteristics and Applications,” Food Engineering Reviews, Rev (2012), pp.124-140 [3] J E Line, E A Svetoch, B V Eruslanov, V V Perelygin, E V Mitsevich, I P Mitsevich, V P Levchuk, O E Svetoch, B S Seal, G R Siragusa, and N J Stern “Isolation and Purification of Enterocin E-760 with Broad Antimicrobial Activity against Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria,” Antimicrobial agents and chemotherapy, Vol 52 (2008), pp 1094-1100 [4] S Arbulu, J.J Jiménez, L Gútiez, L M Cintas, C Herranz et al, “Cloning and expression of synthetic genes encoding the broad antimicrobial spectrum bacteriocins SRCAM 602, OR-7, E-760, and L-1077, by recombinant pichia pastoris,” BioMed Research International, (2015) [5] http://vast.ac.vn/ung-dung-va-trien-khai/ung-dung/937-nghien-cuu-che-tao-vat-lieudung-bao-quan-rau-qua-tuoi [6] M Imran, S El-Fahmy, A Revol-Junelles, S Desobry, “Cellulose derivative based active coatings: Effects of nisin and plasticizer on physico-chemical and antimicrobial properties of hydroxypropyl methylcellulose films,” Carbohydrate Polymers, Vol 81 (2010), pp 219-225 [7] H Neetoo, M Ye, H Chen, R Joerger, D Hicks, D Hoover, “Use of nisin-coated plastic films to control Listeria monocytogenes on vacuum-packaged cold-smoked salmon,” International journal of food microbiology, Vol 122 (2008), pp 8-15 [8] T T Thủy, H T M Tú, P T T Phương cộng sự, “Tác dụng kháng khuẩn màng polylactic acid - nisin,” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Số 51 (6) (2013), pp 729-735 [9] F Donsì, E Marchese, P Maresca, G Pataro, K D Vu, S Salmieri, M Lacroix, G Ferrari, “Green beans preservation by combination of a modified chitosan basedcoating containing nanoemulsion of mandarin essential oil with high pressure or pulsed light processing,” Postharvest Biology and Technology, Vol 106 (2015), pp 21-32 [10] R Severino, K D Vu, F Donsì, S Salmieri, G Ferrari, M Lacroix, “Antibacterial and physical effects of modified chitosan based-coating containing nanoemulsion of mandarin essential oil and three non-thermal treatments against Listeria innocua in green beans,” International journal of food microbiology, Vol 191 (2014), pp 82-88 Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số Đặc san Hội thảo Quốc gia FEE, 10 - 2020 329 Hóa học – Sinh học – Mơi trường ASTRACT EVALUATION OF ANTIMICROBIAL PROPERTIES OF MODIFIED ATMOSPHERE PACKAGING (MAP) COATED WITH ENTEROCIN E-760 Enterocin E-760 is a bacteriocin class II which consists of 62 amino acids has a broad inhibitory spectrum against both Gram-positive and Gram-negative Genecoding enterocin E-760 was artificially synthesized and successfully expressed in Pichia pastoris X-33 After being recovered by ethanol precipitation method at the concentration of 70 % ethanol, this bacteriocin was coated on modified atmosphere packaging (MAP-ent760) and PE film (PE-ent760) The results from scanning electron microscopy (SEM) showed that the distribution of the enterocin E-760 - polyethylene glycol 400 mixture on the MAP film was more effective than on the PE film The MAP-ent760 film also illustrated the ability to inhibit both Gram-positive (Listeria monocytogenes) and Gram-negative (Escherichia coli) bacteria strains by using the agar diffusion assay In conclusion, the broad antimicrobial spectrum enterocin E-760 was successfully coated on MAP which is potential for applying in food preservation Keywords: Bacteriocin; Biological antimicrobial; Enterocin E-760; MAP Nhận ngày 30 tháng năm 2020 Hoàn thiện ngày 05 tháng 10 năm 2020 Chấp nhận đăng ngày 05 tháng 10 năm 2020 Địa chỉ: 1Viện Công nghệ mới/Viện Khoa học Công nghệ quân sự; Viện Hóa học/Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam * Email: hoangviet1015@gmail.com 330 B T Hiếu, …, N K H Việt, “Đánh giá khả kháng khuẩn … gắn enterocin E-760.” ... chứng màng MAP không gắn enterocin E-760 để đánh giá phân bố enterocin E-760 màng [8] 2.3.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn màng gắn enterocin E-760 Hoạt tính kháng khuẩn màng gắn enterocin. .. Hiếu, …, N K H Việt, ? ?Đánh giá khả kháng khuẩn … gắn enterocin E-760. ” Nghiên cứu khoa học công nghệ đồng màng MAP-ent760 (theo kết đánh giá mục 3.1), dẫn đến khả kháng khuẩn màng PE-ent760 thử... phủ màng chứa chất kháng khuẩn enterocin E760 chất hóa dẻo PEG-400 gắn lên màng bao gói khí biến đổi (MAP) Kết ảnh kính hiển vi điện tử quét (SEM) độ phóng đại 500 lần bề mặt màng MAP sau gắn enterocin