Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết ethylacetat của lá cây khôi đốm (sanchezia nobilis hook f)

LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi- Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu- Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, ThS Bùi Thị Xuân, Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp Đại học Quốc gia Hà Nội, mã số: QG.18.20 hỗ trợ kinh phí tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược cổ truyền Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em q trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, bạn bè, người thân gia đình ln dạy dỗ, trang bị kiến thức tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ, động viên em suốt năm theo học trường Cuối cùng, em xin kính chúc thầy ln mạnh khỏe, hạnh phúc thành công công việc sống! Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2018 Sinh viên Vũ Thị Mây DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 DANH MỤC HÌNH STT 10 DANH MỤC BẢNG STT MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I: TỒNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia .2 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Sanchezia .2 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2.2 Đặc điểm sinh thái 1.2 Tổng quan lồi Khơi đốm 1.2.1 Đặc điểm lồi Khơi đốm 1.2.2 Đặc điểm vi học Khôi đốm 1.2.2.1 Thân 1.2.2.2 Lá 1.2.3 Đặc điểm vi học bột dược liệu 1.2.3.1 Bột thân 1.2.3.2 Bột 1.2.4 Phân bố .8 1.2.5 Thành phần hóa học Khơi đốm 1.2.6 Tác dụng dược lý 11 1.2.6.1 Tác dụng gây độc tế bào ung thư .11 1.2.6.2 Tác dụng chống oxy hóa chống viêm 12 1.2.6.3 Tác dụng kháng khuẩn .12 1.2.6.4 Tác dụng kháng nấm 13 1.2.6.5 Tác dụng diệt côn trùng .13 1.2.7 Tác dụng công dụng theo Y học cổ truyền 13 CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nguyên vật liệu nghiên cứu 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .15 2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 15 2.1.2.1 Hóa chất dung mơi 15 2.1.2.2 Trang thiết bị 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 16 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 16 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 17 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chấ t 20 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 23 3.2.1 Hợp chất X1 .23 3.2.2 Hợp chất X2 25 3.2.3 Hợp chất X3 27 3.3 Bàn luận 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .31 TÀI LIỆU THAM KH ẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với phát triển khoa học kĩ thuật, nhiều dược phẩm tạo với đa dạng dược chất dạng bào chế Tuy nhiên, việc sử dụng chất hóa học để điều trị bệnh gây nhiều tác dụng phụ nên người dân Việt Nam ngày có xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc từ dược liệu Việt Nam có vị trí địa lí thuận lợi, thảm thực vật phong phú, nguồn dược liệu dồi đặc biệt có y học cổ truyền từ lâu đời Do vậy, việc nghiên cứu phát triển thuốc chất có nguồn gốc từ dược liệu xu hướng quan tâm Các thuốc dân gian, thuốc đặ c biệt rau quen thuộc sử dụng việc phòng điều trị b ệnh tật ngày nhà nghiên cứu khoa học quan tâm Cây Khơi đốm có tên khoa học Sanchezia nobilis [29], họ Ơ rơ Acanthaceae [29] Trên giới, Khơi đốm nghiên cứu có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm gây độc tế bào invitro [22] Việt Nam dân gian ta sử dụng để chữa bệnh viêm dày, với cách chữa đơn giản cần lấy vài tươi rửa ăn với chút muối cắt đau lập tức, hay dùng khô hãm với nước sôi uống hàng ngày, sau thời gian bệnh khỏi [8] Tuy nhiên, mớ i kinh nghiệm dân gian, thực tế nghiên cứu thành ph ầ n hóa học dược liệu Khơi đốm cơng dụng chưa phổ biến Việc nghiên cứu chi tiết lồi góp phần cung cấp sở tiền đề cho việc sử dụng, bảo tồn, phát triển lồi Khơi đốm Việt Nam đóng góp phần vào kho tàng tri thức thuốc lí giải kinh nghiệm dân gian Vì v ậ y triển khai đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết ethylacetat Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook.f) ‟‟ với mục tiêu: Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ Khôi Đốm Xác định cấu trúc hợp chất CHƢƠNG I: TỒNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại Theo “Hệ thống phân loại ngành Ngọc lan (Magnoliophyta )” [5, 29] tác giả A.Takhtajan, chi Sanchezia có vị trí phân loại sau: Giới Thực vật: Plantae Ngành Ngọc lan: Magnolipphyta Lớp Cỏ tháp bút: Equisetopsida C Agardh Phân lớp Mộc lan: Magnoliidae Novák ex Takht Bộ Hoa mơi: Lamiales Họ Ơ rơ: Acanthaceae Chi: Sanchezia 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Sanchezia 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật Cây bụi hay cỏ xanh nửa mùa Rễ khơng có lông Thân trơn màu xanh tươi sáng với màu tím Lá dài, lớn đến 26cm, màu xanh đậm có vân trắng kem vàng, hình mác Hoa mọc đơn độc hợp lại thành chùm, hình ống có màu vàng, cam, đỏ, tím mọc ngọn, bắc có màu đỏ dài khoảng 5cm, đài thùy, tràng 5, dính thành hình ống, nhị 4, nhị lép nhị thị ra, bao phấn Qủ a nang, 6-8 hạt, hạt hình cầu [9,17] 1.1.2.2 Đặc điểm sinh thái Môi trường sống tự nhiên: Trên cạn (rừng mưa nguyên sinh, rừng nhiệt đới thứ sinh) [35] Khí hậu ưu tiên: nhiệt đới Phân bố: Trung tâm đa dạng lồi có nguồn gốc Peru Ecuador [34] Phân bố chủ yếu phía Tây Nam Mỹ, số lồi phân bố vùng phía Bắc Đơng Bắc Bắc Mỹ, Trung Mỹ vùng biển Caribean số đảo Thái Bình Dương [11, 30] Chi Sanchezia mơ tả lần đầu Ruiz Pavon với loài thuộc chi vào đầu kỉ 18 Đến 1964, Leonard Smith đưa kết luận có 59 lồi cơng bố khóa phân loại cho lồi Năm 2015, Tripp Koenemann thống kê lại lập danh mục 55 loài thuộc chi Các nhà khoa học xác định tên 75 loài thuộc chi 54 tên khoa học chấp nhận, tên xác định tên đồng nghĩa 12 tên lại chưa xác định dựa dự án The Plant list gồm loài như: Sanchezia lambra, Sanchezia speciosa, Sanchezia nobilis, Sanchezia oblonga, Sanchezia ovata, Sanchezia parviflora, Sanchezia peruviana, Sanchezia putumayensis, …[30] Tại Việt Nam, chi có lồi có tên khoa học Sanchezia speciosa hay Sanchezia nobilis, gọi Xăng sê, Ngũ sắc hay Khối đốm Phân bố chủ yếu miền núi Tây Giang - Quảng Nam, Hòa Vang- tỉnh Đà Nẵng, miền núi Chiêm Hóa, Na Hang- Tuyên Quang), tỉnh Nam Định [5, 7] 1.2 Tổng quan loài Khôi đốm Tên khoa học: Sanchezia nobilis Hook F.hay Sanchezia speciosa Leonard Tên Việt Nam: Khôi đốm, Xăng sê, Ngũ sắc [5] 1.2.1 Đặc điểm lồi Khơi đốm Cây bụi lớn, xanh nửa mùa, mọc lên cao khoảng 3m với thân màu xanh gân màu trắng không lông [9] Lá đơn giản, đối diện, lưỡi hình elip, có phiến thon, to, màu lục, đỏ vàng, gân trắng, đầu nhọn, bìa nguyên hay có tà, cuống ngắn, đơn mọc đối hình chữ thập, dài 10-25 cm, rộng 3-7 cm, nhẵn, mép lượn sóng, mặt có màu xanh đậm, mặt màu xanh nhạt; hệ gân lơng chim, có 9-12 đôi gân bê Hoa liên tục quanh năm, bọc cụm cành dựng đứng, đáy Phát hoa chót nhánh, mọc thành cụm hoa ,bông gồm nhỏ trở lên, cuống ngắn; bắc màu lục hay đỏ, vành hình ống trịn, láng vàng sáp, đỉnh tù, nhẵn, ôm lấy cụm hoa, cao 4-5cm, tai đều, tiểu nhị thò dài, thụ 2, nép 2, nang hột Hoa lưỡng tính, mùi hoa nhạt đặc trưng [9, 14, 27] Đài nhiều, hình vảy, dài 1,5-1,8cm, rộng 3-5 mm, tròn đỉnh [26] Tràng cánh hoa hợp nhất, hình ống trịn, màu vàng có sáp, dài 4,5 5,5 cm, rộng 7-8 cm phía với thành thùy tròn, thu hẹp dần xuống đến mm, nhẵn, thùy dài 3-4 mm, trịn, có khía; nhị dài, nhị có nhị phát triển dài 4-4,5 cm, có lơng nhị tiêu giảm [9, 27] Quả nang có nơ hình trụ, có hạt [9] 1.2.2 Đặc điểm vi học Khôi đốm 1.2.2.1 Thân Thân non vi phẫu hình trịn Cấu tạo từ vào gồm: lớp biểu bì cấu tạo hàng tế bào, có lông che chở đơn bào; mô dày gồm 6-8 hàng tế bào xếp thành hình trịn khép kín; mơ mềm gồm 5-7 lớp tế bào, bên có chứa tinh thể calcioxalat hình kim hạt tinh bột đơn; libe gần hình trịn khép kín, libe ngoài, gỗ trong, bị gián đoạn số tế bào mô mềm; mô mềm ruột cấu tạo nhiều lớp tế bào, tế bào thành mỏng, to, hình đa giác xếp lộn với [1,12] Thân già vi phẫu hình vng Cấu tạo tương tự thân non, ngoại trừ có thêm lớp bần bên ngồi Dược liệu Chiết ethanol (8,0 lít x lần) Dịch chiết ethanol Thu hồi n-hexan Dịch chiết nướ c acetat(28,8 g) Cô cạn Cắn nƣớc (26,6 g) Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn Khơi đốm Tiến hành phân tích cắn EtOAc (25,0 g) cột sắc ký silica gel với hệ dung mơi có độ phân cực tăng dần bao gồm n-hexan- EtOAc (5:1→1:1, v/v, phân đoạn 600 mL) tiếp sau CHCl3- MeOH (10:1→ 1:1, v/v, phân đoạn 500mL) thu phân đoạn ký hiệu E1~E6 21 Từ phân đoạn E1 (8,1g), chạy sắc ký cột silicagel (Φ45 mm × 350 mm) với hệ pha động EtOAc - MeOH (5:1, v/v, 2,5L) thu phân đoạn nhỏ E1.1~ E1.6 Phân đoạn E1.1 (0,9 g) tiếp tục tiến hành sắc ký cột silicagel pha thường với hệ dung môi rửa n-hexan:etylacetat 4/1, thu chất X1 (21 mg) Từ phân đoạn E1.2 (1,1 g) tiến hành sắc ký cột silica gel với hệ dung môi n-hexan/ethyl acetat (8/1, v/v) thu hợp chất X2 (15mg) Phân đoạn E1.3 (1,2 g) chạy sắc ký cột silica gel với hệ dung môi n-hexan:CH2Cl2 (2:1, v/v) thu hợp chất X3 (16 mg) Cắn ethyl acetat Silica gel pha thuận n hexan: EtOAc CHCl3: MeOH hexan- EtOAc n-hexanEtOAc (5:1→1:1), E1 E5,E6 Pha thường EtOAc: MeOH E1.1 nhexan :EtOAc (4:1) X1 (21) mg Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 22 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 3.2.1 Hợp chất X1 Tính chất: kết tinh hình phiến, khơng màu [α]D25 = - 187,0 (c=0,15; CHCl3) Nhiệt độ nóng chảy Mp =238-239oC Rf = 0,51 (TLC silica gel, n-hexan/ EtOAc, 7:3, v/v) ESI-MS cho pic ion phân tử proton hóa m/z 277 [M+H]+ ứng với cơng thức phân tử (C16H20O4), M= 276 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất X1 Phổ 1H-NMR (CDCl3,500MHz), 13C-NMR (CDCl3,125MHz) chất X1 trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR DEPT hợp chất X1 chất tham khảo Vị trí C 10 11 12 13 14 15 16- OMe OH-9 Ghi (CDCl3,125MHz) chất tham khảo [15] Đơn vị : δH δ C ppm; J số tương tác spin- spin proton có đơn vị Hz Biện luận cơng thức cấu tạo: Chất X1 kết tinh hình phiến, khơng màu, nhiệt độ nóng chảy: 238-239 C, Rf=0,5 (n-hexan/ethyl acetat: 7/3, v/v); Phổ ESI-MS cho pic ion phân tử o proton hóa m/z=277 [M+H]+ , tương ứng với khối lượng phân tử 276 Các liệu phổ khối phổ 13C-NMR cho biết chất X1 có cơng thức phân tử C16H20O4 (DBE=7) Phân tích liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT X1 cho thấy chất X1 có khung tương đồng với chất Chloranthalacton B bao gồm nhóm α, β-ethylen-γ-lacton ở δ C 156,3; 128,0 171,0 ppm Một vòng cyclopropan gồm nhóm methylen cho tín hiệu δH 0,67 (1H, dt, J = 3,9; 24 ch 5,3 Hz), 0,82 (1H, dt, J = 5,3, 8,7 Hz); δC 15,7 (C-2) nhóm methin δ H 2,11 (1H, br, dt, J = 3,9; 8,7 Hz ); δC 22,8 (C-1) δH 1,96 (1H, m); δC 23,6 (C-3) Tín hiệu nhóm >C=CH2 quan sát thấy phổ 1HNMR, 3C-NMR δC 152,2; 106,0 δH 4,70 (1H, br, t); 5,01 (1H, m, OH) Tuy nhiên có điểm khác biệt thay nhóm oxiran Chloranthalacton B X1 xuất nhóm -CH-OH nhóm methoxy thể phổ 13 C-NMR 1H- NMR δC 79,6 (C-9), δH 3,83 (1H, d, J =7,4 Hz, H-9), 3,41 (1H, d, J = 7,4 Hz, OH) δC 50,3 (OCH3) δH 3,22 (3H, s, OCH3) Phân tích liệu phổ 1H- NMR, 13C-NMR phổ 2D-NMR chất X1 kết hợp so sánh liệu phổ tài liệu [15], khẳng định chất X1 9-hydroxyheterogorgiolid 3.2.2 Hợp chất X2 Tinh thể màu vàng, tan cloroform Nhiệt độ nóng chảy tnc = 178-180oC Phổ khối lượng HR-ESI-MS (+) m/z: 252,08 [M+H]+, ứng với CTPT C15H10N2O2, M= 251 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất X2 25 Phổ 1H-NMR (CDCl3,500MHz), 13C-NMR (CDCl3,125MHz) chất X2 trình bày bảng 3.2 Vị trí C 10 11 12 13 14 15 16 17 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR DEPT hợp chất X2 chất tham khảo Q [16, 28] Biện luận công thức cấu tạo: Hợp chất X2 dạng tinh thể màu vàng, tan cloroform, nhiệt độ nóng chảy 178-180 0C cho phản ứng với thuốc thử Dragendorff Trên phổ HR-ESI- MS X2 xuất peak ion giả phân tử m/z 252,08 [M+H]+ 26 ứng với khối lượng phân tử 251 kết hợp với phổ khẳng định công thức phân tử X2 C15H10N2O2 13 C-NMR cho phép Phổ H-NMR X2 cho tín hiệu doublet đặc trưng proton H-4 δ 7,98 H-5 δ 6,93 với số tương tác J = 9,5 Hz; cặp proton vicinal H-1 δ 7,80 H-2 δ 8,74 với J = 5,0 Hz Ngồi ra, cịn xuất tín hiệu nhân thơm ABX với ba proton δ 8,16 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,04 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-10), 7,90 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-11) Sự diện nhóm methoxy δ 56,0 (C-17) 3,98 (3H, s, H-17) Nhóm gắn với C-9 dựa vào tương tác H-17/C-9 phổ HMBC Kết hợp liệu phổ X2 đồng thời so sánh với tư liệu [16, 28], khẳng định X2 9-methoxycanthin-6-on, alkaloid δ 3.2.3 Hợp chất X3 Chất bột màu trắng, vơ định hình [α]D25 = -80,5(c=0,1, MeOH) Phổ ESI-MS: m/z 263,2 [M+H]+ Công thức phân tử: C16H22O3 M= 262 Hình 3.5 Cấu trúc hợp chất X3 Phổ H-NMR (CDCl3,500MHz), Phổ 13 C-NMR (CDCl3,125MHz) chất X3 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ(ppm): 169,7(C-2); 117,2(C-3); 27 173,0(C-3a); 38,7(C-4); 47,7(C-4a); 18,4(C-5); 30,9(C-6); 134,2(C-7); 123,5(C-8); 30,1(C-8a); 40,2(C-9); 107,5(C-9a); 25,7(C-10); 25,2(C-11); 23,1(C-12); 50,3(9a-OMe) Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ(ppm): 5,81(1H, s, H-3); 1,68(1H, m, H-4a); 1,16 (1H, m, H-5α)/1,68 (1H, m, H=5β); 1,97(1H, m, H-6); 5,36(1H, d, J=5.0Hz, H-8); 2,77(1H, m, H-8a); 1,52 (1H, dd, J=13.5, 13.5Hz, H-9α)/2,34 (1H, dd, J=3.5, 13.5Hz, H-9β); 1,37(1H, s, H-10); 1,24(1H, s, H-11); 1,62(1H, s, H-12); 3,17(1H, s, OMe) Hợp chất X3 thu dạng bột vơ định hình màu trắng Phổ khối lượng ESI-MS X3 xuất pic ion giả phân tử m/z 263,2 [M+H]+, phù hợp với công thức phân tử C16H22O3, (M = 262) Phổ 1H-NMR thấy xuất tín hiệu c proton olefin δ H 5,36 (d, J=5,0 Hz) 5,81 (s); methoxy δH 3,17 (s); methyl δH 1,24 (s), 1,37 (s) 1,62 (s) nhóm carbonyl δ C 169,5; carbon bậc δ C 38,7, 107,5, 134,2 173,0; methin δC 30,1, 47,7, 117,2 123,5; methylen δC 18,4, 30,9 40,2; methyl δC 23,1; 25,2; 25,7 50,3 Từ liệu phổ 1D-NMR X3 dẫn đến gợi ý cấu trúc X3 tương tự hợp chất O-methyl furodysinin lacton [13] Phân tích tương tác phổ HSQC cho phép ta gán tín hiệu proton liên kết trực tiếp với carbon Phổ HMBC, thấy xuất hi ện tương tác H-10 (δ H 1,37)/H-11 (δH 1,24) với C-3a (δC 173,0)/C-4 (δC 38,7)/C-4a (δC 47,7), H-3 (δH 5,81) C-2 (δC 169,5)/C-3a (δC 173,0)/C-9a (δC 107,5) xác định vị trí nhóm methyl gắn trực tiếp vào C-4, vị trí nối đơi C-3/C-3a Tương tác HMBC nhóm methoxy δ H 3,17 C-9a (δC 107,5) xác định vị trí methoxy C-9a Tương tác HMBC H-12 (δH 1,62) với C-6 (δC 30,9)/C-7(δC134,2)/C-8 (δC 123,5) , H-8 (δH 5,36) với C-4a (δC 47,7)/C-8a (δC 30,1) xác định vị trí nối đôi C7/C-8 Dựa vào liệu phổ 1D, 2D-NMR X3 so sánh với số liệu hợp chất O-methyl furodysinin lacton [13] thấy trùng khớp Từ liệu phổ, cấu trúc X3 xác định O-methyl furodysinin lacton 28 Bàn luận Việc chiết xuất phân lập: Phương pháp chiết xuất EtOH phân lập chất bằ ng sắc ký cột tham khảo từ nghiên cứu trước Đề tài chiết xuất cao tồn phần từ Khơi đốm phương pháp ngâm nhiệt độ phòng với dung mơi cồn 80% Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị đơn giản, rẻ tiền thu khối lượng cắn toàn phần đạt 6% so với lượng dược liệu ban đầu Cắn toàn phần sau chiết lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần nhexan, ethyl acetat chạy qua cột sắc ký Diaion, thu cắn phân đoạn với khối lượng đạt 0,368% ; 1,152% ; 1,064% so với nguyên liệu khô ban đầu Kết phân lập thành ph ần từ phần lá Khôi đốm thu tỉnh Nam Định Cấu trúc hợp chất xác định thơng qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan Ba hợp chất xác định 9-methoxycanthin-6-on (X1), 9-hydroxyheterogorgiolid (X2), O-methyl furodysinin lacton (X3) Các hợp chất tách nghiên cứu từ khác, hợp chất (1) có tác dụng kháng viêm Hợp chất (X2), ( X3) gây độc tế bào ung thư [15, 16, 28].Tuy nhiên lần hợp chất phân lập từ Khôi đốm Việc chiết xu ất tạo sở cho việc nghiên cứu sâu tác dụng dược lí 9-methoxycanthin-6-on (X1), 9-hydroxyheterogorgiolid (X2), Omethyl furodysinin lacton (X3) Tuy nhiên, trình phân lập chưa phát thêm thành phần điển hình khác nhắc đến nghiên cứu trước hợp chất : flavononid, alkaloid, Điều lý giải thời điểm thu hái không phù hợp, điều kiện môi trường sống nhiều khắc nghiệt, hay trình di thực nên làm cho hàm lượng hợp chất mẫu Khôi đốm nghiên cứu chiếm tỉ lệ thấp; hệ dung mơi lựa chọn khơng phải thích hợp để phân lập hợp chất 29 Các nghiên cứu đề tài bước đầu, tạo sở cho việc nghiên cứu sâu Khôi đốm; bổ sung tư liệu cho việc sử dụng làm thuốc dân gian, phục vụ cho lĩnh vực kiểm nghiệm dược liệu sau 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài khóa luận thu số kết sau : Chiết xuất, phân lập: Đã sử dụng phương pháp chiết ngâm với dung môi EtOH 80% phương pháp sắc ký cột để chiết xuất phân lập hợp chất từ Khôi đốm + Xác định cấu trúc hợp chất phân lập được: Thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, góc quay cực riêng, phổ tử ngoại- khả kiến, phổ khối, phổ cộng hưởng hạt nhân, xác định c ấu trúc hợp chất 9methoxycanthin-6-on (X1), 9-hydroxyheterogorgiolid (X2), O-methyl furodysinin lacton (X3) Đây lần hợp chất phân lập từ Khôi đốm + Kiến nghị Tiếp tục triển khai phân lập hợp chất khác từ loài Sanchezia nobilis Hook.f + Dựa kết nghiên cứu thành phần hóa học, cần nghiên cứu tác dụng sinh học loài tác dụng chống viêm giảm đau, chống loét dày tác d ụng sinh học khác + 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ môn Dược liệu Đại học Dược Hà Nội (2009), Thực tập dược liệu, pp 54-69 Bộ Y tế (2008), Y học cổ truyền, Nxb Y học, Hà Nội, pp 198 Bộ Y tế (2011), Dược liệu học I, Nxb Y học, Hà Nội, pp 255-256 Bộ Y tế, Vụ khoa học đào tạo (2006), Dược học cổ truyền, Nxb Y học, Hà Nội, pp 231-232 Nguyễn Tiến Bân, V P Serov (2005), Danh mục loài thực vật Việt Nam, tập III, Hà Nội, Nhà xuất Nông nghiệp, tr.272-273 Nguyễn Thị Mai (2017), “ Nghiên cứu thành phần hóa học Xăng sê”, khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Khoa Y Dược, ĐHQGHN Phan Văn Chiêu (2011), Đông nam dược nghiệm phương, Nhà xuất Thuận Hóa, tr.856 Nguyễn Trung Hịa (2012), Đơng y tồn tập, Nhà xuất Thuận Hóa, tr.1234-1235 Phạm Hồng Hộ (2000), ây cỏ Việt Nam, Nhà xuất Trẻ, 3, tr 39 Tài liệu Tiếng Anh 10 Abd-Ellah A., Mohamed K., Backheet E., et al (2014), "Cinnamyl Alcohol, Benzyl Alcohol, and Flavonoid Glycosides from Sanchezia nobilis", Chemistry of Natural Compounds, 50(5), pp.715-717 11 Adams C (1972), Flowering plants of Jamaica, Mona, Jamaica: University of the West Indies, pp 785-788 Ahmed E Abd-Ellah, Khaled M Mohamed, Enaam Y Backheet and 12 Mahmoud H Mohamed (2006), „„Macro-and micromorphology of Sanchezia nobilis Hook cultivated in Egypt: leaf, stem and flower‟‟, Bull Pharm Sci., Assiut University, Vol 29, Part 2, pp 300-327 13 Andrew M Piggott and Peter Karuso (2005), “ 9-Hydroxyfurodysinin-O-ethyl Lactone: A New SesquiterpeneIsolated from the Tropical Marine Sponge 14 ”, Dysidea arenaria,Molecules, 10, pp.1295-1297 Ellah A E A., Mohamed K M., Backheet E Y., et al (2013), " Matsutake alcohol glycosides from Sanchezia nobilis ", Chemistry of Natural Compounds, 48(6), pp 930-933 15 Kevin Hung, Xirui Hu and Thomas J Maimone (2005), “ Total synthesis of complex terpenoids employing radical cascade processes”, Nat Prod Rep., 22, 465 16 Kensuke Ohishi, Kazufumi Toume, Midori A Arai, Takashi Koyano, Thaworn Kowithayakorn, Takamasa Mizoguchi, Motoyuki Itoh, and Massami Ishibashi (2015),“9-Hydroxycanthin-6-one,a β-Carboline Alkaloid from Eurycoma longifolia, Is the First Wnt Signal Inhibitor through Activation of Glycogen Synthase Kinase 3β without Depending on Casein Kinase 1α” J Nat Prod., 78 (5), pp 1139–1146 17 Leonard E C and Smith L B (1964), "Sanchezia and related American Acanthaceae", Rhodora, 66(768), pp 313-343 18 Lee E H., Song D.-G., Lee J Y., et al (2009), "Flavonoids from the leaves of Thuja orientalis inhibit the aldose reductase and the formation of advanced glycation endproducts", Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry, 52(5), pp 448-455 19 Loi Vu Duc, Tung Bui Thanh, Ha Vu Hoang and Tuyen Nguyen Manh (2016),“Phytochemical and anti-inflammatory effect from the leaf of Sanchezia speciosa Leonard growing in Vietnam”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 8(7), pp 309-315 20 Ming-Xin Ren, Xiao-Hui ,Deng Fang Ai ,Guo-Yan Yuan, Hai-Yan Song (2015) “Effect of quercetin on the proliferation of the human ovarian cancer cell line SKOV-3 in vitro”, Experimental and therapeutic medicine, 10(2), pp.579-583 21 Nusrat Shaheeen, Muhammaduzair, Bashir Ahmad Ch and Alamgeer (2017), “ Invitro Cytotoxicity Of Sanchezia Speciosa Extracts On Human Epithelial Cervical Cancer(Hela) Cell Line”, Acta Poloniae Pharmaceutica Drug Research, Vol 74 No 5, pp1389-1394 22 Paydar M., Wong Y L., Moharam B A., et al (2013), "In vitro anti-oxidant and anti-cancer activity of methanolic extract from Sanchezia speciosa leaves", Pakistan Journal of Biological Sciences, 16(20), p 1212-1215 23 Parvin S., Rafshanjani M A S., Kader M A., et al (2015), "Preliminary phytochemical screening and cytotoxic potentials from leaves of Sanchezia speciosa Hook f", International Journal of Advances in Scientific Research, 1(3), pp 145-150 24 Pereira C., Júnior B., Bomfim C., et al (2012), "Flavonoids and a neolignan glucoside from Guarea macrophylla (Meliaceae)", Química Nova, 35(6), pp 1123-1126 25 Rafshanjani M., Parvin S., Kader M., et al (2014), "In vitro antibacterial, antifungal and insecticidal activities of ethanolic extract and its fractionates of Sanchezia speciosa Hook f", Int Res J Pharm2014, 5(9), ap 26 717-720 Sciences W A o and Sciences W A o (1922), Journal of the Washington Academy of Sciences, Washington Academy of Sciences, 86(3), pp 6-3169 27 Sciences W A o and Sciences W A o (1926), Journal of the Washington Academy of Sciences, Washington Academy of Sciences, 86(3), pp 9-2258 28 Sofa Fajriah, Muhammad Hanafl, Atiek Sumiati, and Ngadiman (2010), “isolation and identification of 9-methoxycanthin-6-on from Eurycoma longifolia roots”, Fitoterapia, 81(7), pp.669-679 29 Takhtadzhian A L (1997), Diversity and classification of flowering plants , Columbia University Press, New York, USA, pp 355-356 30 Tripp E A and Koenemann D M (2015), "Nomenclatural Synopsis of Sanchezia (Acanthaceae), Fifty Years Since Last Treated", Novon, 24(2), ap 31 213-221 Tung Bui Thanh, Loi Vu Duc, Hai Nguyen Thanh , Vung Nguyen Tien (2016) “In vitro antioxidant and anti-inflammatory activities of isolated compounds of ethanol extract from Sanchezia speciosa Leonard‟s leaves”, J basic clin physiol pharmacol, 28(1), pp 79-84 Website 32 https://dongybonphuong.com/ly-cay-xang-se-chua-dau-da-day/ 33 http://www.stuartxchange.org/Sanchezia 34 http://thaoduocmaxgreen.net/bai-thuoc-hay/cay-xang-se-chua-dau-daday.html 35 https://www.gardenguides.com/101997-wintergreen-plantinformation.html ... góp phần vào kho tàng tri thức thuốc lí giải kinh nghiệm dân gian Vì v ậ y triển khai đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết ethylacetat Khôi đốm (Sanchezia nobilis Hook. f). .. hợp chất phân lập từ Khôi đốm + Kiến nghị Tiếp tục triển khai phân lập hợp chất khác từ loài Sanchezia nobilis Hook. f + Dựa kết nghiên cứu thành phần hóa học, cần nghiên cứu tác dụng sinh học loài... Chiêm Hóa tỉnh Tuyên Quang [5] 1.2.5 Thành phần hóa học Khơi đốm Một số nghiên cứu hóa thực vật cho thấy Khôi đốm chứa hàm lượng flavonoid hợp chất glycosid cao Năm 2016, theo nghiên cứu chiết