Hiện nay các hoóc môn sinh trưởng thực vật ngày càng được ứng dụng rộng rãi trong việc tăng sinh khối cây trồng góp phần mang lại hiệu quả kinh tế cao. Bổ sung GA3 vào môi trường nuôi cấy là một trong những hướng nhằm tăng sinh khối tảo Silic, từ đó chủ động tạo nguồn thức ăn phong phú cho nuôi trồng thủy hải sản.
Năm học 2009 – 2010 BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA GIBERELIN (GA3) ĐẾN SINH TRƯỞNG CỦA THALASSIOSIRA SP Lê Thị Bích Trầm (SV năm 3, Khoa Sinh học) GVHD: TS Lê Thị Trung Mở đầu Thực vật phù du, đặc biệt tảo Silic nguồn thức ăn quan trọng cho ấu trùng nhiều loại thủy hải sản Ngoài việc cung cấp hàm lượng lớn chất dinh dưỡng lipid, vitamin, cacbohydrat, protein,… tảo Silic cung cấp silic, canxi cacbonat… hợp chất có vai trị cấu trúc xương tế bào Hiện hc mơn sinh trưởng thực vật ngày ứng dụng rộng rãi việc tăng sinh khối trồng góp phần mang lại hiệu kinh tế cao Bổ sung GA3 vào môi trường nuôi cấy hướng nhằm tăng sinh khối tảo Silic, từ chủ động tạo nguồn thức ăn phong phú cho ni trồng thủy hải sản Mục đích nghiên cứu: Tìm hiểu ảnh hưởng GA3 lên sinh trưởng Thalassiosira sp môi trường nước biển nhân tạo f/2 Vật liệu – phương pháp 2.1 Vật liệu Loài Thalassiossira sp Nguyễn Tấn Đại phân lập từ nước biển thuộc bãi biển Đồng Hòa, xã Long Hòa, huyện Cần Giờ, TP Hồ Chí Minh Thalassiosira sp thuộc lớp tảo trung tâm (Centriophyceae) 2.2 Phương pháp 2.2.1 Môi trường nuôi cấy Tảo nuôi môi trường f/2 (Guillard, 1975) Đây môi trường nước biển tự nhiên có bổ sung số khống đa lượng (NaNO3, NaH2PO4.H2O, Na2SiO3.9H2O), loại khoáng vi lượng loại vitamin cần thiết Môi trường sử dụng phổ biến để ni lồi tảo Silic nước mặn sống ven bờ 2.2.2 Cấy chuyền Mẫu cấy chuyền tảo pha tăng trưởng mạnh Thể tích cấy chuyền khoảng % tổng thể tích mơi trường: 2ml tảo bổ sung vào môi trường nuôi cấy (60 ml) thực điều kiện vô trùng 296 Kỷ yếu Hội nghị sinh viên NCKH Điều kiện nuôi cấy: ánh sáng 3000 ± 500 lux, chu kì sáng/tối 12/12, pH88,3, nhiệt độ 25oC ± 2oC 2.2.3 Xác định hệ số pha loãng Xác định hệ số pha loãng mẫu gốc trước cấy chuyền để có mật độ xuất phát nghiệm thức bình ni [5] Hệ số pha lỗng xác định theo công thức: Với n: số lượt đếm mẫu gốc N: tổng số tế bào đếm n lượt đếm V: thể tích vùng đếm (ml) 2.2.4 Đếm số lượng tế bào Mỗi ngày lắc trích lấy bình thí nghiệm 1ml, cố định dung dịch Lugol Không bổ sung thêm môi trường (nuôi cấy không liên tục) Đếm mật độ tế bào buồng đếm hồng cầu, dung tích buồng đếm 1x10 -4ml Tổng số tế bào đếm (n) tất lần đếm (i) mẫu dùng để tính mật độ tế bào (D) mẫu đó, theo cơng thức: x 104 (tế bào/ml) [6] 2.2.5 Quan sát hình thái Mẫu theo dõi hình dạng ngày kính hiển vi quang học (X40) 2.2.6 Xác định đường cong sinh trưởng tốc độ sinh trưởng Đường cong sinh truởng xác định dựa mật độ tế bào ngày Mật độ tế bào hai thời điểm khác trình sinh trưởng mẫu dùng để tính tốc độ sinh trưởng khoảng thời gian 2.3 Ảnh hưởng GA3 lên sinh trưởng Thalassiosira sp Sau ni thích nghi Thalassiosira sp mơi trường f/2 hai đợt, chọn lúc tảo sinh trưởng mạnh, tiến hành bổ sung GA3 nồng độ 10-8 10-9 g/ml vào môi trường nuôi cấy Tất nghiệm thức lặp lại lần Số liệu đuợc xử lí phần mềm SPSS 11.5, Microsoft excel Các thí nghiệm tiến hành từ 05-01-1010 đến 07-04-2010 phịng thí nghiệm Sinh lí thực trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh 297 Năm học 2009 – 2010 Kết - thảo luận 3.1 Sự sinh trưởng Thalassiosira sp môi trường f/2 Thalassiosira sp phát triển qua pha Từ ngày đến ngày 4, số lượng tế bào không tăng mạnh Đây giai đoạn tảo thích nghi với mơi trường Bên cạnh có tế bào khơng thích nghi nên vỡ giải phóng chất vào mơi trường Từ ngày đến ngày 9, số lượng tế bào tăng mạnh đạt cực đại vào ngày với mật độ trung bình 6,14 x 105 tế bào/ml, sau số lượng tế bào ổn định Sang ngày 10 số lượng tế bào bắt đầu giảm mạnh (bảng 1, hình 1) Bảng 1: Mật độ tế bào Thalassiosira sp qua ngày mơi trường f/2 ( Đơn vị tính : 105 tế bào/ ml) Ngày Mật độ tế bào 10 0,218 0,232 0,456 0,160 0,468 0,158 1,92 0.07 3,16 0,06 5,06 0,04 5,19 0,04 6,14 0,04 11 12 6,19 5,36 4,71 0,04 0,03 0,04 700000.00 (100000 tế bào/ml) Mật độ tế bào 600000.00 500000.00 400000.00 300000.00 200000.00 100000.00 0.00 f/2 10 11 12 Ngày Hình 1: Đường cong sinh trưởng Thalassiosira sp môi trường f/2 3.2 Ảnh hưởng GA3 lên sinh trưởng Thalathiossira sp Khi bổ sung GA3 vào môi trường nuôi cấy, giai đoạn đầu (ngày 1, 2, 3) tốc độ sinh trưởng vi tảo chậm môi trường chuẩn f/2 Đây giai đoạn tảo thích nghi với mơi trường Sau đó, tốc độ sinh trưởng Thalassiosira sp tăng lên rõ rệt Từ ngày đến ngày 10 số lượng tế bào tăng mạnh đạt cực đại vào ngày 10 với mật độ tế bào trung bình 8,28 x 10 tế bào / ml (với GA3 10 -8 g/ml) 6,56 x 10 tế bào/ml (với GA3 10 -9 g/ml) (bảng 2, hình 2) 298 khơng bổ sung Kỷ yếu Hội nghị sinh viên NCKH Bảng 2: Mật độ tế bào Thalassiosira sp môi trường bổ sung GA3 (g/ml) ( Đơn vị tính: 105 tế bào/ ml; a,b,c khác biệt có ý nghĩa với độ tin cậy 95 %) (MT: môi trường) Ngày 10 0,218 0,456 0,468 1,92 3,16 5,06 5,19 6,14 6,19 bc 0,232 0,160 c 0,158c c c bc bc 0.078 0,061 0,048 0,046 0,043a 0,042c + GA3 10-8 0,197 0,23a 1,95 0,07a 3,01 0,060a 3,49 0,046a 8,28 0,029a + GA3 10-9 0,165 0,257 1,52 1,52 0,212ab 0,169ab 0,121ab 0,069ab 2,04 0,06b 11 12 MT 0,267 0,204a 4,93 0,038a 4,93 0,038a 5,87 0,03a 4,71 0,045c 8,18 0,03a 0,039c 7,43 0,031a 4,46 4,48 5,92 6,52 6,56 6,34 0,040ab 0,040ab 0,035a 0,034ab 0,033b 0,034b 9.00E+5 Mật độ tế bào (100000 tế bào/ml) F/2 5,36 8.00E+5 7.00E+5 6.00E+5 5.00E+5 4.00E+5 3.00E+5 2.00E+5 1.00E+5 0.00E+0 -8 f/2 + GA GA3310 10^-8 -9 f/2 + GA3 10^-9 GA310 10 11 12 Ngày chuẩn f/2 Hình 2: Đường cong sinh trưởng Thalassiosira sp mơi trường bổ sung GA3 (g/ml) Ngồi ra, GA3 cịn làm thay đổi hình dạng tế bào Thalassiosira sp Trong môi trường bổ sung GA3 10-8 g/ml 10-9 g/ml có tượng tế bào kéo dài thời gian sinh trưởng so với môi trường chuẩn Sang ngày 10, mơi trường chuẩn (f/2) có tượng vỡ tế bào (hình 3) 299 Năm học 2009 – 2010 Hình 3: Sự sinh trưởng Thalassiosira sp môi trường nuôi cấy (X 40) Từ xuống: ngày thứ 6, ngày thứ 8, ngày thứ 10 Từ trái qua: f/2, GA3 10 -8 g/ml, GA3 10 -9 g/ml Kết luận – đề nghị Từ kết cho thấy: - Trong môi trường f/2, Thalassiosira sp sinh trưởng đạt số lượng tế bào cực đại với mật độ trung bình 6,19 x 105 tế bào /ml - GA3 thúc đẩy sinh trưởng Thalassiosira sp Trong đó, GA3 10 -8 g /ml cho mật độ tế bào cao (8,28 x 105 tế bào /ml) Trong thời gian tới, có điều kiện, chúng tơi tiếp tục tìm hiểu số hoạt động sinh lí (quang hợp, hơ hấp, hàm lượng diệp lục tố) Thalassiosira sp ảnh hưởng GA3 300 Kỷ yếu Hội nghị sinh viên NCKH TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đặng Đình Kim (1999), Cơng nghệ sinh học vi tảo, NXB Nơng nghiệp [2] Hồng Thị Sản (2006), Phân loại học thực vật, NXB Đại học Sư phạm [3] Đặng Thị Sy (2005), Tảo học, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội [4] Vũ Văn Vụ (2002), Sinh lý học thực vật, NXB Giáo dục [5] Andersen RA, Kawachi M.(2005), "Traditional microalgae isolation techniques”, Andersen RA (ed.), Algal culturing techniques Amsterdam: Academy Press, p 83-100 [6] Guillard GRL, Sieracki MS (2005) “Counting cells in cultures with the light microscope”, Andersen RA (ed.) Algal culturing techniques Amsterdam: Elsevier Academic Press, p 239-252 [7] Các trang web: www.sinhhocvietnam.com http://eds.mard.gov.vn/uni/home/index.php http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vitao02.htm 301 ... trình sinh trưởng mẫu dùng để tính tốc độ sinh trưởng khoảng thời gian 2.3 Ảnh hưởng GA3 lên sinh trưởng Thalassiosira sp Sau ni thích nghi Thalassiosira sp mơi trường f/2 hai đợt, chọn lúc tảo sinh. .. Đường cong sinh trưởng Thalassiosira sp môi trường f/2 3.2 Ảnh hưởng GA3 lên sinh trưởng Thalathiossira sp Khi bổ sung GA3 vào môi trường nuôi cấy, giai đoạn đầu (ngày 1, 2, 3) tốc độ sinh trưởng. .. hoạt động sinh lí (quang hợp, hơ hấp, hàm lượng diệp lục tố) Thalassiosira sp ảnh hưởng GA3 300 Kỷ yếu Hội nghị sinh viên NCKH TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đặng Đình Kim (1999), Cơng nghệ sinh học vi