Real-time PCR trong sàng lọc Streptococcus Group B ở phụ nữ mang thai

Nhiễm trùng sơ sinh (NTSS) thường nặng, diễn biến phức tạp, tỉ lệ tử vong cao và dễ để lại các di chứng. Nhiều tác nhân truyền nhiễm quan trọng liên quan đến NTSS. Trong số này, Streptococcus agalactiae (S. agalactiae) hay Streptococcus nhóm B (Group B streptococcus – GBS) là một trong những vi khuẩn phổ biến được xác định liên quan đến NTSS khởi phát sớm với những triệu trứng nặng và nguy hiểm. Sàng lọc GBS ở phụ nữ mang thai ở tuần thai 35-37 đã được CDC khuyến cáo, nhằm giúp bác sĩ Sản khoa có thể chẩn đoán chính xác và cho thai phụ kháng sinh dự phòng nhằm bảo vệ thai nhi khi ra đời không bị NTSS sớm. Đặc biệt, việc sàng lọc sẽ có ý nghĩa hơn nếu thai phụ vào chuyển dạ mà tình trạng GBS chưa được khảo sát trong thai kỳ. Với phương pháp nuôi cấy truyền thống, kết quả có sau 24 giờ, không phù hợp để sàng lọc khi chuyển dạ. real-time PCR giúp sàng lọc GBS hiệu quả ở tuần thai 35-37 vì có độ nhạy và đặc hiệu cao, hơn nữa quy trình có thể hoàn thành trong thời gian từ 4-6 giờ, nên có thể thay thế phương pháp nuôi cấy truyền thống trong trường hợp thai phụ vào chuyển dạ. Điều này sẽ hỗ trợ rất nhiều cho bác sỹ trong việc theo dõi thai phụ trước khi sinh, nhằm có những can thiệp phù hợp như tiêm kháng sinh dự phòng.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Tổng Quan REAL-TIME PCR TRONG SÀNG LỌC STREPTOCOCCUS GROUP B Ở PHỤ NỮ MANG THAI Trần Thị Bích Huyền*,**, Nguyễn Tuấn Anh***,**** TĨM TẮT Nhiễm trùng sơ sinh (NTSS) thường nặng, diễn biến phức tạp, tỉ lệ tử vong cao dễ để lại di chứng Nhiều tác nhân truyền nhiễm quan trọng liên quan đến NTSS Trong số này, Streptococcus agalactiae (S agalactiae) hay Streptococcus nhóm B (Group B streptococcus – GBS) vi khuẩn phổ biến xác định liên quan đến NTSS khởi phát sớm với triệu trứng nặng nguy hiểm Sàng lọc GBS phụ nữ mang thai tuần thai 35-37 CDC khuyến cáo, nhằm giúp bác sĩ Sản khoa chẩn đốn xác cho thai phụ kháng sinh dự phòng nhằm bảo vệ thai nhi đời không bị NTSS sớm Đặc biệt, việc sàng lọc có ý nghĩa thai phụ vào chuyển mà tình trạng GBS chưa khảo sát thai kỳ Với phương pháp nuôi cấy truyền thống, kết có sau 24 giờ, khơng phù hợp để sàng lọc chuyển real-time PCR giúp sàng lọc GBS hiệu tuần thai 35-37 có độ nhạy đặc hiệu cao, quy trình hồn thành thời gian từ 4-6 giờ, nên thay phương pháp nuôi cấy truyền thống trường hợp thai phụ vào chuyển Điều hỗ trợ nhiều cho bác sỹ việc theo dõi thai phụ trước sinh, nhằm có can thiệp phù hợp tiêm kháng sinh dự phòng Từ khóa: nhiễm trùng sơ sinh ABSTRACT REAL-TIME PCR SCREENING FOR STREPTOCOCCUS GROUP B IN PREGNANT WOMEN Tran Thi Bich Huyen, Nguyen Tuan Anh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 01 – 08 Neonatal sepsis is a complicated systemic bacterial infection with significant morbidity and mortality worldwide Many important infectious organisms cause neonatal sepsis Among them, Streptococcus agalactiae (S agalactiae) or Group B streptococcus (GBS) has been implicated as one of the most common pathogen involved in early-onset neonatal sepsis with severe consequences The Center for Disease Control and Prevention (CDC, USA) recommended routine culture for all pregnant women between 35 and 37 weeks of gestation for GBS screening, to help obstetricians have accurate prognosis and provide intrapartum antibiotic prophylaxis to the colonized mother with the purpose of preventing early-onset neonatal infection in most newborn Especially, the screening will have more meaningful for pregnant women who lack of information on the GBS colonization status at delivery Conventional culture method, requiring up to 24 hours before results can be reported, are not a good choice for GBS screening at delivery Real-time PCR method for detection of GBS colonization in pregnant women between 35 and 37 weeks of gestation have shown high sensitivity and specificity; moreover, the PCR protocol could be accomplished in to hours, so it could replace traditional culture method in case of pregnant women at delivery This would support obstetricians a lot during monitoring pregnant women before delivery to provide suitable intervention such as antibiotic prophylaxis Keyword: neonatal sepsis *Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh **Khoa Sản, Bệnh viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Cơ sở ***Trung tâm Đào tạo Chẩn đoán Y Sinh học phân tử, Bệnh viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ****Trung tâm nghiên cứu Di truyền Sức khỏe sinh sản, Khoa Y, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS.BS Trần Thị Bích Huyền ĐT: 0913122840 Email: huyenbssk@yahoo.com Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Tổng Quan Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5* 2019 ĐẶTVẤNĐỀ Nhiễm trùng sơ sinh (NTSS) thường nặng, diễn biến phức tạp, tỉ lệ tử vong cao dễ để lại di chứng Theo Tổ chức Y tế Thế giới (TCYTTG), hàng năm có triệu trẻ sơ sinh chết nhiễm khuẩn, nước phát triển chiếm 98% (châu Á 27 - 69%, châu Phi 21%) Ở nước phát triển, tỉ lệ mắc tử vong nhiễm khuẩn mẹ - cao (châu Á từ 2,4 đến 6%, châu Phi từ đến 21%)(1) Cho đến giảm tỷ lệ NTSS nước phát triển từ 2/1000 trẻ sinh sống cịn 0,1-0,4/1000 trẻ sinh sống Thành cơng chiến lược phối hợp bác sĩ sản khoa, bác sĩ sơ sinh chuyên gia ngành xét nghiệm(3,4,5) NHIỄM KHUẨN SƠ SINH Nhiễm trùng sơ sinh (NTSS) hội chứng lâm sàng xảy trẻ ≤ 28 ngày tuổi, biểu dấu hiệu nhiễm trùng hệ thống có hay không du khuẩn huyết(19,21) NTSS bệnh lý thường gặp nguyên nhân gây tử vong đứng thứ cho trẻ sơ sinh sau hai nguyên nhân non tháng ngạt(1) Các đường lây truyền từ mẹ sang Từ mẹ qua đến thai Từ ổ nhiễm khuẩn tử cung qua màng ối vào nước ối qua đến thai Từ ổ nhiễm khuẩn tử cung qua màng thai vào nước ối đến thai Từ âm đạo qua thai thai sinh ngã âm đạo Phân loại NTSS Dựa vào thời gian xảy nhiễm trùng sơ sinh(3,4,5,19): NTSS sớm Xảy vòng 72 đầu sau sinh NTSS sớm thường từ đường sinh dục mẹ, nhiễm ngược dòng làm nhiễm trùng ối, bánh nhau, tử cung Nguy nhiễm trùng tăng – 4% trẻ có mẹ nhiễm trùng ối NTSS muộn Xảy sau 72 NTSS muộn từ đường sinh dục mẹ, chăm sóc, môi trường, trang thiết bị, sở vật chất Triệu chứng Thường gặp triệu chứng nặng biểu toàn thân: bệnh cảnh nhiễm trùng huyết, viêm phổi, viêm màng não, dẫn đến tử vong di chứng lâu dài(6,15,17) Nguyên nhân gây NTSS sớm Các tác nhân truyền nhiễm liên quan đến nhiễm trùng sơ sinh thay đổi kể từ kỷ 20 Trong năm 1950, Staphylococcus aureus Escherichia coli vi khuẩn gây bệnh phổ biến cho trẻ sơ sinh Hoa Kỳ Trong thập kỷ tiếp theo, Streptococcus nhóm B (GBS) thay Staphylococcus aureus vi khuẩn gram dương phổ biến gây nhiễm trùng huyết khởi phát sớm(18) Hiện tại, GBS Escherichia coli vi khuẩn phổ biến xác định liên quan đến nhiễm trùng sơ sinh Các sinh vật khác Staphylococcus cholermidis coagulase âm tính, Listeria monocytogenes, Chlamydia pneumoniae, Henzae, Enterobacter aerogenes Clostridium xác định nhiễm trùng sơ sinh Nhiễm trùng huyết khởi phát sớm (EOS) thường vi khuẩn gây bệnh lây truyền từ đường sinh dục mẹ sang thai trẻ sơ sinh Những mầm bệnh từ âm đạo, cổ tử cung vào tử cung vào nước ối gây nhiễm trùng ối Trẻ sơ sinh bị nhiễm trùng tử cung sinh chúng qua ống âm đạo Các mầm bệnh vi khuẩn điển hình cho EOS bao gồm Streptococcus nhóm B (GBS), Escherichia coli, Staphylococcus âm tính coagulase, cúm Haemophilus Listeria monocytogenes(17,19) Các yếu tố khác mẹ làm tăng nguy nhiễm trùng sơ sinh bao gồm sinh trước 37 tuần, viêm màng ối, vỡ ối kéo dài 18 giờ, mẹ sốt chuyển dạ(3,4) Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nhiễm GBS thường không gây vấn đề phụ nữ khỏe mạnh, nhiên thời gian mang thai đơi gây bệnh nghiêm trọng cho người mẹ trẻ sơ sinh GBS nguyên nhân hàng đầu gây nhiễm trùng sơ sinh vi khuẩn trẻ thời kỳ mang thai sau sinh với tỷ lệ tử vong đáng kể trẻ sinh non, tỷ lệ tử vong tăng từ -10 lần(1,5) Nhiễm trùng huyết khởi phát muộn (LOS) thường xảy thông qua việc truyền mầm bệnh từ môi trường sau sinh, chẳng hạn tiếp xúc từ nhân viên y tế người chăm sóc LOS gây biểu muộn nhiễm trùng lây truyền theo chiều dọc Trẻ sơ sinh có đặt ống thơng nội mạch, có bị làm thủ thuật xâm lấn khác làm phá vỡ niêm mạc, có nguy cao phát triển LOS Trẻ sơ sinh non tháng có nguy nhiễm trùng, nhiễm trùng huyết cao trẻ sơ sinh đủ tháng, chúng có khuynh hướng cần làm nhiều thủ thuật xâm lấn so với trẻ sơ sinh đủ tháng Các chủng Staphylococcus coagulase âm tính, đặc biệt Staphylococcus cholermidis nguyên nhân chủ yếu gây bệnh 50% trường hợp LOS nước công nghiệp, nhiều mầm bệnh vi khuẩn virus liên quan đến LOS(11) STREPTOCOCCUS NHÓM B (GBS) Streptococcus group B (GBS) tác nhân quan trọng trẻ sơ sinh phụ nữ mang thai(1) Trong suốt thai kỳ, nhiễm khuẩn âm đạo với GBS thường kèm với nhiễm khuẩn sơ sinh liên quan đến tỷ lệ mắc bệnh tử vong chu sinh (9,11,17, 18) Nhiễm trùng sơ sinh sớm nhiễm GBS nguyên nhân gây bệnh tử vong cho trẻ sơ sinh toàn giới Streptococcus agalactiae (S agalactiae) hay Streptococcus nhóm B (Group B streptococcus – GBS) nhiều lồi vi khuẩn có kiểu huyết phân biệt giống Streptococcus GBS loại song cầu Gram dương, có nang, tạo chuỗi, biểu kiểu tan huyết β môi trường thạch máu, yếm khí tùy ý, địi hỏi điều kiện dinh dưỡng đặc biệt, hoạt tính catalase âm Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Tổng Quan tính, có khả thủy phân sodium hippurate, kháng bacitracin CAMP test dương tính(7) GBS vi khuẩn hội sinh phổ biến hệ vi khuẩn âm đạo trực tràng với tỷ lệ người mang không triệu trứng khoảng từ 4% đến 40%; nhiên, gây bệnh nhiễm trùng số người với tỷ lệ trung bình khoảng 17,9% giới(12,13) Nhiễm khuẩn GBS nguyên nhân quan trọng tỷ lệ bệnh tật tử vong trẻ sơ sinh Mỹ, tỷ lệ lây truyền dọc từ mẹ đến trẻ sơ sinh trình chuyển GBS trẻ sơ sinh cao tới 75% 1% đến 2% số trẻ bị nhiễm GBS khởi phát sớm Xác định nhiễm trùng thời điểm chuyển quan trọng để ngăn ngừa lây truyền theo chiều dọc (từ mẹ) cho trẻ sơ sinh(11,14) Sự nguy hiểm nhiễm GBS Nhiễm GBS thai phụ yếu tố nguy quan trọng khiến trẻ sơ sinh bị nhiễm bệnh suốt trình chuyển Sự diện GBS suốt trình mang thai cho nguyên nhân hàng đầu dẫn đến nhiễm trùng sơ sinh nguy hiểm, bao gồm nhiễm trùng máu, viêm phổi viêm màng não, dẫn đến tử vong Các triệu trứng khởi phát sớm dẫn đến tỷ lệ tử vong lên đến 10%; triệu trứng khởi phát muộn để lại di chứng nặng nề(12) Trong giai đoạn mang thai, nhiễm trùng GBS nguyên nhân phổ biến gây viêm bàng quang, viêm thận, nhiễm khuẩn nước tiểu sản phụ diện vi khuẩn mật độ cao đường sinh dục Điều làm tăng nguy viêm màng con, nhiễm trùng ối sinh non(12) Tuy nhiên, GBS phổ biến giai đoạn sơ sinh nhóm tuổi hệ miễn dịch chưa hoàn thiện, nhiễm trùng thường nguyên nhân phổ biến loại bệnh tật nguy hiểm Nguyên nhân hàng đầu dẫn đến trường hợp nhiễm trùng sơ sinh nguy hiểm thường diện GBS suốt trình mang thai thai phụ trẻ sơ Tổng Quan Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5* 2019 sinh bị nhiễm bệnh trình chuyển dạ, trẻ di chuyển từ tử cung ngoài, tiếp xúc với dịch thai bị nhiễm Sự lây truyền theo chiều dọc trình chuyển chiếm tỷ lệ cao, gần 50% trường hợp thai phụ mang trùng Vì thế, xác định sản phụ nhiễm GBS thời điểm chuyển có ý nghĩa, để ngăn ngừa lây truyền vi khuẩn từ mẹ cho trẻ sơ sinh(11,14) Ý nghĩa sàng lọc GBS Chiến lược phòng ngừa GBS có khơng ngăn chặn tất trường hợp bệnh khởi phát sớm Phát nhanh sơ sinh nhiễm trùng bắt đầu điều trị thích hợp cần thiết để giảm thiểu bệnh suất tử vong trường hợp tiếp tục xảy Phát bệnh GBS khởi phát sớm đặt thách thức lâm sàng định, bác sĩ phải tính đến xuất triệu chứng lâm sàng trẻ sơ sinh, diện yếu tố nguy mẹ bệnh GBS nguy trẻ sơ sinh tiếp xúc với kháng sinh cho mẹ sinh Cũng theo nhiều tác giả, khảo sát tình trạng GBS thai kỳ yếu tố cần thiết để có định dùng kháng sinh dự phòng cho thai phụ trước trẻ sinh Điều làm giảm tình trạng nhiễm trùng sơ sinh sớm làm giảm hậu di chứng nặng nề sau cho trẻ bị nhiễm trùng sơ sinh sớm Với trẻ sinh bị nhiễm trùng sơ sinh sớm có biểu viêm phổi, viêm màng não, nhiễm trùng huyết, q trình điều trị diễn tiến nặng gây tử vong để lại di chứng nặng nề ảnh hưởng đến trình sống, sinh hoạt phát triển trẻ Điều trị lâu dài tốn Hình Trẻ bị nhiễm trùng sơ sinh nặng Nguồn hình: Dr Carol Baker Baylor College of Medicine, Houston, TX việc sử dụng kháng sinh dự phòng Theo CDC 2002, 2010, phụ nữ mang thai tảng đánh giá nguy dẫn đến việc điều trị nên sàng lọc GBS tuần thai thứ 35 không cần thiết nhiều phụ nữ tình trạng 37 thai kỳ Việc giúp giảm nhiễm GBS lúc chuyển thay đổi so trường hợp bệnh nhiễm trùng GBS trẻ sơ với kết sàng lọc lúc thai 35 – 37 tuần(7,20) sinh hạn chế sử dụng kháng sinh dự phịng khơng cần thiết số phụ nữ mang thai lúc chuyển Các kết nghiên cứu cho thấy nhiễm trùng sơ sinh ngăn ngừa hầu hết trường hợp việc cung cấp kháng sinh dự phòng cho bà mẹ nhiễm GBS chuyển Tuy nhiên, Có nhiều phương pháp sử dụng để phát sàng lọc GBS, chủ yếu phương pháp nuôi cấy phương pháp nhân vật liệu di truyền (polymerase chain reaction PCR)(2,4) Đối với phương pháp này, mẫu bệnh phẩm dùng cho việc sàng lọc GBS thường Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 “mẫu phết hai lần”, trước tiên phết khu vực âm đạo, sau phết khu vực trực tràng thai phụ tuần thai từ 35 đến 37(8) Phương pháp nuôi cấy Nuôi cấy sàng lọc GBS xem tiêu chuẩn vàng Từ năm 2002, trung tâm phịng ngừa kiểm sốt dịch bệnh Hoa Kỳ (CDC) với hướng dẫn cho việc ngăn ngừa nhiễm GBS cho trẻ sơ sinh từ người mẹ mang trùng, đề nghị phương pháp nuôi cấy thường qui cho tất phụ nữ mang thai có tuần thai từ 35 đến 37 Phương pháp tiêu chuẩn (vàng) theo CDC việc phát GBS ủ mẫu phết âm đạo trực tràng môi trường chọn lọc, sau tiếp tục ni cấy đĩa thạch máu Môi trường chọn lọc thường sử dụng môi trường Todd Hewitt có chứa colistin acid nalidixic để kìm hãm phát triển vi khuẩn đường ruột vi khuẩn khác diện đường ống tiêu hóa sinh dục Sau khoảng 18-24 chọn lọc tăng sinh 37oC điều kiện hiếu khí, sau tiếp tục ni cấy mơi trường đĩa thạch máu Granada điều kiện yếm khí khoảng 48 Sự xuất khuẩn lạc có màu cam đến màu đỏ cho thấy diện GBS Tuy nhiên, số phụ nữ mang thai có kết ni cấy GBS âm tính họ phát triển triệu trứng nhiễm trùng GBS Hình Ni cấy Streptococcus agalactiae Chun Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Tổng Quan Khảo sát tình trạng GBS chuyển cần phải có chẩn đốn nhanh xác để BS khoa Sản có đưa chẩn đốn cho kháng sinh dự phòng cho thai phụ nhằm bảo vệ cho thai đời không bị nhiễm trùng sơ sinh sớm Với phương pháp ni cấy truyền thống cho kết sau 24 Nhiều phương pháp sàng lọc GBS đánh giá dựa tính hiệu chẩn đoán tốc độ thực để hỗ trợ thay phương pháp nuôi cấy truyền thống Hiện nay, phương pháp chẩn đoán theo nguyên lý sinh học phân tử PCR thu thút quan tâm đặc biệt, cần phát GBS sớm thai phụ, có ưu điểm đặc trưng(15) Sau hướng dẫn CDC 2010, số tác giả Việt Nam nước tiếp tục nghiên cứu sử dụng phương pháp real-time PCR cho GBS, tác giả khảo sát tầm soát tuổi thai từ 35-37 tuần Sự phát triển sinh học phân tử giúp chẩn đốn nhanh xác, thai phụ vào chuyển mà tình trạng GBS chưa khảo sát thai kỳ Phương pháp real-time PCR để phát GBS Kỹ thuật nhân vật liệu di truyền việc phát GBS phụ nữ mang thai chuyển cho thấy độ nhạy độ đặc hiệu tốt Phương pháp sử dụng thành phần phản ứng đặc biệt để nhân vùng gene đặc trưng vi khuẩn, thường gene sip cfb Các gene xem dấu ấn phân tử đặc trưng cho diện của vi khuẩn GBS có mẫu bệnh phẩm Sử dụng nguyên lý nhân gene giúp tăng độ nhạy phương pháp Nếu mẫu bệnh phẩm diện số lượng nhỏ vi khuẩn, khó phát phương pháp khác nhuộm soi tế bào chí khó ni cấy thành cơng, phương pháp nhân vật liệu di truyền cho kết dương tính, sau phản ứng kết thúc, có hàng tỉ vùng gene nhân mẫu dễ dàng phát tín hiệu huỳnh quang tích hợp phản ứng Khi có tín hiệu nhân phản ứng, điều có nghĩa Tổng Quan Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5* 2019 mẫu bệnh phẩm ban đầu có vật liệu di truyền đặc trưng vi khuẩn GBS Điều ngầm hiểu có diện GBS mẫu bệnh phẩm thu thập từ bệnh nhân Hay nói cách khác, bệnh nhân bị nhiễm GBS Với quy trình phát GBS real-time PCR, mẫu phết sau thu thập bảo quản -20oC Sau đó, bắt đầu quy trình, mẫu phết giải đơng để vào giai đoạn tách chiết DNA Mẫu phết huyền phù 500 μl Tris-EDTA 10 mM, pH 7,4 Sau đó, DNA tách chiết kit thương mại sẵn có, QIAamp DNA mini kit (Qiagen), theo hướng dẫn nhà sản xuất DNA sau tách chiết bảo quản -20oC sử dụng (thực phản ứng real-time PCR) Những năm gần đây, nhiều qui trình realtime PCR phát triển nhằm phát GBS, nhắm vào gene đích khác nhau, đặc trưng vi khuẩn cfb, cylE, dltR, sip, scpB gene mã hóa protein C Trong gene này, cfb(10) gene sử dụng phổ biến Phản ứng real-time PCR tiến hành hệ thống máy real-time PCR phổ biến thị trường ABI, Bio-Rad, A Agilent Qiagen Thành phần phản ứng real-time PCR chương trình chạy chuyên biệt theo nhà sản xuất tương ứng Các mẫu chứng âm chứng dương phải thực lần chạy để kiểm soát quy trình Mẫu DNA gene vi khuẩn Streptococcus agalactiae thường sử dụng chứng dương mẫu nước cất hai lần khử trùng sử dụng chứng âm quy trình Đặc biệt qui trình phát GBS GeneXpert (Cepheid) kết hợp nguyên lý nhân vật liệu di truyền nguyên lý kênh vi dẫn (microfluidic channel) cho phép chẩn đoán GBS nhanh hồn tồn tự động Nhanh kết có sau lấy mẫu với độ nhạy đặc hiệu 90% Quy trình hồn tồn tự động từ giai đoạn tách chiết acid nucleic đến giai đoạn nhân gene đích nhằm phát diện GBS mẫu bệnh phẩm Quy trình thực nhân viên y tế thơng thường, chí người vận chuyển mẫu, chưa có chun mơn xét nghiệm làm Tuy nhiên, quy trình có số khuyết điểm mà bàn luận sau B Hình 3: A Kết real-time PCR phát S agalactiae dương tính, B Kết real-time PCR khơng phát S agalactiae Đường màu tím (FAM) đại diện cho chứng nội nội sinh; Đường màu đỏ (ROX) đại diện cho chứng nội ngoại sinh; Đường màu xanh (HEX) đại diện cho GBS Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 So sánh phương pháp phát GBS Nuôi cấy kỹ thuật sử dụng thường qui phương pháp tham chiếu quan trọng tính đặc hiệu chi phí hiệu việc phát GBS Tuy nhiên, phương pháp ni cấy để phát GBS có số bất lợi có độ nhạy giới hạn, thời gian trả kết dài hơn, từ 36 đến 72 Sàng lọc GBS trước sinh (tuần 35 đến 37) dựa nuôi cấy không cung cấp đủ thông tin tình trạng diện GBS, số phụ nữ mang thai có tình trạng nhiễm GBS khơng liên tục tỷ lệ nhiễm GBS người mẹ thay đổi suốt q trình mang thai; Hơn nữa, giá trị chẩn đoán phương pháp sàng lọc nhiễm trùng trước sinh giảm thực lâu vài tuần trước sinh Vì thế, nhiều kỹ thuật khác phát triển đánh giá nhằm có phương pháp nhanh, xác hiệu để sàng lọc GBS, có phương pháp realtime PCR Real-time PCR sử dụng để kiểm tra mẫu phết lâm sàng có kết ni cấy âm tính cho thấy thuận tiện có giá trị chẩn đốn độ nhạy cao phương pháp trường hợp có nghi ngờ cần phát nhanh GBS để giảm thiểu nguy nhiễm GBS trẻ sơ sinh bệnh viện phát GBS sản phụ thời điểm 2h-4h trước sinh để có chiến lược tiêm kháng sinh dự phòng hiệu So với nuôi cấy sàng lọc trước sinh, phương pháp real-time PCR đánh giá đạt độ nhạy 95,5% độ đặc hiệu 99,1%(2) Phương pháp PCR cho tỷ lệ dương tính cao (35,9% so với 22,5%) so sánh với phương pháp nuôi cấy(19) Đây kỹ thuật có độ nhạy đặc hiệu tốt để phát nhiễm GBS công cụ phù hợp để xác định thai phụ cần tiêm kháng sinh dự phòng chuyển nhằm hạn chế nhiễm trùng trẻ sơ sinh(2) Xpert® GBS (Cepheid) xét nghiệm chẩn đoán in vitro đạt đầy đủ tiêu chuẩn CDC chẩn đoán nhanh GBS lúc chuyển Tuy nhiên, chi phí cao phương Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Tổng Quan pháp tỷ lệ thất bại cao (10,8 đến 19%) hạn chế việc ứng dụng phương pháp Điều diện chất nhầy vật chất khác phân gây ức chế phản ứng PCR làm nghẽn kênh vi dẫn thiết bị chẩn đoán(21) Hơn nữa, việc sử dụng phương pháp cho chẩn đốn cịn phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác, chun mơn hóa mặt kỹ thuật phòng xét nghiệm (thiết bị đầy đủ, chuyên gia có nhiều kinh nghiệm) yếu tố lâm sàng (thai phụ có sốt vào chuyển dạ, lịch sử nhiễm GBS trẻ sơ sinh trước thai phụ) Mặc dù kỹ thuật real-time PCR kỹ thuật địi hỏi chi phí cao ni cấy, phương pháp có độ nhạy tốt cho kết nhanh Hơn nữa, tính đến yếu tố chi phí tiêm kháng sinh dự phịng, chi phí nằm viện tăng với triệu trứng bệnh khởi phát sớm trẻ sơ sinh nhiễm GBS mà nuôi cấy không phá thai phụ Chi phí cuối tính tốn áp dụng hai phương pháp để sàng lọc GBS(6,9,17) KẾT LUẬN Nhiều phương pháp khác sử dụng để chẩn đoán sàng lọc GBS từ mẫu phết âm đạo trực tràng thai phụ Phương pháp real-time PCR phương pháp chẩn đoán sớm GBS, nhanh chóng, dễ dàng sử dụng áp dụng thường qui cho mục tiêu sàng lọc vi khuẩn thai phụ, thời điểm 35-37 tuần thai mà cịn thực lúc chuyển thời điểm 4-6 trước sinh Điều hỗ trợ nhiều cho bác sỹ việc theo dõi thai phụ trước sinh, nhằm có can thiệp hợp lý việc tiêm kháng sinh dự phòng lúc chuyển để tránh cho trẻ sinh sau xuất nhiễm trùng sơ sinh biến chứng nặng nhiễm trùng GBS từ mẹ lây truyền qua TÀILIỆUTHAMKHẢO ACOG (2011) Prevention of Early- Onset Group B Streptococcal Tổng Quan Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5* 2019 Disease i Newborns Committee Opinion, 485(117):1019-27 Carrillo-Avila JA, et al (2018) Comparison of qPCR and culture methods for group B Streptococcus colonization detection in pregnant women: evaluation of a new qPCR assay BMC Infect Dis, 18(1):305 Centers for Disease Control and Prevention (1996) Prevention of perinatal group B Streptococcal disease: a public health perspective MMWR Recomm Rep, 45(RR-7):1-24 Centers for Disease Control and Prevention (2002) Prevention of perinatal group B Streptococcal disease: a public health perspective MMWR Recomm Rep, 51(RR-11):1-22 CDC (2010) Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease Revised Guidelines CDC, 59(RR-10):1-36 El Helali N, et al (2012) Cost and effectiveness of intrapartum group B streptococcus polymerase chain reaction screening for term deliveries Obstet Gynecol, 119(4):822-9 Gizachew, M., et al (2019) Streptococcus agalactiae maternal colonization, antibiotic resistance and serotype profiles in Africa: a meta-analysis Ann Clin Microbiol Antimicrob, 18(1):14 Gopal Rao, G., et al (2017) Outcome of a screening programme for the prevention of neonatal invasive early-onset group B Streptococcus infection in a UK maternity unit: an observational study BMJ Open, 7(4):e014634 Helmig RB, Gertsen JB (2017) Diagnostic accuracy of polymerase chain reaction for intrapartum detection of group B streptococcus colonization Acta Obstet Gynecol Scand, 96(9):10701074 10 Konikkara KP, et al (2014) Evaluation of Culture, Antigen Detection and Polymerase Chain Reaction for Detection of Vaginal Colonization of Group B Streptococcus (GBS) in Pregnant Women J Clin Diagn Res, 8(2):47-9 11 Korir ML, Manning SD, Davies HD (2017) Intrinsic Maturational Neonatal Immune Deficiencies and Susceptibility to Group B Streptococcus Infection Clin Microbiol Rev, 30(4):973989 12 Kwatra G, et al (2016) Prevalence of maternal colonisation with group B streptococcus: a systematic review and meta-analysis Lancet Infect Dis, 16(9):1076-1084 13 Meehan M, et al (2015) Real-time polymerase chain reaction and culture in the diagnosis of invasive group B streptococcal disease in infants: a retrospective study Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 34(12):2413-20 14 Morgan JA, Cooper DB (2019) Group B Streptococcus and Pregnancy Treasure Island, pp.28-80 15 Machado AB, De Paris F, Gheno TC, Ascoli BM, Oliveira KR, Barth AL (2011) Group B Streptococcus detection: comparison of PCR assay and culture as a screening method for pregnant women Braz J Infect Dis, 15(4):323-7 16 Plainvert C, et al (2018) Intrapartum group B Streptococcus screening in the labor ward by Xpert(R) GBS real-time PCR Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 37(2):265-270 17 Ramesh Babu S, et al (2018) Screening for group B Streptococcus (GBS) at labour onset using PCR: accuracy and potential impact - a pilot study J Obstet Gynaecol, 38(1):49-54 18 Raymond SL, Stortz JA, Mira JC, Larson SD, Wynn JL, Moldawer LL (2017) Immunological Defects in Neonatal Sepsis and Potential Therapeutic Approaches Front Pediatr; 5:14 19 Silva da HD, Kretli Winkelstroter L (2019) Universal gestational screening for Streptococcus agalactiae colonization and neonatal infection - A systematic review and meta-analysis J Infect Public Health, 12(4):479-481 20 Simonsen KA, Anderson-Berry AL, Delair SF, Davies HD (2014) Early-onset neonatal sepsis Clin Microbiol Rev; 27(1):21-47 21 Wynn JL (2016) Defining neonatal sepsis Curr Opin Pediatr, 28(2):135-40 Ngày nhận báo: 25/08/2019 Ngày báo đăng: 10/10/2019 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học ... nên sàng lọc GBS tuần thai thứ 35 khơng cần thiết nhiều phụ nữ tình trạng 37 thai kỳ Việc giúp giảm nhiễm GBS lúc chuyển thay đổi so trường hợp b? ??nh nhiễm trùng GBS trẻ sơ với kết sàng lọc lúc thai. .. tình trạng diện GBS, số phụ nữ mang thai có tình trạng nhiễm GBS khơng liên tục tỷ lệ nhiễm GBS người mẹ thay đổi suốt trình mang thai; Hơn nữa, giá trị chẩn đoán phương pháp sàng lọc nhiễm trùng... ward by Xpert(R) GBS real-time PCR Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 37(2):265-270 17 Ramesh Babu S, et al (2018) Screening for group B Streptococcus (GBS) at labour onset using PCR: accuracy and