BO CO PHƯƠNG PHP KIỂM ĐỊNH VI SINH TRONG THỰC.pdf

Báo cáo phương pháp kiểm định vi sinh trong thực phẩm

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 1 NH VI SINH TRONG THC PHM I. Giới thiệu Ng c thc phm  n hi mc bit tình trng ng c tp th  Có rt nhiu nguyên nhân dn tình trng ng c thc phm, chim 55,8% trong s n t các loài vi sinh vStaphylococcus aureus, Coliform, E. Coli… Ch tính riêng  Vin tht do ng c thc phn 30 t ng. Nm bc tình hình thc t, trong tun tháng 5 va qua ( t n 21/05/2011) khoa Sinh hn hành cho sinh viên thc nghim v  kinh vi sinh trong thc phm nhm giúp sinh viên thnh và gia n thc trong quá trình tip cn vi các c t. II. Mẫu thực phẩm 1. Tên mẫu:  2. Ngày thu: 16/05/2011 3. Nơi thu-  III. Tiêu chuẩn kiểm nghiệm: TCVN 7046 : 2002 Th- nh k thut IV. Kết quả kiểm định 1. Tổng số vi sinh vật hiếu khí, số khuẩn lạc trong 1(g) mẫu (TPC) 1.1. Quy trình định lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 2 1.2. Kết quả đếm khuẩn lạc  pha loãng F S khun lc N ( CFU) 10-4 >300 10-5 >300 10-6 323 và 358 1.3. Kết luận - Kt qu: Tng s vi sinh vt hiu khí trong 1 (g) mu l6 CFU/g TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 3 - Kt lun: Tng s vi sinh vt hiu khí trong 1 (g) mt tiêu chun cho phép ca tiêu chun Vit Nam (106 CFU/g) 1.4. Mở rộng -  m khun lc là m bi c s dng r ng vi sinh vt, c th  ng vi sinh vt hiu khí có trong mu thc phm. Trong bài thc tp mc tin hành pha loãng lên n 10-4 , 10-5 , 10 -6 c xem là n   tin hành nuôi cy ng PCA. Kt qu m khun lu l y mu thm rt nhiu vi sinh vt hiu khí. Nhiu chng loi khác nhau. - V n th t thc phm khá d b nhim vi sinh v   phm cht giúp vi sinh vt tn ti và phát tri0 c, thành phm dinh ng m có th do ch bin, gia nhii hn, nhim t các dng c ch bin, vt cha hoc t t. - Gii pháp: Cn gi sch s trong quá trình ch bin thcác thit b b ng tht, vùng ch bin phi thoáng, tránh xa cng rãnh hoc vùng rác thi. X lý sch nhng ph phn. Quá trình bo qun và vn chuyn phi gi nhi  tránh n chng th Hình 1: Tng s vi sinh vt hing PCA  n 10-6 2. Coliform tổng số trong 1 (g) mẫu (C) 2.1. Quy trình định lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 4 2.2. Kết quả đếm khuẩn lạc và ống sinh hơi  pha loãng F S khun lc N ( CFU) 10-4 50 và 15 - S i n: n= 2 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 5 - Th tích c - T l xác nhn: R= s khun lng BGBL/tng s khun lcy=1 ( c  N x R N x V x F C = 32,5 x 104 ( CFU/g) 2.3. Kết luận - Coliform tng s / g trong mu th4 CFU/g - Kt lun: Coliform tng s trong 1(g) mt tiêu chun cho phép theo TCVN 102 CFU 2.4. Mở rộng - ng VRB không hng khác, mà c cân t và gi nhit  450C. - ng BGLB Coliform0Coliform - c tính ca nhóm Coliform là có kh ng nuôi cy lng Coliform tng s ta s d    quan sát kh   a Coliform t khnh có xut hin Coliform trong mu. Trong bài thc tp này kt qu cho ta thy 5 ng BGBL có cy khun lc Coliform  - Coliform có th c xem là vi sinh vt ch th bi vì s ng ca chúng hin din trong mu ch th kh n din ca các vi sinh vt gây bnh khác trong thc phm. S hin din Coliform trong mu th cho thy s hin din ca các vi sinh vt gây bnh khác trong mu thln. - Khun l ho m do màu c ng và thêm ta qung mui mng. TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 6 Hình 2: Khun lng VRB 3. Quy trình định tính Escherichia Coli giả định 3.1. Quy trình định tính TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 7 3.2. Kết luận - Kt qu: Phn ng th t hin vòng màu hng trên mt dung dch. - Kt lun: Phát hin E. Coli gi nh trong 1(g) mu. TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 8 3.3. Mở rộng - Thuc th s dng trong phn    t chính tham gia phát hi    ng nuôi cy là p-dimethyaminobanzaldehyde. Cht này phn ng vi indol to thành phc h do nhân pyrol ca indol phn ng vi nhóm ahdehyde ca DMAB t. - t ch th ng ô nhim phân hay cht th nh s hin din c kim tra xem mu thc phm có b nhim bn t ng hay thông qua nguc hay không. 4. Quy trình định lượng Staphylococcus aureus 4.1. Quy trình định lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 9 4.2. Kết quả  pha loãng F S khun lc N (CFU) 10-3 21 và 14 - S ng huy 4 - T l xác nhn: R= S khun l huyng s khun lc cy = 4/5 N x R N x V x F C = 14 x 103 (CFU/g) 4.3. Kết luận - Staphylococcus aureus có trong 1 (g) mu là 14 x 103 CFU/g - Kt lun: Staphylococcus aureus trong 1 (g) mt quá tiêu chun cho phép ca TCVN: 102 CFU/g 4.4. Mở rộng -   Staphylococcus  StaphylococcusStaphylococcus có hai    - S.aureus0 S.aureus     Staphylococcus aureus. -  TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 10 Hình 3: Khun lc Staphylococcus aureus [...]...TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM 5 Định tính Samonella trong 25 (g) mẫu 5.1 Quy trình định tính VŨ THÙY LINH 0715174 11 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM 5.2       Kết quả Thử nghiệm KIA: Đối chứng: Trên đỏ dƣới vàng,... rộng 5 3 Quy trình định tính Escherichia Coli giả định 6 3.1 Quy trình định tính 6 3.2 Kết luận 7 VŨ THÙY LINH 0715174 14 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM 3.3 Mở rộng 8 4 Quy trình định lƣợng Staphylococcus aureus 8 4.1 Quy trình định lƣợng 8 4.2 Kết... chuẩn kiểm nghiệm: 1 IV Kết quả kiểm định 1 1 Tổng số vi sinh vật hiếu khí, số khuẩn lạc trong 1(g) mẫu (TPC) 1 1.1 Quy trình định lƣợng 1 1.2 Kết quả đếm khuẩn lạc 2 1.3 Kết luận 2 1.4 Mở rộng 3 2 Coliform tổng số trong 1 (g) mẫu (C) 3 2.1 Quy trình định lƣợng 3 2.2 Kết quả đếm khuẩn lạc và ống sinh. .. ra và chuyển thành NH3 DMAB trong môi trƣờng nuôi cấy phản ứng với indol tạo màu đò Samonella không có khả năng tách nhóm amin từ tryptophan vì vậy không sinh indol Phản ứng thử indol âm tính (-) không phát sinh vòng màu đỏ Hình 3: Hình dạng khuẩn lạc Samonella VŨ THÙY LINH 0715174 13 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM Mục lục: Giới... 9 4.3 Kết luận 9 4.4 Mở rộng 9 5 Định tính Samonella trong 25 (g) mẫu 11 5.1 Quy trình định tính 11 5.2 Kết quả 12 5.3 Mở rộng 12 VŨ THÙY LINH 0715174 15 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 16 ... Samonella trong 25 (g) mẫu Mở rộng Salmonella là trực trùng gram âm, hiếu khí và kị khí tùy ý, có khả năng di động không tạo bào tử, lên men glucose và mannitol sinh acid nhƣng không lên men saccharose và lactose, không sinh Indole, không phân giải ure, không có khả năng tách nhóm amine từ tryptophane, hầu hết các chủng đều sinh H2S Salmonella có thể phân tích định tính bằng mộ quy trình gồm 4 bƣớc: tăng sinh, ... tăng sinh chọn lọc, phân lập và khẳng định Salmonella thƣờng có mặt trong mẫu với số lƣợng nhỏ, bị tổn thƣơng và cùng hiện diện chung với một số lƣợng lớn với các loài vi khuẩn khác thuộc họ Enterobacteriaceae có tính cạnh tranh mạnh và ức chế sự tăng trƣởng của Salmonella Vì trong môi trƣờng KIA lƣợng đƣờng chỉ chiếm 1% lactose và 0,1% glucose và thuốc thử phenol red Do đó sau khi lên men glucose... glucose hết Samonella bắt đầu sử dụng đến pepton trong môi trƣờng, quá trình trao đồi này làm giải phóng NH3, làm kiềm hóa môi trƣờng do đó phần nghiêng có màu đỏ Ở phần sâu của môi trƣờng có pH acid bởi sự lên 5.3 VŨ THÙY LINH 0715174 12 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM men kỵ khí glucose, các sản phẩm thu đƣợc là acid hữu cơ, do... lisine decarboxylase tác động lên amino acid L- lisin và khử nhóm carboxyl, chúng tạo thành một amin và CO2 làm kiềm hóa môi trƣờng Tiến hành thử phản ứng LDC để xác định khả năng tổng hợp enzyme khử nhóm carboxyl hay tách hydrogen từ các acid amin Nếu sau khi nuôi cấy môi trƣờng chuyển màu vàng là âm tính, giữ nguyên màu ban đầu là dƣơng tính Từ kết quả trên ta có thể thấy Samonella là vi sinh vật có... enzyme khử nhóm carboxyl hoặc tách hydrogen từ acid amin khi môi trƣờng giữ nguyên màu tím (+) Vi khuẩn Samonella có khả năng lên men đƣờng manitol sinh acid khi có thuốc thử phenol red sẽ làm môi trƣờng chuyển từ đỏ sang vàng Samonella có khả năng lên men đƣờng manitol do đó môi trƣờng ở ống đối chứng chuyển từ đỏ sang vàng Emzyme urease là một enzyme quan trọng trong tế bào vi sinh vật Khi có cơ . BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 1 NH VI SINH TRONG THC PHM I. . BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 3 - Kt lun: Tng s vi sinh vt hiu khí trong 1 (g) mt