Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA

Lịch sử trong việc phát hiện virus viêm gan B : Hepatitis B virus ( HBV ) là nguyên nhân gây ra bệnh viêm gan B. Năm 1963 Blumberg đã phát hiện ra kháng nguyên Autralia Năm 1967, phát hiện sự liên quan của kháng nguyên này trong viêm gan kiểu B. Năm 1970, phát hiện được hạt virus tòan vẹn ( virion và hạt Dane ). Năm 1979, nhân dòng HBV DNA và xác định chuỗi mã nuclêiotid DNA tòan phần. Năm 1983, khuếch đại DNA virus bằng phương pháp PCR do Mullis phát minh. 1.2 Phân loại Hepatitis B virus: HBV là một lọai siêu vi DNA thuộc họ Hepadna – viridae .Tất cả thành viên của họ Hepadnaviridae là các virus hướng gan và có bộ gen mạch kép. Ngày nay, người ta biết gia đình của những virus giống virus viêm gan B thuộc họ Hepadaeviridae gồm

Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 1 CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN VỀ BỆNH VIÊM GAN SIÊU VI B 1. Hepatitis B virus : 1.1 Lịch sử trong việc phát hiện virus viêm gan B : Hepatitis B virus ( HBV ) là nguyên nhân gây ra bệnh viêm gan B. Năm 1963 Blumberg đã phát hiện ra kháng nguyên Autralia Năm 1967, phát hiện sự liên quan của kháng nguyên này trong viêm gan kiểu B. Năm 1970, phát hiện được hạt virus tòan vẹn ( virion và hạt Dane ). Năm 1979, nhân dòng HBV DNA và xác định chuỗi mã nuclêiotid DNA tòan phần. Năm 1983, khuếch đại DNA virus bằng phương pháp PCR do Mullis phát minh. 1.2 Phân loại Hepatitis B virus: HBV là một lọai siêu vi DNA thuộc họ Hepadna – viridae .Tất cả thành viên của họ Hepadnaviridae là các virus hướng gan và có bộ gen mạch kép. Ngày nay, người ta biết gia đình của những virus giống virus viêm gan B thuộc họ Hepadaeviridae gồm : Virus viêm gan B người (human hepatitis B virus) : HBV Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 2 Virus viêm gan Macmot - Sóc (Woochuck hepatitis virus) : WBV Virus viêm gan B Vịt (Duck hepatitis B virus) : DHBV HBV chỉ gây nhiễm cho loài linh trưởng bậc cao như hắc tinh tinh và vượn. WHV không gây nhiễm cho các loaị gậm nhấm khác. DHBV có thể gây nhiễm tự nhiên trong một số bầy vịt nuôi và đã được nhiễm truyền thưc nghiệm vào ngỗng thành công. 1.2 Cấu trúc của HBV: Virus nguyên vẹn (virion) có hình cầu hoặc hình sợi, đường kính 42 nm, virion hiệh rõ một cấu trúc hai vỏ: Vỏ protein bên ngòai ( màng bao ) được tạo thành bởi các protein bề mặt (HBsAg). Vỏ protein bên trong là hạt lõi ( HBcAg) có đường kính 34 nm.Muốn phát hiện kháng nguyên này phải phá vỡ hạt virus bằng dung môi lipit. Kháng nguyên này thấy khi làm sinh thiết gan. Trong một số loại kháng nguyên HBcAg còn có một loại kháng nguyên hòa tan có nguồn gốc từ nuclêocapsid còn gọi là HBeAg. Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 3 Hình 1 : Cấu trúc của HBV 1.2.1 Cấu trúc HBs: là kháng nguyên bề mặt của HBV lưu hành trong huyết thanh người nhiễm virus. Đa số là các hạt hình cầu đường kính 17 – 25 nm, thường có số lượng khoảng 10 13 /ml. Các hạt hình sợi hoặc hình ống ít hơn, đường kính thay đổi, có nồng độ khoảng 10 11 /ml hoặc 1µ/ml. Các sợi HBs chứa 3 polipeptid khác nhau : protein lớn nhất ( LHBs ), protein trung bình ( MHBs ), protein nhỏ ( SHBs ).SHBs là thành phần nhiều nhất trong tất cả 3 hạt protein vỏ của HBV và MHBs ít nhất. 1.2.2 Cấu trúc HBc : HBcAg là một protein được tổng hợp trong dịch bào tan tạo thành một dimmer ổn định khi còn ở nồng độ thấp. Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 4 Các HBc bao bộ gen HBV DNA dài 3.2kb qua đó men primerase ( pr ) của DNA polymerase gắn kết đồng hóa trị, protein kinase C và protein sốc nhiệt hcs90 cũng được bao. 1.3.3 Cấu trúc của HBe : Tất cả hepadnavirus đều có một dạng protein HBc bài tiết được gọi là HBeAg (e : enigma ). Các hepadnavirus tạo HBeAg bằng phần đầu tận 5’ của khung đọc mở lõi, gọi là chuỗi mã tiền lõi. Chuỗi mã tiền lõi mã hoá một vòng xoắn kỵ nước, là một tín hiệu bài tiết và giúp chuyển vị protein HBe vào trong khoang lưới nội bào tương. Đột biến vùng tiền lõi sẽ không sản xuất được HBeAg. 2. Bệnh viêm gan B: 2.1 Lịch sử phát triển viêm gan B trên thế giới : Trên thế giới hàng năm có hơn 50 triệu người nhiễm HBV mới vf khảng 1 triệu người chết liên quan đsên các tác động của bệnh này. Trên thế giới, HBV được chia làm 3 vùng dịch, ước tính có 45% dân số sống trong vùng dịch địa phương cao, 43% dân số sống trong vùng dịch địa phương trung bình, 12% dân số sống trong vùng dịch địa phương thấp. Hiện nay, do dân số tăng nhanh, đến cuối năm 2000, số người mang HBV mạn được ước tính khỏang 400 triệu người ( độ 5% dân số tòan cầu ). Phân bố tần suất nhiễm HBV trên thế giới không đòng đều và được xếp loại từ dịch địa phương rất cao ở trẻ em trong hầu hết các nước đang phát triển đến dịch địa phương Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 5 thấp ở các nước phát triển, chủ yếu người lớn và một số yếu tố nguy cơ như cách sống, chăm sóc y tế,… 2.2 Dịch tễ học của nhiễm HBV : 2.2.1 Vùng dịch HBV địa phương cao : Trong vùng dịch địa phương cao có 7 – 20% người nhiễm HBV mạn và trong huyết thanh của đa số người lớn đã chứng tỏ có nhiễm virus trước đó. Những vùng này gồm đa số các nước Châu Á, trong đó có Viêt Nam ( trừ Nhật và Ấn Độ ), Châu Phi, hầu hết vùng Trung Đông, vùng châu thổ Amazon Nam Mỹ, hầu hết các nhóm quần đảo Thái Bình Dương và một số sắc dân địa phương khác như đan Ết – Ki – mô, thổ dân Châu Úc và dân Maori. Trong một số vùng dịch địa phương cao, tỉ lệ người mang HBV có thể từ 8% đến 25% và tần suất anti – HBs từ 60% đến 85%. ở vùng địa phương cao, đa số nhiễm virus xảy ra ở trẻ em dưới 1 tuổi và trẻ nhỏ, và chỉ một ít nhiễm ở tuổi lớn. Sự truyền nhiễm HBV thường xảy ra trong thời kỳ chu sinh ( truyền nhiễm theo chiều dọc ) từ người mẹ nhiễm virus mạn đến con cái, hoặc trong thời kỳ sau sinh ( truyền nhiễm theo chiều ngang ) từ người mẹ bị nhiễm virus, anh chị em hoặc những cá nhân nhiễm virus mạn khác trong hoặc ngoài gia đình. Những trẻ này còn khả năng nhiễm virus khi đến tuổi trưởng thànhdo họat động tình dục. 2.2.2 Vùng dịch HBV địa phương trung bình : Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 6 Trong vùng dịch địa phương trung bình, tàn suất của người nhiễm HBsAg mạn từ 2 – 7% và 20 – 50% người lớn đã từng nhiễm HBV. Những vùng này gồm Ấn Độ, một phần trung đông, và Nam Mỹ. Cách truyền bệnh phức tạp hơn và truyền nhiễm xảy ra ở tất cả các nhóm tuổi ( trẻ sơ sinh, trẻ em và người lớn ), nhưng thời kỳ nhiễm bệnh chủ yếu có lẽ xảy ra ở trẻ nhỏ, tuổi thiếu niên và thanh niên. Trong các vùng này, nguy cơ cuộc sống trung bình của những người nhiễm HBV được ước tính từ 20 – 60%. Những vùng này bao gồm 43% dân số tòan cầu. 2.2.3 Vùng dịch HBV địa phương thấp : Tần suất người mang HBV mạn dưới 2% và tần suất người lớn đã từng nhiễm virus dưới 20%. Những vùng này bao gồm Mỹ, Canada, Tây Âu, Úc, New Zealand. Nhiễm bệnh chủ yếu ở người lớn. Tuy nhiên, sự truyền bệnh xảy ra thời kỳ chu sinh và thời thơ ấu cũng góp phần quan trong vào tần suất người nhiễm HBV mạn. Tại Tây Âu, tỷ lệ mới mắc hàng năm của viêm gan B cấp khỏang 5 trong 100 000 người. Tần suất của HBsAg có biên độ từ dưới 0.1% ở Bắc Âu và từ 1 – 5% ở Nam Châu Âu. Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 7 Hình 2 : Sơ đồ dịch tễ của HBsAg 2.3 Cách truyền và đường truyền nhiễm HBV : 2.3.1 Máu hoặc dịch cơ thể nhiễm HBV : Truyền nhiễm virus chủ yếu là từ máu hoặc từ huyết thanh của những người nhiễm HBV. Định lượng nồng độ HBV – DNA cho thấy độ 10 10 /ml ở người HBeAg (+) và 10 1 – 10 7 ở người anti – Hbe (+). Dịch cơ thể có nguồn gốc từ máu, như dịch màng phổi, màng bụng, chứa virus cao như nồng độ virus trong máu. Tinh dịch và nước bọt cũng chứa HBV, nhưng nồng độ 10 3 lần thấp hơn trong huyết thanh. HBsAg và HBV – DNA được phát hiện ít Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 8 hơn ở nước tiểu, phân và sữa, trừ khi các dịch này bị nhiễm máu. Nồng độ virus thấp trong các dịch cơ thể cho thấy khả năng nhiễm bệnh thấp, trừ khi tiếp xúc nhiều lần. 2.3.2 Lây nhiễm HBV qua tiếp xúc tình dục : Tần suất nhiễm HBV ở người đồng tính rất cao, các yếu tố nguy cơ lớn nhất gồm có giao hợp qua đường hậu môn và số lượng nhiều bạn tình, các bệnh khác gây tổn thương hậu môn hoặc tổn thương niêm mạc. Những người hành nghề mại dâm, nguy cơ nhiễm HBV thường tỉ lệ với số lường người bạn tình và với tình trạng nhiễm giang mai. Các vết loét giang mai giúp nhiễm hiệu quả hơn. HBV có thể là dấu ấn đại diện cho những bệnh loét đường sinh dục mạn tính khác. 2.3.3 Truyền nhiễm HBV chu sinh : Truyền nhiễm chu sinh từ người mẹ mang HBsAg mạn và người mẹ viêm gan B cấp 3 trong tháng cuối của thai kỳ, hoăc 2 tháng đầu sau khi sanh. Trẻ sinh ra từ người mẹ có HBsAg (+), HBeAg (+) có khảng 90% nguy cơ nhễm HBV trong 9 tháng sau khi sanh và 90% trong số đó thành người mang HBV. 2.4 Các đường truyền nhiễm HBV khác: 2.4.1 Vai trò của nước bọt trong truyền nhiễm HBV : Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 9 Nước bọt có thể gây nhiễm nếu có máu nhiễm HBV, nhưng không truyền nhiễm khi nước bọt nhiễm HBV được khí dung vào mũi, khi uống nước, hay khi dùng bàn chải răng nhiễm HBV. Truyền nhiễm cũng có thể qua vết cắn hay cùng nhai kẹo cao su. Hôn hít không truyền nhiễm HBv có ý nghĩa, nhưng vẫn có thể truyền nhiễm khi bị cắn. 2.4.2 Vai trò của tinh dịch và dịch tiết âm đạo trong truyền nhiễm HBV: Tinh dịch và tiết âm đạo, chứa một nồng độ virus giống với nồng độ trong nước bọt, giữ một vai trò quan trọng trong nhiễm HBV. 2.4.3 Đường lây nhiễm HBV qua da : Tai nạn kim tiêm làm truyền HBV qua da trực tiếp có thể xảy ra với kim nhiễm máu, thảm thách máu,… Những vất liệu tíếp xúc với da hở, hoặc màng niêm như mắt cũng có thể được xem lây nhiễm virus. Vì HBV khá ổn định, sự truyền nhiễm qua các bề mặt môi trường tiếp xúc với màng niêm mạc hoặc da bị tổn thương như kem đánh răng, chai sữa, đồ chơi, các dụng cụ ăn, máy hô hấp nhân tạo, nội soi có thể xảy ra. 2.4.4 Côn trùng và truyền nhiễm HBV : Vai trò của côn trùn trong truyền nhiễm HBV đã được nghĩ đến do dịch tễ học của viêm gan B thường phân bố ở những nước nhiệt đới nghèo trùng với sự phát triển của côn trùng. Truyền nhiễm HBV do côn trùng, nếu xảy ra, do hai cách sau : Truyền nhiễm chủ động : Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 10 Khi virus sao chép trong côn trùng và truyền nhiễm qua qua vết cắn. Tuy nhiên virus chỉ sao chép ở nhười và lòai linh trưởng lớn, không sao chép ở côn trùng. Truyền nhiễm thụ động : Truyền nhiễm cơ học do HBV chuyển từ ruột lên miệng của côn trùng. Cách truyền nhiễm này hiện chưa có bằng chứng. Nếu có cũng không hiệu quả. 2.4.5 Nhiễm HBV trong bệnh viện : Nhân viên chăm sóc sức khỏe có nguy cơ nhiễm hơn cộng đòng chung : do phơi nhiễm thường xuyên với bệnh nhân nhiễm virus. Nhân viên y tế có thể nhiễm HBV từ 2 đến 10 lần so với cộng đồng theo chứng minh của Hadler 2.4.6 Truyền nhiễm HBV giữa anh em trong nhà : Truyền nhiễm HBv giữa anh em trong nhà có thể xảy ra qua các tổn thương da như chàm, chốc lở tiếp xúc với vật nhiễm máu như bàn chải đánh răng, dao cạo râu,… 1. Diễn tiến tự nhiên của bệnh viêm gan siêu vi B : . Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 1 CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN VỀ B NH VIÊM GAN SIÊU VI B 1. Hepatitis B virus. dịch HBV địa phương trung b nh : Tìm hiểu quy trình xét ngiệm viêm gan B bằng phương pháp ELISA Bs: Hoàng Xuân Thế 6 Trong vùng dịch địa phương trung b nh,