Chất ức chế Tyrosine Kinase (TKIs) như Gefitinib và Erlotinib mang lại hiệu quả điều trị cao cho bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ (UTPKTBN) mang đột biến EGFR. Bên cạnh đột biến EGFR, biến đổi di truyền ngoại gen là nhân tố quan trọng tham gia vào quá trình tiến triển ung thư, trong đó có ung thư phổi. Methyl hóa gen ức chế khối u thường xuất hiện ở giai đoạn sớm của sự phát sinh ung thư
GIẢI PHẪU BỆNH MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA ĐỘT BIẾN EGFR VÀ METHYL HÓA QUÁ MỨC GEN MGMT, MLH1, BRCA1 Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHÔNG TẾ BÀO NHỎ TẠI BỆNH VIỆN K VƯƠNG DIỆU LINH1, NGUYỄN NGỌC QUANG2, TẠ VĂN TỜ3, NGUYỄN PHI HÙNG4 TÓM TẮT Mục tiêu: Chất ức chế Tyrosine Kinase (TKIs) Gefitinib Erlotinib mang lại hiệu điều trị cao cho bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ (UTPKTBN) mang đột biến EGFR Bên cạnh đột biến EGFR, biến đổi di truyền ngoại gen nhân tố quan trọng tham gia vào q trình tiến triển ung thư, có ung thư phổi Methyl hóa gen ức chế khối u thường xuất giai đoạn sớm phát sinh ung thư Trong ung thư người, số gen có vai trị sửa chữa sai hỏng DNA bị ức chế phiên mã methyl hóa DNA, chẳng hạn MGMT, MLH1, BRCA1 Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang 111 mẫu UTPKTBN sử dụng kỹ thuật realtime PCR PCR đặc hiệu methyl (MS-PCR) để phân tích đột biến gen EGFR methyl hóa gen MGMT, MLH1 BRCA1 Kết quả: 50/111 (45.1%) mẫu có đột biến gen EGFR; 42/111 (37.8%), 29/111 (26.1%) 40/111 (36.1%) mẫu bị methyl hóa gen MGMT, MLH1 BRCA1 Phân tích mối tương quan nghịch đột biến gen EGFR methyl hóa gen MGMT, khác biệt có ý nghĩa, p50% mẫu bệnh phẩm) Phương pháp nghiên cứu Loại hình nghiên cứu Mơ tả cắt ngang Phương pháp nghiên cứu Tách chiết DNA tổng số: Các mảnh bệnh phẩm căt thành lát dày 8µm đánh dấu vị trí tế bào u tiêu H&E DNA tổng số từ mẫu đúc paraffin tách chiết sử dụng QIAamp DNA FFPE kit Xử lý DNA tổng số với bisulfite: DNA tổng số xử lý bisulfite theo hướng dẫn Epitech Bisulfite Kit (Qiagen) Phương pháp real-time PCR: Đột biến gen EGFR xác định kỹ thuật Real-time PCR 217 GIẢI PHẪU BỆNH ARMS Scorpion sử dụng EGFR PGQ PCR kit chạy máy Rotor-Gene Q24 (Qiagen) Phương pháp MS-PCR (Methylation - Specific PCR): Sử dụng cặp mồi thiết kế đặc hiệu cho trình tự DNA methyl hóa DNA khơng bị methyl hóa, MS-PCR cho phép phân biệt DNA xử lý hay không xử lý, DNA methyl hóa DNA khơng methyl hóa Trình tự cặp mồi phát methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1 thiết kế dựa phàn mềm MethPrimer Xử lý số liệu: Xác định tần suất đột biến EGFR, methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1; Đánh giá mối tương quan đột biến gen EGFR với methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1 sử dụng phần mềm SPSS16.0 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết đột biến EGFR bệnh nhân UTPKTBN Đầu tiên, phương pháp nhuộm H&E, vùng khối mô chứa 50% tế bào ác tính khoanh vùng, tách khỏi khối paraffin cắt thành lát dày 8µm DNA tổng số tách chiết từ 111 mẫu UTPKTBN kit QIAamp DNA FFPE Tissue kit (Qiagen) sử dụng để xác định đột biến gen EGFR với phương pháp Arms Scorpion RT-PCR Kết cho thấy 50/111 trường hợp mang đột biến gen EGFR, đạt 45.1% Phương pháp RT-PCR cho phép xác định 29 đột biến, nhiên hai dạng đột biến đột biến đoạn Del exon 19 đột biến thay L858R exon 21 gen EGFR (40/111), chiếm tới 76% Những dạng đột biến lại bao gồm đột biến đơn lẻ hay đột biến kép chiếm tỷ lệ thấp từ 2.0 - 4.0% Kết methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1 bệnh nhân UTPKTBN DNA sau tách chiết tiến hành xử lý bisulfite theo hướng dẫn Epitech Bisulfite Kit (Qiagen) Phản ứng PCR nhân gen β-globin từ DNA tổng số tách chiết DNA sau xử lý sử dụng để đánh giá chất lượng DNA trước sau xử lý bisulfite (kết không hiển thị) DNA đạt chất lượng dùng để phân tích methyl hóa gen quan tâm Phản ứng MS-PCR phát methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1 sử dụng cặp mồi đặc hiệu cho trình tự DNA methyl hóa DNA khơng methyl hóa phù hợp với kỹ thuật PCR lồng (nested PCR) Kết cho thấy 42/111, 29/111 40/111 trường hợp có methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1; chiếm tỷ lệ tương ứng 37.8%, 26.1% 30.1% Đặc biệt, 74/111 (66.7%) bệnh nhân UTPKTBN bị methyl hóa gen có vai trị sửa chữa sai hỏng DNA Đánh giá tương quan đột biến gen EGFR methyl hóa gen MGMT, MLH1, BRCA1 bệnh nhân UTPKTBN Trong 50 trường hợp UTPKTBN đột biến EGFR, 14 trường hợp có methyl hóa gen MGMT chiếm 28 % 36 trường hợp khơng bị methyl hóa (72%) Đối với trường hợp UTPKTBN không mang đột biến EGFR, tỷ lệ bị methyl hóa khơng methyl hóa gen MGMT 30/61 31/61, xấp xỉ 1:1 Tính riêng 42 trường hợp methyl hóa gen MGMT, tỷ lệ mang đột biến gen EGFR 28.5%; 71.5% bệnh nhân có methyl hóa MGMT khơng mang đột biến Như vậy, tỷ lệ bệnh nhân khơng có đột biến gen EGFR bị methyl hóa gen MGMT cao đáng kể bệnh nhân mang đột biến gen EGFR, khác biệt có ý nghĩa thống kê, p