Thiết kế quy trình phân tích Alpha Lipoic Acid trong một số thực phẩm chức năng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - BÙI MINH ĐỨC THIẾT KẾ QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ALPHA LIPOIC ACID TRONG MỘT SỐ THỰC PHẨM CHỨC NĂNG Chuyên ngành : Kỹ thuật hóa học Mã số : 8520301 TĨM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Đà Nẵng 2019 Cơng trình đƣợc hoàn thành TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Diệu Hằng Phản biện 1: PGS.TS Phạm Cẩm Nam Phản biện 2: PGS.TS Lê Minh Đức Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ chuyên ngành Kỹ thuật hóa học, họp Đại học Bách khoa vào ngày 30 tháng 08 năm 2019 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm thơng tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Bách khoa, Đại học Đà Nẵng MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Chất lượng thực phẩm chức vấn đề cần phải quan tâm sử dụng trực tiếp vào thể người Nếu thực phẩm chức giả, chất lượng, không đảm bảo nguồn gốc có khả ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người Trong “Thuốc” có quy định chặt chẽ cần phải ghi rõ ngun liệu, cơng dụng luật định, chuyển hóa thể, đào thải sao, tác dụng phụ, hàm lượng… thực phẩm chức lại khơng có yêu cầu khắt khe Do vậy, việc sản xuất thực phẩm chức trở nên dễ dàng hơn, khâu đăng ký sản xuất hay khâu kiểm định chất lượng Trong thời gian qua, việc sản xuất, kinh doanh thực phẩm chức không đảm bảo chất lượng, không rõ nguồn gốc xuất xứ, chưa đăng ký công bố với quan quản lý, đặc biệt kinh doanh qua mạng điện tử có chiều hướng diễn biến phức tạp, ảnh hưởng đến quyền lợi sức khỏe người tiêu dùng, gây xúc với xã hội Ngày 19/06/2018, Thử tướng Chính phủ ban hành Chỉ thị số 17/CT-TTg việc “Tăng cường đấu tranh chống buôn lậu, gian lận thương mại, sản xuất, kinh doanh hàng giả, hàng chất lượng thuộc nhóm hàng dược phẩm, mỹ phẩm, thực phẩm chức năng, dược liệu vị thuốc y học cổ truyển” Hiện thị trường có nhiều loại thực phẩm chức có thành phần Alpha Lipoic Acid (ALA) Tuy nhiên chất lượng sản phẩm vấn đề cần quan tâm cần có phương pháp tối ưu để phân tích định lượng hàm lượng hoạt chất sản phẩm Trong quy trình phân tích tham khảo từ tiêu chuẩn kênh nước Các hệ thống TCVN; QCVN; Dược Điển Việt Nam; Dược Điển Anh… chưa thấy có quy trình thức phân tích chất lượng Alpha Lipoic Acid chưa tìm báo khoa học Việt Nam nói việc xây dựng quy trình tối ưu điều kiện chiết xuất phân tích ALA thực phẩm chức Các quy trình phân tích Việt nam quy trình nội điều kiện phân tích thiết bị hóa chất khác nhau, chưa đánh giá tối ưu theo điều kiện phân tích Chính cần xây dựng áp dụng phương pháp đánh giá tối ưu để hoàn thiện quy trình phân tích Ngồi thực trạng nhu cầu quản lý địa bàn tỉnh Quảng Ngãi cần tìm hiểu chất lượng sản phẩm thực phẩm chức năng, đặc biệt hoạt chất mới, hoạt chất đáng quan tâm sử dụng nhiều ALA Với lý vấn đề thực tiễn xin lựa chọn đề tài “Thiết kế quy trình phân tích Alpha Lipoic Acid số thực phẩm chức năng” Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng đánh giá quy trình phân tích ALA số thực phẩm chức năng, quy trình phải tối ưu phân tích hầu hết mẫu thực phẩm chức có chứa ALA thị trường Từ quy trình xây dựng lập hướng dẫn phương pháp quan đơn vị để phân tích mẫu nghiên cứu có địa bàn Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu: - Thực phẩm chức có chứa ALA địa bàn tỉnh Quảng Ngãi - Sắc ký lỏng cao áp HPLC Phƣơng pháp nghiên cứu: - Nghiên cứu lý thuyết - Phân tích liệu 3 - Xây dựng quy trình Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài: - Xây dựng lựa chọn quy trình phân tích, lựa chọn thơng số điều kiện quy trình phân tích - Xây dựng tối ưu quy trình xử lý mẫu phân tích - Xây đựng quy trình đánh giá quy trình phân tích Sau tiến hành thực phân tích đối chứng quy trình với phịng thí nghiệm khác - Phân tích số mẫu đối chứng địa bàn Cấu trúc luận văn: Cấu trúc luận văn gồm Chương sau: - Chương 1: Tổng quan - Chương 2: Đối tượng, hóa chất, thiết bị phương pháp nghiên cứu - Chương 3: Thực nghiệm thảo luận - Chương 4: Kết luận CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Khái quát thực phẩm chức 1.1.1 Định nghĩa thực phẩm chức 1.1.2 Phân loại thực phẩm chức 1.1.3 Yêu cầu kiểm nghiệm thực phẩm chức [3] 1.2 Tổng quan Alpha Lipoic Acid 1.2.1 Cấu tạo tính chất lý hóa 1.2.2 Cơng dụng sức khỏe 1.3 Sản xuất Ala công nghiệp [18] 1.4 Tổng quan sắc ký lỏng HPLC [1] 1.4.1 Hệ thống bơm 1.4.2 Bộ phận tiêm mẫu 1.4.3 Pha tĩnh 1.4.4 Pha động 1.4.5 Detector 1.4.6 Các thông số sắc ký lỏng hiệu cao CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu đặc điểm đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu mẫu thực phẩm chức bao gồm: mẫu tự tạo, mẫu dùng để xây dựng quy trình thẩm định mẫu lưu hành thị trường có thành phần thể chất phức tạp, tiêu chí phân tích đa dạng Cụ thể là:  Viên nén Webber naturals Alpha-Lipoic Acid 100mg  Viên nén Alpha-Lipoic Acid 300mg  Swanson Alpha Lipoic Acid 50mg Ngồi cịn có mẫu đặc trưng dùng để phân tích nghiên cứu đánh giá quy trình theo yêu cầu ISO 17025-2017 mà cụ thể AGL 03 yêu cầu bổ sung để công nhận phong thử nghiệm lĩnh vực hóa (Văn phịng cơng nhận chất lượng BOA) mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe bào chế dạng thuốc xác nhận giá trị sử dụng phương pháp dạng bào chế: Bào chế dạng rắn, lỏng, thân dầu/ưa dầu, cốm… .Ở ta chọn 03 dạng bào chế thường gặp hoạt chất Alpha Lipoic Acid bao gồm:  Nền mẫu 1: Dung dịch tiêm truyền Thiotic acid 300mg/12ml (nền mẫu ALA dạng lỏng)  Nền mẫu 2: Viên nén Thực phẩm bảo vệ sức khoẻ Alpha Lipoic Acid 600mg (nền mẫu ALA dạng rắn)  Nền mẫu 3: Thực phẩm chức Omega 3-4-6, Alpha Lipoic Acid 780mg (nền mẫu ALA ưa dầu) 2.1.2 Nội dung nghiên cứu Để thực nghiên cứu phân tích ALA thực phẩm chức năng, quy trình nghiên cứu thực sau:  Sử dụng hệ thống phân tích Sắc ký lỏng tiến hành nghiên cứu Khảo sát thông số HPLC, đưa quy trình tiến hành xác định ALA HPLC Lựa chọn quy trình phân tích, lựa chọn thơng số điều kiện quy trình phù hợp Mục đích cho pic sắc ký lỏng tách tốt nhất, có độ phân giải cao  Thực mơ hình quy hoạch tối ưu hóa thực nghiệm mẫu thêm chuẩn, từ đưa thơng số tối ưu cho trình chiết tách ALA mẫu thực phẩm Nhằm mục đích chiết tách sản phẩm tối đa mức độ chiết cao  Xây đựng quy trình đánh giá quy trình phân tích Sau tiến hành thực phân tích đối chứng quy trình với phịng thí nghiệm khác  Khảo sát số mẫu thực phẩm chức theo quy trình tối ưu 2.1.3 Mục tiêu nghiên cứu  Xây dựng quy trình phân tích ALA số thực phẩm chức năng, quy trình phải tối ưu phân tích hầu hết mẫu thực phẩm chức có chứa ALA thị trường  Quy trình xây dựng đánh giá theo ISO 17025:2017 từ đưa vào quy chuẩn phịng thí nghiệm 2.1.4 Chất chuẩn, dung mơi, hóa chất 2.1.4.1 Chất chuẩn Chất chuẩn sử dụng nghiên cứu gồm có:  Alpha Lipoic Acid (Hàm lượng: 99,0 %; Nơi sản xuất: Trung Quốc; Hạn dùng: 03/2021; Đã kiểm tra thực nối chuẩn)  Alpha Lipoic Acid (Hàm lượng: 99,9%; Viện An Toàn Vệ Sinh Thực Phẩm Quốc Gia) 2.1.4.2 Dung mơi, hóa chất Một số dung mơi, hóa chất khác sử dụng nghiên cứu gồm có:  Acetonitrile 30/11/2020) (Merck; Lô: K49707491; Hạn dùng:  Acid phosphoric 85% (Trung Quốc)  Acid sulfuric đậm đặc 95% (Prolabo; Lô: 17J44013; Hạn dùng: 20/11/2022)  Methanol HPLC (Merck; Lô: I0916118; Hạn dùng: 30/9/2020)  Ethanol Absolution (Prolabo; Lô: 17K074009; Hạn dùng: 03/11/2022)  NaOH (Prolabo; Lô: 17E4110; Hạn dùng: 05/2020)  Tetrahydrofuran (Prolabo; Lô: 14L090500; Hạn dùng: 12/2019)  Acid Formic 98-100% (Merck; Lô: S5779554; Hạn dùng: 30/04/2021)  Acid Acetic 100% (Prolabo; Lô: 17E034008; Hạn dùng: 03/2022)  Ethylenglycol (Trung Quốc)  Acetanilid (Merck; Lô: S6921344; Hạn dùng: 31/07/2019)  Saccharose (Merck; Lô: K47396387; Hạn dung: 31/01/2020)  Tinh bột (Trung Quốc)  Dầu thực vật 2.1.5 Thiết bị, dụng cụ Các thiết bị dụng cụ theo quy định yêu cầu ISO 17025 – 2017 Viện kiểm nghiệm thuốc TW công ty hiệu chuẩn bảo trì gồm:  Máy sắc ký lỏng hiệu nâng cao (Model: U-3000; Nơi sản xuất: Dionex)  Máy sắc ký lỏng hiệu nâng cao (Model: D7000; Nơi sản xuất: Hitachi)  Cân phân tích số lẻ (Model: ML 204/01; Nơi sản xuất: Thụy sĩ)  Bể điều hòa nhiệt độ (Model: 1,5HP; Nơi sản xuất: LG)  Nồi cách thủy (Model: WNB145; Nơi sản xuất: Đức)  Máy li tâm (Model: Z206A; Nơi sản xuất: Đức)  Bể siêu âm (Model: Elma; Nơi sản xuất: Anh)  Giấy lọc, màng lọc 0,45m  Bếp điện, nhiệt kế thủy tinh  Dụng cụ thủy tinh xác cấp A (Pipet; bình định mức)  Dụng cụ thủy tinh (Bình gạn; cốc có mỏ) 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Xác định nồng độ ALA mẫu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 2.2.2 Quy hoạch tối ưu hóa thực nghiệm 2.2.2.1 Khái niệm quy hoạch thực nghiệm 2.2.2.2 Khái niệm tối ưu hóa 2.2.2.3 Các bước quy hoạch tối ưu hóa thực nghiệm [9] 2.2.3 Xác nhận giá trị phương pháp 2.2.3.1 Độ đặc hiệu 2.2.3.2 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 2.2.3.3 Giới hạn phát iới hạn đ nh n 2.2.3.4 Đánh iá độ chụm phươn pháp 2.2.3.5 Đánh iá độ đún phươn pháp 2.2.3.6 Đánh iá độ khôn đảm bảo đo CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện đo sắc ký lỏng 3.1.1 Các thông số điều kiện khảo sát 3.1.1.1 Kết khảo sát cột sắc ký lỏng Khi chạy chạy mẫu thuốc thực phẩm chức nơi nghiên cứu thấy cột C18 tách tốt C8 nên ta chọn cột loại cột C18 để khảo sát Trong trình nghiên cứu thực nghiệm lâu dài, nhận thấy Cột Purospher Star RP-18e (5μm; 250 x 4.6mm) thích hợp để nghiên cứu hoạt chất khả đáp ứng pic, tách cột tốt Ngồi q trình nghiên cứu thực phẩm chức nhiều thành phần nên ưu tiên chọn cột dài để thời gian rửa giải lâu khả tách nhiều chất 3.1.1.2 Kết khảo sát pha động sắc ký lỏng  Lựa chọn nồng độ acid H3PO4 0,025M: Dựa vào kết sắc ký đồ pic ALA nồng độ H3PO4 0,025M cho nghiên cứu nồng độ nằm khoảng giới hạn cho phép cột, pic sắc ký rõ nét, cân đối, tốn thời gian phân tích dung mơi pha động  Lựa chọn thành phần pha động: Tỷ lệ ACN lớn thời gian lưu ngắn, hệ số tách nhỏ, pic đẹp cân đối, tượng kéo đuôi giảm dần Tuy nhiên tỷ lệ ACN từ 50% trở lên hệ số tách q nhỏ, pic khơng rời Trong tỷ lệ ACN từ 30% trở xuống pic tách chậm, chân đường bị giãn dễ gây sai số thời gian phân tích kéo dài khơng lợi ích kinh tế Thường thực phẩm, thực phẩm chức hay có tạp chất nên chọn hỗn hợp dung môi pha động cho thời gian lưu tương đối để tách tốt pic sắc ký đẹp Trong điều kiện pha động nhận thấy tỉ lệ ACN: 0,025M H3PO4 (40:60), (v/v) phù hợp Khi pic 10 chuẩn có hệ số đối xứng 1,13; số đĩa lý thuyết 3474 phù hợp 3.1.1.3 Kết khảo sát bước sóng Qua thực nghiệm nhận thấy bước sóng 208nm cho tín hiệu phân tích tốt nhất, kết phân tích từ đường chuẩn khoảng nồng độ chuẩn làm việc đạt có hệ số slope lớn (Hệ số cao giới hạn định lượng khả phát tốt) hệ số tương quan R2 cao so với bước sóng cịn lại  Đường chuẩn ALA 208nm: Y = 77,6744X + 0,4220; r = 0,9971  Đường chuẩn ALA 215nm: Y = 69,4275X + 0,4624; r = 0,9969  Đường chuẩn ALA 218nm: Y = 64,3109X + 0,3507; r = 0,9967  Đường chuẩn ALA 220nm: Y = 59,9417X + 0,3269; r = 0,9967 3.1.1.4 Kết khảo sát tốc độ dòng Khi chạy với tốc độ dòng 1,5 ml/min với hệ pha động cho pic sắc ký có thời gian lưu khoảng – phút, thời gian hầu hết pic tạp tách hết nên ta chọn để tốn thời gian phân tích Trong trường hợp mẫu phức tạp bị dính pic chồng pic giảm tốc độ dịng để tách chất theo yêu cầu 3.1.2 Quy trình kết lựa chọn điều kiện HPLC sau khảo sát Quá trình khảo sát nghiên cứu cho thơng số quy trình sắc ký HPLC để xác định nồng độ ALA sau:  Cột tách: RP-18e (5μm; 250 x 4.6mm)  Hệ pha động: ACN: H3PO4 0,025M (40:60), (v/v)  Bước sóng: 208nm 11  Thể tích tiêm: 20µl  Tốc độ dòng: 1,5ml/min  Nhiệt độ cột: Lựa chọn 30oC (Chọn nhiệt độ nhiệt độ phòng nhằm tạo ổn định cho q trình phân tích mẫu) 3.2 Kết khảo sát tối ƣu điều kiện xử lý mẫu Modde 3.2.1 Các yếu tố khảo sát Hình 3.14 Các mức yếu tố cần khảo sát Modde Hình 3.15 3.2.2 Tổ chức thí nghiệm trực giao cấp [9] Hình 3.16 Phươn án thí n hiệm kết phân tích mẫu Modde 12 3.2.3 Đánh giá thông số quy hoạch thực nghiệm Hình 3.17 Tỷ lệ tươn quan hệ số hồi quy Hình 3.18 Hệ số kết kiểm tra hệ số phươn trình hồi quy 3.2.4 Tối ưu hóa thực nghiệm Sau kiểm tra phương trình hồi quy phù hợp với mơ hình thực nghiệm ta tiến hành tối ưu hóa thực nghiệm mục Optimzer Hàm mục tiêu trình chiết xuất lượng (mg/g) ALA mẫu lớn nhất, chọn Maximize mục Criteria chạy chương trình tối ưu để kết 13 Hình 3.20 Tối ưu hóa thực nghiệm 3.2.5 Đánh giá kết tối ưu Kết tối ưu quy hoạch thực nghiệm cho thấy điều kiện: Dung môi ACN 63%, nhiệt độ siêu âm 43oC thời gian siêu âm 52 phút cho lượng chiết xuất mẫu tốt nhất, tiết kiệm dung môi thời gian, chi phí Tiến hành thực thí nghiệm lặp lại để kiểm tra kết trình quy hoạch tối ưu thực nghiệm Bản 3.4 Kiểm tra lại q trình quy hoạch tối ưu hóa thực nghiệm (mg/g) ALA mẫu % Thu hồi STT Dung môi ACN (%) Nhiệt độ (oC) Thời gian siêu âm (Min) 63 43 52 501.346 100.2692 63 43 52 500.827 100.1654 63 43 52 500.938 100.1876 501.037 100.2074 Trung bình 14 Kết cho thấy trình quy hoạch tối ưu hóa thực nghiệm phù hợp đạt yêu cầu Toàn kết chiết xuất cho thấy hàm lượng ALA mẫu chiết xuất hoàn toàn Kết thu hồi đáp ứng yêu cầu phụ lục F AOAC đối hàm lượng mẫu phân tích phương pháp từ 10% đến 100%; thu hồi phải nằm khoảng 98  102% Từ kết trên, kết luận điều kiện xử lý tối ưu là: Tỷ lệ dung môi ACN:H2O 63:37 (v/v), nhiệt độ 43oC thời gian siêu âm 52 phút Và quy trình xử lý mẫu phù hợp là: Cân lượng mẫu thử tương ứng khoảng 100mg ALA vào bình nón 250ml, thêm khoảng 5ml NaOH 0,1N, lắc Thêm khoảng 70ml ACN:H2O (63:37) (v/v), điều chỉnh nhiệt độ bể siêu âm 43oC siêu âm 52 phút Sau chuyển tồn mẫu vào bình định mức 100ml, định mức dung dịch ACN:H2O (63:37); (v/v) tương ứng, lắc lọc Hút xác 5,0ml dung dịch cho vào bình định mức 50ml, định mức nước cất lắc 3.3 Đánh giá quy trình phân tích Ala 3.3.1 Kết tính đặc hiệu Hình 3.21 ắc k đồ ẫu trắn 15 Hình 3.22 ắc k đồ ẫu chuẩn nồn độ 0,1mg/ml Hình 3.23 ắc k đồ ẫu Hình 3.24 ắc k đồ ẫu Hình 3.25 ắc k đồ ẫu 16 Hình 3.26 Ph -Vis dun d ch chuẩn ẫu th Qua kết nhận thấy:  Sắc ký đồ dung dịch chuẩn xuất pic rõ ràng cho thời gian lưu ALA: 8,740min Sắc ký đồ mẫu 1, 2, cho thời gian lưu ALA là: 8,623min, 8,683min; 8,703min Như vậy, độ lệch thời gian lưu mẫu thử so với chuẩn không 5% đạt yêu cầu cho phép máy phân tích HPLC  Trên sắc ký đồ mẫu thử pic ALA tách hoàn toàn khỏi pic khác có mẫu thử 1,2,3  Sắc ký đồ dung dịch mẫu trắng không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu chất chuẩn  Pic chất cần phân tích sắc ký đồ dung dịch thử phải tinh khiết xem thông qua phổ UV-Vis mẫu thử mẫu chuẩn phù hợp với yêu cầu Theo mục 3.1.1.3 khảo sát bước sóng giải thích rõ phổ UV-Vis, theo phổ chuẩn mẫu thử có độ tinh khiết tốt với độ phù hợp điều 999 Các kết cho thấy độ đặc hiệu phương pháp phân tích ALA phù hợp 17 3.3.2 Kết khoảng nồng độ tu ến tính Bản 3.5 Bản kết ph n tích độ chệch đườn chuẩn STT Nồng độ ALA (mg/ml) Diện tich pic ALA Ct (Cobs) % Δi (Bias) 0,0508 3,9880 0,0505 -0,5568 0,0813 6,3808 0,0812 -0,1138 0,1016 7,9876 0,1018 0,2130 0,2033 15,9620 0,2041 0,3920 0,2541 19,8108 0,2535 -0,2511 Phương trình đường chuẩn: Y = 77,9660X + 0,0494 Hình 3.27 Phươn trình hồi qu tu ến tính ALA Kết khảo sát độ tuyến tính ta phương trình hồi quy: Y 77,9660X 0,0494 với hệ số tương quan R2 = 1,000 (0,99 ≤ R2 ≤ 1) Nhận thấy phương trình có tính tương quan rõ rệt Phương trình hồi quy có độ chệch điểm chuẩn nằm khoảng từ -0,25% đến 0,39% nằm khoảng 15%, nên phương trình hồi quy đạt yêu cầu phương pháp phân tích 18 3.3.3 Kết giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Bản 3.6 Bảng kết xác đ nh LOD, LOQ Nồng độ ALA (mg/L) 0,50 1,00 1,50 Lần Chiều cao pic (H = S) Chiều cao nhiễu (h = 2N) S/N 0,139 0,094 2,957 0,130 0,095 2,737 0,135 0,094 2,872 0,134 0,092 2,913 0,320 0,096 6,666 0,334 0,092 7,261 0,320 0,094 6,809 0,312 0,093 6,710 0,471 0,093 10,129 0,468 0,096 9,750 0,475 0,094 10,106 0,480 0,093 10,322 Từ bảng cho thấy:  Giới hạn phát LOD phương pháp: 0,50ppm với hệ số S/N nằm khoảng từ 2,737 đến 2,957 phù hợp với yêu cầu S/N =  Giới hạn định lượng phương pháp LOQ 1,50ppm với hệ số S/N nằm khoảng từ 9,750 đến 10,322 phù hợp với yêu cầu S/N = 10 19 Hình 3.28 Sắc kí đồ ALA nồn độ 1,50ppm 3.3.4 Kết độ chụm 3.3.4.1 Kết độ lặp lại Kết thu cho thấy:  Nền mẫu 1: HorRat = 0,4248; nằm khoảng 0,3 – 1,3 đáp ứng yêu cầu độ lặp lại phương pháp  Nền mẫu 2: HorRat = 0,8931; nằm khoảng 0,3 – 1,3 đáp ứng yêu cầu độ lặp lại phương pháp  Nền mẫu 3: HorRat = 0,9969; nằm khoảng 0,3 – 1,3 đáp ứng yêu cầu độ lặp lại phương pháp 3.3.4.2 Kết Độ tái lặp nội : Kết thu cho thấy:  Nền mẫu 1: %RSD KNV = 0,6037 < %RSD Howritz 3,4817 nên phương pháp đạt yêu cầu độ tái lặp nội  Nền mẫu 2: %RSD KNV = 0,5903 < %RSD Howritz 2,0634 nên phương pháp đạt yêu cầu độ tái lặp nội  Nền mẫu 3: %RSD KNV = 0,8599 < %RSD Howritz 1,5727 nên phương pháp đạt yêu cầu độ tái lặp nội 3.3.5 Kết độ Đạt yêu cầu phụ lục F AOAC 3.3.6 Kết đánh giá độ không đảm bảo đo 20 Kết thu cho thấy độ không đảm bảo đo phù hợp, thông thường mẫu thuốc phịng thí nghiệm thường độ khơng đảm bảo đo < 2% cho tốt  Nền mẫu : (mg/ml) ALA = 25,1341 ± 0,2634 mg/ml  Nền mẫu : (mg/ml) ALA = 812,7983 ± 8,2945 mg/g  Nền mẫu : (mg/ml) ALA = 333,8059 ± 4,9627 mg/g 3.4 Đánh giá phƣơng pháp so sánh liên phòng Kết bảng cho thấy: Phịng thí nghiệm số 42 phân tích mẫu cho kết 21,4g/100g (Hệ số Z’- score = 1,56) nên phương pháp phân tích xây dựng đạt yêu cầu chương trình thử nghiệm thành thạo khơng có khác biệt phịng thí nghiệm 3.5 Phân tích số mẫu lấy địa bàn Bản Kết phân tích ALA mẫu lấ đ a bàn tỉnh Quảng Ngãi Kết (mg/viên) Kết so với hàm lƣợng nhãn (%) Viên nén Webber naturals Alpha-Lipoic Acid 100mg 97,85mg ± 0,99mg 97,85 Viên nén Alpha-Lipoic Acid 300mg 287,33mg ± 2,93mg 95,78 Swanson Alpha Lipoic Acid 50mg 45,29mg ± 0,46mg 90,58 Dung dịch tiêm truyền Thiotic acid 300mg/ 302,40mg ± 3,14mg 100,67 STT Mẫu phân tích 21 STT Mẫu phân tích Kết (mg/viên) Kết so với hàm lƣợng nhãn (%) ống 12ml Viên nén Thực phẩm bảo vệ sức khoẻ Alpha Lipoic Acid 600mg 598,52mg ± 6,10mg 99,75 Thực phẩm chức Omega 3-4-6, Alpha Lipoic Acid 780mg 338,30mg ± 5,03mg 86,74 22 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trong trình thực nghiệm đạt kết sau:  Xây dựng thiết kế quy trình xác định Alpha Lipoic Acid lựa chọn thông số tối ưu điều kiện sắc kí lỏng Quy trình xây dựng đánh giá theo yêu cầu hệ thống ISO 17025:2017  Quy trình xây dựng phân tích hầu hết mẫu thực phẩm chức ALA có địa bàn  Quy trình xây dựng đưa vào tài liệu hướng dẫn phương pháp quan đơn vị Với kết thu được, tác giả nghiên cứu có số kiến nghị sau:  Phương pháp xây dựng thể đặc trưng 03 mẫu theo hướng dẫn AGL 03, phương pháp dùng hầu hết dạng thực phẩm chức có thị trường Tuy nhiên mẫu lạ có thành phần phức tạp chưa quy trình phân tích Chính sau phương pháp xây dựng cần phải định kỳ tháng lấy mẫu có hàm lượng hoạt chất (ALA) kiểm tra năm lần tham gia đánh giá so sánh liên phòng Nhằm nâng cao tay nghề cho nhân viên trường hợp gặp mẫu lạ có hàm lượng hoạt chất phức tạp, nghiên cứu để xây dựng bổ sung vào quy trình  Sau thiết kế quy trình xong cần phải xây dựng hướng dẫn phương pháp, phổ biến cho nhân viên nơi làm việc  Quy trình xây dựng đánh giá phương pháp áp dụng tham khảo nhiều tài liệu có uy tín khác Chính sử dụng để áp dụng cho mẫu hoạt chất khác cần nghiên cứu sau  ... tài ? ?Thiết kế quy trình phân tích Alpha Lipoic Acid số thực phẩm chức năng? ?? Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng đánh giá quy trình phân tích ALA số thực phẩm chức năng, quy trình phải tối ưu phân tích. .. tiêu nghiên cứu  Xây dựng quy trình phân tích ALA số thực phẩm chức năng, quy trình phải tối ưu phân tích hầu hết mẫu thực phẩm chức có chứa ALA thị trường  Quy trình xây dựng đánh giá theo... chiết cao  Xây đựng quy trình đánh giá quy trình phân tích Sau tiến hành thực phân tích đối chứng quy trình với phịng thí nghiệm khác  Khảo sát số mẫu thực phẩm chức theo quy trình tối ưu 2.1.3