Phân tích thành phần hóa học của lá mơ lông Việt Nam (Paederia lanuginosa)

VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI dP rm ac y, KHOA Y- DƯỢC ine an ĐÀM VIỆT HÙNG ed ic PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LÁ MƠ LÔNG VIỆT NAM M (Paederia lanuginosa) Co py rig ht @ Sc ho ol of KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2019 ea nd Ph arm ac KHOA Y- DƯỢC y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ici n ĐÀM VIỆT HÙNG ed PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LÁ MƠ LÔNG VIỆT NAM of M (Paederia lanuginosa) ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Sc KHÓA: QH.2014 TS NGUYỄN HỮU TÙNG Co py rig h t@ NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS LÊ THỊ THU HƯỜNG Hà Nội – 2019 y, VN U LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp, em nhận giúp đỡ, tạo điều kiện, đóng góp ý kiến bảo tận tình, tâm huyết thầy cơ, gia đình bạn bè Ph arm ac Em xin chân thành cảm ơn TS Lê Thị Thu Hường - giảng viên Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội TS Nguyễn Hữu Tùng – giảng viên Bộ mơn Hóa dược kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, người Thầy tận tâm hướng dẫn, hết lòng bảo tạo điều kiện giúp đỡ em suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khoá luận ici n ea nd Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược học Cổ truyền, Bộ mơn Hóa dược kiểm nghiệm thuốc Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, hướng dẫn giúp đỡ em trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp ed Em xin chân thành cảm ơn tất quý thầy cô Khoa Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học Khoa Co py rig h t@ Sc ho ol of M Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè, người ln theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp hồn thành khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày 26 tháng năm 2019 Sinh viên Đàm Việt Hùng y, VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Tên ký hiệu, viết tắt A Độ hấp thụ quang (Absorption) C Nồng độ (Concentration) EtOH Ethanol HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) MeOH Methanol R2 STT TLC UV nd ea ici n Hệ số tương quan ed Số thứ tự of M Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) ho ol Sc t@ rig h py Co Ph arm ac STT Vùng tử ngoại (Ultra Violete) y, VN U DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình vẽ, đồ thị Trang Hình 1.1 Cây mơ lơng arm ac Hình 1.2 Các iridoid glucoside có mơ lơng Hình 1.3 Iridoid dạng đime số Hình 1.4 Iridoid dạng đime số Ph Hình 1.5 Iridoid dạng đime số nd Hình 1.6 Một số hợp chất anthraquinon có mơ lơng Hình 2.1 Mẫu tươi mơ lơng ici n ea Hình 3.1 Sắc ký đồ pha đảo mẫu cao mơ với hệ dung môi MeOHH2O tỷ lệ 1:2 (A), 2:1 (B), 1:1 (C) ed Hình 3.2 Sắc ký đồ pha đảo cao tổng với hệ dung môi MeOH-H2O (1:2) 8 11 20 20 21 Hình 3.4 Phổ UV chất có thời gian lưu 6,099 phút 22 Hình 3.5 Phổ UV chất có thời gian lưu 10,212 phút 22 Hình 3.6 Phổ UV chất có thời gian lưu 11,146 phút 23 ho ol of M Hình 3.3 Sắc ký đồ HPLC mẫu cao mơ 23 Hình 3.8 Phổ UV chất có thời gian lưu 15,872 phút 24 Sc Hình 3.7 Phổ UV chất có thời gian lưu 15,039 phút 24 Hình 3.10 Phổ UV chất có thời gian lưu 17,012 phút 25 Hình 3.11 Phổ UV chất có thời gian lưu 18,539 phút 25 rig h t@ Hình 3.9 Phổ UV chất có thơi gian lưu 16,532 phút py Hình 3.12 Đồ thi miêu tả phụ thuộc độ hấp thụ quang vào nồng độ mẫu chuẩn iridoid Co 26 y, VN U DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang arm ac Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp mẫu cao mơ phản ứng hóa học 26 Bảng 3.3 Hàm lượng iridoid mẫu tươi tính dựa vào độ hấp thụ quang mẫu thử 27 rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph Bảng 3.2 Nồng độ giá trị độ hấp thụ quang tương ứng mẫu chuẩn iridoid py Co 19 y, VN U MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC BẢNG arm ac ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG – TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan mơ lông (Paederia lanuginosa) Ph 1.1.1 Đặc điểm họ Cà phê (Rubiaceae) 1.1.2 Vị trí, phân loại chi Paederia nd 1.1.3 Đặc điểm thực vật mơ lông ea 1.1.4 Tác dụng dược lý mơ lông ici n 1.1.5 Thành phần hóa học mơ lông CHƯƠNG – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 Đối tượng nghiên cứu 11 ed 2.1 2.2 Phương tiện nghiên cứu 11 M 2.2.1 Thiết bị dụng cụ 11 of 2.2.1 Hóa chất, dung mơi 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 12 ho ol 2.2.1 Phương pháp xử lý mẫu chiết mẫu 12 2.2.2 Phương pháp định tính mẫu cao mơ phản ứng hóa học 13 Sc 2.2.3 Phương pháp định tính sắc ký lớp mỏng 16 2.2.4 Phương pháp định tính kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 17 t@ 2.2.5 Phương pháp định lượng iridoid toàn phần 17 CHƯƠNG – KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN 18 rig h 3.1 Chiết xuất 18 Co py 3.2 Phân tích định tính nhóm chất hữu có cao mơ 18 3.2.1 Kết phân tích định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học 18 3.2.2 Kết phân tích định tính iridoid sắc ký lớp mỏng 20 3.2.3 Kết phân tích định tính sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 21 y, VN U 3.3 Định lượng iridoid tồn phần có mẫu cao mơ 25 3.4 Bàn luận 27 3.4.1 Về chiết xuất cao toàn phần từ mẫu mơ 27 3.4.2 Về định tính mẫu cao mơ 27 3.4.3 Về định lượng iridoid toàn phần 28 arm ac KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu tiếng Việt Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph B Tài liệu tiếng Anh y, VN U ĐẶT VẤN ĐỀ arm ac Thuốc phòng bệnh chữa bệnh điều chế từ nguồn chính: dược liệu hóa chất tổng hợp Riêng thảo dược, thống kê chưa đầy đủ Tổ chức y tế giới cho thấy 21.000 loài cỏ dân tộc giới dùng làm thuốc Không nước Á Đông mà nước phương Tây tiêu thụ lượng lớn dược liệu Do đó, việc sản xuất thuốc từ nguồn gốc thảo dược hướng nghiên cứu nhà nghiên cứu khoa học đặc biệt trọng ea nd Ph Nước ta nằm vùng khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, có thảm thực vật vơ phong phú đa dạng với nhiều loại thảo dược quý Trong có thuốc dân gian sử dụng từ hàng ngàn năm mơ, ngải cứu, lốt Tuy nhiên, thảo dược hầu hết sử dụng trực tiếp chế biến thành nguyên liệu thô, chưa phát huy hết cơng dụng chúng Một số phải kể đến mơ lông (Paederia lanuginosa họ Cà phê-Rubiaceae) thuộc chi Paederia M ed ici n Cây mơ lông (mơ tam thể) Paederia lanuginosa thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) loại thân leo, mọc hoang Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản Các phận sử dụng làm thuốc thuốc lợi tiểu, gây nôn, kháng viêm, diệt khuẩn… Các nghiên cứu trước mơ lơng cho thấy có chứa hai thành phần iridoid glucoside anthraquinon ho ol of Nghiên cứu hợp chất hóa học có hoạt tính từ mơ lơng hướng nghiên cứu triển vọng nhà khoa học giới quan tâm Tuy nhiên, Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý mơ lông chưa nhiều Do vậy, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Phân tích thành phần hóa học mơ lơng Việt Nam (Paederia lanuginosa)” Sc Mục tiêu đề tài: Chiết xuất xác định số thành phần hóa học có mơ lông Đề tài thực với nội dung sau: t@ Chiết xuất xác định nhóm hợp chất hữu thường có mẫu nghiên cứu phản ứng hóa học phương pháp sắc ký lớp mỏng rig h Xác định sơ nhóm hợp chất hữu có mẫu cao mơ lơng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Co py Định lượng iridoid tồn phần có mẫu cao mơ lông phương pháp đường chuẩn y, VN U CHƯƠNG – TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan mơ lông (Paederia lanuginosa) 1.1.1 Đặc điểm họ Cà phê (Rubiaceae) nd Ph arm ac Các thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) thường loại thân gỗ, bụi nửa bụi, thân thảo hay dây leo Lá mọc đối, ln có kèm với nhiều hình dạng khác Hoa thường tập hợp thành cụm hình xim, đơi hình đầu, mẫu Đài tràng hợp, tràng có tiền khai hoa thường vặn Trong vài trường hợp, số thùy tràng lên tới 10 Số nhị thường với số thùy tràng nằm xen kẽ thùy, dính vào ống tràng họng tràng Bộ nhụy gồm hai nỗn dính vào thành bầu dưới, có hai buồng Một vịi nhụy mảnh, đầu nhụy chia hai Mỗi buồng bầu chứa đến nhiều noãn đảo hay thẳng Quả mọng, hạch hay khô (quả mở phân thành hạch nhỏ) Hạt thường có phơi thẳng có nội nhũ đơi khơng có [8,18] ici n ea Trên giới, họ Cà phê (Rubiaceae) năm họ có nhiều lồi nhóm thực vật có hoa, với khoảng 13.000 nghìn lồi [18], phân bố 620 chi, 40 tông chia làm phân họ: Cinchonoideae, Ixoroideae, Rubioideae [18] of M ed Chúng tìm thấy tất lục địa, kể nam cực, với vài loài chi Coprosma, Galium, Sherardia [18] Phần lớn phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Ở Việt Nam, theo tài liệu nghiên cứu công bố họ Cà phê cho thấy, họ có khoảng 93 chi 450 lồi, phân bố rộng khắp nước [1,8] ho ol 1.1.2 Vị trí, phân loại chi Paederia Vị trí chi Paederia hệ thống phân loại thực vật Takhtajan (1987) [27]: Sc Giới thực vật (Planta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa Môi (Lamiidae) Bộ Cà Phê (Rubiales) Họ Cà Phê (Rubiaceae) Chi Paederia Co py rig h t@ Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) y, VN U CHƯƠNG – KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN 3.1 Chiết xuất H= 𝑎∗100∗100 𝑏∗(100−𝑥) Trong đó: nd a: Khối lượng cao ici n ea b: Khối lượng dược liệu khô x: Giá trị hàm ẩm (10,81%) arm ac Khối lượng dược liệu tươi: 2000 g Khối lượng dược liệu khô: 253,18 g Giá trị hàm ẩm dược liệu khô: 10,81% Khối lượng cao thu được: 29,22 g Hiệu suất chiết: 12,94% Hiệu suất chiết tính theo theo cơng thức: Ph - 3.2 Phân tích định tính nhóm chất hữu có cao mơ ed 3.2.1 Kết phân tích định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học Co py rig h t@ Sc ho ol of M Sử dụng phản ứng thơng thường để định tính nhóm chất hữu trình bày tài liệu [2,4], kết trình bày bảng 3.1 18 STT Nhóm chất Phản ứng Thuốc thử Trim -Hill Iridoid Kết ++ Phản ứng Cyanidin Flavonoid - arm ac y, VN U Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp mẫu cao mơ phản ứng hóa học - Tác dụng với FeCl3 Tác dụng với kiềm Nhận xét Có Khơng - Saponin Phản ứng tạo bọt Tanin Phản ứng với FeCl3 Steroid Khơng + Có Phản ứng Libermann-Burchardt - Khơng Tinh dầu Phản ứng với kiềm + Có Đường khử Phản ứng với thuốc thử Fehling - Khơng Terpennoid Phản ứng Salkowski ++ Có Alkaloid Phản ứng với thuốc thử Mayer + Có 10 Anthraquinon Phản ứng với NaOH + Có M ed ici n ea nd Ph - of Ghi chú: (-): phản ứng âm tính, (+): phản ứng dương tính, (++): phản ứng dương tính rõ Co py rig h t@ Sc ho ol Nhận xét: Dựa vào phương pháp định tính phản ứng hóa học, ta sơ kết luận mơ lơng có chứa nhóm chất: Iridoid, tanin, tinh dầu, terpennoid, alkaloid, anthraquinon; không phát có mặt nhóm chất: Flavonoid, saponin, steroid, đường khử 19 ea nd Ph arm ac y, VN U 3.2.2 Kết phân tích định tính iridoid sắc ký lớp mỏng ici n Hình 3.1 Sắc ký đồ pha đảo mẫu cao mơ với hệ dung môi MeOH-H2O tỷ lệ 1:2 (A), 2:1 (B), 1:1 (C) Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed Nhận xét: Dựa vào hình ảnh sắc ký đồ trên, ta chọn hệ dung môi MeOH-H2O (1:2) cho kết tách chất tốt Hình 3.2 Sắc ký đồ pha đảo cao tổng với hệ dung môi MeOH-H2O (1:2) 20 y, VN U Nhận xét: Sau phun thuốc thử H2SO4 hơ nóng mỏng, thấy xuất màu xanh dương màu nâu, đặc trưng cho thành phần iridoid [4] 3.2.3 Kết phân tích định tính sắc ký lỏng hiệu cao HPLC M ed ici n ea nd Ph arm ac Ta có hình ảnh sắc ký đồ HPLC mẫu cao Hình 3.3 Sắc ký đồ HPLC mẫu cao mơ ho ol of Nhận xét: Hình ảnh sắc ký đồ cho tín hiệu rõ nét, chất có mẫu cao tách riêng rẽ Hình ảnh cho thấy tính đặc hiệu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Co py rig h t@ Sc Ta có số hình ảnh phổ UV chất: 21 y, VN U arm ac Ph nd Hình 3.4 Phổ UV chất có thời gian lưu 6,099 phút ho ol of M ed ici n ea Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 325 nm, sơ xác định chất thuộc nhóm chất flavonoid [4,13] Sc Hình 3.5 Phổ UV chất có thời gian lưu 10,212 phút Co py rig h t@ Chất hấp thụ tia tử ngoại cực đại bước sóng khoảng 325 nm, sơ kết luận chất thuộc nhóm chất flavonoid [4,13] 22 y, VN U arm ac Ph Hình 3.6 Phổ UV chất có thời gian lưu 11,146 phút ho ol of M ed ici n ea nd Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 325 nm, sơ kết luận chất thuộc nhóm chất flavonoid [4,13] Hình 3.7 Phổ UV chất có thời gian lưu 15,039 phút Co py rig h t@ Sc Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 235 nm, sơ kết luận chất thuộc nhóm chất iridoid [4,19] 23 y, VN U arm ac Ph Hình 3.8 Phổ UV chất có thời gian lưu 15,872 phút ho ol of M ed ici n ea nd Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 260 nm, sơ xác định chất thuộc nhóm chất anthraquinon [4] Hình 3.9 Phổ UV chất có thơi gian lưu 16,532 phút Co py rig h t@ Sc Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 265 nm, sơ xác định chất thuộc nhóm chất anthraquinon [4] 24 y, VN U arm ac Ph Hình 3.10 Phổ UV chất có thời gian lưu 17,012 phút ho ol of M ed ici n ea nd Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 235 nm, sơ xác định chất thuộc nhóm chất iridoid [4,19] Hình 3.11 Phổ UV chất có thời gian lưu 18,539 phút Sc Chất hấp thụ tia UV cực đại bước sóng khoảng 330 nm, sơ xác định chất thuộc nhóm chất flavonoid [4,13] t@ Nhận xét: Dựa vào phổ UV chất ứng với thời gian lưu, sơ xác định mẫu cao có chứa chất thuộc nhóm anthraquinon, flavonoid, iridoid rig h 3.3 Định lượng iridoid tồn phần có mẫu cao mơ Co py Ta có kết dựng đường chuẩn mẫu iridoid bảng 3.2 hình 3.11: 25 0,5 0,25 0,125 Giá trị A 0,76 0,37 0,196 0,09 Đồ thị đường chuẩn iridoid 0.8 nd 0.5 0.4 0.3 ea Độ hấp thụ quang 0.6 0,04 Ph y = 0.7631x - 0.0045 R² = 0.9995 0.7 0,0625 arm ac Nồng độ (mg/ml) y, VN U Bảng 3.2 Nồng độ giá trị độ hấp thụ quang tương ứng mẫu chuẩn iridoid 0.2 ici n 0.1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 M ed Nồng độ (mg/ml) of Hình 3.12 Đồ thi miêu tả tương quan tuyến tính độ hấp thụ quang nồng độ mẫu chuẩn iridoid Co py rig h t@ Sc ho ol Ta có phương trình hồi quy tuyến tính iridoid tồn phần độ hấp thụ quang bước sóng 609 nm nồng độ dung dịch là: y = 0,7631x – 0,0045 với hệ số R2 = 0,9995 Dựa vào mật độ quang đo mẫu thử liệu đường chuẩn trên, tính nồng độ iridoid mẫu thử hàm lượng iridoid mẫu cao đặc, kết trình bày Bảng 3.3 26 y, VN U Bảng 3.3 Hàm lượng iridoid mẫu cao tính dựa vào độ hấp thụ quang mẫu thử Hàm lượng iridoid mẫu cao (mg/ml) (%) (mg/ml) (Abs) 12,5 0,237 0,316 25 0,473 0,625 40 0,754 0,994 2,52 2,5 2,48 Ph Giá trị A arm ac Nồng độ iridoid mẫu thử Nồng độ mẫu thử 𝑎 × 100 𝑏 ea X= nd Hàm lượng iridoid mẫu cao tính theo cơng thức: ici n Trong đó: a: Nồng độ iridoid mẫu thử tính dựa vào phương trình đường chuẩn ed b: Nồng độ dung dịch mẫu thử M X: Hàm lượng iridoid mẫu cao (%) ho ol 3.4 Bàn luận of Nhận xét: Như hàm lượng iridoid mẫu cao mơ xác định khoảng 2,5% 3.4.1 Về chiết xuất cao toàn phần từ mẫu mơ rig h t@ Sc Từ mẫu mơ lông thu mua chợ Bưởi, Hà Nội, tiến hành sấy khô sử dụng phương pháp chiết lạnh để chiết xuất cô lấy cao đặc Mẫu đem chiết lần cồn 80 độ, lần chiết vòng ngày Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị rẻ tiền nhiên hiệu suất chiết chưa cao Kết quả, từ 2000 g mẫu tươi, sấy khô thu 253,18 g mẫu khô, đem chiết xuất thu 29,22 g cao đặc Lượng cao đặc đạt tỉ lệ 11,54% so với lượng mẫu khô hiệu suất chiết đạt 12,94% Co py 3.4.2 Về định tính mẫu cao mơ Khóa luận tiến hành định tính mẫu cao mơ dựa theo phương pháp hóa học trình bày tài liệu Dược liệu học Thực tập dược liệu Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, cho kết nhanh nhiên kết 27 y, VN U phản ứng bị ảnh hưởng chất lượng hóa chất, độ nhạy phản ứng thao tác thực nghiệm Kết phép định tính thống với tài liệu nước mơ tam thể có mặt nhóm chất iridoid, anthraquinon, alkaloid, terpennoid, tinh dầu Nhóm sử dụng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng để xác định có mặt nhóm chất iridoid mẫu cao arm ac Ngồi ra, nhóm nghiên cứu tiến hành định tính mẫu cao việc sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Kết cho thấy, chất thuộc nhóm iridoid anthraquinon, cịn phát thêm chất thuộc nhóm flavonoid Đây phát quan trọng cần phải có thêm kỹ thuật khác để thẩm định tính xác kết ea nd Ph So với nghiên cứu trước PGS.TS Lê Ngọc Quang cộng mơ lông, việc sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao để định tính mẫu cao điểm đề tài khóa luận Tuy nhiên cần sử dụng thêm chất chuẩn vào phương pháp để định tính định lượng chất cụ thể có mẫu cao ici n 3.4.3 Về định lượng iridoid toàn phần Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed Về định lượng, nhóm sử dụng phương pháp đường chuẩn để định lượng iridoid toàn phần mẫu cao mơ Đây điểm đề tài Trước đó, Việt Nam chưa có nghiên cứu vào định lượng thành phần hóa học có mơ lơng Phương pháp thực nhanh đơn giản kết bị ảnh hưởng thao tác thực nghiệm tính xác máy đo độ hấp thụ quang Hàm lượng iridoid mẫu cao xác định khoảng 2,5% Để định lượng xác hàm lượng nhóm chất iridoid có mẫu mơ lơng, cần phải tách sử dụng chất chuẩn để định lượng hàm lượng chất riêng biệt nhóm chất 28 Kết luận y, VN U KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Qua thời gian nghiên cứu đề tài, nhóm nghiên cứu thu số kết phù hợp với mục đích nghiên cứu ban đầu sau: ici n ea nd Ph arm ac  Đã thu mẫu mơ lông sử dụng phương pháp chiết lạnh để tiến hành chiết xuất mẫu khô thu lấy cao đặc Kết từ 2000 g mẫu tươi, thu 253,18 g mẫu khô 22,29 g cao đặc Lượng cao đặc chiếm 11,54% so với lượng mẫu khô hiệu suất chiết đạt 12,94%  Đã định tính sơ nhóm chất có mơ lơng việc sử dụng phản ứng hóa học, kỹ thuật sắc ký lớp mỏng Kết phép định tính phù hợp với tài liệu tham khảo nói mơ tam thể có mặt nhóm chất chất iridoid, anthraquinon, alkaloid, terpennoid, tinh dầu Ngồi cịn phát thêm có mặt nhóm chất flavonoid định tính kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao  Đã định lượng hàm lượng iridoid tồn phần có mơ lông phương pháp đường chuẩn Kết quả, hàm lượng iridoid mẫu cao xác định khoảng 2,5% of M ed Tuy nhiên, điều kiện thời gian thực nghiên cứu ngắn, phương pháp nghiên cứu tương đối đơn giản, thao tác thực nghiệm chưa thật chuẩn xác số yếu tố khách quan khác, kết nghiên cứu số hạn chế định Có thể kể đến như: Sc ho ol  Do sử dụng phương pháp chiết xuất đơn giản nên hiệu suất chiết chưa cao  Các phép định tính phát nhóm chất chung chưa đưa chất cụ thể  Đã phát định lượng hàm lượng iridoid tồn phần có mẫu cao chưa tách định lượng chất cụ thể nhóm chất t@ Kiến nghị rig h Trên kết nghiên cứu nội dung nghiên cứu thành phần hóa học mơ tam thể Ngoài kết có được, nghiên cứu cịn nhiều hạn chế Để khắc phục hạn chế này, đề tài cần tiếp tục: Co py  Tiếp tục nghiên cứu tối ưu quy trình chiết sử dụng phương pháp chiết khác nhằm nâng cao hiệu suất chiết 29 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac y, VN U  Tiến hành chiết xuất phân đoạn mẫu cao toàn phần có với dung mơi ethyl acetat, butanol, n-hexan để nghiên cứu cụ thể thành phần hóa học mẫu  Sử dụng kỹ thuật sắc ký cột, sắc ký khối phổ để tiến hành phân lập hợp chất tinh khiết  Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng số chất cụ thể thuộc nhóm chất iridoid có mẫu mơ  Xây dựng số mơ hình sinh học để đánh giá thêm tác dụng dược lý mơ lông 30 A Tài liệu tiếng Việt y, VN U TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Tiến Bân chủ biên (2003), Danh mục loài thực vật Việt Nam, Tập II, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tr 1063-1093 arm ac Bộ môn Dược liệu (2010), Thực tập Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Hà Nội Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (2007), Đảm bảo chất lượng ea nd Ph thuốc số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr 107 – 113, tr 216-250 Bộ Y tế, Vụ khoa học đào tạo (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, tr 75-76 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học ici n thuốc, Nhà xuất Y học, tr 8-99, 162-196, 234-242 Trần Ngọc Ninh (1987), “Góp phần vào việc thống kê lồi thực vật có ho ol of M ed ích thuộc họ cà phê (Rubiaceae Juss) Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 9(2), 4044 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập chất hữu cơ, Nhà xuất ĐHQG TP HCM, tr 151-451 10 Trần Nhật Phương (2008), Học phần kỹ thuật Công Nghệ Sinh Học ProteomicSắc ký, tr 12 11 Trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ mơn hố phân tích (2006), Hố phân tích II, tr 17, 99-146, tr 173-222 Sc 12 Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr 199 – 222; 493 – 685 t@ B Tài liệu tiếng Anh Co py rig h 13 Ann E Stapleton, Virginia Walbot (2008), “Flavonoids Can Protect Maize DNA from the Induction of Ultraviolet Radiation Damage”, Plant Physiology, 105(3), 881-889 14 Brison Guiide, Ch Erdenechimeg, B Dejidmaa (2017), “Total phenolic, flavonoid, alkaloid and iridoid content and preventive effect of Lider-7-tang on lipopolysaccsaride-induced acute lung injury in rats”, Brazilian Journal of Medical and Biological Research, 50, 591-595 y, VN U 15 Dang Ngoc Quang and Le Huy Nguyen (2009), “Anthraquinones andcumarin from the roots of Paederia scandens”, Journal of Chemistry(Vietnam), 47, 428 16 Dang Ngoc Quang (2009), “Anthraquinones from the roots of Paederiascandens”, Journal of Chemistry (Vietnam), 47, 95-98 arm ac 17 Dang Ngoc Quang, Toshihiro Hashimoto, Masami Tanaka, NguyenXuan Dung, Yoshinori Asakawa (2002), “Iridoid glucosides from roots of 21 Inouye, H., Okigawa, ici n ea nd Ph Vietnamese Paederia scandens”, Phytochemistry, 60, 505-514 18 Goevarts R, M Ruhsam, L Andersson, E Robbrecht, D Bridson, A Davis, I Schanzer, B Sonke (2006), “World checklist of Rubiaceae”, Royal Botanic Gardens, 25(3), 52-55 19 Jefferson Rocha de Andrade, Ana Claudia Fernandes (2007), “Quantitative determination by HPLC of iridoids in the bark and latex of Himatanthus sucuuba”, ACTA AMAZONICA, 37, 119-122 20 Inouye H., Shimokawa, N and Okigawa, M., (1969), “Studieson monoterpene glucosides”, Chemical Pharmaceutical Bulletin, 17, 1942-1948 M and Shimokawa (1969), “Studies on ho ol of M ed monoterpeneglucosides - Artefacts formed during extraction of asperuloside andpaederoside” Chemical Pharmaceutical Bulletin, 17, 1949-1954 22 Inouye, Saito, S., Taguchi, H and Endo (1969), “Zwei neueiridoidglucoside aus gardenia jasminoides: gardenosid und geniposid” Tetrahedron Letters, 28, 2347-2350 23 Kapadia G., Shukla, Y N., Bose, A K., Fujiwara, H and Lloyd, H.A (1979), “Revised structure of paederoside, a novel monoterpene Smethyl Co py rig h t@ Sc thiocarbonate”, Tetrahedron Letters, 22, 1937-1938 24 Rajesh Kumar Soni, Raghuveer Irchhaiya, Vihangesh Dixit (2017), “Paederia foetida linn: phytochemistry, pharmacological and traditional uses”, Interational journal of pharmaceutical sciences and research, 4, 4525-4530 25 Sasidharan S, Chen Y, Saravanan D, Sundram KM, Latha Y (2011), “Extraction, isolation and characterization of bioactive compounds from plants extracts”, Afr J Tradit Complement Altern Med, 8, 1-10 26 Shukla Y., Lloyd, H A., Morton, J F and Kapadia, G J (1976) “Iridoid glucosides and other constituents of Paederia foetida”, Phytochemistry, 1989 27 Takhtajan A.L (1997), “Diversity and Classification of Flowering Plants, Columbia University Press”, New York, USA