Bào chế kem chống côn trùng từ tinh dầu sả chanh

nd Ph arm ac KHOA Y DƯỢC y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ici n ea NGUYỄN THỊ MAI of M ed BÀO CHẾ KEM CHỐNG CÔN TRÙNG TỪ TINH DẦU SẢ CHANH Co py rig h t@ Sc ho ol KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2019 nd Ph NGUYỄN THỊ MAI arm ac KHOA Y DƯỢC y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ici n ea BÀO CHẾ KEM CHỐNG CÔN TRÙNG TỪ TINH DẦU SẢ CHANH ho ol of M ed KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2014.Y Co py rig h t@ Sc Người hướng dẫn: TS NGUYỄN THỊ THANH BÌNH HÀ NỘI - 2019 y, VN U LỜI CẢM ƠN arm ac Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Nguyễn Thị Thanh Bình, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ suốt trình thực khóa luận suốt q trình học tập khoa Ph Tơi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô môn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược – Đại Học Quốc Gia Hà Nội tạo điều kiện cho tơi để hồn thành khóa luận ea nd Tôi xin cảm ơn thầy cô, Ban chủ nhiệm phòng ban Khoa Y Dược – Đại Học Quốc Gia Hà Nội kiến thức dạy suốt năm học tập rèn luyện khoa ed ici n Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè, người bên tôi, động viên, khích lệ giúp đỡ tơi sống học tập để tơi thực hồn thành tốt khóa luận Co py rig h t@ Sc ho ol of M Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 06 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Mai β-CD Beta – cyclodextrin Dược điển Việt Nam ea DĐVN Cục quản lý thực phẩm dược phẩm (Food and Drug administration) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) t@ Sc ho ol of M ed ici n FDA rig h py Ph Công thức nd CT Co arm ac Tên đầy đủ Tên viết tắt y, VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Bảng Tên bảng Số trang Nguyên liệu hóa chất sử dụng Bảng Công thức bào chế mẫu kem CT1 Bảng Công thức bào chế mẫu kem CT2 Bảng Công thức bào chế mẫu kem CT1 Bảng Công thức bào chế kem chứa tinh dầu sả chanh không sử dụng β-CD Bảng Công thức bào chế kem chứa tinh dầu sả chanh có sử dụng β-CD 25 Bảng Hiệu suất chiết citral 29 Bảng Kết định lượng citral sản phẩm 29 Bảng Theo dõi hàm lượng citral mẫu kem M1 32 Bảng 10 Theo dõi hàm lượng citral mẫu kem M2 33 Ph nd ea ici n ed M of ho ol Sc Số lượng kiến tập trung vùng giấy lọc bôi mẫu kem theo thời gian t@ rig h py arm ac Bảng Bảng 11 Co y, VN U DANH MỤC CÁC BẢNG 15 20 21 22 23 34 Tên hình Số trang Cơng thức cấu tạo geranial Hình Cơng thức cấu tạo neral Hình Các sản phẩm bán tổng hợp từ citral Hình Cấu trúc khơng gian kích thước cyclodextrin Hình Cấu trúc khơng gian β-CD Hình Quá trình tạo phức β-CD Hình Mẫu kem chứa tinh dầu sả chanh khơng có β-CD 24 Hình Mẫu kem chứa tinh dầu sả chanh có β-CD 26 Hình Sắc ký đồ hỗn hợp geraniol, citral bước sóng 200nm 242nm 28 ho ol of M ici n ea nd Ph arm ac Hình ed Hình y, VN U DANH MỤC CÁC HÌNH Sc Hình 10 Sắc ký đồ dung dịch mẫu trắng khơng có β-CD có β-CD 10 11 12 28 30 Hình 12 So sánh màu sắc kem M1 bào chế sau bảo quản 136 ngày 31 rig h t@ Hình 11 Sắc ký đồ dung dịch pha từ mẫu kem M1 M2 242nm py Co Hình 13 Số lượng kiến vùng bơi mẫu trắng vùng bôi sản phẩm 35 y, VN U MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU arm ac Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Các sản phẩm chống côn trùng 1.1.1 Một số hoạt chất sản phẩm chống côn trùng Ph 1.1.2 Một số sản phẩm phổ biến thị trường nd 1.2 Tinh dầu sả chanh citral ea 1.2.1 Tinh dầu sả chanh 1.2.2 Cấu trúc citral ici n 1.2.3 Tính chất citral ed 1.2.4 Ứng dụng citral M 1.2.5 Định lượng citral tinh dầu sả chanh HPLC of 1.3 Beta – cyclodextrin 10 1.3.1 Giới thiệu chung cyclodextrin 10 ho ol 1.3.2 Cấu trúc beta – cyclodextrin 11 1.3.3 Tính chất beta – cyclodextrin 11 Sc 1.3.4 Ứng dụng beta – cyclodextrin 12 t@ 1.4 Khái quát kem bôi da 13 rig h 1.4.1 Khái niệm 13 py 1.4.2 Kỹ thuật bào chế sản xuất kem bôi da 13 1.4.3 Các yêu cầu chất lượng kem bôi da 14 Co Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 y, VN U 2.1 Nguyên liệu, hóa chất 15 2.2 Máy móc, thiết bị 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp bào chế kem từ tinh dầu sả chanh 16 arm ac 2.3.2 Phương pháp định lượng citral sản phẩm 18 2.3.3 Phương pháp theo dõi độ ổn định sản phẩm 18 Ph 2.3.4 Phương pháp đánh giá hiệu chống côn trùng sản phẩm 19 nd Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THỰC NGHIỆM 20 3.1 Bào chế kem chứa tinh dầu sả chanh 20 ea 3.1.1 Bào chế kem chứa tinh dầu sả chanh không sử dụng β-CD 20 ici n 3.1.2 Bào chế kem chứa tinh dầu sả chanh có sử dụng β-CD 24 ed 3.2 Định lượng citral sản phẩm 26 M 3.3 Độ ổn định sản phẩm 31 3.4 Đánh giá hiệu chống côn trùng sản phẩm 34 of Chương 4: BÀN LUẬN 36 ho ol KẾT LUẬN 37 ĐỀ XUẤT 38 Co py rig h t@ Sc TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 y, VN U MỞ ĐẦU ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac Việt Nam nước nhiệt đới, với khí hậu nóng ẩm, điều kiện thuận lợi cho lồi trùng sinh sống phát triển Các lồi trùng khơng gây hại đến thực vật mà chúng cịn gây nhiều phiền phức, tổn hại đến người Cơn trùng đốt, cắn, giải phóng độc tố để lại tổn thương thể người, gây khó chịu, dị ứng, bỏng,…[1], chí số lồi cịn nguyên nhân gây bệnh nguy hiểm có khả dẫn đến tử vong Do đó, nhu cầu ngăn chặn tiêu diệt côn trùng tất yếu Các sản phẩm chống côn trùng đa dạng hình thức thành phần chủ yếu sản xuất từ chất hóa học DEET, IR3535… với độc tính nguy dị ứng [3], hầu hết sản phẩm không phù hợp sử dụng cho trẻ sơ sinh trẻ nhỏ Việc sử dụng sản phẩm chống côn trùng với thành phần tự nhiên an tồn, thân thiện với mơi trường để thay cho sản phẩm có nguồn gốc hóa học mang ý nghĩa lớn Trong tự nhiên, khơng lồi thực vật có khả xua đuổi, tiêu diệt côn trùng nhờ vào mùi hương, loại tinh dầu thường sử dụng cho thiết bị xơng xua đuổi trùng kể đến tinh dầu sả chanh, tinh dầu tràm, tinh dầu bạch đàn Trong số tinh dầu sả chanh gần gũi với đời sống ngày Thành phần tinh dầu sả chanh citral với hai đồng phân cis (hay gọi neral) trans (hay cịn gọi geranial) Chính hoạt chất gây nên mùi hương đặc trưng tác động chống côn trùng tinh dầu sả chanh [11] Co py rig h t@ Sc Trên thực tế, tinh dầu sả chanh khơng thích hợp dùng trực tiếp da citral gây kích ứng dùng liều cao, chế phẩm dạng xịt khó trì độ ổn định citral dễ bay Vì việc bào chế sản phẩm dạng kem từ tinh dầu sả chanh thích hợp Do chất dễ bay citral nên việc kết hợp với chất có khả bảo vệ hoạt chất khiến độ ổn định sản phẩm tốt β-cyclodextrin, oligosaccharide dạng vịng có khả bao lấy hoạt chất cấu trúc không gian dạng nón cụt thêm vào cơng thức bào chế để cải thiện độ ổn định sản phẩm β-cyclodextrin ứng dụng nhiều lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm với vai trò bảo vệ dược y, VN U chất, gia tăng khả hòa tan, dẫn truyền thuốc qua màng sinh học, che dấu mùi, vị,…[19] Nghiên cứu “Bào chế kem chống côn trùng từ tinh dầu sả chanh” thực với mục tiêu sau: arm ac 1, Bào chế kem chống côn trùng từ tinh dầu sả chanh 2, Sơ đánh giá độ ổn định sản phẩm Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph 3, Bước đầu chứng minh tác dụng chống côn trùng sản phẩm y, VN U arm ac Ph nd ea ici n py rig h t@ Sc ho ol of M ed Hình Sắc ký đồ hỗn hợp geraniol, citral bước sóng 200nm (A) 242nm (B) Co Hình 10 Sắc ký đồ dung dịch mẫu trắng khơng có β-CD (A) có β-CD (B) 28 y, VN U Hiệu suất chiết: Hiệu suất chiết xác định dựa đáp ứng dung dịch mẫu thử tự tạo so sánh với đáp ứng mẫu chuẩn nồng độ Ph arm ac Tiến hành pha mẫu thử: Cân xác khoảng 234,4mg mẫu trắng 15,6mg citral cho vào bình định mức 50ml, pha lỗng với hệ dung mơi quy trình tương tự sản phẩm Khi nồng độ citral dung dịch 60µg/ml Kết định lượng citral dung dịch hiệu suất chiết thể bảng 9,7106 ea Có β-CD 15,1274 60,0041 100,0068 15,1123 59,9360 99,8933 ed 9,7246 Nồng độ citral Hiệu suất thực tế (µg/ml) chiết (%) M Khơng có β-CD mAu*min geranial ici n mAu*min neral Mẫu nd Bảng Hiệu suất chiết citral of Như phương pháp cho hiệu suất chiết cao, gần với giá trị 100% Sc ho ol Từ đó, tiến hành định lượng citral hai mẫu kem, kết cho tín hiệu sắc ký neral geranial hình 11 Hàm lượng citral mẫu kem thể bảng t@ Bảng Kết định lượng citral sản phẩm Nồng độ citral dung dịch (µg/ml) Hàm lượng citral mẫu (%) M1 60,8899 6,0890 M2 60,4971 6,0497 Co py rig h Mẫu 29 y, VN U arm ac Ph nd ea ici n ed M of ho ol Sc Hình 11 Sắc ký đồ dung dịch pha từ mẫu kem M1 (A) M2 (B) 242nm Co py rig h t@ Như từ phương pháp định lượng đảm bảo tính đặc hiệu, tính đúng, tính xác, có độ tuyến tính hiệu suất chiết cao định lượng hàm lượng citral mẫu kem M1 6,098% M2 6,0497% 30 y, VN U 3.3 Độ ổn định sản phẩm Biến đổi cảm quan: ea nd Ph arm ac Theo dõi sản phẩm thời gian tháng bảo quản điều kiện thường, tránh ánh sáng Bằng quan sát cảm quan, nhận thấy rằng: mẫu kem M1 có thay đổi hình thức (màu vàng đậm hơn), thể chất khơ (hình 12), mẫu kem M2 khơng có thay đổi hình thức thể chất ed Thay đổi hàm lượng citral: ici n Hình 12 So sánh màu sắc kem M1 bào chế (A) sau bảo quản tháng (B) Co py rig h t@ Sc ho ol of M Tiến hành định lượng hàm lượng citral mẫu sản phẩm theo phương pháp mô tả mục 2.3.2 thời điểm khác Kết định lượng hàm lượng citral mẫu kem theo thời gian thống kê bảng bảng 10 31 y, VN U Bảng Theo dõi hàm lượng citral mẫu kem M1 Hàm lượng citral mẫu (%) 6,0890 13 6,1514 30 6,0016 43 5,7978 55 5,6403 76 5,5785 91,62 93 5,5498 91,14 100 M ed ici n ea nd Ph 101,02 98,56 95,22 92,63 5,4285 89,15 5,2225 85,77 Co py rig h t@ Sc ho ol 136 of 104 Tỷ lệ so với hàm lượng ban đầu (%) arm ac Ngày theo dõi 32 Ngày theo dõi Hàm lượng citral mẫu (%) 6,0497 12 5,9719 33 5,9495 50 5,8206 61 5,7826 93 5,7112 y, VN U Bảng 10 Theo dõi hàm lượng citral mẫu kem M2 Tỷ lệ so với hàm lượng ban đầu (%) arm ac 100 98,71 Ph 98,34 95,58 94,40 ici n ea nd 96,21 Sc ho ol of M ed Hàm lượng citral hai mẫu kem giảm dần theo thời gian Do citral dễ bay dẫn đến thay đổi hàm lượng Ở mẫu M1 hàm lượng citral giảm nhanh, so sánh với mẫu M2 có giảm hàm lượng citral tốc độ giảm chậm Sau tháng, hàm lượng citral mẫu M1 5,5498% tương đương 91,14 % hàm lượng ban đầu hàm lượng citral mẫu M2 5,7112% tương đương 94,4% hàm lượng ban đầu Do hạn chế mặt thời gian nên việc theo dõi độ ổn định mẫu kem M2 đạt tới ngày 93 (3 tháng) Co py rig h t@ Như việc sử dụng β-CD vào công thức bào chế mẫu kem M2 giúp gia tăng độ ổn định sản phẩm, thể hình thức, cảm quan sản phẩm hàm lượng citral ổn định so với mẫu M1 (không chứa β-CD) 33 y, VN U 3.4 Đánh giá hiệu chống côn trùng sản phẩm arm ac Tiến hành thử nghiệm bào chế sau bào chế tháng theo phương pháp mô tả mục 2.3.3 kết chụp lại (hình 13) số liệu trình bày bảng 11 Ph Bảng 11 Số lượng kiến tập trung vùng giấy lọc bôi mẫu kem theo thời gian ici n M1 MT1 M2 MT2 25 25 25 ed M 15 25 30 25 45 25 60 75 nd MT2 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 120 25 25 25 25 90 Co py rig h 105 of M2 Sau bào chế tháng ho ol MT1 Sc M1 ea Ngay sau bào chế t@ Thời gian (phút) Số lượng kiến tập trung (cá thể) 34 y, VN U arm ac Ph nd ea ici n M ed Hình 13 Số lượng kiến vùng bơi mẫu trắng (nửa bên trái) vùng bôi sản phẩm (nửa bên phải): mẫu M1 sau bào chế (A) sau tháng (B), mẫu M2 sau bào chế (C) sau tháng (D) Co py rig h t@ Sc ho ol of Toàn kiến tập trung vùng giấy lọc bôi mẫu trắng, cá thể di chuyển đến vùng bơi kem chứa tinh dầu sả chanh Kết chứng minh hiệu xua đuổi loài kiến hai mẫu kem M1 M2 với tỷ lệ 100%, có mặt β-CD khơng ảnh hưởng tới hiệu chống côn trùng kem Hiệu kem sau thời gian bảo quản tháng hai mẫu kem không đổi 35 y, VN U Chương 4: BÀN LUẬN arm ac Kem bào chế phương pháp nhũ hóa trực tiếp Tỷ lệ thành phần cơng thức đóng vai trị định chất lượng kem Tỷ lệ KOH ảnh hưởng đến giá trị pH kem Tỷ lệ tá dược pha dầu, tá dược pha nước ảnh hưởng đến thể chất kem of M ed ici n ea nd Ph Việc đưa β-CD vào công thức làm tăng độ ổn định cho sản phẩm Nhờ vào cấu trúc đặc biệt, β-CD tạo phức với citral cách “bắt giữ” phân tử citral vào bên cấu trúc khơng gian hình nón cụt, khiến cho phân tử khơng bị bay Q trình tạo phức diễn dung môi nước, phân tử nước “năng lượng cao” giải phóng khỏi “lỗ hổng” β-CD thay phân tử phân cực hơn, trường hợp nghiên cứu phân tử citral Liên kết phân tử citral với β-CD liên kết hydrogen, tương tác Vander waals tương tác lưỡng cực Tuy lượng β-CD sử dụng công thức bào chế không đảm bảo hiệu suất tạo phức với citral 100%, từ kết theo dõi hàm lượng citral mẫu chứng tỏ ý nghĩa β-CD thêm vào công thức bào chế Lượng β-CD thêm vào hạn chế đáng kể lượng citral bị bay trình bảo quản tháng Sc ho ol β-CD chất rắn, thêm vào hỗn hợp làm thay đổi thể chất kem Do cần điều chỉnh tỷ lệ thành phần tá dược công thức bào chế cho phù hợp với thể chất kem Co py rig h t@ Qua q trình thực nghiệm, hiệu chống trùng sản phẩm khơng chứa β-CD sản phẩm có chứa β-CD Như vậy, chưa thấy ảnh hưởng đến tác dụng sản phẩm thêm β-CD vào thành phần công thức bào chế 36 y, VN U KẾT LUẬN Như từ nghiên cứu “Bào chế kem chống côn trùng từ tinh dầu sả chanh” thu kết sau: arm ac - Bào chế kem chống côn trùng từ tinh dầu sả chanh, sử dụng β-CD để cải thiện công thức bào chế, nâng cao độ ổn định sản phẩm Ph - Sơ đánh giá độ ổn định sản phẩm thời gian tháng Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd - Bước đầu chứng minh hiệu chống trùng sản phẩm lồi kiến Camponotus consobrinus 37 y, VN U ĐỀ XUẤT Từ kết đạt được, nghiên cứu tiếp tục phát triển hướng sau: - Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm - Nâng quy mô bào chế arm ac - Theo dõi độ ổn định sản phẩm thời gian dài Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph - Đánh giá tác dụng sản phẩm số lồi trùng khác muỗi, rệp, … để khẳng định hiệu sản phẩm 38 y, VN U TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: [1] GS.TS Nguyễn Viết Tùng (2006), Giáo Trình Cơn Trùng Học Đại cương, NXB Giáo Dục, pp.6-9 arm ac [16] Vụ khoa học đào tạo – Bộ Y tế (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, pp.68-84 Ph [24] Trường Đại Học Dược Hà Nội – Bộ Môn Bào Chế (2004), Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc (tập 2), NXB Y học, pp.40-88 ea nd [28] Bộ Y tế (2012), Kiểm nghiệm thuốc (dùng cho đào tạo dược sĩ đai học), Nhà xuất giáo dục Việt Nam, pp.135-184 ici n [29] Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hố học vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật,pp.10-59 M ed [30] Bộ y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, NXB Y học Tiếng Anh: ho ol of [3] H O.Lawal*, G.O.Adewuyi, A B Fawehinmi, A.O Adeogun, S O Etatuvie (2012), Bioassay of Herbal Mosquito Repellent Formulated from the Essential Oil of Plants, Journal of Natural Products, 5, pp.109-115 Sc [4] U.S Environmental Protection Agency (2005), New Pesticide Fact Sheet: Picaridin rig h t@ [5] Larry Goodyer, Steven Schofield (2018), Mosquito Repellents for the Traveller: Does Picaridin Provide Longer Protection than DEET?, Journal of Travel Medicine, 25, pp.10-15 Co py [6] U.S Environmental Protection Agency (2000), 3-[N-Butyl-N-acetyl]aminopropionic acid, ethyl ester (IR3535) (113509) Fact Sheet 39 y, VN U [7] Adeniran O.I.*, Fabiyi E et al (2012), A cream formulation of an effective mosquito repellent: a topical product from lemongrass oil (Cymbopogon citratus), Stapf Journal of Natural Product and Plant Resource, (2), pp.322327 arm ac [8] Dalziel, J M (1937), Flora of West Tropical Africa, Crown Agents, London, pp.454-455 Ph [9] Antonieta Rojas de Arias , Guillermo Schmeda‐Hirschmann, Adalberto Falcao (1992), Feeding deterrency and insecticidal effects of plant extracts on Lutzomyia longipalpis, Phytotherapy Research, (2), pp.64-67 ici n ea nd [10] Shigeharu Inouye, Toshio Takizawa, Hideyo Yamaguchi (2001), Antibacterial activity of essential oils and their major constituents against respiratory tract pathogens by gaseous contact, Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 47 (5), pp.565-573 M ed [11] Teuscher E (2006), Medicinal Spices-A Handbook of Culinary Herbs, Spices, Spice Mixtures and Their Essential Oils, Stuttgart, Germany, Medpharm Scientific Publishers ho ol of [13] Onawunmi, G.O (1989), Evaluation of the antimicrobial activity of citral, Lettes in Applied Microbiology, (3), pp.105-108 Sc [15] O'Neil, M.J (2006), The Merck Index – An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals, Whitehouse Station, NJ: Merck and Co.,Inc., pp.389 rig h t@ [17] Roopa Gaonkar, S Yallappa, B.L Dhananjaya Gurumurthy Hegde (2016), Development and validation of Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography for citral analysis from essential oils, Journal of Chromatography B, 1036 – 1037, pp.50-56 Co py [18] Diogo Mirona, Fernanda Battistia , Carla Schwengber Ten Catenb , Paulo Mayorgaa and Elfrides Eva Scherman Schapoval (2012), Spectrophotometric Simultaneous Determination of Citral Isomers in Cyclodextrin Complexes 40 y, VN U with Partial Least Squares Supported Approach, Current Pharmaceutical Analysis, 8, pp.401-408 [19] Thomas Wimmer (2012), "Cyclodextrins" Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, Wiley-VCH puplisher arm ac [20] Erem Bilensoy (2011), Cyclodextrins in Pharmaceutics, Cosmetics and Biomedicine, John Wiley & Sons, Inc Ph [22] T.Loftson, M.E Brewster, M Masson (2004), Role of cyclodextrins in Improving oral drug delivery, Am J Drug Deliv, 2(4), pp.261-275 nd [23] R Arun et al (2008), Cyclodextrins as drug carrier molecule: a review, Sci Pham, 76, pp.567-598 ed ici n ea [25] Ms Shubhangi Sharad Bhide*, Ms Babita Himmatrao More, Ms Suvarna Prabhakar Gajare, Mr Sachin Vinayak Tembhurne Bhide et al (2014), Development of mosquito repellent formulations and evaluation for its activity, World Journal of Pharmaceutical Research, 3(2), pp.2910-2917 ho ol of M [26] Ravindra RP, Muslim PK (2013), Comparison of physical characteristics of vanishing Cream base, cow ghee and shata-dhauta- ghrita as per pharmacopoeial standards, International Journal of Pharma and Bio Sciences, 4(4), pp.14-21 t@ Sc [27] Mohamad Adib Bin Edris, Awang Soh Yusuff Mamat, Muhammad Shahzad Aslam*, Muhammad Syarhabil Ahmad (2016), Insect Repellent Properties of Melaleuca alternifolia, Recent Advances in Biology and Medicine, 2, pp.57-61 rig h [31] ICH (2010), International conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human use py Trang web: Co [2] https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/4284 [12] https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Citral 41 y, VN U [14] https://toxnet.nlm.nih.gov/cgibin/sis/search2/r?dbs+hsdb:@term+@rn+@rel+5392-40-5 Co py rig h t@ Sc ho ol of M ed ici n ea nd Ph arm ac [21] https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/beta-CYCLODEXTRIN 42