đánh giá tác dụng và tìm hiểu cơ chế hóa sinh của cao chiết cồn từ cây thạch tùng răng cưa (huperzia serrata (thunb ) trevis) trên mô hình ruồi giấm chuyển gen mang bệnh alzheimer

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐẶNG THỊ DUYÊN ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG VÀ TÌM HIỂU CƠ CHẾ HĨA SINH CỦA CAO CHIẾT CỒN TỪ CÂY THẠCH TÙNG RĂNG CƢA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS) TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM CHUYỂN GEN MANG BỆNH ALZHEIMER LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐẶNG THỊ DUYÊN ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG VÀ TÌM HIỂU CƠ CHẾ HĨA SINH CỦA CAO CHIẾT CỒN TỪ CÂY THẠCH TÙNG RĂNG CƢA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS) TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM CHUYỂN GEN MANG BỆNH ALZHEIMER LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 8720208 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Phạm Thị Nguyệt Hằng PGS TS Nguyễn Thị Lập HÀ NỘI 2020 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực đề tài nghiên cứu, em nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô, anh chị đồng nghiệp, gia đình tập thể bạn bè Đầu tiên, tất kính trọng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Phạm Thị Nguyệt Hằng PGS TS Nguyễn Thị Lập, hai người thầy ln tận tình hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài nghiên cứu Tiếp đến, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến anh chị khoa dược lý – sinh hóa – Viện Dược Liệu Quốc Gia giúp đỡ, hướng dẫn em kĩ thuật tạo điều kiện để em hồn thành nghiên cứu thực nghiệm khoa Và em xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu, phòng sau đại học tồn thể thầy giáo trường Đại Học Dược Hà Nội dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian học tập thực đề tài nghiên cứu Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè bên ủng hộ, động viên giúp đỡ em vượt qua khó khăn q trình học tập nghiên cứu Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn, đề tài nghiên cứu cịn nhiều thiếu sót Em mong nhận góp ý thầy để đề tài hoàn thiện Em xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ quý báu Hà Nội, ngày 30 tháng 03 năm 2020 Học viên Đặng Thị Duyên i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ vii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh Alzheimer 1.1.1 Sơ lược bệnh Alzheimer 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Nguyên nhân gây bệnh yếu tố di truyền học 1.1.4 Yếu tố nguy yếu tố bảo vệ: 1.1.5 Cơ chế bệnh sinh 1.1.6 Đặc điểm lâm sàng 10 1.1.7 Một số mơ hình nghiên cứu bệnh Alzheimer 11 1.1.8 Các thuốc điều trị 12 1.2 Tổng quan Thạch Tùng Răng Cưa: 16 1.2.1 Vị trí phân loại đặc điểm thực vật Thạch tùng cưa: 16 1.2.2 Bộ phận dùng 17 1.2.3 Thành phần hóa học 17 1.2.4 Tác dụng dược lý 19 1.3 Tổng quan ruồi giấm chuyển gen 22 1.3.1 Tên gọi, vị trí phân loại 22 1.3.2 Đặc điểm 22 1.3.3 Ưu điểm sử dụng ruồi giấm phịng thí nghiệm 22 1.3.4 Chu kì vịng đời 24 1.3.5 Hệ thống GAL4/UAS 25 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng nguyên liệu nghiên cứu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 30 ii 2.2.1 Nhân dòng ruồi giấm chuyển gen hAPP mang bệnh Alzheimer 31 2.2.2 Đánh giá tác dụng cải thiện bệnh Alzheimer cao chiết cồn TTRC mơ hình ruồi giấm mang bệnh Alzheimer thử nghiệm hành vi 32 2.2.3 Bước đầu tìm hiểu chế tác dụng cao chiết cồn từ Thạch tùng cưa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis): 38 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 43 3.1 Đánh giá hiệu cải thiện bệnh cao chiết cồn từ Thạch tùng cưa mơ hình ruồi giấm mang bệnh Alzhiemer thử nghiệm hành vi 43 3.2 Bước đầu tìm hiểu chế tác dụng cao chiết cồn từ Thạch tùng cưa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) mơ hình ruồi giấm chuyển gen mang bệnh Alzheimer 53 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 57 4.1 Về mơ hình nghiên cứu 57 4.1.1 Về việc lựa chọn mơ hình ruồi giấm mang bệnh Alzheimer 57 4.1.2 Về việc lựa chọn protein tiền chất amyloid enzym acetylcholinesterase 58 4.1.3 Về việc lựa chọn mức liều 2mg/ml 4mg/ml 60 4.2 Về kết nghiên cứu 60 4.2.1 Đánh giá khả nhớ mùi ấu trùng ruồi giấm 60 4.2.2 Đánh giá khả vận động ruồi giấm 61 4.2.3 Đánh giá khả sống sót ruồi giấm trưởng thành 62 4.2.4 Bước đầu tìm hiểu chế tác dụng cao chiết cồn từ Thạch tùng (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) cưa mơ hình ruồi giấm chuyển gen mang bệnh Alzheimer 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Viết tắt Viết đầy đủ tiếng anh Viết đầy đủ tiếng việt AA Alzheimer's Association Hiệp hội Alzheimer AchE Acetylcholinesterase Acetylcholinesterase AD Alzheimer disease Bệnh Alzheimer Nghiên cứu chăm sóc sức AHRQ Healthcare Research and Quality khỏe chất lượng AM n- Amyl acetate n- Amyl acetat ApoE Apolipoprotein E Apolipoprotein E Amyloid beta (A4) precursor Protein tiền chất amyloid APP protein ATCI Acetylthiocholin iodid Acetylthiocholin iodid Aβ β-amyloid β-amyloid 10 BACE1 β-site APP-cleaving β-site APP-cleaving 11 BPB Bromophenol blue Bromophenol màu xanh 12 BuchE Butyrylcholinesterase Butyrylcholinesterase 13 HRP Horseradish peroxidase Horseradish peroxidase 14 LDL Low-density lipoprotein Lipoprotein tỷ trọng thấp American National Institute of Viện Lão Khoa quốc gia Gerontology Hoa Kỳ National Institute of China Học viện quốc gia Trung Exellence Quốc (National Institute of Viện quốc gia rối loạn Neurological and thần kinh giao tiếp đột Communicative Disorders and quỵ - hiệp hội bệnh Stroke – Alzheimer’s Disease Alzheimer rối loạn NINCDS- and Related Disorders liên quan ADRDA Association 15 16 17 NIA NICE iv National Institute of Viện rối loạn thần kinh Neurological Disorders and đột quỵ quốc gia 18 NINDS Stroke 19 NMDA N-methyl D- aspartate 20 OBX Olfactory bulbectomized 21 OCT 1-octanol Phẫu thuật loại bỏ vùng khứu giác 1-octanol Peroxisom prolifrator activated Thụ thể hoạt hóa tăng sinh N-methyl D- aspartat 22 PPARγ receptor γ peroxisom γ 23 PVDF Polyvinyllidene difluoride Polyvinyllidene difluoride 24 TTRC Huperzia serrata (Thunb.) Trevis Thạch tùng cưa 25 SDS Sodium dodecyl sulphate Sodium dodecyl sulphate Sodium dodecyl sulphate Điện di gel polyacrylamide SDS- polyacrylamide gel với SDS 26 PAGE electrophoresis 27 TBS Tris buffer saline Đệm tris 28 βAP β-amyloid peptid β-amyloid peptid v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Hóa chất sử dụng nghiên cứu đề tài 28 Bảng 2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 29 Bảng Tác dụng cao chiết cồn TTRC lên hoạt độ acetylcholinesterase **: p