1. Định lượng Paracetamol trong viên nén Paracetamol 500mg bằng phương pháp đo quang Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên và nghiền thành bột mịn Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng khoảng 0,075g Paracetamol vào bình định mức 100ml, thêm 25ml dd NaOH 0,1M và 50ml H2O, lắc 15 phút, thêm nước đến định mức. Lắc đều, lọc qua giấy lọc khô, bỏ 20ml dịch lọc đầu thu được dd A Lấy chính xác 5ml dd A cho vào bình định mức 50ml. Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc đều thu được dd B Lấy chính xác 5ml dd B cho vào bình định mức 50ml, thêm 5ml NaOH 0,1M, Thêm nước đến định mức, lắc đều Đo độ hấp thụ của dung dịch thu được ở bước sóng 257nm, dùng cốc dày 1cm. Mẫu trắng là dung dịch NaOH 0,01M Tính hàm lượng Paracetamol, C8H9NO2 theo A(1%,1cm). Lấy 715 là giá trị A (1%,1cm) ở bước sóng 257nm Yêu cầu: Hàm lượng của Paracetamol , C8H9NO2 từ 95,0105,0% so với hàm lượng ghi trên nhãn Kết quả: STT KL viên (g) STT KL viên (g) STT KL viên (g) STT KL viên (g) 1 0,6055 6 0,5875 11 0,5994 16 0,5905 2 0,5972 7 0,5964 12 0,5921 17 0,5882 3 0,5900 8 0,5979 13 0,5984 18 0,6018 4 0,5966 9 0,6032 14 0,5867 19 0,5916 5 0,5928 10 0,5948 15 0,5927 20 0,5904 mtb = 0,5947 g => mcân theo lý thuyết = 0,0892g mcân thực = 0,0894g => mpara thực = 0,0752 g Lần A 1 0,545186 2 0,545294 3 0,545170 => A_T = 0,545217 Ta có: A= A_(1%)1cm . l . C => AC = A_(1%)1cm . l = 715 A_TC_T = AC = 715 => C_T = A_T715 => C_bđ = C_T . 100 = (A_T . 100)715 m_paracetamol= (C_bđ . 100)100 = (A_T . 100 )(715 ) = (0,545217 . 100)(715 ) = 0,0763 (g) => H% = m_paracetamolm_(para thực) .100% = 0,07630,0752 . 100% = 101,46% Vậy chế phẩm đạt yêu cầu về định lượng theo TCCS 2. Chỉ tiêu và yêu cầu STT Chỉ tiêu Yêu cầu 1 Tính đặc hiệu Phổ UV mẫu thử tương tự phổ UV của mẫu chuẩn Paracetamol ( có cực đại hấp thụ trong khoảng 257 + 2nm) Độ hấp thụ của mẫu Placebo < 2% so với mẫu có hoạt chất 2 Độ thích hợp hệ thống Cực đại hấp thụ trong khoảng 257 + 2nm RSD giá trị mật độ quang < 2% 3 Độ tuyến tính Hệ số tương quan r > 0,995 4 Độ đúng Tỷ lệ thu hồi trong khoảng 98% 102% RSD tỷ lệ thu hồi < 2% 5 Khoảng xác định Khoảng xác định nằm trong khoảng tuyến tính và đạt độ đúng 6 Độ chính xác (độ lặp lại) % Hàm lượng mẫu thử đạt như trong chuyên luận RSD < 2% 3. Cách tiến hành Pha dd NaOH 0,1M: Cân 2,00 g NaOH cho vào ống đong 500 ml, thêm nước vừa đủ, khuấy đều thu được dd NaOH 0,1M Pha mẫu trắng: Lấy 5 ml dd NaOH 0,1M vừa pha cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ, lắc đều thu được dd NaOH 0,01M Pha mẫu thử: Cho lần lượt vào 6 bình định mức 50ml mỗi bình chính xác 5ml dd B của phần định lượng, thêm vào mỗi bình 5ml NaOH 0,1M, thêm nước đến định mức, lắc đều thu được 6 mẫu thử nồng độ 100% Pha mẫu chuẩn: Cân chính xác 0,075 g paracetamol mcân thực tế = 0,0754 g Tiến hành tương tự như phần định lượng đến khi thu được dd B Lấy chính xác lần lượt 3,5 ml ; 4,5 ml; 5 ml; 6 ml; 6,5 ml dd B cho vào 5 bình định mức 50ml riêng biệt. Thêm vào mỗi bình 5ml dd NaOH 0,1 M. Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc đều thu được các dd chuẩn có nồng độ tương ứng là 70%, 90%, 100%, 120%, 130%. Pha mẫu placebo: Cân lần lượt tá dược tương ứng với 20 viên, trộn đều, đồng nhất. Mỗi viên chứa 0,5 g paracetamol có 0,153 g tá dược => Với 0,075g paracetamol tương ứng có 0,02295 g tá dược Cân chính xác 0,02295 g tá dược mtá dược cân thực tế= 0,2230 g Tiến hành tương tự như phần định lượng thu được mẫu placebo. Pha mẫu tự tạo: Cân chính xác 0,075 g paracetamol và 0,02295 g tá dược mpara cân thực tế= 0,0776 g mtá dược cân thực tế= 0,0230g Tiến hành tương tự như phần định lượng đến khi thu được dd A Cho lần lượt vào 3 bình định mức 50ml mỗi bình chính xác 5ml dd A, thêm nước đến định mức, lắc đều thu được dd B1, B2 , B3 Lấy chính xác lần lượt 4 ml, 5ml, 6ml dd B1 cho vào 3 bình định mức 50 ml riêng biệt. Thêm vào mỗi bình 5ml dd NaOH 0,1 M. Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc đều thu được các dd tự tạo có nồng độ tương ứng là 80%, 100%, 120%. Làm tương tự với các dd B2 và B¬3. 3.1. Tính đặc hiệu Thực hiện trên các mẫu: Mẫu trắng Mẫu placebo Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 gml Mẫu thử Mẫu tự tạo => Kết quả: Mẫu placebo Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 gml Mẫu thử Mẫu tự tạo Nhận xét: Phổ UV mẫu thử tương tự phổ UV của mẫu chuẩn Paracetamol ( đều có cực đại hấp thụ tại bước sóng 257 nm) Mẫu A Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 gml 0,536196 Mẫu thử 0,544930 Mẫu tự tạo 0,546602 Mẫu placebo 0,021116 Mẫu placebo không có cực đại hấp thụ trong khoảng 257 + 2nm Vậy chỉ tiêu về tính đặc hiệu đạt. 3.2. Độ thích hợp hệ thống Thực hiện trên mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 gml Kết quả: A Lần 1 1 0,536771 2 0,536658 3 0,536774 Lần 2 4 0,537059 5 0,537046 6 0,536899 => A_tb = 0,536868 SD = 1,6215.〖10〗(4) RSD = SDA_tb = (1,6215.〖10〗(4))0,536868 = 0,0302 % < 2% Vậy chỉ tiêu về độ thích hợp hệ thống đạt. 3.3. Độ tuyến tính Thực hiện trên mẫu chuẩn ở 5 nồng độ tương ứng 70%, 90%, 100%, 120%, 130% Kết quả: Nồng độ A đo A_tb 70% 1 0,370196 0,370267 2 0,370184 3 0,370421 90% 1 0,485913 0,485853 2 0,485863 3 0,485783 100% 1 0,536771 0,536734 2 0,536658 3 0,536774 120% 1 0,645242 0,645292 2 0,645267 3 0,645366 130% 1 0,708124 0,708119 2 0,708106 3 0,708127 r2 = 0,9994 => Hệ số tương quan r = 0,9997 > 0,995 Vậy chỉ tiêu về độ tuyến tính đạt. 3.4. Độ đúng Thực hiện trên mẫu tự tạo 80%, 100%, 120% (mỗi nồng độ 3 mẫu) Kết quả: Ta có: mpara cân thực tế= 0,0776 g A= A_(1%)1cm . l . C => AC = A_(1%)1cm . l = 715 A_TC_T = AC = 715 => C_T = A_T715 => C_bđ = C_T . 100 = (A_T . 100)715 m_paracetamol= (C_bđ . 100)100 = (A_T . 100 )(715 ) 100ml dd chứa 0,0776g paracetamol tương ứng với nồng độ 100% =>100 ml dd chứa m_paracetamol tương ứng với nồng độ X% => C_đo = X = (m_paracetamol .100)0,0776 (%) Tỷ lệ thu hồi = C_đoC_thực . 100% Nồng độ Mẫu A đo A_tb C_đo Tỷ lệ thu hồi 80% 1 0,443190 0,443323 79,90% 99,88% 0,443386 0,443392 2 0,443699 0,443709 79,97% 99,96% 0,443715 0,443714 3 0,448137 0,448092 80,76% 100,95% 0,448075 0,448063 100% 1 0,547387 0,547345 98,65% 98,68% 0,547334 0,547315 2 0,546275 0,546291 98,46% 98,46% 0,546264 0,546333 3 0,556104 0,556102 100,23% 100,23% 0,556188 0,556015 120% 1 0,659502 0,659475 118,86% 99,05% 0,659498 0,659424 2 0,668431 0,668265 120,44% 100,37% 0,668197 0,668166 3 0,669962 0,669918 120,74% 100,62% 0,669950 0,669841 Tất cả các mẫu tự tạo đều có tỷ lệ thu hồi trong khoảng 98102% RSD = SD〖TLTH〗_tb = 0,876799,8 = 0,878 % < 2% Vậy chỉ tiêu về độ đúng đạt. 3.5. Khoảng xác định Thực hiện trên mẫu tự tạo 80%, 100%, 120% (mỗi nồng độ 3 mẫu) Kết quả: Khoảng xác định (80%120%) nằm trong khoảng tuyến tính (70%130%) và đạt độ đúng. Vậy chỉ tiêu về khoảng xác định đạt. 3.6. Độ chính xác (Độ lặp lại) Thực hiện trên 6 mẫu thử nồng độ 100% Kết quả: mpara thực = 0,0752 g Ta có: A= A_(1%)1cm . l . C => AC = A_(1%)1cm . l = 715 A_TC_T = AC = 715 => C_T = A_T715 => C_bđ = C_T . 100 = (A_T . 100)715 m_paracetamol= (C_bđ . 100)100 = (A_T . 100 )(715 ) => H% = m_paracetamolm_(para thực) .100% = (A_T . 100)(0,0752 .715) . 100% Mẫu thử A đo A_T H% 1 0,545186 0,545217 101,40 % 0,545294 0,545170 2 0,536254 0,536316 99,75% 0,536303 0,536392 3 0,541152 0,541280 100,67% 0,541403 0,541286 4 0,541749 0,541789 100,76% 0,541817 0,541800 5 0,541242 0,541237 100,66% 0,541251 0,541218 6 0,540345 0,540357 100,50% 0,540348 0,540378 Tất cả 6 mẫu thử đều có hàm lượng đạt như trong chuyên luận (từ 95,0% 105,0%) RSD = SD〖H%〗_tb = 0,5298100,62 = 0,526 % < 2% Vậy chỉ tiêu về độ chính xác (độ lặp lại) đạt. Kết luận: Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất viên nén Paracetamol 500mg đạt theo T
BÁO CÁO THỰC HÀNH Bài 6: Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất viên nén Paracetamol 500mg phương pháp đo quang Công thức viên nén Paracetamol 500mg Thành phần Paracetamol Lactose Tinh bột sắn Dextrin Talc Mg stearat Khối lượng 500,00 mg 79,00 mg 65,50 mg 5,00 mg 3,00 mg 0,50 mg Định lượng Paracetamol viên nén Paracetamol 500mg phương pháp đo quang Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 0,075g Paracetamol vào bình định mức 100ml, thêm 25ml dd NaOH 0,1M 50ml H2O, lắc 15 phút, thêm nước đến định mức Lắc đều, lọc qua giấy lọc khô, bỏ 20ml dịch lọc đầu thu dd A Lấy xác 5ml dd A cho vào bình định mức 50ml Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc thu dd B Lấy xác 5ml dd B cho vào bình định mức 50ml, thêm 5ml NaOH 0,1M, Thêm nước đến định mức, lắc Đo độ hấp thụ dung dịch thu bước sóng 257nm, dùng cốc dày 1cm Mẫu trắng dung dịch NaOH 0,01M Tính hàm lượng Paracetamol, C8H9NO2 theo A(1%,1cm) Lấy 715 giá trị A (1%,1cm) bước sóng 257nm Yêu cầu: Hàm lượng Paracetamol , C8H9NO2 từ 95,0-105,0% so với hàm lượng ghi nhãn Kết quả: STT KL viên (g) STT KL viên (g) STT KL viên (g) STT KL viên (g) 0,6055 0,5875 11 0,5994 16 0,5905 0,5972 0,5964 12 0,5921 17 0,5882 0,5900 0,5979 13 0,5984 18 0,6018 0,5966 0,6032 14 0,5867 19 0,5916 0,5928 10 0,5948 15 0,5927 20 0,5904 mtb = 0,5947 g => mcân theo lý thuyết = 0,0892g mcân thực = 0,0894g => mpara thực = 0,0752 g Lần A 0,545186 0,545294 0,545170 = 0,545217 Ta có: A= l C => = l = 715 = = 715 => = => = 100 = = = = = 0,0763 (g) => H% = = 100% = 101,46% Vậy chế phẩm đạt yêu cầu định lượng theo TCCS Chỉ tiêu yêu cầu ST T Chỉ tiêu Yêu cầu Tính đặc hiệu Độ thích hợp hệ thống Độ tuyến tính Độ Khoảng xác định - Phổ UV mẫu thử tương tự phổ UV mẫu chuẩn Paracetamol ( có cực đại hấp thụ khoảng 257 + 2nm) - Độ hấp thụ mẫu Placebo < 2% so với mẫu có hoạt chất - Cực đại hấp thụ khoảng 257 + 2nm - RSD giá trị mật độ quang < 2% - Hệ số tương quan r > 0,995 - Tỷ lệ thu hồi khoảng 98% - 102% - RSD tỷ lệ thu hồi < 2% - Khoảng xác định nằm khoảng tuyến tính đạt độ Độ xác (độ lặp - % Hàm lượng mẫu thử đạt chuyên luận lại) - RSD < 2% Cách tiến hành * Pha dd NaOH 0,1M: Cân 2,00 g NaOH cho vào ống đong 500 ml, thêm nước vừa đủ, khuấy thu dd NaOH 0,1M * Pha mẫu trắng: Lấy ml dd NaOH 0,1M vừa pha cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ, lắc thu dd NaOH 0,01M * Pha mẫu thử: Cho vào bình định mức 50ml bình xác 5ml dd B phần định lượng, thêm vào bình 5ml NaOH 0,1M, thêm nước đến định mức, lắc thu mẫu thử nồng độ 100% * Pha mẫu chuẩn: Cân xác 0,075 g paracetamol mcân thực tế = 0,0754 g Tiến hành tương tự phần định lượng đến thu dd B Lấy xác 3,5 ml ; 4,5 ml; ml; ml; 6,5 ml dd B cho vào bình định mức 50ml riêng biệt Thêm vào bình 5ml dd NaOH 0,1 M Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc thu dd chuẩn có nồng độ tương ứng 70%, 90%, 100%, 120%, 130% * Pha mẫu placebo: Cân tá dược tương ứng với 20 viên, trộn đều, đồng Mỗi viên chứa 0,5 g paracetamol có 0,153 g tá dược => Với 0,075g paracetamol tương ứng có 0,02295 g tá dược Cân xác 0,02295 g tá dược mtá dược cân thực tế= 0,2230 g Tiến hành tương tự phần định lượng thu mẫu placebo * Pha mẫu tự tạo: Cân xác 0,075 g paracetamol 0,02295 g tá dược mpara cân thực tế= 0,0776 g mtá dược cân thực tế= 0,0230g Tiến hành tương tự phần định lượng đến thu dd A Cho vào bình định mức 50ml bình xác 5ml dd A, thêm nước đến định mức, lắc thu dd B1, B2 , B3 Lấy xác ml, 5ml, 6ml dd B1 cho vào bình định mức 50 ml riêng biệt Thêm vào bình 5ml dd NaOH 0,1 M Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc thu dd tự tạo có nồng độ tương ứng 80%, 100%, 120% Làm tương tự với dd B2 B3 3.1 Tính đặc hiệu Thực mẫu: - Mẫu trắng - Mẫu placebo - Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 g/ml - Mẫu thử - Mẫu tự tạo => Kết quả: - Mẫu placebo - Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 g/ml - Mẫu thử - Mẫu tự tạo Nhận xét: Phổ UV mẫu thử tương tự phổ UV mẫu chuẩn Paracetamol ( có cực đại hấp thụ bước sóng 257 nm) Mẫu Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 g/ml Mẫu thử Mẫu tự tạo Mẫu placebo A 0,536196 0,544930 0,546602 -0,021116 Mẫu placebo khơng có cực đại hấp thụ khoảng 257 + 2nm Vậy tiêu tính đặc hiệu đạt 3.2 Độ thích hợp hệ thống Thực mẫu chuẩn Paracetamol 7,5 g/ml Kết quả: Lần Lần 2 A 0,536771 0,536658 0,536774 0,537059 0,537046 0,536899 = 0,536868 SD = 1,6215 RSD = = = 0,0302 % < 2% Vậy tiêu độ thích hợp hệ thống đạt 3.3 Độ tuyến tính Thực mẫu chuẩn nồng độ tương ứng 70%, 90%, 100%, 120%, 130% Kết quả: Nồng độ 3 3 70% 90% 100% 120% 130% A đo 0,370196 0,370184 0,370421 0,485913 0,485863 0,485783 0,536771 0,536658 0,536774 0,645242 0,645267 0,645366 0,708124 0,708106 0,708127 0,370267 0,485853 0,536734 0,645292 0,708119 0.8 0.7 0.6 f(x) = 0.56x - 0.02 R² = 0.5 0.4 Linear () 0.3 0.2 0.1 60% 70% 80% 90% 100% 110% 120% 130% 140% = 0,9994 => Hệ số tương quan r = 0,9997 > 0,995 Vậy tiêu độ tuyến tính đạt 3.4 Độ Thực mẫu tự tạo 80%, 100%, 120% (mỗi nồng độ mẫu) Kết quả: Ta có: mpara cân thực tế= 0,0776 g A= l C => = l = 715 = = 715 => = => = 100 = = = 100ml dd chứa 0,0776g paracetamol tương ứng với nồng độ 100% =>100 ml dd chứa tương ứng với nồng độ X% => = X = (%) Tỷ lệ thu hồi = 100% Nồng độ Mẫu 80% 100% 120% A đo 0,443190 0,443386 0,443392 0,443699 0,443715 0,443714 0,448137 0,448075 0,448063 0,547387 0,547334 0,547315 0,546275 0,546264 0,546333 0,556104 0,556188 0,556015 0,659502 Tỷ lệ thu hồi 0,443323 79,90% 99,88% 0,443709 79,97% 99,96% 0,448092 80,76% 100,95% 0,547345 98,65% 98,68% 0,546291 98,46% 98,46% 0,556102 100,23% 100,23% 0,659475 118,86% 99,05% 0,659498 0,659424 0,668431 0,668197 0,668265 120,44% 0,668166 0,669962 0,669950 0,669918 120,74% 0,669841 Tất mẫu tự tạo có tỷ lệ thu hồi khoảng 98-102% 100,37% 100,62% RSD = = = 0,878 % < 2% Vậy tiêu độ đạt 3.5 Khoảng xác định Thực mẫu tự tạo 80%, 100%, 120% (mỗi nồng độ mẫu) Kết quả: Khoảng xác định (80%-120%) nằm khoảng tuyến tính (70%-130%) đạt độ Vậy tiêu khoảng xác định đạt 3.6 Độ xác (Độ lặp lại) Thực mẫu thử nồng độ 100% Kết quả: mpara thực = 0,0752 g Ta có: A= l C => = l = 715 = = 715 => = => = 100 = = = => H% = = 100% Mẫu thử A đo 0,545186 0,545294 0,545170 0,536254 H% 0,545217 101,40 % 0,536316 99,75% 0,536303 0,536392 0,541152 0,541403 0,541286 0,541749 0,541817 0,541800 0,541242 0,541251 0,541218 0,540345 0,540348 0,540378 0,541280 100,67% 0,541789 100,76% 0,541237 100,66% 0,540357 100,50% Tất mẫu thử có hàm lượng đạt chuyên luận (từ 95,0% - 105,0%) RSD = = = 0,526 % < 2% Vậy tiêu độ xác (độ lặp lại) đạt Kết luận: Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất viên nén Paracetamol 500mg đạt theo TCCS ... mẫu thử có hàm lượng đạt chuyên luận (từ 95,0% - 105,0%) RSD = = = 0,526 % < 2% Vậy tiêu độ xác (độ lặp lại) đạt Kết luận: Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất viên nén Paracetamol 500mg... vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ, lắc thu dd NaOH 0,01M * Pha mẫu thử: Cho vào bình định mức 50ml bình xác 5ml dd B phần định lượng, thêm vào bình 5ml NaOH 0,1M, thêm nước đến định mức,... mẫu chuẩn: Cân xác 0,075 g paracetamol mcân thực tế = 0,0754 g Tiến hành tương tự phần định lượng đến thu dd B Lấy xác 3,5 ml ; 4,5 ml; ml; ml; 6,5 ml dd B cho vào bình định mức 50ml riêng biệt