Tiểu luận Phân tích hóa lý: Xác định protein bằng phương pháp Kjedahl

Nội dung tiểu luận gồm 2 chương: Chương 1 Xác định protein bằng phương pháp Kjedahl và chương 2: Xác định hàm lượng nitơ tổng số và tính hàm lượng protein thô trong malt (tcvn 10791:2015). Mời các bạn tham khảo

_ BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM  BÁO CÁO TIỂU LUẬN MƠN: PHÂN TÍCH HĨA LÝ THỰC PHẨM XÁC ĐỊNH PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJEDAHL GVHD: PHẠM THỊ CẨM HOA NHÓM THỰC HIỆN: NĂM HỌC 2018-2019 _ BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM  BÁO CÁO TIỂU LUẬN MƠN: PHÂN TÍCH HĨA LÝ THỰC PHẨM XÁC ĐỊNH PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJEDAHL NHÓM THỰC HIỆN: Nguyễn Hồng Trâm Anh Ngơ Thị Mỹ Ngọc Nguyễn Vũ Thảo Vy Nguyễn Thị Nhật Quỳnh Nguyễn Thị Trúc Mai Trần Thị Thúy Vy Nguyễn Thị Thúy An Lê Thị Huệ Đinh Nguyên Cẩm Hà Phạm Thị Tuyết Hoa NĂM HỌC 2018-2019 _ BẢNG ĐÁNH GIÁ STT 10 HỌ TÊN Nguyễn Hoàng Trâm Anh Nguyễn Vũ Thảo Vy Nguyễn Thị Trúc Mai Nguyễn Thị Thúy An Đinh Nguyên Cẩm Hà Nguyễn Thị Nhật Quỳnh Ngô Thị Mỹ Ngọc Trần Thị Thúy Vy Lê Thị Huệ Phạm Thị Tuyết Hoa MSSV 2022150156 2022150188 2022150074 2022150070 2022150153 2022150160 2022150103 2022150175 2022150092 2022150169 ĐÁNH GIÁ 13,25% 13,25% 13,25% 10% 10% 10% 10% 10% 5% 5% DANH MỤC BẢNG BẢNG MỘT SỐ CHỈ THỊ MÀU THÔNG DỤNG BẢNG MỘT SỐ CHỈ THỊ HỖN HỢP THÔNG DỤNG BẢNG BẢNG CHUYỂN ĐỔI N THÀNH PROTEIN DANH MỤC HÌNH HÌNH BỘ CHƯNG CẤT ĐẠM KJELDAL HÌNH BỘ PHÁ MẪU ỐNG _ MỤC LỤC XÁC ĐỊNH PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL 1.1 Nguyên tắc 1.2 Dụng cụ, hóa chất, thiết bị 1.3 Cách tiến hành: 1.4 Tính kết quả: ỨNG DỤNG: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ TỔNG SỐ VÀ TÍNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THƠ TRONG MALT (TCVN 10791:2015) 2.1 Phạm vi áp dụng: 2.2 Cách tiến hành: 2.2.1 Phân hủy mẫu 2.2.2 Chưng cất 2.2.3 Mẫu trắng 2.3 Tính kết quả: 2.3.1 Hàm lượng nitơ tổng số 2.3.2 Hàm lượng protein tổng số TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC A 10 PHỤ LỤC B 14 _ XÁC ĐỊNH PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL 1.1 Nguyên tắc Mẫu sau vơ hóa thu nitơ dạng NH4+ Dùng kiềm mạnh đẩy ammonia khỏi muối chưng cất đạm Dùng nước kéo ammonia giải phóng sang bình hấp thu định lượng kỹ thuật chuẩn độ kỹ thuật chuẩn độ ngược với thị Tashiro 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛 𝐻2𝑆𝑂4 đậ𝑚 đặ𝑐,𝑡𝑜 Xúc tác > (NH4)2SO4 + SO2 + CO2 +H2O  Đẩy NH3 khỏi muối (NH4)2SO4 kiềm mạnh (NaOH): (NH4)2SO4 + 2NaOH → 2NH3↑ + 2H2O +Na2SO4  Định lượng NH3 bay bẳng acid HCl 0,1N (kỹ thuật chuẩn độ thế): 2NH3↑ + 4H2BO3- → 2NH4+ + B4O72- + 5H2O B4O72- + 2H+ +5H2O → 4H3BO3  Hoặc sử dụng H2SO4 0,1N dư, chuẩn độ lượng H2SO4 dư dung dịch NaOH 0,1N (kỹ thuật chuẩn độ ngược): 2NH3↑ + H2SO4 → (NH4)2SO4 2NaOH + H2SO4 (dư) → Na2SO4 + 2H2O Phạm vi áp dụng: Áp dụng cho tất loại thực phẩm Tài liệu trích dẫn: TCVN 8099 – : 2009 1.2 Dụng cụ, hóa chất, thiết bị  Dụng cụ Dụng cụ thủy tinh thơng thường phòng thí nghiệm Bình Kjeldahl dung tích 500ml Bộ chưng cất Kjeldahl  Hóa chất Dung dịch H2SO4 đậm đặc Hỗn hợp xúc tác CuSO4 : K2SO4 = : 10 Dung dịch H3BO3 4% pH = 5,5, điều chỉnh pH dung dịch NaOH 0,1N Dung dịch HCl 0,1N _ Dung dịch NaOH 0,1N Dung dịch H2SO4 0,1N Dung dịch Tashiro alirazin natri sunfonate Giấy quỳ tím  Thiết bị Hình Bộ chưng cất đạm Kjeldal A: Bình cầu E: Ống sinh hàn B: Bình rửa F: Bình hấp thu C: Bình cất P1, P2: Khóa D: Phễu _ Bảng Một số thị màu thông dụng pKct Màu Môi trường Môi trường acid, dạng bazơ, dạng phân tử ion Đỏ Vàng 4,4 – 6,2 5,0 – 8,0 6,8 – 8,4 8,0 – 10,0 7 Đỏ Đỏ Vàng Không màu Vàng Xanh Đỏ Đỏ 5,1 9,4 – 10,6 10,0 – 12,0 10 11 Khơng màu Vàng Xanh Tím nhạt 9,7 10,7 Chất thị pHcm pT Metyl da cam (MO) Metyl đỏ (MR) Quỳ Phenol đỏ Phenolphtalein (PP) Thymol phtalein Alizarin vàng 3,1 – 4,4 3,7 9,2 Bảng Một số thị hỗn hợp thông dụng Thành phần thị Chỉ thị Tasiro A Metyl đỏ 0,2% rượu B: Metyl xanh 0,2% rượu Tỷ lệ thể tích A:B = 1:1 A: Metyl cam 0,2% nước B: Bromcresol chàm 0,1% nước có 2,9ml NaOH 0,05N cho 0,1g Tỷ lệ thể tích A:B = 1:1 A Metyl đỏ 0,2% rượu B: Bromcresol chàm 0,1% rượu Tỷ lệ thể tích A:B = 1:3 A: Thymol phtalein 0,1% rượu B: Alizarin vàng 0,1% rượu Tỷ lệ thể tích A:B = 2:1 pHcm Màu pT 5,2 – 5,6 5,4 Môi trường acid, dạng phân tử Tím hồng 4,1 – 4,5 4,3 Vàng Lục chàm 4,9 – 5,3 5,1 Đỏ nho Lục 10,0 – 10,4 10,2 Vàng Tím Mơi trường bazơ, dạng ion Lục _ 1.3 Cách tiến hành:  Vơ hóa mẫu phá mẫu nhiều ống: Cân xác khoảng 2- g mẫu V(ml) dung dịch mẫu cho vào ống phá mẫu, lưu ý khơng để mẫu dính lên thành bình Thêm g hỗn hợp xúc tác CuSO4: K2SO4 = 1:10 Rót từ từ theo thành bình 10ml H2SO4 đậm đặc Lắc nhẹ để acid trộn mẫu Đặt ống vào vị trí phá mẫu Mở máy cài đặt thông số thời gian công suất làm việc máy Thực vơ hóa đến thu dung dịch suốt Để nguội cẩn thận định mức đến 100ml nước cất Hình Bộ phá mẫu ống  Tiến hành cất đạm cất đạm Kjeldahl: − Lắp cất đạm, khớp nối bôi lớp mỏng vaseline − Rửa cất đạm cách chưng cất đến dung dịch chảy đầu ống sinh hàn trung tính (khơng làm đổi màu giấy quỳ tím) Sau đó, giảm áp đột ngột bình cầu (tắt điện, thêm nước trùm khăn lạnh vào bình cầu để rút tồn dung dịch từ bình cất bình rửa xả bỏ − Bình hấp thu chứa sẵn 20ml dung dịch H3BO3 bão hòa, thêm giột Tashiro đầu ống sinh hàn phải ngập dung dịch − Cho mẫu vơ hóa vào bình cất, tráng phễu nước cất hai lần để tránh mẫu, thêm giọt alizarin natri sunfonat, thêm từ từ dung dịch NaOH 30% dung dịch chuyển sang tím đậm, tiếp tục thêm khoảng 5ml dung dịch NaOH 30% Tráng rửa phễu, khóa phễu, giữ nước cất phễu − Chưng cất khoảng 15-30 phút, tiến hành thử NH3 hết chưa cách dùng giấy quỳ tím hứng vài giọt dung dịch chảy ống sinh hàn (tráng rửa đầu ống sinh hàn trước kiểm tra), quỳ tím khơng đổi màu kết thúc trình _ chưng cất Nếu quỳ tím chuyển sang màu xanh tiếp tục chưng cất quỳ tím khơng đổi màu − Rửa cất đạm sau kết thúc trình chưng cất Lưu ý: Ngoài việc cất đạm cất đạm Kjeldahl, ta thực máy cất đạm tự động  Chuẩn độ: - Chuẩn độ thế: Lấy bình hấp thu ra, chuẩn độ dung dịch HCl 0,1N với thị Tashiro, dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu tím Ghi thể tích dung dịch chuẩn HCl 0,1N tiêu tốn - Nếu chuẩn độ ngược, thay 20,00ml dung dịch chuẩn H2SO4 0,1N Chuẩn độ dung dịch chuẩn NaOH 0,1N Dung dịch chuyển từ màu tím sang màu xanh Ghi thể tích dung dịch chuẩn NaOH 0,1N tiêu tốn - Tiến hành tương tự với mẫu trắng (thay dung dịch chuẩn NaOH 0,1N nước cất lần) 1.4 Tính kết quả: Hàm lượng N tồn phần tính theo cơng thức:  Đối với mẫu rắn: 𝑁 × 𝑉 × 10−3 × 14 × 100 𝑁 𝑡𝑜à𝑛 𝑝ℎầ𝑛 (𝑔⁄100𝑔) = 𝑚  Đối với mẫu lỏng: 𝑁 × 𝑉 × 10−3 × 14 × 1000 𝑁 𝑡𝑜à𝑛 𝑝ℎầ𝑛 (𝑔⁄𝑙 ) = 𝑉𝑚 Trong đó:     V: thể tích dung dịch HCl 0.1N (ml) N: nồng độ đương lượng dung dịch HCl Vm: thể tích mẫu thử (ml) m: khối lượng mẫu thử (g) Hoặc hàm lượng N tổng số theo kỹ thuật chuẩn độ ngược tính theo cơng thức:  Đối với mẫu rắn: 𝑁 𝑡𝑜à𝑛 𝑝ℎầ𝑛 (𝑔⁄100𝑔) = 𝑁 × (𝑉2 − 𝑉1 ) × 10−3 × 14 × 𝐹 × 100 𝑚 _  Đối với mẫu lỏng: 𝑁 × (𝑉2 − 𝑉1 ) × 10−3 × 14 × 𝐹 × 1000 𝑁 𝑡𝑜à𝑛 𝑝ℎầ𝑛 (𝑔⁄𝑙) = 𝑉𝑚 Trong đó:       V1: thể tích dung dịch NaOH 0.1N V2: thể tích dung dịch NaOHBlank 0.1N N: đương lượng dung dịch H2SO4 0.1N Vm: thể tích mẫu thử (ml) m: khối lượng mẫu thử (g) F: hệ số hiệu chỉnh nồng độ dung dịch NaOH 0.1N Hàm lượng protein tổng xác định cách lấy kết N toàn phần nhân với hệ số 6.25 (hay hệ số tương ứng trường hợp cụ thể) Bảng Bảng chuyển đổi N thành protein Tên sản phẩm Kiều mạch Cùi dừa Chuyển đổi N thành protein 5,53 5,3 Bột ngô 6,25 Bột hạt 5,3 Yến mạch Bột yến mạch 5,5 5,83 Bột lạc Bột hạt dầu cải Gạo (lức, hạt dài) Gạo nghiền, gạo xát dối, gạo đổ Gạo lật gạo lức (chỉ bỏ trấu) 5,46 5,53 5,95 5,95 Tên sản phẩm Bột đậu tương Đậu tương, hạt, bột sản phẩm chúng Bột hoa hướng dương (khô) Bột hoa hướng dương Mầm lúa mì Bột lúa mì thơ bột mịn Gạo xát, gạo trắng Hạt vùng thô Thức ăn gia súc Thực phẩm nguồn gốc động vật Sữa 5,95 Chuyển đổi N thành protein 5,71 5,71 5,3 5,3 5,45 5,83 5,95 5,3 6,25 6,25 6,38 Lưu ý: Trong trình chưng cất đạm, dung dịch bình cất bị hút phía bình thải nguồn cung cấp nhiệt cho hệ thống cất đạm không ổn định _ Có thể thay thị Tashiro thị metyl red 1% pha cồn Trong trình chưng cất đạm, màu dung dịch bình hứng chuyển sang màu xanh lục thị Tashiro màu vàng chị thị metyl red có nghĩa lượng sulfuric acid bị thiếu, cần thêm lượng sulfuric acid vào bình hứng ỨNG DỤNG: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ TỔNG SỐ VÀ TÍNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THƠ TRONG MALT (TCVN 10791:2015) 2.1 Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn quy định phương pháp Kjeldahl để xác định hàm lượng nitơ tổng số tính hàm lượng protein thơ malt 2.2 Cách tiến hành: - Cân khoảng 20 g mẫu thử, xác đến 0,01 g, nghiền mịn máy nghiền Chuyển mẫu nghiền vào lọ, đậy nắp trộn kĩ 2.2.1 Phân hủy mẫu - Cân từ 1,0 đến 1,5 g phần mẫu thử chuẩn bị, xác đến mg, chuyển định lượng vào bình Kjeldahl khơ Thêm khoảng 10 g hỗn hợp xúc tác (kali sulfat dạng bột, titan dioxit đồng sulfat ngậm năm phân tử nước theo tỉ lệ tương ứng 1000 : 30 : 30 (phần khối lượng)) trộn - Thêm 20 ml axit sulfuric 98 %, xoay nhẹ bình để trộn làm ẩm lượng chứa bình Tiến hành phân hủy mẫu nhiệt độ thấp ngừng tạo bọt Đun sôi hỗn hợp đến xuất màu nâu, đun tiếp 30 phút Không để nguồn nhiệt tiếp xúc trực tiếp với bình phía mức chất lỏng phải quan sát thấy nước hồi lưu vùng thấp cổ bình Kjeldahl - Để nguội dịch phân hủy Nếu lượng chứa bình bị hóa rắn chứng tỏ lượng axit dư bị thất q trình phân hủy amoni sulfat hóa 2.2.2 Chưng cất - Cẩn thận pha loãng dịch phân hủy với 250 ml nước cất, thêm vật liệu chống sôi trào ( cacborundum dạng bột thô, kẽm dạng viên bi thủy tinh) thêm từ từ khoảng 70 ml dung dịch NaOH để tạo thành hai lớp rõ rệt Lắp bình với ống bảo vệ nối với sinh hàn, ý không làm xáo trộn lớp chất lỏng Đầu sinh hàn phải nhúng ngập dung dịch axit boric - Xoay mạnh bình để trộn nhanh lượng chứa bình gia nhiệt đủ Bật sẵn thiết bị gia nhiệt trước nối bình, để giảm thiểu nguy hiểm chất lỏng chảy ngược trở lại qua sinh hàn Ngay sau trộn, cần tháo bình chứa _ axit boric để làm khơ đầu bình sinh hàn để cân áp suất bình chưng cất - Chưng cất amoniac vào lượng dư axit boric nồng độ 20 g/lit (khoảng 25 ml), có chứa 0,5 ml chất thị (bromocresol xanh) Lấy khoảng 180 ml dịch chưng cất chuẩn độ amoniac dung dịch axit chuẩn độ (HCl 0,1M) Điểm kết thúc chuẩn độ đạt dung dịch chuyển sang màu xám 2.2.3 Mẫu trắng - Thực mẫu trắng thuốc thử, dùng 1,000 g sacarose (tinh khiết) thay cho phần mẫu thử 2.3 Tính kết quả: 2.3.1 Hàm lượng nitơ tổng số Hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, XN1, biểu thị theo phần trăm khối lượng, tính theo Cơng thức (1): (1) Hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, XN2, biểu thị theo phần trăm khối lượng chất khơ, tính theo Cơng thức (2): (2) Trong đó: V thể tích dung dịch axit chuẩn độ cần để trung hòa amoniac sau trừ giá trị tương ứng mẫu trắng, tính mililit (ml); 0,0014 số gam nitơ tương ứng với ml dung dịch axit chuẩn độ (axit clohydric 0,1 M axit sulfuric 0,05 M); M khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); W độ ẩm phần mẫu thử, tính phần trăm khối lượng, xác định theo TCVN 10788:2015 (phụ lục A) 2.3.2 Hàm lượng protein tổng số Hàm lượng protein tổng số mẫu thử, XP1, biểu thị theo phần trăm khối lượng, tính theo Cơng thức: XP1 = XN1 x 6,25 Hàm lượng protein tổng số mẫu thử, XP2, biểu thị theo phần trăm khối lượng chất khơ, tính theo Cơng thức _ XP2 = XN2 x 6,25 Trong đó: XN1 hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, tính phần trăm khối lượng XN2 hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, tính phần trăm khối lượng chất khô 6,25 hệ số chuyển đổi từ hàm lượng nitơ tổng số sang hàm lượng protein TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Lê Thị Hồng Ánh (chủ biên), Giáo trình Phân tích hóa lý Thực phẩm 1, NXB ĐH Quốc gia TP.HCM [2] TCVN 10791:2015: Malt - xác định hàm lượng nitơ tổng số tính hàm lượng protein thơ - phương pháp kjeldahl _ PHỤ LỤC A TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10788:2015 MALT – XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM – PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG Malt – Determination of moisture content – Gravimetric method Lời nói đầu TCVN 10788:2015 xây dựng sở tham khảo tiêu chuẩn Hiệp hội Đồ uống châu Âu EBC Method 4.2 (2000)Moisture content of malt; TCVN 10788:2015 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F9 Đồ uống biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố MALT – XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM – PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG Malt – Determination of moisture content – Gravimetric method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp khối lượng để xác định độ ẩm loại malt Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 10787:2015, Malt – Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Độ ẩm (moisture content) Hao hụt khối lượng sản phẩm, tính phần trăm, điều kiện quy định tiêu chuẩn 10 _ Nguyên tắc Nghiền mẫu để thu dạng bột mịn Sấy phần mẫu thử nhiệt độ từ 105 oC đến 106 oC thời gian h ± (đảm bảo thu khối lượng không đổi) Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ thông thường phòng thử nghiệm sau: 5.1 Máy nghiền đĩa, có khoảng cách hai đĩa nghiền 0,2 mm (ví dụ: máy nghiền đĩa Bühler Universal Laboratory Disc Mill, kiểu DLFU hãng Bühler GmbH, Đức) 5.2 Tủ sấy, trì nhiệt độ từ 105 oC đến 107 oC, xác đến 0,5 oC Chuẩn hóa cách sấy đồng thời hai mẫu nhiệt độ từ 105 oC đến 106 oC thời gian h ± min, sau để nguội bình hút ẩm (5.4) 20 nhiệt độ phòng, cân sấy thêm h nhiệt độ nêu Nếu độ ẩm hao hụt lớn 0,10 g/100 g mẫu tăng nhiệt độ lên oC thực lại với hai mẫu Thực chuẩn hóa nhiệt độ khơng lớn 107 oC cho chênh lệch độ ẩm sau h sấy độ ẩm thu nhiệt độ sau h sấy khoảng 0,10 g/100 g Duy trì thơng khí đóng cửa tủ suốt thời gian sấy 5.3 Chén cân, kim loại (ví dụ nhơm), đường kính khoảng 50 mm chiều cao khơng lớn 20 mm, có nắp đậy kín 5.4 Bình hút ẩm, chứa chất hút ẩm hiệu quả, ví dụ silica gel 5.5 Cân phân tích, cân xác đến 0,5 mg Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng không bị thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 10787:2015 Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn bị mẫu thử theo TCVN 10787:2015 Cách tiến hành Cân khoảng 20 g mẫu thử chuẩn bị, xác đến 0,5 mg Sử dụng máy nghiền đĩa (5.1) để nghiền phần mẫu thử Trộn kỹ đưa khoảng g phần mẫu thử nghiền 11 _ vào chén cân (5.3) khơ, biết trước khối lượng (cân trừ bì), xác đến mg Đậy nắp chén cân ngay, xác đến mg Mở nắp chén cân, đưa chén với nắp vào tủ sấy (5.2) gia nhiệt trước đến nhiệt độ chuẩn hóa, sấy h ± Đậy nắp lấy chén cân khỏi tủ sấy Để nguội bình hút ẩm (5.4) 20 nhiệt độ phòng Cân lại chén cân với lượng chứa chén, xác đến mg Tính biểu thị kết Độ ẩm mẫu thử, X, biểu thị theo phần trăm khối lượng, tính theo Cơng thức sau: Trong đó: w1 khối lượng phần mẫu thử trước sấy, tính gam (g); w2 khối lượng phần mẫu thử sau sấy, tính gam (g) Biểu thị kết đến chữ số thập phân 10 Độ chụm Các giá trị độ chụm xác định từ liệu thử nghiệm liên phòng Ủy ban phân tích EBC thực năm 1992 Các phòng thử nghiệm tham gia phân tích mẫu malt với sáu mức độ ẩm từ 3,8 % đến 7,3 % (khối lượng), sử dụng đồng sulfat để chuẩn hóa tủ sấy Các giá trị độ chụm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu 10.1 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm độc lập, đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn 0,13 % (0,13 g độ ẩm 100 g mẫu) 10.2 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm khác 12 _ nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp lớn 0,6 % (0,6 g độ ẩm 100 g mẫu) 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tuỳ chọn, với tình bất thường khác ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu được, thỏa mãn yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu 13 _ PHỤ LỤC B TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10791:2015 MALT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ TỔNG SỐ VÀ TÍNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THÔ - PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL Malt - Determination of the nitrogen content and calculation of the crude protein content - Kjeldahl method Lời nói đầu TCVN 10791:2015 xây dựng sở tham khảo AOAC 950.09 Protein in laboratory malt Kjeldahl method tiêu chuẩn Hiệp hội Đồ uống châu Âu EBC Method 4.3.1 (2004) Total nitrogen of malt Kjeldahl method; TCVN 10791:2015 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F9 Đồ uống biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố MALT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ TỔNG SỐ VÀ TÍNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THÔ - PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL Malt - Determination of the nitrogen content and calculation of the crude protein content - Kjeldahl method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp Kjeldahl để xác định hàm lượng nitơ tổng số tính hàm lượng protein thô malt Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm u cầu kỹ thuật phương pháp thử TCVN 10787:2015, Malt - Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử TCVN 10788:2015, Malt - Xác định độ ẩm - Phương pháp khối lượng 14 _ Nguyên tắc Phân hủy hợp chất nitơ có mẫu thử axit sulfuric đặc nóng, có mặt chất xúc tác, để thu amoni sulfat Sản phẩm phân hủy kiềm hóa dung dịch natri hydroxit giải phóng amoniac cách chưng cất vào lượng dư dung dịch axit boric Chuẩn độ amoniac dung dịch chuẩn axit Thuốc thử vật liệu thử Sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích nước đạt loại theo TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987), trừ có quy định khác 4.1 Axit sulfuric, 98 % (khối lượng/thể tích) 4.2 Dung dịch natri hydroxit Hòa tan 450 g natri hydroxit dạng viên dạng vẩy, lít nước Dung dịch phải có tỉ trọng tương đối lớn 1,35 4.3 Hỗn hợp chất xúc tác, gồm kali sulfat dạng bột, titan dioxit đồng sulfat ngậm năm phân tử nước theo tỉ lệ tương ứng 1000 : 30 : 30 (phần khối lượng) Có thể sử dụng viên xúc tác bán sẵn có thành phần tương tự 4.4 Vật liệu chống sôi trào, cacborundum dạng bột thô, kẽm dạng viên bi thủy tinh 4.5 Dung dịch axit boric, 20 g/lít 4.6 Dung dịch axit chuẩn độ, axit clohydric 0,1 M axit sulfuric 0,05 M 4.7 Chất thị bromocresol xanh Trộn dung dịch bromocresol xanh (3,3’-5,5’-tetrabromomcresol sulfonic phthalein) nồng độ g/lít etanol 95 % (thể tích) với dung dịch metyl đỏ (axit pdimethylaminoazobenzeneo- cacboxylic) nồng độ g/lít etanol 95 % (thể tích), với tỉ lệ thể tích 10 : Chất thị có màu hồng mơi trường axit, màu xám điểm kết thúc chuẩn độ màu xanh lam môi trường kiềm 4.8 Acetanilide, sấy trước áp suất giảm 80 oC 4.9 Sacarose, tinh khiết 15 _ Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ thơng thường phòng thử nghiệm sau: 5.1 Bộ phân hủy mẫu Kjeldahl 5.2 Bình Kjeldahl, dung tích 500 ml 5.3 Bộ chưng cất 5.4 Bình nón (bình hứng), dung tích 250 ml 5.5 Ống đong, dung tích 25 ml, 100 ml 250 ml 5.6 Pipet, chia vạch đến ml 5.7 Buret, loại 25 ml 50 ml 5.8 Máy nghiền đĩa, có khoảng cách hai đĩa nghiền 0,2 mm, nghiền mịn vật liệu khơng sinh nhiệt (ví dụ: máy nghiền đĩa Bühler Universal Laboratory Disc Mill, kiểu DLFU hãng Bühler GmbH, Đức) 5.9 Cân phân tích, cân xác đến 0,1 mg Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng không bị thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 10787:2015 Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn bị mẫu thử (nghiền) theo TCVN 10787:2015 Cân khoảng 20 g mẫu thử, xác đến 0,01 g, nghiền mịn máy nghiền (5.8) Chuyển mẫu nghiền vào lọ, đậy nắp trộn kĩ Cách tiến hành 8.1 Phân hủy mẫu Cân từ 1,0 đến 1,5 g phần mẫu thử chuẩn bị, xác đến mg, chuyển định lượng vào bình Kjeldahl khơ (5.2) Thêm khoảng 10 g hỗn hợp xúc tác dạng bột dạng viên (4.3), trộn 16 _ Thêm 20 ml axit sulfuric 98 % (4.1), xoay nhẹ bình để trộn làm ẩm lượng chứa bình Tiến hành phân hủy mẫu nhiệt độ thấp ngừng tạo bọt Đun sôi hỗn hợp đến xuất màu nâu, đun tiếp 30 Không để nguồn nhiệt tiếp xúc trực tiếp với bình phía mức chất lỏng phải quan sát thấy nước hồi lưu vùng thấp cổ bình Kjeldahl Để nguội dịch phân hủy Nếu lượng chứa bình bị hóa rắn chứng tỏ lượng axit dư bị thất thoát trình phân hủy amoni sulfat hóa 8.2 Chưng cất Cẩn thận pha loãng dịch phân hủy với 250 ml nước cất, thêm vật liệu chống sôi trào (4.4) thêm từ từ khoảng 70 ml dung dịch natri hydroxit (4.2) để tạo thành hai lớp rõ rệt Lắp bình với ống bảo vệ nối với sinh hàn, ý không làm xáo trộn lớp chất lỏng Đầu sinh hàn phải nhúng ngập dung dịch axit boric Xoay mạnh bình để trộn nhanh lượng chứa bình gia nhiệt đủ Bật sẵn thiết bị gia nhiệt trước nối bình, để giảm thiểu nguy hiểm chất lỏng chảy ngược trở lại qua sinh hàn Ngay sau trộn, cần tháo bình chứa axit boric để làm khơ đầu bình sinh hàn để cân áp suất bình chưng cất Chưng cất amoniac vào lượng dư axit boric nồng độ 20 g/lit (khoảng 25 ml), có chứa 0,5 ml chất thị (4.7) Lấy khoảng 180 ml dịch chưng cất chuẩn độ amoniac dung dịch axit chuẩn độ (4.6) Điểm kết thúc chuẩn độ đạt dung dịch chuyển sang màu xám 8.3 Mẫu trắng Thực mẫu trắng thuốc thử, dùng 1,000 g sacarose (4.9) thay cho phần mẫu thử Tính biểu thị kết 9.1 Hàm lượng nitơ tổng số Hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, XN1, biểu thị theo phần trăm khối lượng, tính theo Cơng thức (1): (1) Hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, XN2, biểu thị theo phần trăm khối lượng chất khơ, tính theo Cơng thức (2): (2) 17 _ Trong đó: thể tích dung dịch axit chuẩn độ cần để trung hòa amoniac sau trừ giá trị tương ứng mẫu trắng, tính mililit (ml); V 0,0014 số gam nitơ tương ứng với ml dung dịch axit chuẩn độ (axit clohydric 0,1 M axit sulfuric 0,05 M); m khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); w độ ẩm phần mẫu thử, tính phần trăm khối lượng, xác định theo TCVN 10788:2015 Biểu thị kết đến hai chữ số thập phân 9.2 Hàm lượng protein tổng số Hàm lượng protein tổng số mẫu thử, XP1, biểu thị theo phần trăm khối lượng, tính theo Cơng thức (3): XP1 = XN1 x 6,25 (3) Hàm lượng protein tổng số mẫu thử, XP2, biểu thị theo phần trăm khối lượng chất khơ, tính theo Cơng thức (4): XP2 = XN2 x 6,25 (4) Trong đó: XN1 hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, tính phần trăm khối lượng, theo Cơng thức (1); XN2 hàm lượng nitơ tổng số mẫu thử, tính phần trăm khối lượng chất khơ, theo Cơng thức (2); 6,25 hệ số chuyển đổi từ hàm lượng nitơ tổng số sang hàm lượng protein 10 Độ chụm Các giá trị độ chụm xác định từ liệu thử nghiệm liên phòng Ủy ban phân tích EBC thực năm 1990 Các phòng thử nghiệm tham gia phân tích mẫu malt với sáu mức hàm lượng nitơ tổng số từ 1,56 % đến 1,87 % (khối 18 _ lượng) Các giá trị độ chụm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu 10.1 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm độc lập, đơn lẻ hàm lượng nitơ tổng số, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn 0,05 % (khối lượng) 10.2 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm đơn lẻ hàm lượng nitơ tổng số, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp lớn 0,13 % (khối lượng) 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy chọn, với tình bất thường khác ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu được, thỏa mãn yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu 19 ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM  BÁO CÁO TIỂU LUẬN MƠN: PHÂN TÍCH HĨA LÝ THỰC PHẨM XÁC ĐỊNH PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJEDAHL NHÓM THỰC HIỆN: Nguyễn Hồng Trâm Anh Ngơ Thị Mỹ Ngọc... hứng ỨNG DỤNG: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITƠ TỔNG SỐ VÀ TÍNH HÀM LƯỢNG PROTEIN THƠ TRONG MALT (TCVN 10791:2015) 2.1 Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn quy định phương pháp Kjeldahl để xác định hàm lượng nitơ... thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố MALT – XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM – PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG Malt – Determination of moisture content – Gravimetric method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp