Luận án Tiến sĩ Công nghệ sinh học Nghiên cứu điều kiện nuôi sinh khối vi tảo Thalassiosira pseudonana để ứng dụng làm thức ăn cho ấu trùng tôm thẻ chân trắng

Luận án Tiến sĩ là công trình nghiên cứu đầu tiên có hệ thống về việc lưu giữ và nuôi trồng được loài vi tảo biển Thalassiosira pseudonana từ phòng thí nghiệm đến quy mô pilot 3,5 m3 trong điều kiện ở Việt Nam.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN VĂN CÔNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI SINH KHỐI VI TẢO Thalassiosira pseudonana ĐỂ ỨNG DỤNG LÀM THỨC ĂN CHO ẤU TRÙNG TÔM THẺ CHÂN TRẮNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN VĂN CÔNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI SINH KHỐI VI TẢO Thalassiosira pseudonana ĐỂ ỨNG DỤNG LÀM THỨC ĂN CHO ẤU TRÙNG TÔM THẺ CHÂN TRẮNG Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS ĐỖ THỊ HOA VIÊN PGS TS ĐẶNG DIỄM HỒNG HÀ NỘI - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu Luận án trung thực chưa tác giả khác công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc hoàn thành Luận án cảm ơn thơng tin trích dẫn Luận án ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu Luận án Hà Nội, ngày TM Tập thể hướng dẫn PGS.TS Đỗ Thị Hoa Viên tháng Nguyễn Văn Công i năm 2019 LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đỗ Thị Hoa Viên - người Thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ bảo tơi suốt thời gian học tập hoàn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đặng Diễm Hồng, nguyên Trưởng phịng Cơng nghệ Tảo, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - người Thầy giúp định hướng nội dung, giúp đỡ tinh thần, kiến thức chuyên môn, sở vật chất bảo tận tình giúp tơi vượt qua nhiều khó khăn để hồn thành Luận án suốt thời gian thực Tôi xin tỏ lịng thành kính biết ơn sâu sắc tới Cố PGS TS Nguyễn Kim Đường - người Thầy có góp ý chân thành hỗ trợ tinh thần suốt chặng đường học tập hồn thành Luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Lãnh đạo Công ty Cổ phần Chăn nuôi C.P Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi sở vật chất giúp đỡ tơi hồn thành thí nghiệm q trình hồn thành Luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn cán Phịng Cơng nghệ tảo, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam: TS Lưu Thị Tâm, TS Ngơ Thị Hồi Thu, NCS Lê Thị Thơm, NCS Nguyễn Cẩm Hà…đã tạo điều kiện giúp đỡ thực phần nội dung nghiên cứu Luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS Đồn Lan Phương, Phịng Hóa sinh hữu cơ, Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ hỗ trợ tơi thực phân tích lipít thành phần axít béo Luận án Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Bộ môn giải phẫu sinh lý Bệnh, Học viện Quân y, Bộ Quốc phòng giúp thử nghiệm động vật thực nghiệm Tôi xin gửi lời cảm ơn tới quý Thầy, Cô giáo Bộ môn Công nghệ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm - Trường Đại học Bách khoa Hà Nội giúp đỡ hướng dẫn, bảo suốt thời gian thực Luận án Nhân dịp này, xin cảm ơn anh chị, em Phòng Đào tạo Trường Đại học Bách khoa Hà Nội ủng hộ tinh thần giúp đỡ công việc phịng để tơi hồn thành Luận án Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè người thân bên cạnh động viên, giúp đỡ, chia sẻ tạo điều kiện tốt cho tơi học tập, nghiên cứu hồn thành Luận án Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Văn Công ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH x MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết luận án Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án Những điểm luận án Cấu trúc luận án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung vi tảo nuôi trồng thủy sản 1.1.1 Giá trị dinh dưỡng vi tảo 1.1.2 Sử dụng vi tảo ương nuôi ấu trùng động vật thân mềm 1.1.3 Sử dụng vi tảo nuôi luân trùng artemia 1.1.4 Sử dụng vi tảo sản xuất giống cá biển 1.1.5 Vi tảo sử dụng trại sản xuất giống tôm biển tôm thẻ chân trắng 1.2 Giới thiệu Thalassiosira pseudonana 1.2.1 Vị trí phân loại Thalassiosira pseudonana 1.2.2 Đặc điểm sinh học sinh sản Thalassiosira pseudonana 1.2.3 Công nghệ nuôi Thalassiosira pseudonana 10 1.2.3.1 Công nghệ nuôi Thalassiosira pseudonana giới 10 1.2.3.2 Công nghệ nuôi Thalassiosira pseudonana Việt Nam 14 1.2.4 Ứng dụng Thalassiosira pseudonana sản xuất giống tôm thẻ chân trắng 18 1.2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh trưởng Thalassiosira pseudonana 19 1.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất giống ni thương phẩm tôm thẻ chân trắng giới Việt Nam 22 1.3.1 Trên giới 22 1.3.2 Ở Việt Nam 26 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Vật liệu 30 iii 2.1.1 2.1.2 2.2 2.3 2.3.1 2.3.2 2.3.3 Đối tượng nghiên cứu 30 Hóa chất thiết bị 30 Các môi trường nuôi cấy 31 Phương pháp nghiên cứu 32 Phương pháp chụp ảnh hình thái tế bào 32 Phương pháp sinh học phân tử 33 Xác định điều kiện ni cấy thích hợp Thalassiosira pseudonana quy mơ phịng thí nghiệm pilot 34 2.3.4 Xác định thông số sinh trưởng Thalassiosira pseudonana 38 2.3.5 Phân tích thành phần sinh hóa sinh khối Thalassiosira pseudonana 39 2.3.5.1 Phương pháp phân tích hàm lượng lipít tổng 39 2.3.5.2 Phương pháp phân tích thành phần hàm lượng axít béo bão hịa khơng bão hịa đa nối đơi 40 2.3.5.3 Phương pháp phân tích thành phần dinh dưỡng kim loại nặng 40 2.3.6 Nghiên cứu ứng dụng Thalassiosira pseudonana sản xuất giống tôm thẻ chân trắng 40 2.3.6.1 Phương pháp nghiên cứu độc tính cấp, độc tính bán trường diễn hành vi động vật thực nghiệm sử dụng sinh khối Thalassiosira pseudonana 40 2.3.6.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng loại thức ăn đến tăng trưởng tỉ lệ sống ấu trùng tôm thẻ chân trắng 42 2.3.6.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng mật độ tôm nuôi đến tăng trưởng tỉ lệ sống ấu trùng tôm thẻ chân trắng 43 2.3.6.4 Phương pháp thử nghiệm nuôi thương phẩm tôm thẻ chân trắng với nguồn giống sản xuất Thalassiosira pseudonana 45 2.3.7 Xử lý số liệu nghiên cứu 47 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 3.1 Đặc điểm sinh học Thalassiosira pseudonana 48 3.1.1 Đặc điểm hình thái tế bào Thalassiosira sp 48 3.1.2 Định tên khoa học Thalassiosira sp kỹ thuật đọc so sánh trình tự nucleotide đoạn gen 18S rRNA 50 3.1.3 Nghiên cứu lưu giữ, khả sinh sản sinh trưởng Thalassiosira pseudonana 52 3.1.3.1 Lưu giữ Thalassiosira pseudonana nhiệt độ phòng 53 3.1.3.2 Đặc điểm sinh học sinh sản Thalassiosira pseudonana 54 3.1.3.3 Sinh trưởng Thalassiosira pseudonana 54 3.2 Điều kiện nuôi sinh khối Thalassiosira pseudonana quy mô khác 55 iv 3.2.1 Điều kiện thích hợp để ni sinh khối Thalassiosira pseudonana quy mơ phịng thí nghiệm 56 3.2.1.1 Quy mơ bình thủy tinh 0,25 L 56 3.2.1.2 Quy mơ bình thuỷ tinh L 66 3.2.1.3 Quy mơ bình thủy tinh L 75 3.2.2 Điều kiện thích hợp để ni sinh khối Thalassiosira pseudonana quy mô pilot 84 3.2.2.1 Quy mô bể composite 0,2 m 84 3.2.2.2 Quy mô bể composite m 89 3.2.2.3 Quy mô bể composite 3,5 m 92 3.2.2.4 Quy trình cơng nghệ ni Thalassiosira pseudonana quy mơ phịng thí nghiệm pilot 96 3.2.3 Thành phần hóa học sinh khối Thalassiosira pseudonana quy mô pilot 99 3.3 Ứng dụng Thalassiosira pseudonana sản xuất giống tôm thẻ chân trắng 105 3.3.1 Đánh giá độ an toàn tác dụng sinh dược sinh khối Thalassiosira pseudonana để làm thức ăn cho ấu trùng tôm thẻ chân trắng 105 3.3.1.1 Độc tính cấp Thalassiosira pseudonana 106 3.3.1.2 Độc tính bán trường diễn Thalassiosira pseudonana 107 3.3.1.3 Hành vi chuột thực nghiệm sau sử dụng sinh khối Thalassiosira pseudonana 111 3.3.2 Sử dụng Thalassiosira pseudonana sản xuất giống tôm thẻ chân trắng 111 3.3.2.1 Ảnh hưởng loại thức ăn đến sinh trưởng tỉ lệ sống ấu trùng tôm thẻ chân trắng 111 3.3.2.2 Ảnh hưởng mật độ tôm nuôi đến tăng trưởng tỉ lệ sống ấu trùng tôm thẻ chân trắng 117 3.3.2.3 Thử nghiệm nuôi thương phẩm với nguồn giống sản xuất Thalassiosira pseudonana 127 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 135 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN 137 TÀI LIỆU THAM KHẢO 138 PHỤ LỤC 151 v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng anh Tiếng việt ALT Alanine aminotransferase ANOVA Analysis of variance Phân tích phương sai ARA Arachidonic acid Axít arachidonic AST Aspatate aminotransferase CĐAS Cường độ ánh sáng CĐSK Chế độ sục khí CFU/g Colony Forming unit per Đơn vị khuẩn lạc gram CHLB Cộng hòa liên bang C.P Charoen pokphand DHA Docosahexaenoic acid Axít docosahexaenoic DLG Daily length gain Tăng trưởng tuyệt đối chiều dài DNA Deoxyribonucleic acid Axít deoxiribonucleic DPA Docosapentaenoic acid Axít docosapentaenoic DWG Daily weigh gain Tăng trưởng tuyệt đối khối lượng ĐC EHP Đối chứng Enterocytozoon Bệnh vi bào tử trùng hepatopanaei EPA Eicosapentaenoic acid Axít eicosapentaenoic FCR Feed conversion ration Tỉ lệ chuyển đổi thức ăn HUFA Highly unsaturated fatty Axít béo khơng bão hịa acid IHHN Infectious hypodermal and Bệnh hoại tử vỏ quan tạo haematopoietic necrosis máu virus IMN Infectious myonecrosis Bệnh hoại tử KP Khẩu phần KPH Khơng phát L Lít LD Lethal dose Liều gây chết động vật thí nghiệm vi LM Light Microscope Kính hiển vi quang học M3 Cubic metre Mét khối MĐTB Mật độ tế bào MUFA Monounsaturated fatty acid Axít béo khơng bão hịa nối đơi NHP Necrotising Bệnh hoại tử gan tụy hepatopancreatitis NTTS Nuôi trồng thủy sản N/L Nauplii/lít PCR Polymerase chain reaction Phản ứng PCR PUFA Polyunsaturated fatty acid Axít béo khơng bão hịa đa nối đôi QCVN Quy chuẩn Việt Nam RNA Ribonucleic acid Axít ribonucleic rRNA Ribosomal ribonucleic acid ARN riboxom SEM Scanning electron Kính hiển vi điện tử quét microscope SFA Saturated fatty acid Axít béo bão hịa SKK Sinh khối khô TATH Thức ăn tổng hợp TB Tế bào TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TFA Total fatty acid Axít béo tổng số TN TS Thử nghiệm Taura syndrome in Penaeus Hội chứng Taura vannamei TTCT VASEP Tôm thẻ chân trắng Vietnam association seafood exporters of Hiệp hội chế biến xuất thủy and sản Việt Nam producers VPA: Vibrio parahaemolyticus : Bệnh hoại tử gan - tụy cấp AHPND Acute hepatopancreatic necrosis disease VTDD Vi tảo dị dưỡng WSD White spot syndrome virus Bệnh đốm trắng YHD Yellow head disease Bệnh đầu vàng vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bảng 1.2 Bảng 1.3 Bảng 2.1 Bảng 2.2 Bảng 2.3 Một số loài vi tảo sử dụng làm thức ăn cho ấu trùng tôm biển tôm thẻ chân trắng Nhu cầu dinh dưỡng ấu trùng tôm thẻ chân trắng 26 Diện tích sản lượng, giá trị xuất tôm nuôi nước lợ 2010 - 2017 27 Thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi vi tảo Thalassiosira pseudonana 32 Chế độ cho ăn ấu trùng tôm thẻ chân trắng 44 Chế độ siphon thay nước bể ương ấu trùng tôm thẻ chân trắng 44 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái tế bào Thalassiosira sp phân lập quan sát kính hiển vi LM SEM 49 Bảng 3.2 Tỉ lệ % độ tương đồng khoảng cách di truyền đoạn gen 18S rRNA loài thuộc chi Thalassiosira 51 Bảng 3.3 Thành phần hàm lượng axít béo sinh khối Thalassiosira pseudonana ni trồng bể composite 3,5 Bảng 3.4 m3 99 Thành phần hóa học Thalassiosira pseudonana 103 Bảng 3.5 Kết theo dõi biểu bất thường sau uống Thalassiosira pseudonana chuột 106 Bảng 3.6 Ảnh hưởng Thalassiosira pseudonana trọng lượng Bảng 3.8 thể chuột 107 Ảnh hưởng Thalassiosira pseudonana lên số tiêu huyết học chuột 108 Ảnh hưởng Thalassiosira pseudonana lên công thức bạch Bảng 3.9 cầu máu chuột 109 Đánh giá mức độ tổn thương tế bào chức gan, thận Bảng 3.7 chuột dùng Thalassiosira pseudonana dài ngày 109 Bảng 3.10 Ảnh hưởng số phần thức ăn lên sinh trưởng ấu trùng tôm thẻ chân trắng 112 Bảng 3.11 Tăng trưởng khối lượng, tỉ lệ sống thời gian biến thái ấu trùng tôm thẻ chân trắng nuôi loại thức ăn khác 112 viii TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] Đặng Thị Sy (2005) Tảo học Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội, 173 trang Pratoomyot J., Srivilas P., Noiraksar T., (2005) Fatty acids composition of 10 microalgal species Songklanakrin J Sci Technol., 27 (6), 1179 - 1187 [3] Aubrey Davis, Lauren T Crum, Lynette B Corbeil, Mark Hildebrand (2017) Expression of Histophilus somni IbpA DR2 protective antigen in the diatom Thalassiosira pseudonana Appl Microbiol Biotechnol 101, 5313 - 5324 doi [4] 10.1007/s00253 - 017 - 8267 - Trần Thị Lê Trang Lục Minh Diệp (2017) Ảnh hưởng mật độ nuôi ban đầu pH đến sinh trưởng, mật độ cực đại thời gian pha cân tảo Thalassiosira pseudonana (Hasle & Heimdal, 1970) ni sinh khối Tạp chí Khoa [5] học - Công nghệ Thủy sản 2, 121 - 126 Trần Thị Lê Trang (2014) Ảnh hưởng độ mặn đến sinh trưởng thành phần sinh hóa tảo Thalassiosira pseudonana (Hasle & Heimdal, 1970) Tạp chí sinh học 36 (2), 220 - 224 [6] Bojko M., Wanda P., Latowski D., Kuczynska P., Olchawapajor M., Strzalka K (2013) The effect of temperature on growth of Thalassiosira pseudonana in vitro system Biotechnol Prog 22, 53 - 59 [7] [8] Iba W., Rice MA., Wikfors GH (2014) Microalgae in eastern pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei (Boone 1931) hatcheries: a review on roles and culture environments Asian Fisheries Science 27, 212 - 233 Ohse S., Derner BR., Ozório ÁR., Corrêa GR., Furlong BE., Cunha RCP (2015) Lipid content and fatty acid profiles in ten species of microalgae IDESIA (Chile) Volumen 33, Nº 1, 93 - 101 [9] Pulz O and Gross W (2004) Valuable products from biotechnology of microalgae Appl Microbiol Biotechnol 65, 635 - 648 [10] Rasala BA and Mayfield SP (2014) Photosynthetic biomanufacturing in green algae; production of recombinant proteins for industrial, nutritional, and medical uses Photosynth Res 123, 227 - 239 doi:10.1007/s11120 - 014 - 9994 - [11] Tredici MR., Rodolfi L., Biondi N., Bassi N., Sampietro G (2016) Techno economic analysis of microalgal biomass production in a - Green Wall Panel (GWP®) plant Algal Research 19, 253 - 263 138 [12] Brown RM., Dunstan AG., Norwood SA., Miller AK (1996) Effects of harvest stage and light on the biochemical composition of the diatom Thalassiosira pseudonana J Phycol 32, 64 - 73 [13] Cook O and Hildebrand M (2016) Enhancing LC - PUFA production in Thalassiosira pseudonana by overexpressing the endogenous fatty acid elongase genes Journal of Applied Phycology., 28, 897 - 905 [14] Tonon T., Sayanova O., Michaelson LV., Qing R., Harvey D., Larson TR., Li Y., Napier JA., Graham IA (2005) Fatty acid desaturases from the microalga Thalassiosira pseudonana FEBS J 272, 3401 - 3412 [15] Tonon T., Harvey D., Qing R., Larson TR., Li Y., Graham IA (2004) Identification of a fatty acid Δ11 - desaturase from the microalga Thalassiosira pseudonana FEBS Lett 563, 28 - 34 [16] Đặng Diễm Hồng, Hồng Minh Hiền, Nguyễn Đình Hưng, Hồng Sỹ Nam, Hồng Lan Anh, Ngơ Hồi Thu, Đình Khánh Chi (2007) Nghiên cứu trình sinh tổng hợp DHA từ loài vi tảo biển dị dưỡng Labyrinthula, Schizochytrium ứng dụng Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 45 (1B), 144 - 153 [17] Macias - Sancho J., Poersch LH., Bauer W., Romano LA., Wasielesky W., Tesser MB (2014) Fishmeal substitution with Arthrospira (Spirulina platensis) in a practical diet for Litopenaeus vannamei: Effects on growth and immunological parameters Aquaculture, Vol 426 - 427, 120 - 125 [18] Napier AJ., Cahoon BE., Chen M., Matsumoto M., Zäeuner S., Markham EJ., Michaelson VL (2013) Identification of a cytochrome b5 - fusion desaturase responsible for the synthesis of triunsaturated sphingolipid long chain bases in the marine diatom Thalassiosira pseudonana Phytochemistry 90, 50 - 55 [19] Qiao H., Cong C., Sun C., Li B., Wang J., Zhang L (2016) Effect of culture conditions on growth, fatty acid composition and DHA/EPA ratio of Phaeodactylum tricornutum Aquaculture 452, 311 - 317 [20] Sahin D., Tas E., Altindag UH (2018) Enhancement of docosahexaenoic acid (DHA) production from Schizochytrium sp S31 using different growth medium conditions AMB Express (1), [21] Borowitzka MA (2013) High - value products from microalgae - their development and commercialization Journal of Applied Phycology 25, 743 - 756 [22] Meyer BJ and de Groot RH (2017) Effects of omega - long chain polyunsaturated fatty acid supplementation on cardiovascular mortality: the importance of the dose of DHA Nutrients, (12), 1305 139 [23] Zárate R., El Jaber - Vazdekis N., Tejera N., Pé - rez JA., Rodríguez C (2017) Significance of long chain polyunsaturated fatty acids in human health Clin Transl Med., (1), 25 [24] Yu ET., Zendejas FJ., Lane PD., Gaucher S., Simmons BA., Lane TW (2009) Triacylglycerol accumulation and profiling in the model diatoms Thalassiosira pseudonana and Phaeodactylum tricornutum (Bacillariophyceae) during starvation J Appl Phycol 21, 669 - 681 [25] Green BR and Zhu SH (2010) Photoprotection in the diatom Thalassiosira pseudonana: Role of LI818 - like proteins in response to high light stress Biochimica et Biophysica Acta 1797, 1449 - 1457 [26] Muller - Feuga A., Robert R., Cahu C., Robin J., Divanach P (2003) Uses of microalgae in aquaculture J.G Støttrup, E McEvoy, (Eds.), Live Feeds in Marine Aquaculture, Blackwell Publishing, Oxford, 253 - 299 [27] Ortega - Salas AA and Nava PF (2017) Cultivation of the Microalga Thalassiosira weissflogii to feed the Rotifer Brachionus rotundiformis J Aquac Mar Biol (5), 00169 DOI: 10.15406/jamb.2017.06.00169 [28] Vartak VR and Joshi VP (2002) Effect of different feeds and water salinities on the cyst production of brine shrimp, Artemia sp Journal of the Indian Fisheries Association 29, 37 - 47 [29] Faulk CK and Holt GJ (2005) Advances in rearing cobia Rachycentron canadum larvae in recirculating aquaculture systems: live prey enrichment and greenwater culture Aquaculture 249, 231 - 243 [30] Reitan KI., Rainuzzo JR., Øie G., Olsen Y (1993) Nutritional effects of algal addition in first feeding of turbot Scophtalmus maximus L., larvae Aquaculture, 118, 257 - 275 [31] Cobcroft JM and Battaglene SC (2009) Jaw malformation in striped trumpeter Latris lineata larvae linked to walling behavior and tank colour Aquaculture 289, 274 - 282 [32] Nicolas JL., Robic E., Ansquer D (1989) Bacterial flora associated with a trophic chain consisting of microalgae, rotifers and turbot larvae: influence of bacteria on larval survival Aquaculture 83, 237 - 248 [33] Lodeiros C., Nuñez M., De Donato M., Graziani C (2002) Evaluation of microalgae diets for Litopenaeus vannamei larvae using a simple protocol Aquaculture Int 10, 177 - 187 [34] Nguyễn Thanh Mai, Trịnh Hồng Khải, Đào Văn Trí, Nguyễn Văn Hùng (2009) Nghiên cứu phân lập, nuôi cấy in vitro tảo silic nước mặn Chaetoceros calcitrans 140 Paulsen, 1905 ứng dụng sinh khối làm thức ăn cho tôm he chân trắng (Penaeus vannamei) Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ 12 (13), 28 - 36 [35] Kiatmetha P., Siangdang W., Bunnag B., Senapin S., Withyachumnarnkul B (2011) Enhancement of survival and metamorphosis rates of Penaeus monodon larvae by feeding with the diatom Thalassiosira weissflogii Aquaculture International 19 (4), 599 - 609 [36] Hemaiswarya S., Raja R., Ravi Kumar R., Ganesan V., Anabazhagan C (2011) Microalgae: a sustainable feed source for aquaculture World J Microbiol Biotechnol 27, 1737 - 1746 [37] Pérez - Morales A., Band - Schmidt CJ., Martínez - Díaz SF (2016) Changes in mortality rates during the larval stage of the Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) on the basis of algal (Chaetoceros calcitrans or Tetraselmis suecica) food density Ecosistemas y recur agropecuarios [online] (9), 415 - 420 [38] Emmerson WD (1980) Ingestion, growth and development of Penaeus indicus larvae as a function of Thalassiosira weissflogii cell concentration Mar Biol 58, 65 - 73 [39] Đoàn Văn Đẩu (1996) Nghiên cứu đặc điểm sinh học tôm he (Penaeus merguiensis de Man 1888) làm sở cho việc xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất tôm giống điều kiện Việt Nam Luận án Tiến sĩ Sinh học, 129 trang [40] Đào Văn Trí (2012) Nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh sản nhân tạo công nghệ sản xuất giống tôm he chân trắng Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nha Trang, 124 trang [41] Brown MR., Jeffrey SW., Volkman JK., Dunstan GA (1997) Nutritional properties of microalgae for mariculture Aquaculture 151, 315 - 331 [42] Jamali H., Ahmadifard N., Abdollahi D (2015) Evaluation of growth, survival and body composition of larval white shrimp (Litopenaeus vannamei) fed the combination of three types of algae International Aquatic Research 7, 115 - 122 [43] Ju ZY., Forster IP., Dominy WG (2009) Effects of supplementing two species of marine algae or their fractions to a formulated diet on growth, survival and composition of shrimp (Litopenaeus vannamei) Aquaculture 292 (3 - 4), 237 - 243 [44] García N., López - Elías AJ., Miranda A., Martínez – Porchas M., Huerta N., García A (2012) Effect of salinity on growth and chemical composition of the diatom Thalassiosira weissflogii at three culture phases Lat Am J Aquat Res., 40 (2), 435 - 440 [45] Li W., Yang Y., Li Z., Xu J., Gao K (2017) Effects of seawater acidification on the growth rates of the diatom Thalassiosira (Conticribra) weissflogii under different 141 nutrient, light, and UV radiation regimes Journal of Applied Phycology 29 (1), 133 - 142 [46] Brown MR (2002) Nutritional value and use of microalgae in aquaculture Avances en Nutrición Accola VI Memorias del VI Simposium Internacional de Nutrición Accola, 3, 281 - 292 [47] Hasle GR and Heimdal BR (1970) Some species of the centric diatom genus Thalassiosira studied in the light and electron microscopes In: Gerloff, J & Cholnoky, J.B Diatomaceae II Beihefte zur Nova Hedwigia 31, 559 - 589 [48] Harris ASD., Medlin LK., Lewis J and Jones KJ (1995) Thalassiosira species (Bacillariophyceae) from a Scottish sea - loch European Journal of Phycology 30, 117 - 131 [49] Armbrust EV., Berges JA., Bowler C., Green BR., Martinez D., Putnam NH., Zhou SG., Allen AE., Apt KE., Bechner M., Brzezinski MA., Chaal BK., Chiovitti A., Davis AK., Demarest MS., Detter JC., Glavina T., Goodstein D., Hadi MZ., Hellsten U., Hildebrand M., Jenkins BD., Jurka J., Kapitonov VV., Kröger N., Lau WWY., Lane TW., Larimer FW., Lippmeier JC., Lucas S., Medina M., Montsant A., Obornik M., Parker MS., Palenik B., Pazour GJ., Richardson PM., Rynearson TA., Saito MA., Schwartz DC., Thamatrakoln K., Valentin K., Vardi A., Wilkerson FP., Rokhsar DS (2004) The genome of the diatom Thalassiosira pseudonana: ecology, evolution, and metabolism Science 306, 79 - 86 [50] Thompson P (1999) The response of growth and biochemical composition to variations in daylength, temperature, and irradiance in the marine diatom Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) J Phycol 35, 1215 - 1223 [51] Trương Ngọc An (1993) Phân loại tảo Silic phù du biển Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kỹ Thuật Hà Nội, 315 trang [52] Poulsen N., Chesley PM., Kroger N (2006) Molecular genetic manipulation of the diatom Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) J Phycol 42, 1059 - 1065 [53] Shrestha RP and Hildebrand M (2017) Development of a silicon limitation inducible expression system for recombinant protein production in the centric diatoms Thalassiosira pseudonana and Cyclotella cryptica Factories 16, pp 145 doi.org/10.1186/s12934 - 017 - 0760 - Microbial Cell [54] Đặng Đình Kim, Trần Văn Tựa, Dương Thị Thủy, Bùi Thị Kim Anh, Vũ Thị Nguyệt, Nguyễn Hồng Yến (2018) Công nghệ sản xuất ứng dụng vi tảo Nhà xuất Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 380 trang [55] Thinh LV (1999) Microalgae for Aquaculture Education Northern Territory University (NTU), Darwin, NT 0909, Australia - 49 142 [56] Trần Anh Tuấn (2012) Nghiên cứu nuôi sinh khối tảo Thalassiosira sp làm thức ăn cho ấu trùng tu hài (Lutrariarhynchaena Jonas, 1884) từ giai đoạn ấu trùng chân bò đến giai đoạn giống cấp I Luận văn Thạc sĩ Nuôi trồng thủy sản, 58 trang [57] Phan Văn Xuân (2010) Ảnh hưởng số yếu tố sinh thái lên phát triển quần thể tảo Thalassiosira sp nhập nội thử nghiệm nuôi thu sinh khối Luận văn Thạc sĩ Nuôi trồng thủy sản, 63 trang [58] Chauton MS., Størseth TR., Johnsen G (2003) High - resolution magic angle spinning 1H NMR analysis of whole cells of Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae): broad range analysis of metabolic composition and nutritional value J Appl Phycol 15 (6), 533 - 542 [59] Jacobsen A., Grahl - Nielsen O., Magnesen T (2010) Does - a large - scale continuous algal production system provide a stable supply of fatty acids to bivalve hatcheries J Appl Phycol 22 (6), 769 - 777 [60] Voltolina D., Sanchez - Saavedra MdP., Torres - Rodriguez LM (2008) Outdoor mass microalgae production in Bahia Kino, Sonora, NW Mexico Aquacultural Engineering 38, 93 - 96 [61] Borowitzka MA (1997) Microalgae for aquaculture: opportunities and constraints Journal of Applied Phycology 9, 393 - 401 [62] Longnecker K., Kujawinski BE., Soule Kido CM (2015) Dissolved organic matter produced by Thalassiosira pseudonana Marine Chemistry 168, 114 - 123 [63] Valenzuela - Espinoza E., Millán - Núñez R., Trees CC., Santamaria - del - Ángel E., Núñez - Cebreo F (2007) Growth and accessory pigments to chlorophyll a ratios of Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) cultured under different irradiances Hidrobiology 17, 249 - 255 [64] Zhukova NV (2004) Changes in the lipid composition of Thalassiosira pseudonana during its life cycle Russian Journal of Plant Physiology 51 (5), 702 - 707 [65] Gao K and Yang G (2012) Physiological responses of the marine diatom Thalassiosira pseudonana to increased pCO2 and seawater acidity Marine Environmental Research 79, 142 - 151 [66] Vásquez - Suárez A., Guevara M., González M., Cortez R., Arredondo - Vega B (2013) Growth and biochemical composition of thalassiosira pseudonana (Thalassiosirales: Thalassiosiraceae) cultivated in semicontinuous system at different culture media and irradiances Rev Biol Trop 61 (3), 1003 - 1013 [67] Widianingsih HR., Endrawati H and Mamuaja J (2013) Fatty acid composition of marine microalgae in Indonesia Journal of tropical biology and conservation 10, 75 - 82 143 [68] La Vars SM., Johnston MR., Gascooke JR., Ellis AV (2013) Si{1H} CP - MAS NMR comparison and ATR - FTIR spectroscopic analysis of the diatoms Chaetoceros muelleri and Thalassiosira pseudonana grown at different salinities Anal Bioanal Chem 405, 3359 - 3365 [69] Amzil Z., Hess P., Séchet V., Réveillon D (2016) Production of BMAA and DAB by diatoms (Phaeodactylum tricornutum, Chaetoceros sp., Chaetoceros calcitrans and, Thalassiosira pseudonana) and bacteria isolated from a diatom culture Harmful Algae 58, 45 - 50 [70] Yan X., Cao J., Liao K., Zhou C., Xu J., Ye M., Ran Z., Chen S., Kong Z., Zhang R (2017) The comparative study for physiological and biochemical mechanisms of Thalassiosira pseudonana and Chaetoceros calcitrans in response to different light intensities Algae Research 27, 89 - 98 [71] Tian Y., Zheng T., Xu H., Chen Q., Zhu X., Ding H., Zheng W., Lei X (2018) Effective harvesting of the marine microalga Thalassiosira pseudonana by Marinobacter sp FL06 Bioresource Technology 269, 127 - 133 [72] Bromke MA., Giavalisco P., Willmitzer L., Hesse H (2013) Metabolic analysis of adaptation to short - term changes in culture conditions of the marine diatom Thalassiosira pseudonana PLoS ONE [73] Hewes CD (2015) Transitional - state growth kinetics of Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) during self - shading in batch culture under light - limiting, nutrient - replete conditions: Improving biomass for productivity (culture quality) Algal Research 12, 550 - 560 [74] Takabe T., Tanaka Y., Kageyama H (2018) Biosynthetic pathways of glycinebetaine in Thalassiosira pseudonana functional characterization of enzyme catalyzing three - step methylation of glycine Plant Physiology and Biochemistry 127, 248 - 255 [75] Lê Thị Trung Huỳnh Thị Ngọc Như (2010) Sự thay đổi hình thái tế bào theo chu kì tăng trưởng vi tảo silic Thalassiosira sp nuôi môi trường nước biển nhân tạo Tạp chí Khoa học Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh 21, 132 137 [76] Trang Si Trung, Nguyen Thi Khanh Huyen, Nguyen Cong Minh, Tran Thi Le Trang and Nguyen The Han (2016) Optimization of harvesting of microalgal Thalassiosira pseudonana biomass using chitosan prepared from shrimp shell waste Asian J Agric Res., 10, 162 - 174 [77] Xu J., Kazachkov M., Jia Y., Zheng Z., Zou J (2013) Expression of a type diacylglycerol acyltransferase from Thalassiosira pseudonana in yeast leads to 144 incorporation of docosahexaenoic acid beta - oxidation intermediates into triacylglycerol FEBS J 280, 6162 - 6172 [78] Brown MR., Mular M., Miller I., Trenerry C., Farmer C (1999) The vitamin content of microalgae used in aquaculture J Phycol 11, 247 - 255 [79] Baek SH., Jung SW., Shin K (2011) Effects of temperature and salinity on growth of Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) isolated from ballast water J Freshw Ecol 26 (4), 547 - 552 [80] Dalin S., Weiying L., Brian MH., Haizheng H., Dongmei L., Shuh - Ji K.,Wenfang L (2015) Interactive effects of light, nitrogen source, and carbon dioxide on energy metabolism in the diatom Thalassiosira pseudonana Limnol Oceanogr 60, 1805 1822 [81] Chen CY and Durbin EG (1994) Effects of pH on the growth and carbon uptake of marine phytoplankton Mar Ecol Prog Ser 109 (1), 83 - 94 [82] Đặng Đình Kim Đặng Hồng Phước Hiền (1999) Công nghệ sinh học vi tảo Nhà xuất Nông nghiệp, 204 trang [83] Hennon GM., Quay P., Morales RL., Swanson LM., Armbrust EV (2014) Acclimation conditions modify physiological response of the diatom Thalassiosira pseudonana to elevated CO2 concentrations in a nitrate - limited chemostat J Phycol 50 (2), 243 - 253 [84] Farfante PI and Kensley B (1997) Penaeoid and Sergestoid Shrimps and Prawns of the Word Keys and Diagnoses for the Families and Genera, Paris [85] FAO (2014) The State of World Fisheries and Aquaculture - Opportunities and challenges Rome 223 p [86] FAO (2018) The State of World Fisheries and Aquaculture - Meeting the sustainable development goals Rome Licence: CC BY - NC - SA 3.0 IGO 227 p [87] https://www.pinoy-entrepreneur.com/2012/10/15/whiteleg-shrimp-culture/ truy cập ngày 1/3/2019 [88] Wyban W., Martinez G., Sweeney J (1997) Adding paprika to Penaeus vannamei maturation diet improves nauplii quality World Aquaculture 28, 59 - 62 [89] Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (2018) Đề án tổng thể phát triển ngành công nghiệp tôm nước lợ Việt Nam đến năm 2030 Số 3475/BNN - QĐ - TCTS ngày 30/08/2018 [90] Napaumpaiporn T., Chuchird N., Taparhudee W (2013) Study on the Efficiency of Three Different Feeding Technique in the Culture of Pacific Shrimp (Litopenaeus vannamei) Kasetsart University Fisheries Research Bulletin 37, - 16 145 [91] Babu DR and Mude JN (2014) Effect of Density on Growth and Production of Litopenaeus vannamei of Brackish Water Culture System in Summer Season with Artificial Diet in Prakasam District, India AIJRFANS 5, 10 - 13 [92] Silva E., Silva J., Ferreira F., Soares M., Soares R., et al (2015) Influence of Stocking Density on the Zootechnical Performance of Litopenaeus vannamei During the Nursery Phase in a Biofloc System Bol Inst Pesca Sao Paulo 41, 777 783 [93] Kumar DP and Krishna PV (2015) Survival and Growth Performance of Pacific White Shrimp Litopenaeus vannamei (Boone 1931) Under Different Stocking Densities IOSR Journal of Agriculture and Veterinary Science 8, 17 - 19 [94] Suriya M., Shanmugasundaram S., Mayavu P (2016) Stocking density, survival rate and growth performance of Litopenaeus vannamei (Boon, 1931) in different cultured shrimp farms Int J Curr Res Biol Med 1, 26 - 32 [95] Samadan GM, Rustadi, Djumanto, Murwantoko (2018) Utilization of Marginal Sand Land for Culture of White Leg Shrimp (Litopenaeus vannamei) with Different Stocking Density in Coastal Purworejo Regency, Central Java, Indonesia Fish Aqua J (3): 257 doi: 10.4172/2150 - 3508.1000257 [96] Franklin DJ., Airs RL., Fernandes M., Bell TG., Bongaerts RJ., Berges JA., et al., (2012) Identification of senescence and death in Emiliania huxleyi and Thalassiosira pseudonana: cell staining, chlorophyll alterations, and dimethylsulfoniopropionate (DMSP) metabolism Limnol Oceanogr 57, 305 - 317 [97] Gunalan B., Nina Tabitha S., Soundarapandian P., Anand T (2013) Nutritive value of cultured white leg shrimp Litopenaeus vannamei Int J Fish Aquaculture, Vol (7), 166 - 171 [98] Aguilar V., Racotta IS., Goytortua E., Wille M., Sorgeloos P et al (2012) The influence of dietary arachidonic acid on the immune response and performance of Pacific whiteleg shrimp, Litopenaeus vannamei, at high stocking density Aquaculture Nutrition 18 (3), 258 - 271 [99] Megahed ME and Mohamed K (2014) Sustainable growth of shrimp aquaculture through biofloc production as alternative to fishmeal in shrimp feeds Journal of Agricultural Science (6), 176 - 188 [100] Kanazawa A (1982) Penaid Nutrition Lousiana State University, Baton Rouge, Lousiana, pp 87 - 105 [101] Gallardo PP., Pedroza - Islas R., Garcia - Galano T., Pascual T., Rosal C., Sanchez A., Gaxiola G (2002) Replacement of live food with microbound diet in feeding Litopaneus setiferus (Burkenroad) larvae Aquaculture Research 33, 681 - 691 146 [102] Becker EW (2004) Microalgae for aquaculture Biotechnology and Applied Phycology, 380 - 391 [103] Nunez M., Lodeiros C., de Donato M., Graziani C (2002) Evaluation of microalgae diets for Litopenaeus vannamei larvae using a simple protocol Aquaculture International 10, 177 - 187 [104] Becker EW (2007) Microalgae as a source of protein Biotechnology Advances 25, 207 - 210 [105] Millamena OM (1996) Review of SEAFDEC/AQD fish nutrition and feed development research SEAFDEC Aquaculture Department, Iloilo, Philippines, pp 52 - 63 [106] Castille F., Lawrence A., Buisman P., Drost R (2004) Effects of sterol supplements (Cholesterol FG, Cholesterol SF and Sterol M1M) on growth and survival of the shrimp, Litopenaeus vannamei Boone pp 504 - 517 [107] VASEP (2017) Báo cáo Xuất thủy sản Việt Nam năm 2017 [108] Hồng Thị Lan Anh, Ngơ Thị Hồi Thu, Đặng Diễm Hồng (2010) Định tên số chủng vi tảo biển phân lập từ vùng biển Hải Phòng Nha Trang dựa hình thái tế bào phân tích 18S rRNA Tạp chí Cơng nghệ Sinh học (3), 387 - 396 [109] Woo ES (2008) Nucleotide sequence and phylogeny of a plastocyanin gene in the marine diatom, Thalassiosira oceanica Department of Biology McGill University Montreal, Quebec, Canada (Master thesis) [110] Luddington IA., Kaczmarska I., Lovejoy C (2012) Distance and Character-Based Evaluation of the V4 Region of the 18S rRNA Gene for the Identification of Diatoms (Bacillariophyceae) PLoS ONE, (9), e45664 [111] Guo L., Sui Z., Zhang S., Ren Y and Liu Y (2015) Comparison of potential diatom ‘barcode’ genes (the 18S rRNA gene and ITS, COI, rbcL) and their effectiveness in discriminating and determining species taxonomy in the Bacillariophyta International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 65, 1369 - 1380 [112] Andersen RA (2005) Algal culturing techniques Academic press [113] Đặng Diễm Hồng cộng (2011) Nghiên cứu xây dựng tập đoàn giống vi tảo biển quang tự dưỡng, dị dưỡng Việt Nam nuôi sinh khối số loài tảo dị dưỡng làm thức ăn nuôi trồng thủy sản Báo cáo tổng kết đề tài, 131 trang [114] Karlson B., Cusack C., Bresnan E (2010) Microscopic and molecular methods for quantitative phytoplankton analysis Paris: Intergovernmental Oceanographic Commission of UNESCO 110 p [115] Guillard RRL and Sieracki MS (2005) Counting cells in cultures with the light microscope Algal culturing techniques, 239 - 252 147 [116] Christopher SL., David JC and Bruno PK (1988) Experimental Phycology A laboratory Mannual Cambridge University Press, Cambridge New York New Rochelle Melbourne Sydney, 123 - 133 [117] Bligh EG and Dyer WJ (1959) A rapid method of total lipid extraction and purification Can J Biochem Physio 37 (8), 911 - 917 [118] Horwitz W (2000) Official Method of Analysis of AOAC International Published by AOAC International, Gaithersburg, Maryland, pp 2200 [119] Đỗ Trung Đàm (2014) Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc Nhà xuất Y học, 264 trang [120] Bộ Y Tế (2012) Thông tư số 03/2012/TT - BYT “hướng dẫn thử thuốc lâm sàng” ngày 2/2/2012 [121] OECD (2002) Drug Safety Evaluation I: Acute and subchronic toxicity assessement USA Academy Press [122] WHO (2000) General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine Geneva, Switzerlandt 2000 [123] Hayes WA (2001) Principles and Method of Toxicology, 4th Edition, Taylor & Francis, Philadenphia [124] Stramski D., Sciandra A., Claustre H (2002) Effects of temperature, nitrogen, and light limitation on the optical properties of the marine diatom Thalassiosira pseudonana Limnol Oceanogr 47, 392 - 403 [125] Berges JA., Varela DE., Harrison PJ (2002) Effects of temperature on growth rate, composition and nitrogen metabolism in the marine diatom Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) Mar Ecol Prog Ser 225, 139 - 146 [126] Bucciarelli E and Sunda WG (2003) Influence of CO2, nitrate, phosphate, and silicate limitation on intracellular dimethylsulfoniopropionate in batch cultures of the coastal diatom Thalassiosira pseudonana Limnol Oceanogr 48, 2256 - 2265 [127] Hoffmann LJ., Breitbarth E., Ardelan MV., Duggen S., Olgun N., Hassellöv M., Wängberg S - Å (2012) Influence of trace metal release from volcanic ash on growth of Thalassiosira pseudonana and Emiliania huxleyi Marine Chemistry 132 - 133, 28 - 33 [128] Mejía LM., Isensee K., Méndez - Vicente A., Pisonero J., Shimizu N., González C., Montelenone B., Stoll H (2013) B content and Si/C ratios from cultured diatoms (Thalassiosira pseudonana and Thalassiosira weissflogii): Relationship to seawater pH and diatom carbon acquisition Geochimica et Cosmochimica Acta 123, 322 337 148 [129] Wu H., Xu Z., Shi Q., Gao G., Yuan W (2018) Combined effects of ocean acidification and warming on physiological response of the diatom Thalassiosira pseudonana to light challenges Marine Environmental Research 135, 63 - 69 [130] Hildebrand M and Manandhar - Shrestha K (2015) Characterization and manipulation of a DGAT2 from the diatom Thalassiosira pseudonana: Improved TAG accumulation without detriment to growth, and implications for chloroplast TAG accumulation Algal Research 12, 239 - 248 [131] Bender SJ., Parker MS., and Armbrust EV (2012) Coupled effects of light and nitrogen source on the urea cycle and nitrogen metabolism over a diel cycle in the marine diatom Thalassiosira doi:10.1016/j.protis.2011.07.008 pseudonana Protist 163, 232 - 251 [132] Reul A, Muñoz M, Bautista B, Neale P, Sobrino C, Mercado J, Segovia M, Salles S, Kulk G, León P (2014) Effect of CO2, nutrients and light on coastal plankton III Trophic cascade, size structure and composition Aquat Biol 22, 59 - 76 [133] Schwenk D., Seppälä J., Spilling K., Virkki A., Tamminen T., Oksman - Caldentey KM., Rischer H (2013) Lipid content in 19 brackish and marine microalgae: influence of growth phase, salinity and temperature Aquat Ecol 47, 415 - 424 [134] Shi Q., Xiahou W., Wu H (2017) Photosynthetic responses of the marine diatom Thalassiosira pseudonana to CO2 - induced seawater acidification Hydrobiologia 788, 361 - 369 [135] Parker MS and Armbrust EV (2005) Synergistic effects of light, temperature, and nitrogen source on transcription of genes for carbon and nitrogen metabolism in the centric diatom Thalassiosira pseudonana (Bacillariophyceae) J Phycol 41 (6), 1142 - 1153 doi: 10.1111/j.1529 - 8817.2005.00139.x [136] Coutteau P (1996) Micro - algae In: Sorgeloos, P., Lavens, P (Eds), Manual on the production and use of live food for aquaculture Fisheries technical paper no 361, Food and Agriculture Organization of the United Nations, Rome, - 48 [137] Smith SR., Glé C., Abbriano RM., Traller JC., Davis A., Trentacoste E., Vernet M., Allen AE., Hildebrand M (2016) Transcript level coordination of carbon pathways during silicon starvation - induced lipid accumulation in the diatom Thalassiosira pseudonana New Phytol 210, 890 - 904 doi:10.1111/nph.13843 [138] Boelen P., van Dijk R., Damste JSS., Rijpstra WIC., Buma AGJ (2013) On the potential application of polar and temperate marine microalgae for EPA and DHA production AMB Express, 3, 26 [139] Bộ Y Tế (2007) Quyết định việc ban hành “Quy định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm” Số 46/2007/QĐ - BYT ngày 19/12/2007 149 [140] Bộ Y Tế (2011) Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia giới hạn ô nhiễm kim loại nặng thực phẩm QCVN - 2:2011/BYT ngày 13/1/2011 [141] Besada V, Andrade JM, Schultze, Gonzalez JJ (2009) Heavy metals in edible seaweeds commercialized for human consumption Journal of Marine Systems 75, 305 - 313 [142] Châu Tài Tảo, Hồ Ngọc Ngà Trần Ngọc Hải (2015) Ảnh hưởng mật độ lên tăng trưởng tỷ lệ sống tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) ương giống theo công nghệ Biofloc Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 37 (1), 65 - 71 [143] Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (2014) Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia sở nuôi tôm nước lợ - điều kiện bảo đảm vệ sinh thú y, bảo vệ môi trường an toàn thực phẩm QCVN 02 - 19:2014/BNNPTNT [144] Bộ Khoa học Công nghệ (2014) Tôm thẻ chân trắng - Tôm giống - Yêu cầu kỹ thuật TCVN 10257: 2014 [145] Nguyễn Phương Toàn, Vũ Văn Sáng, Nguyễn Viết Vương, Nguyễn Quang Tuất, Đặng Thị Dịu, Đoàn Thị Nhinh, Trần Thế Mưu, Vũ Văn In (2013) Ảnh hưởng mật độ lên sinh trưởng tỉ lệ sống tôm chân trắng SPF nuôi thương phẩm bể composit nhà (Litopenaeus vannamei) Tạp chí Khoa học Phát triển 11 (2), 223 - 229 [146] Nguyễn Duy Quỳnh Trâm Huỳnh Thị Hương (2017) Ảnh hưởng mật độ đến sinh trưởng, tỉ lệ sống hiệu kinh tế tôm thẻ chân trắng Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) ni thương phẩm tỉnh Quảng Nam Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 15 (7), 926 - 934 [147] Châu Tài Tảo, Hoàng Văn Lâm, Cao Mỹ Án Trần Ngọc Hải (2017) Ảnh hưởng hỗn hợp dược liệu lên tăng trưởng, tỷ lệ sống đáp ứng miễn dịch tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) ni thâm canh bể Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ số 48b, 10 - 17 150 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Danh sách trình tự đoạn gen 18S rRNA công bố Phụ lục 2: Phụ lục 3: ngân hàng gen (GenBank) sử dụng để xây dựng phát sinh chủng loại Phương pháp chuẩn bị môi trường nuôi vi tảo Tách chiết ADN tổng số, phản ứng PCR nhân phần gen 18S rRNA, điện di gel agarose, tinh sản phẩm PCR xác định trình tự gen Phụ lục 4: Phụ lục 5: Trình tự gen 18S rRNA Thalassiosira sp Phương pháp chuẩn bị nguồn nước biển sử dụng thí nghiệm ni sinh khối vi tảo, sản xuất giống nuôi thương Phụ lục 6: phẩm tôm thẻ chân trắng Phương pháp xác định khối lượng khô Phụ lục 7: Phụ lục 8: Xác định hàm lượng Chlorophyll a, b Carotenoit Các cơng đoạn hoạt hóa giống Thalassiosira pseudonana Phụ lục 9: phịng thí nghiệm Mật độ tế bào Thalassiosira pseudonana bể composite 3,5 m3 12 Phụ lục 10: Hình ảnh minh họa bố trí thí nghiệm Thalassiosira pseudonana 16 Phụ lục 11: Phụ lục 13: Hình ảnh quy mơ nuôi trồng Thalassiosira pseudonana 17 Quy trình thu hoạch Thalassiosira pseudonana quy mơ phịng thí nghiệm pilot 17 Hình ảnh minh họa thu hoạch sinh khối Thalassiosira Phụ lục 14: pseudonana tươi sống 20 Hình ảnh minh họa sinh khối tươi sinh khối khô Phụ lục 12: Thalassiosira pseudonana 21 Phụ lục 15: Bố trí thử nghiệm độc tính cấp sinh khối khơ Thalassiosira pseudonana 21 Phụ lục 16: Hình ảnh giải phẫu mơ bệnh học gan, thận chuột dùng Thalassiosira pseudonana dài ngày 22 Phụ lục 17: Mô tả phương pháp kết nghiên cứu hành vi chuột thực nghiệm sau sử dụng sinh khối Thalassiosira pseudonana 24 151 Phụ lục 18: Phụ lục 19: Hình ảnh minh họa bố trí thí nghiệm ương nuôi ấu trùng tôm thẻ chân trắng sinh khối Thalassiosira pseudonana tươi sống bể composite 50 L 28 Hình ảnh minh họa bố trí thử nghiệm ương ni ấu trùng tôm thẻ chân trắng sinh khối Thalassiosira pseudonana tươi Phụ lục 20: Phụ lục 21: sống bể xi măng 30 m3 29 Hình ảnh minh họa giai đoạn tơm thẻ chân trắng thí nghiệm 30 Hình ảnh minh họa ni thương phẩm tơm thẻ chân trắng với nguồn giống sản xuất sinh khối Thalassiosira pseudonana tươi sống 31 Phụ lục 22: Biến động yếu tố môi trường nước bể ương ao nuôi thương phẩm tôm thẻ chân trắng 31 Phụ lục 23: Thu hoạch hoạch tốn kinh tế vụ ni tơm thẻ chân trắng 37 152 ... sinh học sinh sản Thalassiosira pseudonana 1.2.3 Công nghệ nuôi Thalassiosira pseudonana 10 1.2.3.1 Công nghệ nuôi Thalassiosira pseudonana giới 10 1.2.3.2 Công nghệ nuôi Thalassiosira. .. hồn thành thí nghiệm q trình hồn thành Luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn cán Phịng Cơng nghệ tảo, Vi? ??n Công nghệ sinh học, Vi? ??n Hàn lâm Khoa học Công nghệ Vi? ??t Nam: TS Lưu Thị Tâm, TS Ngơ Thị Hồi... gian học tập hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đặng Diễm Hồng, nguyên Trưởng phòng Công nghệ Tảo, Vi? ??n Công nghệ sinh học, Vi? ??n Hàn lâm Khoa học Công nghệ