TUYẾN TRÙNG KÝ SINH GÂY HẠI TRÊN CÀ RỐT Ở VIỆT NAM VÀ THỬ NGHIỆM BIỆN PHÁP SINH HỌC TRONG PHÒNG TRỪ CHÚNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN THỊ DUYÊN TUYẾN TRÙNG KÝ SINH GÂY HẠI TRÊN CÀ RỐT Ở VIỆT NAM VÀ THỬ NGHIỆM BIỆN PHÁP SINH HỌC TRONG PHÒNG TRỪ CHÚNG Chuyên ngành: Tuyến trùng học Mã số: Thí điểm TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC Hà Nội – 2018 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS TS Nguyễn Ngọc Châu Người hướng dẫn khoa học 2: TS Trịnh Quang Pháp Phản biện 1: … Phản biện 2: … Phản biện 3: … Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ’, ngày … tháng … năm 201… Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam MỞ ĐẦU Cà rốt (Daucus carota L Him) trồng tiêu thụ rộng rãi giới nhờ có giá trị dinh dưỡng giá trị y học cao (Chen et al., 2016) Ở Việt Nam, Lâm Đồng Hải Dương có diện tích trồng tập trung lớn Tuy nhiên, vùng trồng chuyên canh cà rốt xuất thiệt hại tuyến trùng thực vật gây ảnh hưởng đến suất chất lượng Hiện nay, Việt Nam, chưa có nhiều nghiên cứu sâu thành phần tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt Để phòng trừ tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt, biện pháp sử dụng thuốc hóa học chủ yếu Tuy nhiên, việc lạm dụng thuốc hóa học gây hậu tiêu cực đến môi trường sống, sức khỏe người sinh vật khác (Meira et al 2006) Biện pháp sinh học biện pháp hiệu phòng trừ tuyến trùng thực vật an tồn với mơi trường (Perry & Moens, 2013) Vì vậy, việc lựa chọn sản phẩm sinh học thân thiện với mơi trường để phòng trừ tuyến trùng cần thiết Với mục đích nghiên cứu thành phần lồi nhóm tuyến trùng gây hại quan trọng cà rốt, đánh giá thử nghiệm biện pháp sinh học phòng trừ tuyến trùng tạo sở cho việc quản lý dịch hại tuyến trùng cà rốt, tiến hành thực đề tài nghiên cứu: “Tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt Việt Nam thử nghiệm biện pháp sinh học phòng trừ chúng” Mục tiêu luận án - Xác định thành phần loài tuyến trùng ký sinh cà rốt vùng trồng cà rốt Việt Nam - Xác định nhóm tuyến trùng ký sinh gây hại quan trọng cà rốt vùng nghiên cứu - Đánh giá khả phòng trừ phòng thí nghiệm số lồi tuyến trùng ký sinh gây hại quan trọng cà rốt loài nấm đối kháng Ý nghĩa khoa học thực tiễn Ý nghĩa khoa học: - Đã xác định thành phần, phân bố loài tuyến trùng ký sinh cà rốt số vùng canh tác cà rốt Việt Nam bổ sung thành phần tuyến trùng ký sinh cà rốt giới Cung cấp, bổ sung liệu hình thái phân tử nhóm tuyến trùng ký sinh gây hại quan trọng cà rốt Đã đăng ký trình tự 19 quần thể tuyến trùng ký sinh cà rốt Việt Nam Genbank - Ghi nhận công bố loài cho khoa học Bổ sung giống tuyến trùng ghi nhận Việt Nam Ghi nhận thêm 16 loài tuyến trùng ký sinh cà rốt Việt Nam - Xác định nhóm tuyến trùng ký sinh gây hại quan trọng cà rốt vùng nghiên cứu - Bước đầu, đưa dẫn chứng khoa học ảnh hưởng dịch bào tử nấm Paecilomyces sp dịch nhân nuôi nấm Lentinus squarrosulus hai loài tuyến trùng ký sinh gây hại quan trọng cà rốt phòng thí nghiệm Ý nghĩa thực tiễn: - Việc xác định nhóm tuyến trùng gây hại cà rốt sở cho việc lựa chọn giải pháp phòng trừ Mơ tả triệu chứng cụ thể tuyến trùng gây củ cà rốt để chẩn đốn nhanh Xác định nhóm tuyến trùng gây hại ảnh hưởng đến phẩm chất chất lượng cà rốt trồng trọt thương phẩm Việt Nam - Đánh giá khả phòng trừ tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt nấm đối kháng làm sở cho việc lựa chọn biện pháp phòng trừ sinh học hữu hiệu góp phần giảm lượng thuốc hóa học, phát triển hệ sinh thái nơng nghiệp bền vững - Những dẫn liệu tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt luận án sử dụng làm nguồn tài liệu giảng dạy bệnh hại cà rốt, giúp người nơng dân tham khảo trình sản xuất cà rốt Nội dung luận án Nội dung 1: Xác định thành phần loài tuyến trùng thực vật ký sinh cà rốt dựa vào đặc điểm hình thái phân tử Nội dung 2: Xác định nhóm tuyến trùng thực vật gây hại quan trọng cà rốt vùng nghiên cứu Nội dung 3: Thử nghiệm khả phòng trừ lồi nấm đối kháng Paecilomyces sp dịch nhân nuôi nấm L squarrosulus nhóm tuyến trùng gây hại cà rốt phòng thí nghiệm Bố cục luận án Luận án gồm 156 trang, đó: mở đầu trang, tổng quan 19 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu trang, kết thảo luận 120 trang, kết luận kiến nghị trang Luận án gồm 34 bảng, 49 hình, 268 tài liệu tham khảo Ngồi có danh mục cơng trình cơng bố phụ lục kèm CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tình hình nghiên cứu tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt giới 1.1.1 Các nhóm tuyến trùng ký sinh quan trọng cà rốt Tuyến trùng ký sinh cà rốt giới tập trung nghiên cứu từ năm 50 kỷ trước Các nghiên cứu chủ yếu tập trung khu vực Châu Âu, Châu Mỹ Châu Úc Cho đến ghi nhận 21 giống tuyến trùng ký sinh cà rốt (Nobbs, 2003) Trong đó, tuyến trùng giống Meloidogyne Pratylenchus nhóm gây hại phổ biển nhiều vùng canh tác cà rốt như: Mỹ, Đức, Úc, Canada,… đề cập đến thành phần lồi 1.1.2 Phân loại hình thái phân tử tuyến trùng thực vật Mơ tả đặc điểm hình thái, hình thái lượng kết hợp với kỹ thuật phân tích đặc trưng phân tử giúp cho việc định loại đến loài xác Phân đoạn mở rộng D2D3 vùng 28S rDNA sử dụng để phân loại số giống tuyến trùng thực vật (Subbotin et al., 2008; Van Den Berg et al., 2015) 1.1.3 Khả phòng trừ tuyến trùng thực vật nấm đối kháng Nấm Paecilomyces spp nấm hoại sinh đất, quan tâm nghiên cứu nhiều nhất, tiềm ký sinh khả kiểm soát tuyến trùng thực vật tốt (Brand et al., 2010) Cơ chế nấm Paecilomyces spp ký sinh trực tiếp sợi nấm (Jones et al., 1984), đồng thời sản sinh hoạt chất enzyme có khả phân hủy lớp kitin bên trứng tuyến trùng, tạo điều kiện thuận lợi cho sợi nấm xâm nhập (Mukhtar et al., 2013) Nấm L squarrosulus lồi nấm ăn được, giàu dinh dưỡng (Omar et al., 2011) Chưa có nghiên cứu khả tiêu diệt tuyến trùng nấm L squarrosulus Tuy nhiên, dịch nhân nuôi nấm L squarrosulus có chứa hàm lượng enzyme chitinase cao, enzyme phân hủy lớp vỏ trứng tuyến trùng (Deborah, 2018) chứa hoạt chất kháng tuyến trùng 1,2 dihydroxymintlactone (Isaka et al., 2011), phenolic (Ghatr & Sridhar, 2017) 1.2 Tình hình nghiên cứu tuyến trùng thực vật Việt Nam Ở Việt Nam, thành phần loài tuyến trùng ký sinh gây hại cà rốt chưa nghiên cứu nhiều Theo N.N Châu & N.V Thanh (2000), ghi nhận 12 loài tuyến trùng thuộc giống ký sinh cà rốt Lâm Đồng Ở Hải Dương, V.Đ Phiên (2014), xác định giống Meloidogyne Pratylenchus gây hại cà rốt Hải Dương Phương pháp phân tích đặc điểm hình thái đánh giá chẩn loại đến loài tuyến trùng Bên cạnh đó, kỹ thuật phân tử áp dụng phân loại tuyến trùng, giúp cho việc định loại đến lồi xác Trên sở phân tích DNA kết hợp với đặc điểm hình thái, số lồi cơng bố cho khoa học như: R duriophilus, R daklakensis, M daklakensis,… (Trinh et al., 2004; 2012; 2018) CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG, ĐỊA ĐIỂM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Tuyến trùng ký sinh rễ, củ cà rốt đất xung quanh vùng rễ - Cây cà rốt Daucus carota L Him - Hai loài nấm đối kháng sử dụng thí nghiệm phòng trừ tuyến trùng là: dịch bào tử nấm Paecilomyces sp dịch nhân nuôi nấm L squarrosulus 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu - Quá trình khảo sát, điều tra tình trạng tuyến trùng ký sinh cà rốt vùng canh tác thuộc tỉnh là: Đơng Anh (Hà Nội); Cẩm Giàng Nam Sách (Hải Dương); Văn Giang (Hưng Yên); Đức Trọng, Đơn Dương Đà Lạt (Lâm Đồng) Nghiên cứu thực Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật Luận án tiến hành từ tháng 10/2014-10/2018 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp điều tra, thu mẫu tuyến trùng Điều tra thành phần loài thu mẫu ngẫu nhiên theo phương pháp điểm chéo góc (N.N Châu, 2003; Perry & Moens, 2013) 2.2.2 Phương pháp tách lọc tuyến trùng từ đất mô thực vật Tuyến trùng tách lọc từ đất rễ theo phương pháp mô tả N.N Châu N.V Thanh (1993) 2.2.3 Phương pháp nhân nuôi tuyến trùng - Tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne nhân nuôi cà chua theo mô tả López-Pérez et al (2011) có hiệu chỉnh - Tuyến trùng gây tổn thương rễ thuộc giống Pratylenchus nhân nuôi đĩa cà rốt theo phương pháp Coyne et al (2014) 2.2.4 Phương pháp xử lý, làm làm tiêu tuyến trùng Tuyến trùng cố định theo phương pháp Courtney et al (1995), làm lên tiêu cố định theo mô tả đề cập N.N Châu (2003) 2.2.5 Phương pháp chuẩn bị mẫu chụp ảnh KHV điện tử quét Xử lý mẫu tuyến trùng để quan sát chụp ảnh hiển vi điện tử quét thực theo quy trình Abolafia (2015) 2.2.6 Các số đo hình thái phân loại tuyến trùng Các số hình thái lượng thực theo Siddiqi (2000) Tuyến trùng phân loại theo khóa phân loại N.N Châu & N.V Thanh (2000), Castillo & Vovlas (2007), Kazachenko & Mukhina (2013), Geraert (2010; 2011), Chitambar & Subbotin (2014) 2.2.7 Phương pháp phân tích phân tử tuyến trùng Tách chiết DNA theo Holterman et al (2009) PCR khuếch đại vùng gene theo De Ley et al (1999) Sản phẩm PCR tinh kít GeneJet PCR Purification gửi giải trình tự Cơng ty Macrogen - Hàn Quốc 2.2.8 Phương pháp thử nghiệm đánh giá hiệu lực phòng trừ tuyến trùng nấm đối kháng Thí nghiệm đánh giá hiệu lực phòng trừ tuyến trùng nấm đối kháng tiến hành theo phương pháp mô tả Pau et al (2012) 2.2.9 Phân tích số liệu Xử lý số liệu theo phần mềm: i) phân tích hình thái lượng: Microsoft Excel, GENSTAT 12 (Payne et al., 2009); ii) phân tích trình tự DNA: chương trình BLAST, BioEdit (Hall, 1999), MEGA (Tamura et al., 2013); iii) phân tích sai khác cơng thức thí nghiệm đối kháng: SPSS CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thành phần loài tuyến trùng ký sinh cà rốt Việt Nam Kết phân loại hình thái phân tử tuyến trùng ký sinh cà rốt xác định 25 loài, thuộc 15 giống, họ, (bảng 3.1) Bảng 3.1 Thành phần loài tuyến trùng ký sinh cà rốt vùng điều tra TT 10 Tên loài BỘ TYLENCHIDA THORNE, 1949 Họ Belonolailidae Whitehead, 1960 Giống Tylenchorhynchus Cobb, 1913 T mashhoodi Siddiqi & Basir, 1959 T annulatus Golden, 1971 Họ Hoplolaimidae Filipjev, 1934 Giống Helicotylenchus Steiner, 1945 H dihystera (Cobb 1893) Sher, 1961 H indicus Siddiqi, 1963 Giống Hoplolaimus Von Daday, 1905 H chambus Jairajpuri & Baqri, 1973 Giống Rotylenchulus Linford & Oliveira, 1940 R reniformis Linford & Oliveira, 1940 Họ Anguinidae Nicol, 1935 (1926) Giống Ditylenchus Filipjev, 1936 Ditylenchus sp Họ Criconematidae Thorne, 1949 Giống Hemicriconemoides Chitwood & Birchfield, 1957 H strictathecatus Esser, 1960 Giống Hemicaloosia Ray & Das, 1978 Hemicaloosia sp Giống Mesocriconema Andrássy, 1965 M sphaerocephalum (Taylor, 1936) Loof, 1989 Họ Meloidogynidae Filipjev, 1934 Giống Meloidogyne Goeldi, 1892 HN HD HY LĐ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 M incognita Chitwood, 1949 M arenaria Chitwood, 1949 M graminicola Golden & Birchfield 1965 Họ Pratylenchidae Thorne, 1949 Giống Pratylenchus Filipjev, 1936 P thornei Sher & Allen, 1953 P zeae Graham, 1951 P haiduongensis Nguyen et al., 2017 P coffeae Filipjev & Sch Stekhoven, 1941 P penestran Filipjev & Sch Stekhoven, 1941 Pratylenchus sp Pratylenchus sp BỘ DORYLAIMIDA PEARSE, 1942 Họ Longidoridae Thorne, 1935 Giống Longidorus Micoletzky, 1922 Longidorus sp Giống Paralongidorus Siddiqi, 1974 Paralongidorus sp Giống Xiphinema Cobb, 1913 X brevicolle Lordello & Da Costa, 1961 BỘ TRIPLONCHIDA COBB, 1920 Họ Diphterophoridae (Micoletzki, 1922) Giống Diphterophora de Man, 1880 Diphterophora sp BỘ APHELENCHIDA SIDDIQI, 1980 Họ Aphelenchoididae Skarbilovich, 1947 Giống Aphelenchoides Fischer, 1894 Aphelenchoides sp + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Ghi chú: (+) diện tuyến trùng; HN: Hà Nội, HD: Hải Dương, HY: Hưng Yên LĐ: Lâm Đồng Trong đó, tuyến trùng ký sinh cà rốt Hải Dương có số lượng giống loài nhiều với 16 loài thuộc 12 giống, Lâm Đồng ghi nhận 12 loài thuộc 10 giống, Hà Nội gồm loài thuộc giống Hưng Yên gồm loài thuộc giống Các kết nghiên cứu ghi nhận thành phần loài tuyến trùng ký sinh cà rốt Hà Nội, Hưng Yên Hải Dương Trong nghiên cứu này, cà rốt Lâm Đồng ghi nhận thêm giống là: Ditylenchus, Tylenchorhychus, Rotylenchulus, Meloidogyne, Hemicaloosia, Xiphinema Diphterophora Trong số 15 giống tuyến trùng ký sinh tìm thấy vùng điều tra, có giống chưa ghi nhận giới là: Hemicriconemoides, Hemicaloosia, Hoplolaimus, Paralongidorus, Diphterophora Aphelenchoides 3.2 Đặc điểm hình thái phân tử loài tuyến trùng ký sinh cà rốt Đặc điểm hình thái, số đo, ảnh chụp, đặc trưng phân tử, chủ phân bố loài tuyến trùng ký sinh cà rốt ghi nhận nghiên cứu mô tả chi tiết đầy đủ luận án 3.2.1 Giống Tylenchorhynchus Cobb, 1913 Có lồi thuộc giống Tylenchorhynchus T annulatus T mashoodi Loài T annulatus ghi nhận vùng canh tác cà rốt là: Hà Nội, Hải Dương Lâm Đồng Quần thể phân lập Hà Nội có kích thước thể, chiều dài kim hút, chiều dài từ đầu đến lỗ tiết chiều dài thực quản lớn Cả ba quần thể có đặc điểm hình thái số đo tương đồng với quần thể mô tả Geraert (2010) So với quần thể Việt Nam mô tả trước đó, số a, c’ lớn kim hút ngắn (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Loài T mashhoodi ghi nhận Hải Dương Hưng Yên Hai quần thể có khoảng biến thiên kích thước thể nhỏ so với quần thể gốc lồi (Siddiqi & Basir, 1959) có kích thước thể, số a nhỏ so với quần thể Việt Nam mơ tả trước (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Loài T annulatus khác với loài T mashhoodi đặc điểm như: Loài T annulatus có kích thước thể, chiều dài từ đỉnh đầu đến vòng thần kinh lớn lồi T mashhoodi Vùng đầu lồi T annulatus khơng phân biệt với đường viền thể khác với loài T mashhoodi tách biệt với đường viền thể Vị trí lỗ tiết loài T annulatus nằm ngang với phần eo thắt thực quản, lỗ tiết lồi T mashhoodi lùi phía sau nằm ngang với cạnh trước gần thực quản tuyến Lồi T annulatus có dài, hình trụ, mút tròn rộng, túi chứa tinh tiêu giảm, khơng chứa tính trùng khơng tìm thấy đực Trong lồi T mashhoodi có ngắn, hình chóp, mút hẹp, túi chứa tinh hình tròn, to, có chứa đầy tinh trùng có ghi nhận đực 3.2.2 Giống Helicotylenchus Steiner, 1945 Có lồi thuộc giống Helicotylenchus ghi nhận ký sinh cà rốt loài H dihystera H indicus Loài H dihystera ghi nhận vùng canh tác cà rốt Hải Dương So với quần thể lồi mơ tả Sher (1966) N.N Châu & N.V.Thanh (2000), quần thể lồi H dihystera phân lập từ cà rốt có khoảng biến thiên giá trị a, c kim hút nhỏ Loài H indicus ghi nhận vùng canh tác cà rốt là: Hà Nội, Hưng Yên Lâm Đồng Cả ba quần thể có đặc điểm hình thái, số đo tương đồng với quần thể gốc mô tả Siddiqi (1963), quần thể mô tả N.N Châu & N.V Thanh (2000) Loài H indicus phân biệt với lồi H dihystera vị trí phasmid Phasmid lồi H indicus nằm phía trước lỗ hậu mơn từ - vòng cutin Trong lồi H dihystera có phasmid nằm vị trí cao phía trước hậu mơn từ - 11 vòng cutin 3.2.3 Giống Hoplolaimus Von Daday, 1905 Giống ghi nhận loài loài H chambus với cá thể vùng canh tác cà rốt Hải Dương Cá thể có đặc điểm hình thái số đo tương tự với loài gốc quần thể Việt Nam mơ tả trước đó, ngoại trừ số b có giá trị nhỏ (Jairajpuri & Baqri, 1973; N.N Châu & N.V Thanh, 2000) 3.2.4 Giống Rotylenchulus Linford & Oliveira, 1940 Giống Rotylenchulus ghi nhận loài R reniformis Loài ghi nhận vùng canh tác cà rốt Cả bốn quần thể có đặc điểm hình thái số đo tương đồng với tương đồng với quần thể mô tả Dasgupta et al (1968) N.N Châu & N.V Thanh (2000) 3.2.5 Giống Hemicriconemoides Chitwood & Birchfield, 1957 Giống Hemicriconemoides ghi nhận loài H strictathecatus Hải Dương Hưng Yên Quần thể Hưng Yên có kích thước thể nhỏ quần thể Hải Dương Hai quần thể có đặc điểm hình thái số đo tương đồng với quần thể mơ tả trước Esser 1960 Geraert 2010 Hiện nay, loài H strictathecatus gộp chung từ ba loài trước loài H strictathecatus, H litchi H mangiferae Đặc trưng phân tử Trình tự vùng gen D2D3 quần thể H4359 tương đồng từ 95 - 99% với quần thể thuộc loài H strictathecatus Quần thể H4359 biến đổi nucleotide từ - 2% so với quần thể thuộc loài H strictathecatus (từ KM516173 KM516178) biến đổi nucleotide 5% so với quần thể thuộc loài H litchi (AY780956, KF856540, MH142618 KP192481) Tuy nhiên, loài nhập chung thành loài loài H strictathecatus Quần thể H4359 tạo thành nhánh lớn H strictathecatus với giá trị bootstrap 96 10 Thanh, 2000; Luc & Coomans, 1992) 3.2.9 Giống Meloidogyne Goeldi, 1892 Có lồi thuộc giống Meloidogyne ghi nhận ký sinh cà rốt loài M incognita, M arenaria M graminicola Loài M incognita ghi nhận vùng canh tác cà rốt So sánh với quần thể mơ tả trước Chitwood (1949), bốn quần thể loài M incognita ký sinh cà rốt có số như: kích thước thể kim hút ấu trùng, giá trị a đực lớn hơn; số a, c ấu trùng, kim hút đực, nhỏ Các quần thể tương đồng với quần thể Việt Nam mô tả N.N Châu & N.V Thanh, 2000 Loài M arenaria ghi nhận quần thể Hải Dương Quần thể biến đổi so với quần thể gốc Chitwood (1949), ngoại trừ kích thước thể trưởng thành ấu trùng, số b đực ấu trùng nhỏ hơn, số c kim hút ấu trùng lớn Quần thể có chiều dài kim hút nhỏ so với quần thể Việt nam mơ tả trước (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Loài M graminicola ghi nhận quần thể Hà Nội Quần thể có đặc điểm hình thái biến đổi so với quần thể gốc, ngoại trừ, có kích thước thể nhỏ chiều dài kim hút lớn hơn; đực có kích thước thể kim hút lớn hơn; ấu trùng có kích thước thể chiều dài kim hút nhỏ (Golden & Birchfield, 1965) Quần thể có kim hút cái, đực ấu trùng, số c ấu trùng nhỏ hơn; số a ấu trùng lớn so với quần thể Việt Nam (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Ba loài thuộc giống Meloidogyne ký sinh cà rốt có đặc điểm hình thái sai khác như: - Con cái: Lồi M arenaria thể có dạng hình tròn đến hình hồ lơ, cổ ngắn eo thắt lại thể Loài M incognita lồi M.graminicola có thể hình tròn, cổ ngắn Tuy nhiên, lồi M incognita có kích thước lớn so với lồi M graminicola Lồi M incognita có vùng lưng cao, vng, vân bụng tròn mịn, đứt đoạn Lồi M arenaria có phần lưng thấp, vân phình sang hai bên Lồi M graminicola có vân tròn, mịn, liền khơng bị đứt đoạn, vùng lưng thấp Lồi M incognita lỗ tiết nằm ngang sau gốc kim hút, loài M arenaria M graminicola lỗ tiết nằm cách xa gốc kim hút - Ấu trùng: Lồi M graminicola có nhọn hyalin dài so với hai lồi lại Vị trí Phasmid loài M incognita nằm khoảng hyaline, vị trí phasmid lồi M arenaria nằm nửa hyaline nằm sát mút lồi M graminicola 13 Đặc trưng phân tử: Trình tự vùng gen D2D3 quần thể M4859, M3656, M4907 M5269 có tương đồng 100% so với quần thể thuộc loài M incognita Quần thể M4806 tương đồng 100% với loài M arenaria quần thể M4856 tương đồng 99% với lồi M graminicola Khơng có biến đổi nucleotide quần thể M4859, M3656, M4907 M5269, có - biến đổi nucleotide so với quần thể M4806, biến đổi từ 72 - 73 nucleotide so với quần thể M4856 Các quần thể M4859, M3656, M4907 M5269 nhánh loài M incognita Quần thể M4806 nhánh loài M arenaria Đáng ý mẫu thuộc loài M incognita M arenaria thuộc nhánh tách biệt với loài khác M4856 thuộc nhánh với loài M graminicola KY882485 M morocciensis KP306531 M incognita KY882486 M morocciensis KX752373 M javanica KX752374 M javanica KX752375 M javanica KX752330 M incognita 96 KX752332 M incognita M incognita M3656 M incognita M5269 M incognita M4859 KX752382 M incognita 99 M incognita M4907 KX752383 M incognita KX151138 M arenaria EU364889 M arenaria 93 AF435803 M arenaria M arienara M4806 KP901082 M arenaria KY882484 M ethiopica 91 KY882481 M ethiopica 99 KF482372 M ethiopica KP411230 M enterolobii KX823404 M enterolobii 99 KX823403 M enterolobii 91 KX823401 M enterolobii KX823400 M enterolobii 95 KC241978 M minor KC241976 M minor KC241979 M naasi 96 JN019266 M naasi 84 KP901068 M naasi M graminicola M4856 94 KY660544 M graminicola 97 KY250089 M graminicola KY660545 M graminicola KF751066 M graminicola 99 JX465616 M trifoliophila JX465617 M trifoliophila 66 JX465618 M trifoliophila EU555406 Radopholus similis 0.05 Hình 3.19 Cây phát sinh chủng loại dạng ML (mơ hình HKY+G) dựa vùng gen D2D3 lồi Meloidogyne spp 14 3.2.10.Giống Pratylenchus Filipjev, 1936 Có loài thuộc giống Pratylenchus ghi nhận ký sinh cà rốt loài P coffeae, P penetrans, P thornei, P zeae, P haiduongensis, Pratylenchus sp Pratylenchus sp Loài Pratylenchus coffeae Loài P coffeae ghi nhận vùng canh tác cà rốt Hưng Yên So sánh quần thể loài P coffeae ký sinh cà rốt với quần loài P coffeae phân lập Việt Nam trước, số như: chiều dài thể, chiều dài kim hút, vị trí vulval giá trị b’, c nhỏ (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Hình dạng mút lồi P coffeae phân lập cà rốt đa dạng So sánh với quần thể mô tả Sher & Allen (1953) Ryss (1988) cho thấy: chiều dài thể chiều dài kim hút nhỏ hơn, vị trí vulval thấp Loài Pratylenchus penetrans Loài P penetrans ghi nhận vùng canh tác cà rốt Lâm Đồng So sánh với quần thể mô tả Loof (1960) Vovlas & Troccoli (1990), có số như: chiều dài thể, chiều dài kim hút giá trị a, c, V có khoảng biến thiên nhỏ So với quần thể loài P penetrans phân lập Việt Nam trước đó, có giá trị a b lớn (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Lồi Pratylenchus thornei Có cá thể phân lập từ cà rốt Hải Dương thuộc loài P thornei với mã số P4358 Cá thể có đặc điểm hình thái số đo hồn toàn tương đồng với quần thể gốc (Sher & Allen, 1953) Tuy nhiên, so với quần thể loài P thornei phân lập Việt Nam trước có: chiều dài thể, kim hút giá trị c nhỏ (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Loài Pratylenchus zeae Loài P zeae phân lập cà rốt ghi nhận có quần thể: quần thể mã số P4854 phân lập Hà Nội quần thể mã số P3656 phân lập Hải Dương Hai quần thể có: chiều dài thể, chiều dài kim hút, giá trị a, b nhỏ so với mô tả gốc (Graham, 1951); Chiều dài thể giá trị b lớn hơn, vị trí vulval cao so với quần thể phân lập Việt Nam trước (N.N Châu & N.V Thanh, 2000) Lồi Pratylenchus haiduongensis Nguyen et al., 2017 Loài P haiduongensis ký sinh cà rốt phân lập Hải Dương, với quần thể mã số: P3655, P3658 P4728 Cả ba quần thể thuộc lồi có đặc điểm hình thái khác biệt so với tất lồi khác theo 15 khóa định loại Castillo & Vovlas (2007) Đây loài cho khoa học với tên P haiduongensis có đặc điểm hình thái sau: Con cái: Vùng đầu có vòng cutin Kim hút dài 17,7 - 20,3 µm, gốc kim hút tròn vát phía trước Vùng bên có đường bên Dải trung tâm đơi xuất vân xiên Hai đường bên ngồi có cấu trúc areolation Túi chứa tinh tiêu giảm, hình tròn bầu dục, khơng có tinh trùng Tử cung sau dài, - 3,5 lần chiều rộng thể vulva Vị trí vulval cao (66 - 70%) Đi dài hình chóp, hình trụ thắt; mút nhọn, tròn, nhẵn xẻ, có 24 - 31 vòng cutin phía bụng Con đực: Khơng tìm thấy Hình 3.1 Ảnh chụp KHV loài P haiduongensis ký sinh cà rốt A: vùng thực quản, B-D: kim hút, F-G: vùng bên, E: tử cung sau, H-I: tử cung trước, J-L: vùng đuôi, L: phasmids (thước đo = 10 µm) Lồi P haiduongensis có đặt điểm hình thái giải phẫu gần giống với loài P parazeae phân lập Trung Quốc Tuy nhiên, lồi P haiduongensis có đặc điểm khác biệt so với loài P parazeae như: chiều dài thể chiều rộng vùng đầu nhỏ hơn; vùng môi tách khỏi đĩa môi vs vùng môi không tách khỏi đĩa môi; kim hút dài hơn; gốc kim hút tròn vát lên phía vs gốc kim hút tròn vát xuống phía dưới; có kiểu hình trụ thắt, lồi P parazeae khơng có kiểu Lồi Pratylenchus sp Loài Pratylenchus sp phân lập cà rốt Lâm Đồng với quần thể mã số: P4861, P4981, P5189 P5208 Bốn quần thể có đặc điểm 16 hình thái số đo đặc trưng sau: Con cái: Vùng đầu có vòng Kim hút dài 14 - 16 µm, gốc kim hút tròn vát phía đường bên, có cấu trúc areolation Dải trung tâm khơng có vân xiên Túi chứa tinh hình tròn bầu dục, chứa đầy tinh trùng Tử cung sau ngắn, 0,8 1,5 lần chiều rộng thể Vị trí vulval thấp (78,8 - 82%) Đi dài, hình trụ, hình Hình 3.2 Ảnh chụp KHV lồi Pratylenchus sp chóp hình chùy với 19 ký sinh cà rốt - 28 vòng cutin phía bụng Con cái: A: vùng thực quản, B-C: kim hút, Mút đuôi đa dạng: nhọn, D: vùng bên, E: túi chứa tinh, G: tử cung sau, tròn, lồi, nhẵn xẻ H-I: vùng đuôi, K: phasmids; Con đực: J: vùng đi, L: phasmids (thước đo: 10 µm) Con đực: Có cấu tạo tương tự cái, trừ đặc điểm giới tính Theo khóa định loại Castillo & Vovlas (2007), loài Pratylenchus sp.1 gần giống với loài P penetrans Tuy nhiên, loài Pratylenchus sp.1 khác so với loài P penetrans đặc điểm: (1) hai đường trung tâm vùng bên khơng có sọc xiên vs có sọc xiên hai đường trung tâm); (2) hình dạng mút đa dạng (tròn, cụt, vs tròn, nhọn); (3) phần phụ bụng mơi có khía vs khơng có khía (hình 3.3) Hình 3.3 Ảnh chụp SEM vùng mơi lồi Pratylenchus sp1 loài P penetrans (Hernándezet al., 2000) Loài Pratylenchus sp Loài Pratylenchus sp phân lập cà rốt Đà Lạt - Lâm Đồng với 17 mã số P3130 Quần thể có đặc điểm hình thái số đo sau: Con cái: Vùng đầu có vòng Đĩa mơi tách khỏi vùng mơi Kim hút dài 15,2 - 16,6 µm, gốc kim hút tròn vát phía trước Có đường bên, dải trung tâm khơng có vân chéo; có cấu trúc areolation, số cá thể, vùng đường bên phân tách thành đường Túi chứa tinh hình tròn bầu dục, chứa đầy tinh trùng Tử cung sau ngắn, - 1,5 lần chiều rộng thể vulval Vulval có vị trí thấp (77 83%) Đi dài, hình chóp, mút Hình 3.4 Ảnh chụp KHV loài Pratylenchus sp ký sinh cà rốt (thước đo =10 µm) tròn nhọn, nhẵn, Con cái: A: vùng thực quản, B-C: kim hút, có 18 - 30 vòng cutin phía bên D: vùng bên, E: túi chứa tinh, F: tử cung bụng sau, G-H: vùng đi; Con đực: J: vùng Con đực: Có cấu tạo tương tự cái, trừ đặc điểm giới tính Theo khóa định loại Castillo & Vovlas (2007), lồi Pratylenchus sp gần giống với loài P penetrans Tuy nhiên, loài Pratylenchus sp khác loài P penetrans đặc điểm: (1) hai đường trung tâm vùng bên khơng có sọc xiên, đường bên đơi bị phân tách thành đường vs có sọc xiên hai đường trung tâm, đường bên không phân tách thành đường; (2) phần phụ bụng phần phụ lưng môi tách khỏi phần bên mơi rãnh khơng vng góc vs vng góc (hình 3.5) Hình 3.5 Ảnh chụp SEM vùng mơi loài Pratylenchus sp loài P penetrans (Hernándezet al., 2000) 18 Loài Pratylenchus sp khác với loài Pratylenchus sp đặc điểm: (1) hình dạng mút (tròn nhẵn, khơng phân đốt vs tròn, cụt lồi, mịn xẻ): (2) đường bên phân tách thành đường vs đường bên không phân tách thành đường; (3) phần phụ bụng vùng mơi khơng có khía vs có khía (hình 3.6) Hình 3.6 Ảnh chụp SEM vùng mơi lồi Pratylenchus sp Pratylenchus sp Phân tích khác biệt chuẩn - CDA Kết nghiên cứu cho thấy, cái: quần thể phân tích CDA phân tách thành vùng khác nhau, ba loài Pratylenchus sp 2, P zeae P haiduongensis bị phân tách thành vùng riêng biệt; hai loài Pratylenchus sp P penetrans tách biệt với lồi lại lại có phần chồng lấn với Bốn quần thể P4861, P4981, P5189 P5208 tách biệt với quần thể Pratylenchus sp Bảy đặc điểm hình thái bao gồm: chiều dài kim hút, V, E.P, b, b’, c’ G2/chiều rộng thể vulval số có ý nghĩa (>1