XÂY DỰNG PHẢ hệ BỆNH NHÂN GLÔCÔM bẩm SINH NGUYÊN PHÁT MANG đột BIẾN GEN CYP1B1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƯƠNG LAN XÂY DỰNG PHẢ HỆ BỆNH NHÂN GLÔCÔM BẨM SINH NGUYÊN PHÁT MANG ĐỘT BIẾN GEN CYP1B1 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƯƠNG LAN XÂY DỰNG PHẢ HỆ BỆNH NHÂN GLÔCÔM BẨM SINH NGUYÊN PHÁT MANG ĐỘT BIẾN GEN CYP1B1 Chuyên ngành: Hóa sinh Mã số : 60720106 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Huy Thịnh HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trước hết xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Trần Huy Thịnh- người Thầy trực tiếp hướng dẫn , tận tình giúp đỡ, truyền đạt kinh nghiệm quý báu kiến thức cho tơi q trình học tập hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng, biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Trần Vân Khánh, Phó Giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Gen-Protein, Trường Đại học Y Hà nội, Chủ nhiệm đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh Glôcôm bẩm sinh nguyên phát Hà Nội” cho phép tham gia nghiên cứu, tạo điều kiện giúp đỡ dẫn tận tình suốt q trình tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng, biết ơn sâu sắc tới GS.TS Tạ Thành Văn, Phó Hiệu trưởng Trường Đại học Y Hà Nội, Chủ nhiệm Bộ mơn Hóa sinh, Giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Gen-Protein, Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi học tập hồn thành luận văn Tơi xin ghi nhớ động viên, giúp đỡ nhiệt tình Thầy, Cơ, cán Bộ mơn Hóa sinh Trung tâm Nghiên cứu Gen - Protein, Trường Đại học Y Hà Nội suốt q trình tơi thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại Học Trường Đại Học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp học tập thực luận văn Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2018 Học viên Đỗ Thị Hương Lan LỜI CAM ĐOAN Tôi Đỗ Thị Hương Lan, học viên Cao học Hóa sinh khóa 25, Trường Đại học Y Hà Nội, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực với hướng dẫn PGS TS Trần Huy Thịnh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố ViệtNam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam đoan Hà Nội, ngày 10 tháng9 năm 2018 Người cam đoan Đỗ Thị Hương Lan DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT A Adenin C Cytosin CYP1B1 Cytochrome P450, family 1, subfamily B, polypeptide DNA Deoxyribonucleotid acid dNTP Deoxyribonucleotid 5’- triphosphat EDTA Ethylen Diamin Tetraacetic Acid G Guanin NADP Nicotinamid Adenin Dinucleotid Phosphat NST Nhiếm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction PCG Primary congenital glaucoma POAG Primary open-angle glaucoma JOAG Juvenile open-angle glaucoma SNP Single nucleotide polymorphisms T Thymin TE tri – EDTA MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát .3 1.1.1.Khái niệm glôcôm bẩm sinh 1.1.2 Dịch tễ học glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.3.Cơ chế bệnh sinh tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh .4 1.1.4 Điều trị glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.2 Cơ chế bệnh học phân tử .8 1.2.1 Cơ chế di truyền gen lặn NST thường .8 1.2.2.Cấu trúc vị trí gen CYP1B1 10 1.3.Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 14 1.4 Phương pháp phát đột biến gen CYP1B1 22 1.4.1 Phương pháp PCR 22 1.4.2 Phương pháp giải trình tự gen 23 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .26 2.1.Đối tượng nghiên cứu 26 2.2 Phương pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 27 2.2.2 Sơ đồ nghiên cứu 28 2.3 Nội dung nghiên cứu 28 2.3.1 Xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát 28 2.3.2 Xây dựng phả hệ gia đình bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát mang đột biến gen CYP1B1 29 2.4 Phương tiện nghiên cứu 29 2.4.1 Dụng cụ, trang thiết bị 29 2.4.2 Hoá chất 30 2.4.3 Nội dung nghiên cứu 31 2.5 Các bước tiến hành .31 2.5.1.Chẩn đoán lựa chọn bệnh nhân 31 2.5.2 Quy trình tách chiết DNA từ máu ngoại vi 31 2.5.3.Quy trình kỹ thuật PCR để khuyếch đại DNA 34 2.5.4 Giải trình tự gen máy giải trình tự tự động 36 2.5.5 Xác định đột biến gen CYP1B1 36 2.6 Xây dựng phả hệ gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh ngun phát mang đột biến gen CYP1B1 36 2.7 Vấn đề đạo đức nghiên cứu .36 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 38 3.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu 38 3.2 Kết phân tích đột biến gen CYP1B1 39 3.2.1 Kết tách chiết DNA .39 3.2.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B 40 3.2.3 Kết phả hệ gia đình bệnh nhân 47 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 54 4.1 Kết phát đột biến gen bệnh nhân 54 4.1.1 Tỷ lệ phát đột biến 54 4.1.2 Các loại đột biến 55 4.2 Biện luận kết phát đột biến gen CYP1B1 gia đình 64 4.2.1 Biện luận kết gia đình mã số G04 64 4.2.2 Biện luận kết gia đình số mã số G09 .64 4.2.3 Biện luận kết gia đình số mã số G12 .65 4.2.4 Phân tích kết gia đình số mã số G18 65 KẾT LUẬN 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Sự di truyền thành viên24 gia đình Saudi Arabian 16 Bảng 1.2 Phân bố loại đột biến CYP1B1 toàn giới .17 Bảng 2.1 Trình tự mồi dùng cho phản ứng PCR 34 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR .35 Bảng 3.1 Phân bố tuổi khởi phát 38 Bảng 3.2 Phân bố giới tính 39 Bảng 3.3 Kết phát đột biến gen CYP1B1 41 Bảng 3.4 Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 42 Bảng 4.1 Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 tác giả khác .55 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Dấu hiệu lâm sàng glơcơm bẩm sinh ngun phát Hình 1.2 Minh họa dấu hiệu tăng nhãn áp .6 Hình 1.3 Hình ảnh siêu âm .7 Hình 1.4 Cơ chế di truyền bệnh gen lặn NST thường .8 Hình 1.5 Sơ đồ di truyền gen lặn liên kết NST thường 10 Hình 1.6 Vị trí gen CYP1B1 nhánh ngắn nhiễm sắc thể .11 Hình 1.7 Minh họa cấu trúc gen CYP1B1 11 Hình 1.8 Sơ đồ minh họa chế ảnh hưởng đột biến gen CYP1B1 13 Hình 1.9 Các bước phản ứng PCR .23 Hình 1.10 Phương pháp giải trình tự gen 25 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu .28 Hình 2.2 Một số ký hiệu dùng để lập phả hệ 29 Hình 3.1 Mật độ quang kiểm tra nồng độ DNA mẫu G09 .39 Hình 3.2 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR exon2 40 Hình 3.3 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR exon 40 Hình 3.4 Hình ảnh đột biến p.Q86K bệnh nhân G04 42 Hình 3.5 Hình ảnh SNP p.A119S bệnh nhân G04 43 Hình 3.6 Hình ảnh đột biến p.Q86K bệnh nhân G09 43 Hình 3.7 Hình ảnh đột biến p.G61E bệnh nhân G12 .43 Hình 3.8 Hình ảnh đột biến p.L27Q bệnh nhân G12 .44 Hình 3.9 Hình ảnh đột biến p.G36D bệnh nhân G12 .44 Hình 3.10 Hình ảnh đột biến p.E229K bệnh nhân G18 45 Hình 3.11 Hình ảnh đột biến p.D218H bệnh nhân G18 45 Hình 3.12 Hình ảnh SNP p.R48G bệnh nhân G13 46 Hình 3.13 Hình ảnh SNP p.A119S bệnh nhân G13 46 Hình 3.14 Hình ảnh SNP p.L432V bệnh nhân G19 46 Hình 3.15 Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân mã số G04 47 Hình 3.16 Hình ảnh giải trình tự gia đình bệnh nhân G04 .48 Hình 3.17 Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân mã số G09 49 Hình 3.18 Hình ảnh giải trình tự gia đình bệnh nhân G09 .49 Hình 3.19 Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân mã số G12 50 Hình 3.20 Hình ảnh giải trình tự gia đình bệnh nhân G12 .51 Hình 3.21 Sơ đồ phả hệ gia đình bệnh nhân mã số G18 52 Hình 3.22 Hình ảnh giải trình tự gia đình bệnh nhân G18 .53 Hình 4.1 Hình minh họa bảo tồn glycin lồi .56 Hình 4.2 Minh họa vị trí đột biến p.G61E p.E229K [87] 59 Hình 4.3 Hình ảnh phần mềm dự đốn đột biến p.L27Q .60 Hình 4.4 Hình ảnh phần mềm dự đốn đột biến p.Q86K .61 Hình 4.5 Hình ảnh phần mềm dự đốn đột biến p.D218H .63 69 gây bệnh, đột biến không phát (trong vùng promoter, bị ảnh hưởng chức gen vơ hiệu hóa biểu [86] Tác giả Ni Li biện luận nghiên cứu đột biến dị hợp tử bệnh nhân số đột biến bị bỏ qua hạn chế phương pháp xét nghiệm, trình tự đột biến nằm vùng khơng mã hóa gen, có khả đột biến gen khác [33] Những đột biến gen CYP1B1 mô tả nguyên nhân di truyền chủ yếu cho phần lớn trường hợp PCG gia Ả Rập Saudi [38] Tuy nhiên kết phân tích phả hệ chúng tơi, có gia đình bệnh nhân phát đột biến phân tích trình tự gen Gia đinh mã số G04,G12 không phát đột biến người nhà, bệnh nhân người gia đình bị bệnh mang gen bệnh Trong đó, bệnh nhân mã số G12 có tiền sử gia đình tiên sử thai nghén (đã trình bày phần trên) Giả thiết đặt đột biến bệnh nhân đột biến de novo (đột biến tế bào mầm, phát sinh) Tác giả Lim SH (2013) nghiên cứu bệnh nhân bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Mỹ phát hai cặp song sinh gia đình mang thay đổi dị hợp tử cho đột biến khơng có cha lẫn mẹ, ông cho khả đột biến de novo [66] BassemA báo cáo không phát đột biến gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh nguyên phát Ả rập Saudi, ông cho đột biến de novo [10] 70 KẾT LUẬN Nghiên cứu tiến hành 20 bệnh nhân, có 13 bệnh nhân nam 7bệnh nhân nữ Tất bệnh nhân có độ tuổi khởi phát tuổi Đối tượng nghiên cứu bao gồm người nhà bệnh nhân phát đột biến Tất mẫu DNA làm phản ứng PCR giải trình tự gen Sau phân tích kết bàn luận, rút số kết luận sau: Kết phát đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân: Phát /20 bệnh nhân có đột biến gen CYP1B1 Có đột biến tìm thấy, có đột biến missen (p.G36D, p.G61E, p.E229K), đột biến (p.27Q, p.Q86K, p.D218H), tất đột biến dị hợp tử Ngồi phát đa hình đơn gen bệnh nhân: p.R48G, p.A119S, p.L432V Kết phát đột biến gen gia đình bệnh nhân Phát đột biến gen dị hợp tử p.E229K bố bệnh nhân mã số G18 mang đột biến trạng thái dị hợp tử Các trường hợp khác không phát đột biến gen thành viên gia đình TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Như Hơn (2012), Nhãn khoa, tập 1, ed, Nhà xuất y học, Hà Nội Chandler PA, Grant WM, Epstein DL, et al (1986) Chandler and Grant's glaucoma Philadelphia, PA: Lea and Febiger 3rd ed, 539 H.A Quigley, A T Broman, et al (2006) The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020 Br J Ophthalmol 90(3), 262–267 Vasiliou V, Gonzalez FJ, et al (2008) Role of CYP1B1 in glaucoma Annu Rev Pharmacol Toxicol 48, 333–358 Faiq M, Mohanty K, Dada R, Dada T (2013) Molecular diagnostics and genetic counseling in primary congenital glaucoma J Current Glau Prac 7(1), 25–35 Vincent P.deLuise MD, Douglas R.Anderson MD (1983) Primary infantile glaucoma (congenital glaucoma) Survey of Ophthalmology -19 Julia Yan Yu Chan, Bonnie NK Choy, Alex LK Ng (2015) Review on the Management of Primary Congenital Glaucoma J Curr Glaucoma Pract 9(3), 92–99 Robert N Weiss, Shaffer and Daniel I (1970) Congenital and pediatric glaucomas Mosby, St Louis tr 37 Francois J (1980) Congenital glaucoma and inheritance Ophthalmologica 181(2), 61-73 10 Benjani BA, Stockton DW, Lewis RA (2000) Multiple CYP1B1 mutations and incomplete penetrance in an inbred population segregating primary congenital glaucoma suggest frequent de novo events and a dominant modifier locus.Hum Mol Genet.9(3), 367-74 11 Ji Hyun Lee, Chang-Seok Ki, Hee-Jung Kim et al (2011) Analysis of copy number variation using whole genome exon-focused array CGH in Korean patients with primary congenital glaucoma Mol Vis 17, tr 3583–3590 12 Mukesh Tanwar, Tanuj Dada, Ramanjit Sihota et al (2009) Mutation spectrum of CYP1B1 in North Indian congenital glaucoma patients Mol Vis 15, tr 1200–1209 13 Fuse N., Miyazawa A., Takahashi K et al (2010) Mutation spectrum of the CYP1B1 gene for congenital glaucoma in the Japanese population Jpn J Ophthalmol 54(1), tr 1-6 14 A O Khan, M A Aldahmesh, J Y Mohamed et al (2012) CYP1B1 analysis of unilateral primary newborn glaucoma in Saudi children J AAPOS 16(6), tr 571-2 15 M Sarfarazi and I Stoilov (2000) Molecular genetics of primary congenital glaucom Eye (Lond) 14 ( Pt 3B), tr 422-8 16 Ho CL, Walton DS (2004) Primary congenital glaucoma J Pediatr Ophthalmol Strabismus 41(5), 271–288 17 B Thylefors and A D Négrel The global impact of glaucoma BULL Who,72(3) 323–326 18 Shields M B, Third edition, Williams and Wilkins (1982) Primary congenital glaucoma USA, 220-233 19 Nguyễn Như Quang (1982), "Đặc điểm lâm sàng bệnh glôcôm bẩm sinh phẫu thuật cắt bè củng mạc" Nhãn khoa,1, tr 65-70 20 Hoskins HD Jr, Kass MA Becker-Shaffer's diagnosis and therapy of the glaucoma (1989) St Louis: CV Mosby 6th ed, p 356 21 T S Dietlein, P C Jacobi., G K Krieglstein (1999) Prognosis of primary ab externo surgery for primary congenital glaucoma Br J Ophthalmol 83(3), 317 – 322 22 Khaled K Abu-Amero, PhD, FRCPath and Deepak P Edward, MD (2004) Primary Congenital Glaucoma GeneReviews® 23 Trịnh Văn Bảo, Trần Thị Thanh Hương (2008), Di truyền y học, Nhà xuất giáo dục, Hà Nội 24 Muneep Faiq, Reetika Sharma, Rima Daka (2013) Genetic, Biochemical and Clinical Insights into Primary Congenital Glaucoma J Current Glau Prac 7(2), 66-84 25 T R Sutter, Y M Tang, C L Hayes et al (1994) Complete cDNA sequence a human dioxin-inducible mRNA identifies a new gene subfamily of cytochrome P450 that maps to chromosome J Biol Chem 269(18), tr 13092-9 26 Y M Tang, Y Y Wo, J Stewart et al (1996) Isolation and characterization of the human cytochrome P450 CYP1B1 gene J Biol Chem 271(45), tr 28324-30 27 Stoilov I., Akarsu A N and Sarfarazi M (1997) Identification of three different truncating mutations in cytochrome P4501B1 (CYP1B1) as the principal cause of primary congenital glaucoma (buphthalmos) in families linked to the GLC3A locus on chromosome 2p21 Hum Molec Genet 6, tr 641-647 28 M Sarfarazi, A N Akarsu, A Hossain et al (1995) Assignment of a locus (GLC3A) for primary congenital glaucoma (Buphthalmos) to 2p21 and evidence for genetic heterogeneity Genomics 30(2), tr 171-7 29 Schwartzman M L., Balazy M., Masferrer J et al (1987) 12(R)hydroxyicosatetraenoic acid: a cytochrome-P450-dependent arachidonate metabolite that inhibits Na+,K+-ATPase in the cornea Eye (Lond) 84(22), tr 8125-9 30 M Sarfarazi and I Stoilov (2000) Molecular genetics of primary congenital glaucom Eye (Lond) 14 ( Pt 3B), tr 422-8 31 Kiranpreet Kaur, Anil K Mandal, Subhabrata Chakrabarti (2011) Primary Congenital Glaucoma and the Involvement of CYP1B Middle East Afr J Ophthalmol 8, – 16 32 Doshi M, Marcus C, Bejjani BA, Edward DP.(2006) Immunolocalization of CYP1B1 in normal, human, fetal and adult eyes Exp Eye Res 82, 24–32 33 Ni Li, Yong Zhou, Liang Du et al (2011) Overview of Cytochrome P450 1B1 gene mutations in patients with primary congenital glaucoma Experimental Eye Research 93, tr 572-579 34 Anil K Mandal , Debasis Chakrabarti, Jan (2011) Update on congenital glaucoma Indian Ophthalmol 59(Suppl1) 148–S157 35 Demenais F, Bonaïti C, Briard ML (1979) J Congenital glaucoma: genetic models Hum Genet 46(3), 305–317 36 Leske MC.(1983) The epidemiology of open-angle glaucoma: a review Am J Epidemiol118(2), 166–191 37 Wilson R., Martone J (1996) Epidemiology of chronic open angle glaucoma In: Ritch R, Shields M, Krupin T, editors The glaucomas St Louis: Mosby pp 753–768 (Vol 2) 38 Basem A, Benjjani, Richard Alan Lewis (1998) Mutations in CYP1B1, the Gene for Cytochrome P4501B1, Are the Predominant Cause of Primary Congenital Glaucoma in Saudi Arabia AJHJ, Pages 325-333 39 Aramati B M Reddy, Shirly G Panicker (2003) Identification of R368H as a Predominant CYP1B1 Allele Causing Primary Congenital Glaucoma in Indian Patients Investigative Ophthalmology & Visual Science Vol.44, 4200-4203 40 H J Kim, W Suh, S C Park et al (2011) Mutation spectrum of CYP1B1 and MYOC genes in Korean patients with primary congenital glaucoma Mol Vis 17, tr 2093-101 41 K K Abu-Amero, E A Osman, A Mousa et al (2011) Screening of CYP1B1 and LTBP2 genes in Saudi families with primary congenital glaucoma: genotype-phenotype correlation Mol Vis 17, tr 2911-9 42 W Suh and C Kee (2012) A clinical and molecular genetics study of primary congenital glaucoma in South Korea Br J Ophthalmol 96(11), tr 1372-7 43 Chen X1, Chen Y, Wang L et al (2014) CYP1B1 genotype influences the phenotype in primary congenital glaucoma and surgical treatment Br J Ophthalm 98(2), tr 246-51 44 Morales-Fernandez L, Martinez-de-la-Casa JM, Garcia-Bella J.(2015) Clinical Variability of Primary Congenital Glaucoma in a Spanish Family With Cyp1b1 Gene Mutations J Glaucoma 630-4 45 Panicker SG, Reddy AB, Mandal AK, Ahmed N (2002) Identification of novel mutations causing familial primary congenital glaucoma in Indian pedigrees Investigative Ophthalmology & Visual Science Vol.43, 1358-1366 46 D F Sena1, S Finzi1,2, K Rodgers (2003) Founder mutations of CYP1B1 gene in patients with congenital glaucoma from the United States and Brazil Medical Genetics Volume 41, issue 47 Maria T., Gacia Anton, Joan J Salazar ( 2017) Goniodysgenesis variability and activity of CYP1B1 genotypes in primary congenital glaucoma.PLoS One 12(4), 0176386 48 Ling Chen, Lina Huang, Aineng Zeng, Zing He ( 2015) CYP1B1 gene mutations with incomplete penetrance in a Chinese pedigree with primary congenital glaucoma: a case report and review of literatures Int J Clin Exp Med 8(8), 14538–14541 49 Faiq MA, Dada R, Qadri R, Dada T (2015)CYP1B1-mediated pathobiology of primary congenital glaucoma J Curr Glaucoma Pract 9, 77–80 50 Hong Wei Wang, Peng Sun, Yoao Chen (2018) Research progress on human genes involved in the pathogenesis of glaucoma Mol Med Rep 18(1), 656-674 51 Phạm Thị Chi Lan (2007) Khảo sát hình thái glôcôm trẻ em BV mắt TPHCM Y Học TP Hồ Chí Minh Tập 11, Phụ Số 52 Tan Do; William Shei; Pham Thi Minh Chau.(2016) CYP1B1 and MYOC Mutations in Vietnamese Primary Congenital Glaucoma Patients Journal of Glaucoma 25(5), 491–498 53 Tạ Thành Văn (2010) PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử Nhà xuất Y học, Hà Nội 54 Sanger F., Nicklen S and Coulson A.R (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors Proc Natl Acad Sci 74(12), 5463-5467 55 Koolman J (2005) DNA sequencing Color Atlas of Biochemistry, 2nd edition, 260-262 56 H.A Quigley, A T Broman.( 2006) The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020 Br J Ophthalmol 90(3), 262–267 57 Panicker SG1, Reddy AB, Mandal AK, Ahmed N (2002) Identification of novel mutations causing familial primary congenital glaucoma in Indian pedigrees Investigative Ophthalmology & Visual Science Vol.43, 1358-1366 58 R Sitorus, S M Ardjo, B Lorenz, M Preising (2003) CYP1B1 gene analysis in primary congenital glaucoma in Indonesian and European patients J Med Genet 40 (1), 9e-9 59 Aramati Bindu Madhava Reddy,Kiranpreet Kaur,Anil Kumar Mandal (2004) Mutation spectrum of the CYP1B1 gene in Indian primary congenital glaucoma patients Molecular Vision 10, 696 – 702.`` 60 Zenteno JC, Hernandez-Merino E, Mejia-Lopez H et al (2008) Contribution of CYP1B1 mutations and founder effect to primary congenital glaucoma in Mexico J Glaucoma 17, 189–192 61 Colomb Evelyne, Kaplan Josseline, Garchon Henri-Jean ( 2003) Novel cytochrome P450 1B1 (CYP1B1) mutations in patients with primary congenital glaucoma in France Hum Mutat 22(6), 496–496 62 Campos-Mollo E, Lopez-Garrido MP, Blanco-Marchite et al (2009) CYP1B1 mutations in Spanish patients with primary congenital glaucoma: phenotypic and functional variability Mol Vis 15, 417–431 63 Weisschuh N, Wolf C, Wissinger B, Gramer E (2009) A clinical and molecular genetic study of German patients with primary congenital glaucoma Am J Ophthalmol 147(4), 744–753 64 Stoilov IR, Costa VP, Vasconcellos JP, Melo MB (2002) Molecular genetics of primary congenital glaucoma in Brazil Invest Ophthalmol Vis Sci 43(6), 1820–1827 65 Dimasi DP, Hewitt AW, Straga T (2007) Prevalence of CYP1B1 mutations in Australian patients with primary congenital glaucoma Clin Genet 72(3), 255–260 66 Lim SH, Tran-Viet KN, Yanovitch TL, et al (2013) CYP1B1, MYOC, and LTBP2 mutations in primary congenital glaucoma patients in the United States Am J Ophthalmol 155(03), 508–517 67 Shei SA, Waryah AM, Narsani AK (2014) Mutational spectrum of the CYP1B1 gene in Pakistani patients with primary congenital glaucoma: novel variants and genotype-phenotype correlations Molvis 20, 991 – 1001 68 Bouyacoub Y, Ben Yahia S, Abroug N (2014) CYP1B1 gene mutations causing primary congenital glaucoma in Tunisia.Ann Hum Genet 78(4), 255-63 69 Fereshteh Chitsazian,Betsabeh Khoramian Tusi,Elahe Elahi (2007) CYP1B1 Mutation Profile of Iranian Primary Congenital Glaucoma Patients and Associated Haplotypes J Mol Diagn 9(3), 382–393 70 Mahmoud R.FassadaAsmaa K.AminaHeba A (2017) MorsyCYP1B1 and myocilin gene mutations in Egyptian patients with primary congenital glaucoma Egyptian Journal of Medical Genetics Pages 219-224 71 David A Hollander, MD, MBA,Mansoor Sarfarazi (2006) Genotype and phenotype correlations in congenital Ophthalamol 104, 183–195 72 Panicker SG, Mandal AK, Reddy AB, Gothwal VK, Hasnain SE (2004) Correlations of genotype with phenotype in Indian patients with primary congenital glaucoma Invest Ophthalmol Vis Sci 45(4), 1149–1156 73 Jansson I, Stoilov I, Sarfarazi M, Schenkman JB (2001) Effect of two mutations of human CYP1B1, G61E and R469W, on stability and endogenous steroid substrate metabolism Pharmacogenetics.11, 793–801 74 http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/ 75 Michels-Rautenstrauss KG, Mardin CY, Zenker M (2001) Primary congenital glaucoma: Three case reports on novel mutations and combinations of mutations in the GLC3A (CYP1B1) gene J Glaucoma 10(4), 354–357 76 Bagiyeva S, Marfany G, Gonzalez-Angulo O, Gonzalez-Duarte R (2007) Mutational screening of CYP1B1 in Turkish PCG families and functional analyses of newly detected mutations Mol Vis 13, 1458–68 77 Choudhary D, Jansson I, Sarfarazi M, Schenkman JB (2008) Characterization of the biochemical and structural phenotypes of four CYP1B1 mutations observed in individuals with primary congenital glaucoma Pharmacogenet Genomics 18, 665–76 78 Yukihiko Mashima; Yasuyuki Suzuki; Yuri Sergeev (2001) Novel Cytochrome P4501B1 (CYP1B1) Gene Mutations in Japanese Patients with Primary Congenital Glaucoma Ophthalmol Vis Sci 42(10), 2211-6 79 Bhattacharjee A, Banerjee D, Mookherjee S et al (2008) Leu432Val polymorphism in CYP1B1 as a susceptible factor towards predisposition to primary open-angle glaucoma Mol Vis 14, 841–50 80 Li DN, Seidel A, Pritchard MP, Wolf CR, Friedberg T (2000) Polymorphisms in P450 CYP1B1 affect the conversion of estradiol to the potentially carcinogenic metabolite 4hydroxyestradiol Pharmacogenetics 10, 343–53 81 Hayes CL, Spinkt DC, Spinkt BC, Caot JQ, Walker NJ, Sutter TR (1996) 17β -Estradiol hydroxylation catalyzed by human cytochrome P450 lBl Proc Natl Acad Sci USA 93, 9776–81 82 Izzotti A, Bagnis A, Sacca SC.(2006) The role of oxidative stress in glaucoma Mutat Res.612(2):105–114 83 Swindell EC, development 84 Eichele G Retinoid metabolizing enzymes in (1999) Biofactors 10:85–9 Shimada T, Hayes CL, Yamazaki S, Amin S, Hecht SS, Guengerich FP, Sutter TR (1996) Activation of chemically diverse carcinogens by human cytochrome P4501B1 Cancer Res 56:2979–84 85 Yamazaki S, Sato K, Suhara K, Sakaguchi M, Mihara K, Omura T (1993) Importance of the proline-rich region following signal-anchor sequence in the formation of correct conformation of microsomal cytochrome P-450s J Biochem 114:652–7 86 Chen Y, Jiang D, Yu L, Katz B, Zhang K, Wan B, Sun X ( 2008) CYP1B1 and MYOC mutations in 116 Chinese patients with primary congenital glaucoma Arch Ophthalmol 126(10):1443–1447 87 Gabriela Chavarria-Soley, Heinrich Sticht, Eleni Aklillu (2008) Mutations in CYP1B1 cause primary congenital glaucoma by reduction of either activity or abundance of the enzyme Article in Human Mutation 29(9):1147-53 PHỤ LỤC Nghiên cứu thực Trung tâm Gen – Protein Trường Đại Học Y Hà Nội, với hỗ trợ kinh phí đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh Glôcôm bẩm sinh nguyên phát Hà Nội” thuộc đề tài cấp Sở Khoa học Công nghệ Hà Nội Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS TRẦN VÂN KHÁNH PHỤ LỤC BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU STT MÃ BỆNH ÁN MÃ BỆNH NHÂN I Hành Họ tên bệnh nhân: Giới Dân tộc Ngày, tháng, năm sinh: Địa chỉ: Sđt: Họ tên bố: Tuổi: Nghề nghiệp: Họ tên mẹ: Tuổi: Nghề nghiệp: Ngày lấy máu XN: II Lý vào viện: III Thời gian phát bệnh IV Tiền sử: Tiền sử thai nghén: - Mẹ mắc bệnh mang thai: - Mẹ dùng thuốc mang thai: Tiền sử bệnh tật: Tiền sử gia đình: - Hơn nhân huyết thống - Thành viên bị bệnh gia đình: V Khám bệnh - Nhãn áp cao ≥ 25 mmHg - Chói, chảy nước mắt, sợ ánh sáng - Đường kính giác mạc to bất thường ≥ 12 mm - Giác mạc phù, mờ đục a - Tiền phòng sâu, góc tiền phòng có tổ chức bất thường - Tổn hại lõm teo gai thị bệnh glơcơm VI Chẩn đốn VII Kết xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân VIII Kết phát đột biến gen thành viên gia đình có quan hệ huyết thống với bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát mang đột biến gen CYP1B1 PHỤ LỤC Nồng độ độ tinh 20 mấu DNA bệnh nhân STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 NỒNG ĐỘ (ng/µl) 291 280 197 187 280 195 254 271 201 290 195 185 279 307 197 203 284 356 267 255 ĐỘ TINH SẠCH (A260/280) 1,82 1.82 1.80 1.79 1.86 1.82 1.84 1.88 1.86 1.86 1.9 1.86 1.88 1.78 1.88 1.81 1.91 1.79 1.83 1.80 ... nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát mang đột biến gen CYP1B1 thực với mục tiêu: Xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Xây dựng phả hệ gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh. .. 28 2.3.1 Xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát 28 2.3.2 Xây dựng phả hệ gia đình bệnh nhân glơcơm bẩm sinh nguyên phát mang đột biến gen CYP1B1 29 2.4... quan hệ huyết thống với bệnh nhân Tuy nhiên, Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát công bố.Việc lập phả hệ để xem xét tính chất đột biến gen