Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và trình tự đoạn gen MATK, ITS của cây bảy lá một hoa thu tại huyện bắc sơn, tỉnh lạng sơn

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN MATK, ITS CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA THU TẠI HUYỆN BẮC SƠN, TỈNH LẠNG SƠN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN MATK, ITS CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA THU TẠI HUYỆN BẮC SƠN, TỈNH LẠNG SƠN Ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy THÁI NGUYÊN - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Các kết nghiên cứu trung thực, phần cơng bố Tạp chí Khoa học công nghệ - Đại học Thái Nguyên với đồng ý cho phép đồng tác giả Phần lại chưa cơng bố cơng trình khác Thái Ngun, tháng năm 2019 Tác giả Trương Mạnh Tiến LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy, khoa Sinh học trường Đại học sư phạm Thái Nguyên người bảo, hướng dẫn em suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn cảm ơn sâu sắc tới thầy cô khoa Sinh học, Trường Đại học Sư Phạm - ĐH Thái Nguyên tận tình hướng dẫn, truyền dạy kiến thức cho em suốt khóa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo, cô giáo Ban giám hiệu trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Ngun, thầy, phòng ban chức tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian học tập trường Em xin chân thành cảm ơn đồng nghiệp ban giám hiệu trường THPT Số Bảo Thắng tạo điều kiện giúp đỡ thời gian học tập Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn bè gia đình ln quan tâm, động viên, ủng hộ giúp đỡ em Luận văn sản phẩm Nhiệm vụ quỹ GEN cấp Bộ có mã số B2018TNA-04-GEN PGS.TS Vũ Thị Thu Thủy Bộ môn Sinh học đại Giáo dục sinh học làm chủ nhiệm Thái Nguyên, tháng năm 2019 Tác giả Trương Mạnh Tiến MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt iv Danh mục bảng v Danh mục hình vi MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài .1 Mục tiêu nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Cây Bảy hoa 1.1.1 Vị trí Bảy hoa hệ thống phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật học Bảy hoa 1.1.3 Giá trị y học Bảy hoa .5 1.1.4 Vấn đề bảo tồn Bảy hoa 1.2 Một số phương pháp định danh thực vật 1.2.1 Phương pháp so sánh hình thái, giải phẫu 1.2.2 Phương pháp phân loại học phân tử 12 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Vật liệu 22 2.1.1 Vật liệu thực vật .22 2.1.2 Vật liệu nhân gen matK, ITS 22 2.1.3 Hóa chất thiết bị 23 2.1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Nhóm phương pháp nghiên cứu hình thái, giải phẫu Bảy hoa 23 2.2.2 Phương pháp phân lập xác định trình tự nucleotide gen 24 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu .25 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu Bảy hoa .26 3.1.1 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái 26 3.1.2 Kết nghiên cứu đặc điểm giải phẫu 27 3.2 Đặc điểm đoạn gen matK vùng gen ITS mẫu Bảy hoa 30 3.2.1 Đặc điểm đoạn gen matK 31 3.2.2 Đặc điểm vùng gen ITS 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .37 TÀI LIỆU THAM KHẢO .39 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BLAST : Basic Local Aligment Search Tool DNA : Deoxyribose nucleic acid đtg : Đồng tác giả ITS : Internal Transcribed Spacer kb : Kilobase matK : Maturase K NCBI : The National Center for Biotechnology Information PCR : Polymerase Chain Reaction rpoC1 : RNA polymerase beta' subunit Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bảng danh lục đỏ thuốc thuộc chi Paris Việt Nam .8 Bảng 1.2 Một số thông tin gen matK chi Paris 14 Bảng 1.3 Một số thông tin vùng ITS chi Paris .16 Bảng 1.4 Một số nghiên cứu giới sử dụng vùng gen ITS phân loại thực vật 17 Bảng 1.5 Mã vạch DNA định danh Bảy hoa Thái Nguyên 20 Bảng 2.1 Trình tự nucleotide mồi matK, ITS sử dụng kỹ thuật PCR 22 Bảng 3.1 Độ tương đồng phân ly mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn dựa trình tự đoạn gen matK 33 Bảng 3.2 Độ tương đồng phân ly mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn dựa trình tự vùng gen ITS 35 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh quan Bảy hoa Hình 1.2 Một số hình thái Bảy hoa Việt Nam .8 Hình 1.3 Cấu trúc đoạn DNA mang vùng gen ITS .15 Hình 2.1 Mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn 22 Hình 3.1 Hình thái mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn trồng vườn trường Đại học Sư phạm 26 Hình 3.2 Hình ảnh giải phẫu cuống mẫu Bảy hoa 28 Hình 3.3 Hình ảnh giải phẫu thân Bảy hoa 29 Hình 3.4 Hình ảnh giải phẫu rễ Bảy hoa .30 Hình 3.5 Hình ảnh kết tách chiết DNA tổng số gel agarose 1% 31 Hình 3.6 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR nhân đoạn gen matK từ mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 31 Hình 3.7 Kết phân tích gen matK BLAST NCBI .32 Hình 3.8 Trình tự đoạn gen matK mẫu thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 32 Hình 3.9 Cây phát sinh chủng loại xây dựng dựa đoạn gen matK mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn 33 Hình 3.10 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR nhân đoạn gen ITS từ mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn .34 Hình 3.11 Kết phân tích BLAST trình tự nucleotide vùng gen ITS NCBI 34 Hình 3.12 Trình tự vùng gen ITS mẫu thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn 35 Hình 3.13 Cây phát sinh chủng loại xây dựng dựa vùng gen ITS mẫu nghiên cứu 36 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Bảy hoa tên gọi chung thơng dụng Việt Nam nhiều lồi thuộc chi Paris Bảy hoa gọi củ rắn cắn, hưu túc nhiều lá, hưu túc vân nam, trọng lâu hải nam … thuộc loại dược liệu quý có nguy tuyệt chủng cần bảo vệ Việt Nam Theo Nguyễn Tâp (2004, 2007), nhiều loài thuộc chi Paris nằm sách đỏ Việt Nam cấp độ đánh giá theo IUCN (International Union for Conservation of Nature) mức nguy cấp (tiếng Anh: Endangered, viết tắt EN) nguy cấp (tiếng Anh: Vulnerable, viết tắt VU) [20], [21] Cây Bảy hoa có khả chữa trị nhiều bệnh từ bệnh thông thường sốt nóng, sốt rét, mụn nhọt, chữa ho…đến bệnh nan y như: rắn độc cắn, ung thư… Vì vậy, Bảy hoa đối tượng nghiên cứu nhiều nhà khoa học Trên giới, chi Paris có 22 lồi nhiều thứ [56] Ở Việt Nam tìm thấy chủ yếu vùng núi phía Bắc, số tỉnh: Lào Cai, Hà Giang, Lai Châu, Cao Bằng, Hòa Bình Cây sống điều kiện núi cao, nhiệt độ lạnh, sống tán rừng Mỗi năm hoa lần vào khoảng tháng -6, tạo vào khoảng tháng 7-11 sau lụi đi, thời gian ủ đơng lâu Các loài chi Paris đa dạng có tương đồng cao hình thái Năm 2016, Nguyen Quynh Nga đtg thiết lập khóa phân loại việc mơ tả hình thái, giải phẫu loài (species) thứ (varieties) Việt Nam [43] Có thể nhận diện thực vật nhiều phương pháp khác Các phương pháp thường dùng nghiên cứu so sánh đặc điểm hình thái, giải phẫu, sinh lý, hóa sinh hướng nghiên cứu thành công số đối tượng trồng Hà thủ ô đỏ [9], Sóng rắn [28], Phong lữ thảo [6]… Tuy nhiên, phương pháp nhận diện hiệu khơng ngun vẹn Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn KM24 278 7_ Paris_ po lyph ylla_ var._ stenop hy KM24 277 8_ Paris_ de la va yi KM24 278 8_ Paris_ po lyph ylla_ var._ yu nn an en KR 23 327 2_ Paris_ farge sii MK 48 808 5_ Paris_ nitida KM24 278 5_ Paris_ po lyph ylla_ var._ ch inen si m a tK_Ba c_ So n MF49 570 5_ Pa ris_ m arm o ta MF41 776 8_ Pa ris_ luq uan en si s KX78 40 50_ Pa 50 ris _vie tnam ens is KX78 40 46_ Pa ris _m a irei KX78 40 45_ Pa ris _luq uan en sis KX78 40 41_ Pa ris _cro nqu istii 50 40 30 20 10 Nu cleo tid e Su bs titution s (x1 00 ) Hình 3.9 Cây phát sinh chủng loại xây dựng dựa đoạn gen matK mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn 3.2.2 Đặc điểm vùng gen ITS Thí nghiệm nhân vùng gen ITS từ DNA hệ gen thực mô tả mục 2.2.2 kiểm tra gel agarose % thu đoạn DNA có kích thước khoảng 800 bp dự kiến (Hình 3.10) Hình 3.10 Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm PCR nhân đoạn gen ITS từ mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn (M: marker 1kb, 1,2, ký hiệu mẫu nghiên cứu) Vùng gen ITS mẫu Bắc Sơn- Lạng Sơn tinh xác định trình tự trực tiếp máy tự động Sử dụng phần mềm BLAST NCBI thu kết trình bày hình 3.11 Hình 3.11 Kết phân tích BLAST trình tự nucleotide vùng gen ITS NCBI Theo hình 3.11, vùng gen ITS Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn so sánh với 15 trình tự GenBank với độ tương đồng 98,34% đến 98,94% Kết so sánh tương đồng trình tự nucleotide khẳng định trình tự mẫu nghiên cứu trình tự đoạn ITS thuộc chi Paris, độ tương đồng lớn với mẫu Paris polyphylla var chinensis (mẫu có mã số Genbank KX146531) mức 98,94% Sử dụng phần mềm Bioedit để phân tích trình tự nucleotide đoạn bảo thủ gen, chúng tơi thu đoạn có chiều dài 661 nucleotide, trình bày hình 3.12 Hình 3.12 Trình tự vùng gen ITS mẫu thu thập Bắc Sơn, Lạng Sơn Dựa trình tự nucleotide gen ITS, phần mềm DNAstar thiết lập bảng tỉ lệ tương đồng tỉ lệ phân ly (Bảng 3.2) Bảng 3.2 Độ tương đồng phân ly mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn dựa trình tự vùng gen ITS Theo kết bảng 3.2, trình tự nucleotide vùng gen ITS mẫu Bắc Sơn- Lạng Sơn có độ tương đồng với loài thuộc chi Paris cao, từ 98,3% đến 98,9% Lồi có độ tương đồng lớn với mẫu Bắc Sơn- Lạng Sơn đạt 98,9% Paris polyphylla var chinensis (KX146530) MK350 325_Pari s _del avayi _va r._del ava yi MK346 921_Pari s _farg es i i_var._br evipe tal MH7110 38_Pari s _farge s ii MK350 326_Pari s _pol yp hyl la _var._ps eud oth DQ6636 78_Pari s _axi alis AY1 92025_ Pari s _c ron quis tii MK309 858_Pari s _ni ti da KX14 6530_P ari s _po lyphyl l a_va r._chi nen s i ITS_Bac _Son 254 KX14 6531_P ari s _po lyphyl l a_va r._chi nen s i KX14 6539_P ari s _po lyphyl l a_va r._pol yp hyl 250 200 150 100 50 Nucl eoti de Subs ti tuti ons (x100) Hình 3.13 Cây phát sinh chủng loại xây dựng dựa vùng gen ITS mẫu nghiên cứu Mối quan hệ di truyền trình tự nucleotide gen matK thể sơ đồ hình 3.13 Kết biểu diễn hình 3.13 cho thấy phân bố mẫu thu thấp Bắc Sơn nằm nhánh nhỏ gần với hai mẫu Paris polyphylla var chinensis (mẫu có mã số Genbank KX146531 KX146530) Kết hợp đặc điểm nghiên cứu hình thái, giải phẫu trình tự nucleotide đoạn gen matK, vùng gen ITS nhận diện mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn- Lạng Sơn giống Paris polyphylla var chinensis KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I Kết luận Về hình thái, giải phẫu mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn 1.1 Về mặt hình thái, có chiều cao thân 40 cm, hình soan ngược, chóp có mũi 1,5 cm Đài hoa mẫu 5, hình mác Tràng hoa màu vàngxanh Nhị hoa mẫu 16 Buồng trứng hình cầu, có ngăn Vòi nhụy ngắn, chân đế mở rộng, màu tím Đầu nhụy sẻ thùy 1.2 Về mặt giải phẫu, (i) Cuống có phần biểu bì, mơ mềm bó dẫn dạng hình cung- mặt lõm hướng lên trên; (ii) Thân có biểu bì ngồi cùng, bên gồm mơ mềm nhiều bó dẫn nằm rải rác; (iii) Rễ có phần vỏ phần trung trụ, bó dẫn trung trụ xếp ln phiên tròn mơ mềm Cấu tạo giải phẫu mẫu điển hình mầm Về đặc điểm gen matK, ITS mẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng Sơn 2.1 Đoạn gen matK nhân lên có chiều dài 772 bp, độ tương đồng với loài thuộc chi Paris mức 99,37% 2.2 Vùng gen ITS có chiều dài 661 bp, độ tương đồng với 15 loài loài thuộc chi Paris từ 98,34 % đến 98,94% Kết hợp đặc điểm nghiên cứu hình thái, giải phẫu trình tự nucleotide đoạn gen matK, vùng gen ITS nhận diện mẫu Bảy hoa thu thấp Bắc Sơn - Lạng Sơn giống Paris polyphylla var chinensis II Kiến nghị Nên sử dụng phương pháp phân loại thực vật hình thái, giải phẫu, đoạn gen matK, vùng gen ITS để nhận diện lồi thuộc chi Paris DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI Hồng Phú Hiệp, Trương Mạnh Tiến, Lương Thị Thúy Vân, Phạm Thị Thanh Vân, Nguyễn Thị Thu Hà, Vũ Thị Thu Thủy*, 2019, ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU CỦA LỒI Paris polyphylla var chinensis VÀ TÍNH CHẤT ĐẤT TRỒNG TẠI BẮC SƠN, LẠNG SƠN - Tạp chí KH CN Đại học Thái Nguyên, 207 (14): 53-59 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Lý Thị Bôn, Nguyễn Thị Mai Linh, Nguyễn Thị Thu Ngà, Sỹ Danh Thường, 2017, Sử dụng mã vạch DNA việc định loại loài Hồng trâu (Capparis versicolor Griff.), Hội nghị Khoa học Toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VII: 62-66 Lê Trần Chấn, Trần Ngọc Ninh, Trần Thị Thúy Vân, 2013, Đa dạng sinh học giải pháp bảo vệ, phát triền bền vững vùng núi đá vôi tỉnh Hà Giang, Hội thảo khoa học diễn đàn đầu tư “Vì Hà Giang phát triển”, 115-120 Nguyễn Tiến Dũng, Nguyễn Quỳnh Nga, Trần Ngọc Lân, Nguyễn Thị Thu, Ninh Thị Phíp, Đồn Thị Thanh Nhàn, Lê Thị Thu Hiền, Nguyễn Nhật Linh, 2018, Đặc điểm hình thái mã vạch DNA loài Bảy hoa, Paris vietnamensis (Takht.) H.Li, Việt Nam, Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, 16 (4), 282-289 Nguyễn Thị Đỏ, 2007, Thực vật chí Việt Nam 8, Khoa học kỹ thuật, 311321 Đỗ Văn Hài, Chang Young Lee, Hà Minh Tâm, 2017, Đặc điểm hình thái phân loại chi Bạch hạc - Rhinacanthus Nees (họ Ơ rơ Acanthaceae) Việt Nam, Hội nghị Khoa học Toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VII, 140-144 Tạ Lê Mai Hậu, Phạm Văn Minh, Hà Vân Oanh, Chử Thị Thanh Huyền, Đào Thị Thanh Hiền, Đỗ Thị Hà, 2016, Nghiên cứu đặc điểm thực vật phong lữ thảo (Pelargonium hortorum L H Bailey), Tạp chí Dược học, 56 (6), 73-76 Phạm Hồng Hộ, 1999, Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ Thành phố Hồ Chí Minh, 473-475 Hà Văn Huân, Nguyễn Văn Phong, 2015, Xác định đoạn mã vạch DNA cho Trà hoa vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensis): Loài đặc hữu Việt Nam, Tạp chí Nơng nghiệp PTNT, 5: 123-130 Phạm Thanh Huyền, Nguyễn Quỳnh Nga, Phan Văn Trưởng, Hồng Văn Tốn, Nguyễn Xn Nam, Phạm Thị Ngọc, Phạm Thị Vân Anh, 2015, Nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu lồi hà thủ đỏ (Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson) Việt Nam, Hội nghị Khoa học Toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VI, 166-172 10.Lê Thị Thanh Hương, Trần Thị Ngọc Anh, Nguyễn Thị Ngọc Yến, Nguyễn Trung Thành, Nguyễn Nghĩa Thìn, 2012, Thực trạng lồi q thu thập tỉnh Thái Nguyên, Tạp chí KHTN CN - ĐHQGHN, 28: 173194 11.Phan Kế Long, Vũ Đình Duy, Phan Kế Lộc, Nguyễn Giang Sơn, 2014, Mối quan hệ di truyền mẫu Sâm thu Lai Châu sở phân tích trình tự nucleotide vùng matK ITS - rDNA, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 12 (2), 327-337 12.Đỗ Tất Lợi, 2004, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Y Học, 13.Nguyễn Thị Hồng Mai, Nguyễn Mạnh Cường, Ngũ Trường Nhân, Nguyễn Phương Đại Nguyên, Nguyễn Thị Phương Trang, 2017, Đặc điểm phân tử vùng gen rpoC loài Trắc (Dalbergia cochinchinensis Pierre) Sưa đỏ (Dalbergia tonkinensis Prain) Việt Nam ứng dụng phân loại, Hội nghị Khoa học Toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VII, 814817 14.Chu Hồng Mậu, Hoầng Phú Hiệp, Nguyễn Hữu Quân, 2019, Giáo trình Tin sinh học, Nxb: Đại học Thái Nguyên, 15.Nguyễn Kim Phụng, 2007, Phương pháp cô lập chất hữu cơ, Nxb Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, 16.Bùi Hồng Quang, Trần Thế Bách, Đỗ Văn Hài, Dương Thị Hoàn, Nguyễn Thị Thanh Hương, Lê Ngọc Hân, Trần Đức Bình, Dỗn Hồng Sơn, Vũ Anh Thương, Sangmi Eum, Vũ Tiến Chính, 2017, Bổ sung loài thuộc chi Ngân hoa - Silvianthus bracteatus Hook f Họ Cạt man (Carlemanniceae) Việt Nam, Hội nghị Khoa học Toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VII, 324-327 17.Hoàng Thị Sản, Nguyễn Phương Nga, 2008, Hình thái - Giải phẫu học Thực vật, Nxb Đại học Sư phạm 18.Dương Văn Tăng, Nguyễn Quốc Bình, Đinh Thị Phòng, 2011, Trình tự nucleotide vùng ITS nhân mối quan hệ di truyền loài gỗ quý Việt Nam: Trắc (Dalbergia cochinchinensis), Cẩm lai (Dalbergia oliveri) Sưa (Dalbergia tonkinensis), Hội nghị Khoa học Toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ VII, 1296-1300 19.Nguyễn Thị Tần, 2013, Cây dược liệu - lợi để người dân vùng cao Lào Cai nghèo, Tạp chí kinh tế kỹ thuật Lào Cai, 24: 590 20.Nguyễn Tập, 2004, Danh lục đỏ thuốc Việt Nam, Viện dược liệu, 14-15 21.Nguyễn Tập, 2007, Cẩm nang thuốc cần bảo vệ Việt Nam, Mạng lưới lâm sản gỗ Việt Nam, 49-50, 71-72 22.Nguyễn Thị Thu, Trần Ngọc Lân, Nguyễn Tiến Dũng, Nguyễn Đắc Bình Minh, Đào Thùy Dương, Nguyễn Thị Duyên, 2016, Nghiên cứu đặc điểm thực vật vi học Bảy hoa Việt Nam, Tạp chí Dược liệu, 21 (4), 242-247 23.Vũ Thị Thu Thủy, 2017, Đặc điểm sinh học giá trị dược học Bảy hoa thuộc chi Paris, Tạp chí khoa học & Công nghệ- Đại học Thái Nguyên, 171 (11), 49-54 24.Vũ Thị Thu Thủy, Hoàng Phú Hiệp, Nguyễn Thị Thu Ngà, Chu Hồng Mậu, 2016, Đặc điểm trình tự gen rpoC1 phân lập từ Thất diệp chi hoa (Paris polyphylla Sm.) thu Lạng Sơn, Việt Nam, Tạp chí khoa học & Cơng nghệ- Đại học Thái Nguyên, 168 (08), 165-168 25.Vũ Thị Thu Thủy, Lục Văn Dương, Ngơ Thùy Linh, Hồng Phú Hiệp, Nguyễn Thị Thu Ngà, Chu Hoàng Mậu, 2018, Một số đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK mẫu Bảy hoa (Paris) thu thập Lào Cai, Báo cáo Hội nghị CNSH toàn quốc 2018, Nxb KHTN CN, 1665-1671 26.Vũ Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Thu Ngà, Hoàng Phú Hiệp, Chu Hoàng Mậu, 2016, Sử dụng mã vạch DNA việc định loại loài dược liệu Thất diệp chi hoa Việt Nam (Paris Polyphylla Sm.), Tạp chí khoa học & Công nghệ- Đại học Thái Nguyên, 171 (11), 49-54 27.Vũ Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Thu Ngà, Hoàng Phú Hiệp, Nguyễn Thị Thúy Lan, Nơng Lệ Thùy, Chu Hồng Mậu, 2016, Sưu tập phân tích đặc điểm trình tự đoạn gen rpoC1 Bảy hoa (Paris polyphylla sm.), Kỷ yếu Hội thảo sinh viên cán trẻ trường Sư phạm toàn quốc, Nxb ĐHSP Thành phố Hồ Chí Minh, 2016: 971-978 28.Nơng Thị Anh Thư, Nguyễn Quý Thái, Nguyễn Thị Minh Thúy, Đào Thanh Hoa, 2017, Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng giảm đau, chống viêm dược liệu Sóng rắn thu hái Thái Nguyên, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, 17 (6), 10-12 29.Nguyễn Thị Phương Trang, Trần Thu Hương, Ludwig Triest, Nguyễn Minh Tâm, 2014, Đặc điểm di truyền ba loài Sao (Hopea) bị đe dọa tuyệt chủng Việt Nam, Tạp chí Sinh học, 36 (3), 316-322 30.Viện dược liệu, 2003, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nxb: Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 182-184 II Tài liệu tiếng Anh: 31.Chase MW, Salamin N, Wilkinson M, Dunwell JM, Kesanakurthi RP, Haider N, V S, 2005, Land plants and DNA barcodes:Short-term and longterm goals, Philosophical Transactions of the Royal Society B Biological Sciences, 360 1889-1895 32.Gao T, Pang X H, Chen S L, 2009, Authentication of plants in Astragalus by DNA barcoding technique, Plant Med, 75 (9), PB21 33.Havill, Nathan P., Campbell, Christopher S., Vining T F, LePage, Ben, Bayer, Randall J., Donoghue, Michael J., 2008, Phylogeny and Biogeography of Tsuga (Pinaceae) Inferred from Nuclear Ribosomal ITS and Chloroplast DNA Sequence Data, Systematic Botany, 478-479 34.Hodkinson, Trevor R., Chase W, Lledo M, Dolores M., Salamin, Nicolas, Renvoize, Stephen A., 2002, Phylogenetics of Miscanthus, Saccharum and related genera (Saccharinae, Andropogoneae, Poaceae) based on DNA sequences from ITS nuclear ribosomal DNA and plastid trnL intron and trnL-F intergenic spacers, Journal of Plant Research, 115 (5), 381-392 35.John Kress W, Erickson D L, 2008, DNA barcodes: Genes, genomics, and bioinformatics, Proc Natl Acad Sci USA, 105 (8), 2761-2762 36.Kress WJ, Wurdack KJ, Zimmer EA, Weigt LA, DH J, 2005, Use of DNA barcodes to identify flowering plants, Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 102 8369 – 8374 37.Lahaye R, Bogarin D, Van der Bank M, Warner J, Pupulin F, Gigot G, Maurin O, Duthoit S, Barraclogh TG, 2008, DNA barcoding the floras of biodiversity hotspots, Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 2923 – 2928 38.Li F R., Jiao P., Yao S T., Sang H., Qin S C., Zhang W., Zhang Y B., Gao L L., 2012, Paris polyphylla Smith extract induces apoptosis and activates cancer suppressor gene connexin 26 expression, Asian Pac J Cancer Prev, 13 (1), 205-209 39.Li X, Wang B, Han R, Zheng Y, Yin H Y, Xu L, 2013, Identification of medicinal plant schisandra chinensis using a potential DNA barcode ITS2, Acta Soc Bot Pol, 82 283-288 40.Liang Songyun, Victor G Soukup, 2000, Paris Linnaeus, Flora of China, 88-95 41.Man S., Gao W., Zhang Y., Yan L., Ma C., Liu C., Huang L, 2009, Antitumor and antimetastatic activities of Rhizoma Paridis saponins, Steroids, 74 (13:), 1051-1056 42.Mohd Tariq, Shyamal K Nandi, Indra D Bhatt, 2016, Conservation planing of Paris polyphylla Smith an important medicinan Herb of the Indian Hymalayan region using predictive ditribution, International Scholary and Scientific rearch and innovation, (9), 408 43.Nguyen Quynh Nga, Pham Thanh Huyen, Phan Van Truong, Hoang Van Toan, 2016, Taxonomy of the genus Paris L.(Melanthiaceae) in Vietnam, Tạp chí Sinh hoc, 38 (3), 333-339 44.Paul DN Heberrt, Alina Cywinska, Shelley L Ball, Jermy R deWaard, 2003, Biological identications throught DNA barcodes, Proceeding Of The Royal Society, 313-321 45.Pirie M, ichael D., Oliver, E G H., Bellstedt, Dirk U., 2011, A densely sampled ITS phylogeny of the Cape flagship genus Erica L suggests numerous shifts in floral macro-morphology, Molecular Phylogenetics and Evolution, 61 (2), 593-601 46.Savolainen V, Cowan RS, Vogler AP, Roderick GK, 2005, DNA barcoding of life, Phil Trans R Soc London Ser B, 1805–1811 47.Savolainen V, Cowan RS, Vogler AP, Roderick GK, 2005, DNA barcoding of life, Phil Trans R Soc London Ser B, 1805–1811 48.Scheunert, Agnes, Heubl, Gunther, 2014, Diversification of Scrophularia (Scrophulariaceae) in the Western Mediterranean and Macaronesia – Phylogenetic relationships, reticulate evolution and biogeographic patterns, Molecular Phylogenetics and Evolution, 70 296-313 49.Shen S, Chen D, Li X, Li T, Yuan M, Zhou Y, Ding C., 2014, Optimization of extraction process and antioxidant activity of polysaccharides from leaves of Paris polyphylla, Carbohydrate polymers, 104: 80-86 50.Vijayan K, Tsoul C.H, 2010, DNA barcoding in plants: taxonomy in new perspective, Current Science, 99 (11), 1530-1538 51.Vijayan K, Tsoul C.H, 2010, DNA barcoding in plants: taxonomy in new perspective, Current Science, 1530-1538 52.Vu Thi Thu Thuy, Nguyen Thi Ngoc Lan, Dinh Thi Huyen, Hoang Phu Hiep, Tran Thi Hong, Nguyen Thi Thu Nga, Sy Danh Thuong, Nguyen Huu Quan, Mau C H, 2018, Identification of Paris species from Sa Pa and Puluong in Viet Nam using DNA barcodes, The 5th Academic Conference on Natural Science for Young Scientists, Master and PhD Students from Asean Countries, Publishing House for Science and Technology, 190-196 53.Warwick, Suzanne I., Mummenhoff, Klaus, Sauder, Connie A., Koch, Marcus A., Al-Shehbaz, Ihsan A., 2010, Closing the gaps: phylogenetic relationships in the Brassicaceae based on DNA sequence data of nuclear ribosomal ITS region, Plant Systematics and Evolution, 209-232 54.Y Teerawatsakul, S Dheeranupattana, K Sringarm, 2014, Effect of temperature on shoot tip culture of Paris polyphylla var chinensis (Franch.) Hara,, Planta Med, 80 - P82O10 DOI: 10.1055/s-0034-1395004 55.Yang, Tao, Zhang, Tian-lei, Guo, You-hao, Liu, Xing, 2016, Identification of hybrids in Potamogeton: Incongruence between plastid and ITS regions solved by a novel barcoding marker PHYB, PLOS ONE, 11 (11), e0166177 III Tài liệu mạng: 56.http://vi.wikipedia.org/wiki/chi_trong_lau, 57.http://khoahocphattrien.vn/Dia-phuong/lang-son-cay-duoc-lieu-bay-la-mothoatrien-vong-nang-cao-thu-nhap/20190513030811704p1c937.htm, 58.https://amp.thaythuoccuaban.com/vithuoc/thatdiepnhatchihoa.htm, (21/8/2019), 59.https://vi.wikipedia.org/wiki/Bắc_Sơn, (20/8/2018), 60 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucleotide/xxx ... đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, ITS Bảy hoa thu huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn Nội dung nghiên cứu 3.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái giải phẫu Bảy hoa thu thập Bắc Sơn - Lạng. .. ––––––––––––––––––– TRƯƠNG MẠNH TIẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, GIẢI PHẪU VÀ TRÌNH TỰ ĐOẠN GEN MATK, ITS CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA THU TẠI HUYỆN BẮC SƠN, TỈNH LẠNG SƠN Ngành: Sinh học thực nghiệm... mặt Bảy hoa [57], [59] Xuất phát từ lý trên, lựa chọn đề tài: Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu trình tự đoạn gen matK, ITS Bảy hoa thu huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn Mục tiêu nghiên cứu