Mục tiêu của nghiên cứu này là dùng chuột lang để kiểm tra hiệu lực của vacxin lở mồm long móng (LMLM) thông qua việc xác định liều bảo hộ 50% trên chuột lang (GPPD50). 16 lô vacxin LMLM (bao gồm: vacxin nhập khẩu từ công ty Mérial, vacxin sản xuất ở NAVETCO với kháng nguyên nhập từ công ty Mérial và vacxin nghiên cứu chế tạo tại NAVETCO dùng chủng virus LMLM phân lập tại Việt Nam đã được thử nghiệm trên chuột lang để kiểm tra hiệu lực của các loại vacxin này.
KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXV SỐ - 2018 SỬ DỤNG CHUỘT LANG ĐỂ KIỂM TRA HIỆU LỰC CỦA VACXIN LỞ MỒM LONG MÓNG Trần Xn Hạnh, Nguyễn Văn Dung, Tô Thị Huệ, Quách Võ Ngôn, Đỗ Thanh Thủy, Nguyễn Thiên Thu, Phạm Hào Quang Công ty CP thuốc thú y Trung ương NAVETCO TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu dùng chuột lang để kiểm tra hiệu lực vacxin lở mồm long móng (LMLM) thông qua việc xác định liều bảo hộ 50% chuột lang (GPPD50) 16 lô vacxin LMLM (bao gồm: vacxin nhập từ công ty Mérial, vacxin sản xuất NAVETCO với kháng nguyên nhập từ công ty Mérial vacxin nghiên cứu chế tạo NAVETCO dùng chủng virus LMLM phân lập Việt Nam thử nghiệm chuột lang để kiểm tra hiệu lực loại vacxin Kết nghiên cứu cho thấy 16/16 lô vacxin kiểm tra đạt tiêu chuẩn hiệu lực với giá trị GPPD50 ≥ 23 GPPD50/liều Kiểm tra hiệu lực lô vacxin chuột lang heo, bò cho kết tượng tự Với kết thu nghiên cứu chuột lang dùng để kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM Từ khóa: chuột lang, hiệu lực, lở mồm long móng (LMLM) Using the Guinea pig in potency test for the foot and mouth disease vaccines Tran Xuan Hanh, Nguyen Van Dung, To Thi Hue, Quach Vo Ngon, Do Thanh Thuy, Nguyen Thien Thu, Pham Hao Quang SUMMARY The objective of this study aimed at evaluating the use of Guinea pig to test the efficacy of Foot and Mouth Disease (FMD) vaccines by means of determining 50% protection dose (GPPD50) The FMD vaccines used in this study were Aftopor type “O”, imported vaccine from MeÙrial company; Aftovax type “O” and type “O”+”A” formulated at NAVETCO using the antigens of the inactivated FMD virus from MeÙrial company; and the FMD vaccine made by NAVETCO using the FMD virus isolated in Viet Nam A total of 16 vaccine lots were tested and the results indicated that all of the 16 vaccine lots reached the potency standards with the GPPD50 value was ≥ 23 GPPD50/dose It was also recognized that all the vaccine lots showed their efficacy in the test on the Guinea pigs with the value ≥ 23 GPPD50/dose, the same value also obtained when efficacy test was done using the target animals as pig or cattle With the outcome of this study, it is suggested that the Guinea pigs can be used for potency test for FMD vaccines Keywords: Guinea pig, efficacy, Foot and Mouth Disease (FMD) KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXV SỐ - 2018 I ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh lở mồm long móng (LMLM) bệnh truyền nhiễm nguy hiểm virus, gây bệnh cho động vật móng guốc chẵn như: bò, heo, dê, cừu vv , với triệu chứng bệnh tích thường xuất móng chân, mũi, miệng lưỡi Ở Việt Nam, virus gây bệnh LMLM gia súc xác định thuộc serotype O, A Asia 1, chủ yếu serotype “O” thuộc topotype SEA ME-SA Thực tế chứng minh hiệu phòng bệnh LMLM phụ thuộc vào chất lượng tiêm phòng cơng tác vệ sinh phòng dịch, chất lượng tiêm phòng đóng vai trò quan trọng Hiện vacxin LMLM dùng tiêm phòng cho đàn gia súc chủ yếu nhập từ nước việc nghiên cứu vacxin nước thực hiện, quy mơ phòng thí nghiệm Để đánh giá chất lượng vacxin LMLM nhập vacxin LMLM nghiên cứu sản xuất nước, người ta thường sử dụng động vật (heo, bò) kiểm tra đáp ứng miễn dịch thông qua phản ứng huyết học với ngưỡng hiệu giá kháng thể quy định theo kit nhà sản xuất theo tiêu chuẩn OIE Rất đánh giá công cường độc trực tiếp thực Một khó khăn nảy sinh thực kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM nước ta chưa có trại ni động vật thực đảm bảo chất lượng để đánh giá vacxin việc cung ứng động vật đảm bảo yêu cầu cho kiểm nghiệm khó khăn, việc kiểm tra vacxin thường nhiều cơng sức, kính phí để tìm động vật kết tất yếu, công tác kiểm nghiệm gặp nhiều khó khăn để đạt độ xác thời gian có kết mong muốn Đã có nhiều báo cáo việc sử dụng chuột lang để kiểm nghiệm hiệu lực vacxin LMLM Trên sở kết nghiên cứu tham khảo, nhằm giải khó khăn nêu trên, tiến hành nghiên cứu sử dụng chuột lang để đánh giá chất lượng vacxin LMLM nhập vacxin LMLM nghiên cứu với chủng virus LMLM phân lập ổ dịch LMLM Việt Nam II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 2.1 Ngun vật liệu thí nghiệm + Vacxin LMLM Vacxin Aftopor nhũ dầu nhập từ công ty Mérial Pháp Vacxin Aftovax type O O+A sản xuất công ty NAVETCO dùng kháng nguyên virus LMLM vô hoạt nhập từ công ty Mérial Pháp Vacxin LMLM vô hoạt nhũ dầu sản xuất công ty NAVETCO dùng chủng virus LMLM Cơ quan thú y vùng (RAHO VI) cung cấp chủng virus LMLM O/NAVETCO/NA09/11 (Topotype MESA) công ty NAVETCO phân lập chọn lọc + Chủng virus công độc: Chủng virus LMLM cường độc ký hiệu O/NAVETCO/NA09/11 + Động vật: Chuột lang khỏe mạnh, P = 350 – 400 g, nhận từ Viện vacxin Nha Trang 2.2 Phương pháp thí nghiệm Mỗi lơ vacxin dùng 25 - 30 chuột lang, chia làm nhóm, nhóm - chuột Mỗi nhóm chuột nhốt riêng rẽ gây miễn dịch tiêm vacxin LMLM da với nồng độ (liều vacxin) khác nhau:1/3, 1/9, 1/27, 1/81 nhóm khơng tiêm dùng làm đối chứng Sau tuần tiêm vacxin, chuột lang lô miễn dịch đối chứng thử thách với virus LMLM cường độc, liều 103-3,5GPID50 Chủng virus LMLM cường độc O/ NAVETCO/NA09/11 dùng cơng có liều gây nhiễm chuột lang 10-5,3 liều gây chết (mLD50) chuột bạch ổ 10-6,7 Liều công thử thách 0,2 ml/con chứa 103-103.5 GPID50, đường gây nhiễm: tiêm gan bàn chân Theo dõi 10 ngày sau công độc, ghi chép số bệnh, số chết tính tốn liều bảo hộ GPPD50 theo công thức KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXV SỐ - 2018 Reed & Muench Công ty CP thuốc thú y TW NAVETCO Tổng số 16 lô vacxin lấy mẫu để kiểm nghiệm hiệu lực phương pháp dùng chuột lang, có lơ kiểm nghiệm phương pháp: Phương pháp dùng chuột lang phương pháp kiểm tra động vật (heo bò) Kiểm tra hiệu lực heo bò thực Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y TW kiểm tra chuột lang tiến hành Trung tâm nghiên cứu thú y, III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hiệu lực vacxin kiểm tra chuột lang, thông qua xác định liều PD50 (GPPD50) Vacxin gây miễn dịch cho nhóm chuột lang với liều khác Sau tháng gây miễn dịch, chuột miễn dịch đối chứng thử thách virus LMLM cường độc type ‘O’ liều 103-3,5GPID50, kết trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra hiệu lực chuột lang STT Loại vacxin Lô vacxin Nơi sản xuất Chủng vacxin Kết GPPD50/liều(1) Kết luận Aftopor type O O-531 Công ty Mérial O3039 + O1 Manisa 60,9 Đạt 48,0 Đạt 60,6 Đạt 47,9 Đạt 47,9 Đạt O-605 122210/15 Aftovax type O 020906/16 O3039 + O1 Manisa 010704/16 022403/16 60,3 Đạt 042605/16 38,0 Đạt 060707/16 38,0 Đạt 080610/16 27,0 Đạt 10 010303/16 71,3 Đạt 38,0 Đạt 11 Aftovax type O+A NAVETCO* O 3039 + O1 Manisa + A 031205/16 12 052306/16 37,0 Đạt 13 072209/16 25,0 Đạt 14 15 16 Vacxin LMLM type O 01 2015 02 2015 03 2016 NAVETCO** O/Navetco/09/11 37,5 Đạt 30,1 Đạt NAVETCO*** RAHO 48,0 Đạt *Kháng nguyên virus LMLM vô hoạt nhập từ công ty Mérial, Pháp **Kháng nguyên virus LMLM NAVETCO phân lập chọn lựa ***Kháng nguyên nhận từ RAHO VI (1) GPPD50 ≥ 23, lô vacxin đạt hiệu lực Kết thu cho thấy tất lơ vacxin LMLM kiểm tra có giá trị GPPD50 lớn 23 GPPD50/liều, lơ vacxin kiểm tra có giá trị GPPD50 thấp đạt 25 GPPD50 lơ vacxin có giá trị GPPD50 cao 71,3 GPPD50 (trung bình 43,6 ±12,6) Để thí nghiệm đạt chuẩn, u cầu động vật lơ đối chứng sau công phải chết bị bệnh 80% số chuột công Thực tế theo dõi chuột sau công độc ghi nhận 100% chuột đối chứng lô kiểm tra (16 lô) chết phát bệnh Dấu hiệu bệnh thường bắt đầu xuất vào ngày thứ sau KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXV SỐ - 2018 công Một số trường hợp xuất vào ngày thứ Các biểu bệnh thường gặp là: chuột ăn bỏ ăn, kêu nhiều, vận động Bệnh tiến triển xuất triệu chứng: Chuột xù lông, chảy nước dãi nhiều từ miệng, mũi ướt, bàn chân sưng đỏ chân tiêm chân đối diện, xuất nốt trắng Chuột bệnh thường chết vòng từ ngày thứ đến ngày thứ sau gây nhiễm Để có sở xem xét khả áp dụng phương pháp khác để kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM, tiến hành so sánh kết kiểm tra hiệu lực dùng chuột lang với phương pháp kiểm tra động vật (heo, bò) thực Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I, kết trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM dùng động vật động vật thí nghiệm – chuột lang STT Loại vacxin Lô vacxin Aftopor type O O-531 Aftovax type O O-605 Nơi sản xuất Công ty Mérial Kết GPPD50/liều Heo Bò O 3039, O1 Manisa 60,9 Đạt Đạt 48,0 Đạt Đạt 47,9 KL Đạt O 3039, O1 Manisa 010704/16 Kết TTKN Chủng vacxin 010303/16 71,3 KL Đạt 031205/16 38,0 KL Đạt 37,0 KL Đạt 25,0 KL Đạt Aftovax type O +A 052306/16 NAVETCO* 072209/16 O 3039, O1 Manisa + A *Kháng nguyên virus LMLM vô hoạt nhập từ công ty Mérial, Pháp KL: không làm Kết ghi nhận tất lơ vacxin có giá trị GPPD50 ≥ 23 cho kết đạt kiểm tra heo bò vacxin Aftopor type O bò vacxin Aftovax type O & type O+A Mặc dù số lượng mẫu hạn chế với kết thu nhận từ nghiên cứu này, sơ nhận xét rằng: Có phù hợp kết kiểm tra hiệu lực phương pháp dùng chuột lang so sánh với phương pháp thử động vật (heo, bò) Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I áp dụng Do khó khăn việc sử dụng động vật đích để kiểm nghiệm vacxin áp dụng sản xuất thường quy hạn chế kỹ thuật, điều kiện an toàn sinh học yếu tố kinh tế, khó thực việc công cường độc kiểm nghiệm lơ vacxin LMLM sản xuất thực tế Chính vậy, việc sử dụng phương pháp kiểm nghiệm thay để kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM yêu cầu thực tế cần xem xét tìm giải pháp để giải Nhiều cơng trình nghiên cứu vacxin LMLM, chí sản xuất vacxin LMLM số công ty giới, người ta sử dụng chuột lang để kiểm tra hiệu lực vacxin thông qua xác định liều bảo hộ chuột lang (1,2,3,4,5) Kết nghiên cứu tất lô vacxin LMLM từ nguồn sản xuất khác kiểm tra hiệu lực chuột lang đạt yêu cầu hiệu lực cho kết ≥ 23 GPPD50/liều Đây ngưỡng số bảo hộ chuột lang xác định tương đương với giá trị ≥ PD50 kiểm tra bò, bê (Theo tài liệu “Federal center for KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXV SỐ - 2018 Animal Health (FGI ARRIAH) - Dossier for vaccine against foot and mouth disease cultural inactivated emulsified from strain type “O”) Hơn nữa, việc đồng thời kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM chuột lang bò, heo so sánh kết thu cho thấy tất lô vacxin LMLM thí nghiệm có giá trị bảo hộ 50% chuột lang ≥ 23 GPPD50/ liều cho kết đạt kiểm tra hiệu lực phương pháp dùng động vật (heo, bò) Từ kết thu thí nghiệm này, chúng tơi nhận xét dùng chuột lang phương pháp thay để kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM vô hoạt nhũ dầu keo phèn Phương pháp chứng minh thuận lợi, đáp ứng yêu cầu thời gian sản xuất đảm bảo tính chinh xác dùng heo bò để kiểm tra, phương pháp áp dụng để kiểm tra vacxin Để có thêm sở áp dụng kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM dùng chuột lang, số thí nghiệm kiểm tra hiệu lực heo bò thực song song với chuột lang cần thiết phải tiến hành thêm TÀI LIỆU THAM KHẢO D.Abaracon; N.Magallanes; E.G.Charles; L.A.Durini; E.Frick; G.Fernandez de Albarracin; E.Degiorgi de Burghi; T Radisich Shelf life of inactivated oiladjuvanted Foot-and-mouth disease vaccine Bol.Centr.Panam.Fiebre Aftosa 37-38:2124, 1980 Ehab El-Sayed, Wael Mossad Gamal ElDin, Sonia Ahmed Rizk, Magdi Abd El-Aty Effect of different storage temperatures on the efficacy of the bivalent foot and mouth disease oil vaccine Journal of Advanced Veterinary research Vol (2012) 198-205 Hans G.Bahnemann & Julio A.Mesquita (1987) Oil-adjuvant against foot-and-mouth disease Bol.Centr.Panam.Fiebre Aftosa 53:25-30, 1987 Ivo Gomes; P Auge de Mello; A.Aloson Fernandez; Kleise de Freitas Costa Foot and mouth disease oil adjuvanted vaccines for pigs III Immune response of vaccines emulsified by ultrasonic or mechanical equipment Bol.Centr.Panam.Fiebre Aftosa 35-36:27-33, 1979 P Auge de Mello; A.Aloson Fernandez; I Gomes; M.S Sondahi; A.R.Pollak; H.Tortora; A Millan; D.Pintos Potency testing of oil adjuvanted foot-and-mouth disease vaccine: PD50 assays of a semi-industrial water in oil type emulsion vaccine in guinea pigs and cattle Bol.Centr.Panam.Fiebre Aftosa 2930:61-65, 1978 Trần Xuân Hạnh, Nguyễn Thị Lam Hương, Tô Thị Huệ, Đặng Hùng, Bùi Anh Thy, Kim Văn Phúc, Phạm Hào Quang, Huỳnh Khương Hữu Duyên, Nguyễn Văn Dung, Lê Thị Thu Phương Kết bước đầu sản xuất vacxin lở mồm long móng type O, vơ hoạt, nhũ dầu, dùng chủng virus LMLM phân lập Việt Nam Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y số 2-2015 Ngày nhận 20-2-2017 Ngày phản biện 18-3-2017 Ngày đăng 1-1-2018 ... bò để kiểm tra, phương pháp áp dụng để kiểm tra vacxin Để có thêm sở áp dụng kiểm tra hiệu lực vacxin LMLM dùng chuột lang, số thí nghiệm kiểm tra hiệu lực heo bò thực song song với chuột lang. .. người ta sử dụng chuột lang để kiểm tra hiệu lực vacxin thông qua xác định liều bảo hộ chuột lang (1,2,3,4,5) Kết nghiên cứu tất lô vacxin LMLM từ nguồn sản xuất khác kiểm tra hiệu lực chuột lang. .. 16 lô vacxin lấy mẫu để kiểm nghiệm hiệu lực phương pháp dùng chuột lang, có lơ kiểm nghiệm phương pháp: Phương pháp dùng chuột lang phương pháp kiểm tra động vật (heo bò) Kiểm tra hiệu lực heo