hóa sinh thực hành

Bài Tên Lý thuyết Thí nghiệm Tên 1 Hóa học Protid , enzy m Protid : hợp chất hữu cấu tạo nguyên tố : C H O N Enzym : chất xúc tác sinh học có chất Protein , khơng sinh không sau phản ứng Hóa Pr Tủa học - lớp áo nước: Protid + dùng chât hút nước Ancol, , Cetol enzy + biến tinhs Pr: đun sôi , Acid m mạnh, kiềm mạnh - Mất lớp điện tích + đưa PH môi trường PHi Pr : acid yếu nồng độ thấp + trung hòa điện tích: chất điện giải NaCl Nguyên tắc Tiến hành Nhận định KQ Ứng dụng 1.Phản ứng Biure Trong môi trường kiềm, - ống : 10 giọt Pr 0,1% + - Ống 1: tạo phức tím ( nitơ liên kết 10 giọt biure Pr tạo phức với Cu(OH)2 peptid Protein tạo - ống 2: 10 giọt glyci 0,1% - ống : không tạo phức ( phức hợp màu tím với + 10 giọt biure Glycin a.min khơng Cu++ có liên kết peptid) PT: Định lượng Pr huyết 2.Tủa Protein cách đun sôi Khi đun sôi tiểu phân protein bị lớp áo nước, Nếu tiểu phân lại bị trung hồ điện tích đưa PH dung dịch gần PHi Protein bị tủa Tìm Protein nước tiểu, dịch màng bụng, màng phổi - Mỗi ống ml Protein - ống 1: không tủa đun thẩm tích sơi làm lớp áo - ống : không thêm nước - ống 2: thêm giọt - ống 2: tủa trắng a.acetic 1% a.acetic acid yếu đưa - ống 3: thêm giọt PH môi trường PHi a.acetic 10% nên làm lớp điện tích, - ống 4: thêm giọt kết hợp đun sôi làm a.acetic 10% + giọt lớp áo nước NaCl bão hòa - ống 3: không tủa - ống 5: thêm giọt NaOH a.acetic 10% acid mạnh 10% + đun sôi làm lớp lắc đun sôi phút áo nước  Pr tích điện dương - ống 4: tủa trắng a.acetic 10% đun sôi làm lớp áo nước, NaCl làm lớp điện tích  Ứ D : tìm Pr nước tiểu - Ống 5: không tủa NaOH kiềm mạnh + đun sôi làm lớp áo nước Pr  Pr tích điện âm Bài Tên Lý thuyết Thí nghiệm Tên Nguyên tắc Tiến hành Nhận định KQ Ứng dụng Hóa học Protid , enzy m 3.Tủa Protein kim loại nặng Protein tạo muối với kim loại nặng thành phức hợp không tan nước - 10 giọt Pr 0,1% + giọt chì acetl 5% - Kết tủa trắng ion kim loại làm phá vỡ màng nước trung hòa điện tích - Sơ cứu ngộ độc kim loại nặng thơi gian chưa hấp thu( cho uống lòng trắng trứng) Hóa học Protid , enzy m 4.Hoạt động enzym catalase Catalase enzym oxy hóa khử có tất tế bào Catalase từ gan xúc tác phản ứng phân hủy H2O2 thành H2O giải phòng oxy Oxy phát phản ứng cháy - Cho 1g gan nghiền - Catalase có TB, TB nhuyễn 10ml nước bị tổn thương giải phóng cấy vào ống đổ nhanh catalase , tác dụng với H2O2 1% vào đầy ống H2O2 giải phòng O2 nghiệm, bịt nhanh ống nghiệm lộn ngược ống nghiệm vào chậu nước Thả ngón tay để nước ống thoát ngoai, giữ thẳng ống nhấc ống khỏi mặt nước , gạt hết bọt ống đưa que đóm đỏ vào ống thấy que đóm bùng cháy - Nước H2O2 rửa vết thương mới, khơng rửa vết thương cũ làm chết tổ chức, mòn da ( 02 nguyên tử có khả oxy hóa mạnh , phá hủy màng tế bào diệt khuẩn) catalase H2O2  H2O+1/2 O2 Bài Tên Hóa học Gluci d, lipid Lý thuyết Glucid : cấu tạo nguyên tố C,H,O có cơng thức phân tử Cn(H2O)m chia làm loại + Monosaccarid: gọi đường đơn, dẫn xuất aldehyt cetol polyancol, đơn vị cấu tạo nhỏ glucid, thị thủy phân VD: Glucose, Fructose, Galactose, Mannose Tính chât hóa học : chuyển dạng dẫn nhau, tính khử, tính oxy hóa, tạo Osazon, tạo Furfural, tạo Glucosid, tạo dẫn xuất osamin, tạo este , oxy + Oligosaccarid:2-14 phân tử monosaccarid tạo nên : VD Sacarose, lactose, Maltose Polysaccarid: tạo nên từ nhiều phân tử monosaccarid Thí nghiệm Tên Nguyên tắc Xác định tính khử monosacar id -phản ứng Fehling Tất phân tử monosaccarid chứa nhóm chức khử ( aldehyd H-C=O Ceton C=O) chúng có tính khủ ion kim loại thành ion kim loại có hóa trị thấp Trong phản ứng Fehling , monosaccarid khủ Cu(OH)2 thành CuOH, chất lại bị nước thành Cu2O kết tủa đỏ gạch PT: Tiến hành Nhận định KQ Mỗi ống cho ml Fehling - ống 1: khơng có kết tủa thêm vào - ống 2: có kết tủa, - ống 1: 10 giọt nước cất dd Glucose có nhóm chức - ống 2: 10 giọt Glucose andehyt, nhóm có tính - ống 3: 10 giọt Fructose khử nên Cu++ thành Cu+ - ống 4: 10 giọt Galactose  có kết tủa đỏ gạch lắc đun sơi phút - ống 3: có kết tủa Fructose có nhóm chức Ceton khơng tham gia phản ứng dd Fehling có mơi trường kiềm làm Fructose chuyển dạng đồng phân Glucose, Glu có tính khử Cu(OH)2 thành Cu2O kết tủa đỏ gạch - ống : có kết tủa , dd Galactose có nhóm chức Andehyt, nhóm có tính khử nên Cu++ thành Cu+, có kết tủa đỏ gạch Ứng dụng - Tìm đường nước tiểu Bài Tên Lý thuyết Glucose: Thí nghiệm Tên Nguyên tắc 6.Xác định tính khử disaccarid Disaccarid phân tử nhóm chức khử ( nhóm OH bán Acetal) có khả khử Cu(OH)2 theo nguyên tắc phản ứng Fehling xác định acid lactic Acid lactic chiết xuất tư tươi Phát có mặt a.lactic dịch chiết phản ứng tạo lactac sắc màu vàng theo chế Phenol+FeCl3 Phenol sắt( màu tím) Phenol sắt +acid lactic lactac sắt ( màu vàng) Tiến hành Mỗi ống cho 1ml Fehling thêm vào - ống 1: 10 giọt nước cất - ống 2: 10 giọt saccarose - ống 3: 10 giọt lactose - ống 4: 10 giọt maltose lắc đun sôi phút Fructose: - đường thối hóa glucose Cho vào ống nghiệm ml phenol 1% khoảng 15 giọt giọt FeCL3 ,1% 4-8 giọt dd chiết Lắc Nhận định KQ Ứng dụng - ống 1: khơng có kết tủa - tìm đường - ống 2: có kết tủa màu đỏ thuốc, gạch saccarose có giá trị q trình đun nóng bị thủy kiểm định phân thành αD glucose thuốc βD Fructose mà chất có nhóm chức khử nên khử Cu++ thành Cu+ kết tủa đỏ gạch( khử gián tiếp - ống 3: có kết tủa lactose có nhóm OH bán cetal nên có tính khử, khủ Cu++ thành cu+ kết tủa đỏ gạch - ống 4: có kết tủa , maltose có nhóm Oh bán cetal nên tính khử, khử Cu++ thành Cu+ kết tủa đỏ gạch - ống nghiệm lắc lúc - định lượng đầu có màu tím , thêm acid lactic dịch chiết vào dd máu ( chuyển thành màu vàng để đánh giá chanh, thêm 1-2 giọt dd chức chiết màu vàng gan), khả đậm tưới máu Bài Tên Lý thuyết Thí nghiệm Tên Lipit : este acid báo Nhũ ancol hoặ amid acid béo tương hóa amin ancol dầu lạc Phân loại Thuần : glycerid, cerid Tạp: photpholipit, lipoprotein Ứng dụng -Khi ăn thức ăn có lopit , máu có Pr nên P+Lipit  liprotein chất vận chuyển lipit máu nên lipit không bị bám vào thành mạch gây tắc mạch -Mật: dịch mật đổ vào khúc tá tràng để nhũ tương hóa lipit thể hấp thu lipit nhờ enzym lipase( tiêu hóa lipit dạng nhũ tương hóa) Thiếu dịch mật  ko hấp thu lipit  thiếu vitamin tan lipit A, E -Xà phòng: Ứng dụng sản xuất dầu gội , sữa tắm… -Ancol – Ether: làm vết bẩn đồ da – len Nguyên tắc Dầu mỡ không tan nước lắc mạnh với nước tạo thành nhũ tương không bền: nghĩa để yên thời gian dd chia lớp , nêu thêm chất nhũ tương hoa NaCO3 , muối mật, Protit, xà phòng … tạo nhũ tương bền Tiến hành Nhận định KQ Cho vào ống nghiệm - ống nhũ tương hóa ống giọt dầu lạc, không bền lắc mạnh thêm vào làm tách phân tử lipit - ống 1: 20 giọt nước cất ra, nước đến bao quanh - ống 2: 20 giọt Na2CO3 , tạo thành mảng 1% lipit nhỏ lớp nước - ống 3: 20 giọt dd Pr 1% để yên lúc mảng lipit - ống 4: 20 giọt dd mật 30% liên kết với tạo - ống 5: 20 giọt dd xà phòng thành nhũ tương hóa 5% khơng bền - ống : 20 giọt Alcol – - ống 2,3,,5: tạo thành nhũ ether tương hóa bền lắc Lắc kỹ quan sát mạnh làm p.tử lipit tượng nhũ tương bền tách ra, nước đến bao không bền quanh tạo thành mảng lipit nhỏ lớp nước chất nhũ tương hóa vừa có đầu kị nước vừa có đầu ưa nước, đầu kị nước bao lấy đầu kị nước lipit đưa đầu ưa nước liên kết chặt chẽ với phân tử nước làm cho p.tử lipit liên kết lại với  tạo thành nhũ tương bền - ống 6: tạo nhành nhũ tương bền dd gần suốt ancol – ether chất nhũ tương hóa mạnh Ứng dụng Bài Tên Lý thuyết Nguồn gốc: nội sinh - Được tổng hợp từ a.amin gan ( có a.amin cần thiết 12 a.a không cần thiết) - Bao gồm + Albumin : tổng hợp từ gan + Globulin: tổng hợp từ gan , TB limph Vai trò : + tạo áp suất keo + vận chuyển bilirubin, lipit, thuốc… + bảo vệ thể + điều hòa hormon Thí nghiệm Tên Nguyên tắc Tiến hành Nhận định KQ Ứng dụng 9.Định lượng Pr huyết ( Phương pháp đo điểm cuối) Nguyên tắc : so màu Các peptid tạo phức màu tím với ion Cu++ mơi trường kiềm đậm độ phức màu tỉ lệ thuận với nồng độ Pr Đo mật độ quang phức màu bước sóng 546 nm Hút 1000 µl thuốc thử ( 1ml) Thêm 10 µl huyết bệnh nhân Lắc , ủ 37 o C phút, đem đo máy Giá trị bình thường 65-85g/l Tăng: thể tích tuần hồn máu, sốt, bỏng, tiêu chảy Tăng giả tạo : cô đặc máu Giảm + giảm tổng hợp : giảm chức gan( suy gan, viêm gan, sơ gan) thiếu a.amin( suy dd) + tăng đào thải : tổn thương màng lọc cầu thận( viêm cầu thận, Hc thận hư, suy thận Giá trị BT : 35-55 g/L Tăng : Mất thể tích tuần hồn máu, sốt, bỏng , tiêu chảy… Giảm : + giảm tổng hợp : Giảm chức gan( suy gan, viêm gan, Xo gan) thiếu a.amin ( suy dd) + tăng đào thải : tổn thương màng lọc cầu thận( viêm cầu thận, hc thận hư, suy thận Đánh giá chức gan, tổn thương thận, phù Pr + Cu++ phức màu tím 10.định lượng Albumin ( Phương pháp đo điểm cuối Nguyên tắc : so màu Albumin kết hợp với xanh Bromcresol môi trường acid tạo phức hợp màu xanh Đậm độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ Albumin Đo phức hợp màu bước sóng 578 nm Hút 1000 µl thuốc thử ( 1ml) Thêm 10 µl huyết bệnh nhân Lắc , ủ 37 o C phút, đem đo máy Chỉ định đánh giá chức gan Tổn thương thận, phù Bài Tên Lý thuyết Thí nghiệm Nguyên tắc Tiến hành Nhận định KQ Ứng dụng 11.phản ứng Rivalta Phản ứng Rivalta nhằm bán ddihj lượng Pr dung dịch chọc dò dựa nguyên tắc Pr a.amin hữu Cho vào ống 100ml nước cất nhỏ giọt acid acetic đặc, nhỏ từ từ 100 µl bệnh phẩm( giọt) Quan sát phản ứng đen Chỉ định : để chẩn đốn ngun nhân gây bệnh 12 Tìm Pr niệu pp đun sơi Pr có mặt nước tiểu bị kết tủa tác dụng nhiệt độ mơi trường acid yếu có mặt chất điện giải Nước tiểu 2ml Acid acetic 10% giọt NaCl bão hòa giọt Lắc đun sơi cách thủy 5p Rivalta (+) xuất hình ảnh khói Dịch tiết tương đương Pr dịch ≥30g/L, thường gặp trong: Lao màng bụng/phổi, K gan, K phổi – màng phổi, apsxe phổi Rivalta (-) khơng có tượng Dịch thấm nồng độ