Nghiên cứu bào chế viên ngậm ức chế vi khuẩn chứa cao dược liệu

Viên nén ngậm chứa cao chiết của hỗn hợp dược liệu (gọi tắt là cao chiết dược liệu) có tác động ức chế vi khuẩn Staphylococcus aureus và MRSA nhằm điều trị viêm họng. Phương pháp nghiên cứu: Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của hỗn hợp cao dược liệu nghiên cứu bằng phương pháp cấy trên đĩa thạch. Từ nồng độ MIC đã xác định, tiến hành đánh giá tác động kháng khuẩn của cốm bán thành phẩm chứa cao dược liệu ở các hàm lượng khác nhau. Sau khi xác định được hàm lượng cao dược liệu cần sử dụng, tiến hành xây dựng công thức viên ngậm dựa trên phương pháp nghiên cứu thay đổi tỉ lệ thành phần công thức bào chế và tối ưu hoá bằng phần mềm BC Pharmsoft.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NGẬM ỨC CHẾ VI KHUẨN CHỨA CAO DƯỢC LIỆU Phạm Đình Duy*, Trương Thị Thu Trang**, Trần Văn Thành*, Trịnh Thị Thu Loan* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Hiện nay, với xu hướng trở thiên nhiên, nhiều dạng thuốc bào chế từ nguyên liệu có nguồn gốc thực vật ngày phong phú Từ xưa, y học cổ truyền có thuốc từ dược liệu điều trị viêm họng hiệu quả, an toàn, kinh tế Trong số dược liệu đó, kể đến Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Tuy nhiên, thuốc thường sử dụng riêng lẻ, bào chế theo phương pháp truyền thống (ngâm, hầm, hãm, sắc), không tiện cho việc sử dụng, không che mùi vị khó chịu Vì vậy, việc phối hợp dược liệu dạng cao chiết tiêu chuẩn hóa dạng bào chế phân liều sẵn, dễ sử dụng vấn đề quan tâm Viên ngậm dạng bào chế thích hợp cho việc điều trị bệnh vùng miệng, họng thuốc tiếp xúc trực tiếp vị trí bệnh cho hiệu nhanh, không bị ảnh hưởng dịch men tiêu hóa trước đến nơi cần tác động Do đó, đề tài thực với mục tiêu bào chế viên nén ngậm chứa cao dược liệu đạt tiêu chuẩn đề có tác dụng kháng khuẩn Staphylococcus aureus ATCC 29213 MRSA ATCC 43300 in vitro Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Viên nén ngậm chứa cao chiết hỗn hợp dược liệu (gọi tắt cao chiết dược liệu) có tác động ức chế vi khuẩn Staphylococcus aureus MRSA nhằm điều trị viêm họng Phương pháp nghiên cứu: Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) hỗn hợp cao dược liệu nghiên cứu phương pháp cấy đĩa thạch Từ nồng độ MIC xác định, tiến hành đánh giá tác động kháng khuẩn cốm bán thành phẩm chứa cao dược liệu hàm lượng khác Sau xác định hàm lượng cao dược liệu cần sử dụng, tiến hành xây dựng công thức viên ngậm dựa phương pháp nghiên cứu thay đổi tỉ lệ thành phần cơng thức bào chế tối ưu hố phần mềm BC Pharmsoft Kết quả: Đã xây dựng cơng thức bào chế viên nén ngậm có tác động kháng khuẩn Staphylococcus aureus MRSA Kết luận: Viên nén ngậm rã nhanh, có tác động kháng khuẩn Cơng thức viên nén xây dựng dùng để nghiên cứu nâng cấp cỡ lô sản xuất thực tế Từ khoá: viên ngậm, cao dược liệu, viêm họng ABSTRACT RESEARCH AND FORMULATION OF TABLET CONTAINING PLANT EXTRACTS FOR SORE THROAT TREATMENT Pham Dinh Duy, Trương Thi Thu Trang, Tran Van Thanh, Trinh Thi Thu Loan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 104 - 111 Objectives: Currently, with the trend of back to nature, many types of drugs are made from plant extracts increasingly tremendously From ancient times, in traditional medicine, there were remedies from medicinal herbs to treat sore throat effectively, safely and economically Among those herbs, it is possible to mention Glycyrrhiza uralensis, Platycodon grandiflorum, Belamcanda chinensis, Eleutherine bulbosa However, these remedies are often used separately, prepared according to traditional methods, inconvenient for use, and it has unpleasant flavors Therefore, the combination of standardized plant extracts in the conventional dosage form, easy to use is *Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh **Công ty Huỳnh Tấn Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Văn Thành ĐT: 0919000008 Email: tranvanthanh@ump.edu.vn 104 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học an issue of concern The lozenges are dosage forms that are suitable for the treatment of oral and throat diseases because of direct contact with the location resulting fast effect, avoiding the unaffected by digestive enzymes Therefore, this research is carried out with the aim of making high-quality tablets containing plant extracts that meet the proposed standards and have in vitro antibacterial effects Materials and methods: Tablets containing plant extracts with anti-microbial activity to treat sore throats Research method: Determining the minimum inhibitory concentration (MIC) of plant extracts by method of implantation on agar plates From the determined MIC, the inhibitory effect on bacteria of various concentrations of plant extracts in the granule were studied After determining the effective concentration of plant extracts, the formulation of lozenges were prepared based on changing ratio of excipients and the optimization of formula, which was obtained by the support of BC Pharmsoft programme Results: A formula for lozenges possessing an antibacterial effect was achieved Conclusion: Fast-release lonzenges have antibacterial effects The lonzenges formulations can be used to scale-up to produce commercially Keywords: sore throat, lonzenge, plant extracts ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, với xu hướng trở thiên nhiên, nhiều dạng thuốc bào chế từ nguyên liệu có nguồn gốc thực vật ngày phong phú Từ xưa, y học cổ truyền có thuốc từ dược liệu điều trị viêm họng hiệu quả, an tồn, kinh tế Trong số dược liệu đó, kể đến Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành(4,5,6,7) Tuy nhiên, thuốc thường sử dụng riêng lẻ, bào chế theo phương pháp truyền thống (ngâm, hầm, hãm, sắc), không tiện cho việc sử dụng, khơng che mùi vị khó chịu Vì vậy, việc phối hợp dược liệu dạng cao chiết tiêu chuẩn hóa dạng bào chế phân liều sẵn, dễ sử dụng vấn đề quan tâm Viên ngậm dạng bào chế thích hợp cho việc điều trị bệnh vùng miệng, họng thuốc tiếp xúc trực tiếp vị trí bệnh cho hiệu nhanh, khơng bị ảnh hưởng dịch men tiêu hóa trước đến nơi cần tác động Do đó, đề tài thực với mục tiêu bào chế viên nén ngậm chứa cao dược liệu đạt tiêu chuẩn đề có tác dụng kháng khuẩn Staphylococcus aureus MRSA in vitro Các vi khuẩn tồn khơng khí, da mũi Khi người bệnh viêm họng, vi khuẩn hội gây nặng thêm tình trạng bệnh gây khó điều trị Việc điều chế viên nén ngậm có tác Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền dụng kháng khuẩn hỗ trợ giúp người bệnh viêm họng NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thí nghiệm Nguyên liệu, thiết bị Cao dược liệu chiết từ phối hợp loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Cao chiết dược liệu đạt tiêu chuẩn cảm quan, định tính, định lượng acid glycyrrhizic, tro tồn phần, tro không tan acid dựa chuyên luận Dược điển Việt Nam V (kết trình bày công bố khác) Nguồn gốc: Bộ môn Dược học cổ truyền, khoa Y học Cổ truyền, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Acid glycyrrhizic chuẩn (Tinh khiết 97,3%, Ban NCKH - ĐHYD), Tinh bột biến tính (Đức, TC USP 30), mannitol (Cargill-Mỹ ), gơm (Willy Benecke-Đức, TC USP 30), tá dược hút (Đức, TC USP 30), aspartam, bột mùi chocola, Aerosil, magnesi stearat (Singapore), methanol (Merck-Đức, TK cho HPLC), Acetonitril (Merck-Đức, TK cho HPLC), acid acetic (Merck-Đức, TK cho HPLC) Chủng vi sinh vật: MRSA ATCC 43300, 105 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Staphylococcus aureus ATCC 29213 Chủng vi khuẩn nuôi cấy bảo quản Bộ môn Vi sinh, khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Môi trường thử nghiệm: Tryptic Soy Agar (TSA), Mueller Hinton Agar (MHA), Tryptic Soy Broth (TSB) Cân phân tích Precisa (Thụy Sĩ), cân xác định độ ẩm Ohaus (Thụy Sĩ), máy xát hạt (Erweka, Đức), máy dập viên Korsh (Đức), máy đo độ cứng (Erweka, Đức), máy đo độ rã (Erweka, Đức), máy đo độ mài mòn (Erweka, Đức), máy HPLC Shimadzu (Nhật), máy quang phổ UV Viber (Pháp) Hinton (MHA) hấp tiệt trùng Tiến hành cấy lượng vi khuẩn qui định lên đĩa thạch vị trí đánh dấu sẵn Kiểm tra tăng sinh vi khuẩn thạch sau thời gian ủ định nhiệt độ qui định MIC nồng độ tối thiểu ức chế tăng trưởng vi khuẩn quan sát mắt thường(1,2,3) Môi trường thử nghiệm Thạch Mueller - Hinton (MHA) Chủng vi sinh vật Staphylococcus aureus ATCC 29213, MRSA ATCC 43300 Chuẩn bị mẫu Cân xác khoảng 10 g cao dược liệu cho Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) vào 10 ml nước cất bình nón Lắc thu cao dược liệu dung dịch có nồng độ g cao/ml Từ dung Nguyên tắc dịch tiến hành pha loãng lần với hệ số pha Chất thử nghiệm pha loãng nồng lỗng 1/2, thu dung dịch có nồng độ cao độ giảm dần môi trường thạch Mueller giảm dần trình bày Bảng Bảng Nồng độ mẫu thử MIC pha loãng từ cao dược liệu Phương pháp nghiên cứu Mẫu Nồng độ trung gian (mg/ml) Nồng độ thử nghiệm mg/ml) M1 1000 100 M2 500 50 Chuẩn bị mơi trường Cân hòa tan thạch MHA theo hướng dẫn nhà sản xuất Hấp tiệt trùng 121°C/1 Để nguội đến khoảng 40-45°C Đối với nồng độ: đong 22,5 ml thạch cho vào bình nón có sẵn 2,5 ml dung dịch cao dược liệu, lắc kĩ Cho vào đĩa petri (đường kính 90 mm, dày 3-4mm) Để đơng nhiệt độ phòng mặt phẳng nằm ngang Bảo quản tủ lạnh 4-8°C Chuẩn bị đĩa môi trường MHA không chứa cao dược liệu: thay cao 2,5 ml nước cất để làm mẫu chứng Chuẩn bị vi khuẩn phương pháp tăng sinh Cấy ria vi khuẩn thử nghiệm môi trường TSA, ủ 37oC 24 Lấy 3-5 khóm vi khuẩn tinh khiết chuyển vào nuôi cấy ống nghiệm chứa 4-5 ml 106 M3 250 25 M4 125 12,5 M5 62,5 6,25 M6 32 3,2 M7 16 1,6 M8 0,8 M9 0,4 môi trường TSB, ủ 35°C 2-6 độ đục lớn hay McFacland 0,5 Hiệu chỉnh dịch treo vi khuẩn đến mật độ vào khoảng 1-2.108 CFU/ml Xác định mật độ cách đo độ hấp thu quang học bước sóng 625 nm, độ hấp thu A phải nằm khoảng 0,08-0,12 hay soi trực tiếp trắng với vạch đen với dung dịch chuẩn McFacland 0,5 (khoảng 1,5 x 108 CFU/ml) Cách tiến hành Đĩa thạch đánh số cho vị trí chủng vi khuẩn Làm khơ đĩa thạch có chất thử đĩa chứng Cho 1-2 ml huyền dịch vi khuẩn loại lên đĩa để đạt mật độ vi khuẩn đĩa 104 CFU/ml Để yên 15 phút để vết chấm khô Lật ngược đĩa thạch cấy ủ tủ ấm Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 37oC 16-18 Đối với MRSA phải ủ 24 Đọc kết Kết có giá trị vi khuẩn mẫu chứng mọc bình thường Đặt đĩa thạch bề mặt sẫm màu, không phản xạ ánh sáng, quan sát tạo thành khóm vi khuẩn thử nghiệm Tìm đĩa có nồng độ thấp ức chế hồn tồn tạo khóm, nồng độ đĩa thạch MIC chất thử vi khuẩn thử nghiệm Xây dựng công thức phương pháp bào chế viên nén ngậm Xác định tỉ lệ cao đơn vị phân liều Nguyên tắc Để chọn tỉ lệ cao cần dùng đơn vị phân liều phải vào MIC cao dược liệu khả diệt khuẩn cao cốm bán thành phẩm Phương pháp Đánh giá khả diệt khuẩn in vitro cốm bán thành phẩm phương pháp khuếch tán qua giếng Vi khuẩn thử nghiệm Staphylococcus aureus ATCC 29213 Đây chủng vi khuẩn thường xuất thể trường hợp viêm nhiễm, chúng xâm nhập vào thể gây suy đa tạng chí tử vong Mẫu thử nghiệm Cốm bán thành phẩm chứa cao dược liệu bào chế với tỉ lệ cao đơn vị phân liều 100, 150 200 mg Chuẩn bị mẫu Nghiền mịn riêng mẫu cốm, cân khối lượng mẫu bột cốm tương đương với 100, 150 200 mg cao Cho vào eppendorf, thêm ml nước cất, vortex đồng nhất, thu hỗn hợp với nồng độ C1 Mỗi mẫu tiếp tục pha loãng lần với hệ số pha loãng 1/2 thu hỗn hợp C2, C3, C4, C5 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học Chuẩn bị mơi trường Cân hòa tan thạch theo hướng dẫn nhà sản xuất Hấp tiệt trùng 121°C/1 giờ, để nguội Đổ thạch vào đĩa petri (đường kính 90mm, dày 4mm) Để thạch đơng nhiệt độ phòng mặt phẳng nằm ngang Bảo quản tủ lạnh 4-8°C Chuẩn bị vi khuẩn phương pháp tăng sinh Thực tương tự chuẩn bị vi khuẩn đề cập Tiến hành Dùng que vô trùng nhúng vào hỗn dịch vi khuẩn chuẩn bị, ép que thành ống cho nước, sau trãi mặt thạch Để hộp mở nắp tủ ấm 3-5 phút cho mặt Đục lỗ đĩa thạch ống đồng, vơ trùng, đường kính mm đục lỗ môi trường trải vi khuẩn Dùng micropipet hút 100 µl mẫu cho vào giếng Để yên khoảng 15 phút cho chất thử nghiệm khuếch tán vào lớp thạch Ủ hộp thạch tủ ấm nhiệt độ 37°C 16-18 Đọc kết Lỗ chứng không ức chế phát triển vi khuẩn Chất thử có khả kháng khuẩn xung quanh lỗ có vòng vơ khuẩn Xây dựng cơng thức cho viên nén ngậm Thành phần tá dược sử dụng nghiên cứu bao gồm: tinh bột biến tính, gơm, tá dược hút, aspartam, bột mùi chocola, aerosil, magnesi, mannitol Tiến hành thăm dò cơng thức, cơng thức với cỡ lô 200 viên, bào chế qui trình Việc chọn lựa loại lượng tá dược dựa theo nguyên tắc có khả kết dính, chịu nén, khơng gây cảm giác nhám lưỡi khó chịu ngậm Trong đó, khả kết dính chịu nén đánh giá dựa khả tạo thành viên nén Cảm giác ngậm đánh 107 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học giá dựa cảm giác thành viên tham gia nghiên cứu đề tài Thiết kế mô hình thực nghiệm Mơ hình thực nghiệm 14 cơng thức thiết kế phần mềm DesignExpert Từ công thức thăm dò, lựa chọn đề nghị cơng thức Bào chế viên theo mơ hình thiết kế Các công thức viên theo thiết kế bào chế điều kiện qui trình Từ cơng thức xác định biến độc lập biến phụ thuộc dùng cho việc thiết kế tối ưu hóa cơng thức Đánh giá thơng số thành phẩm Các thông số đánh giá viên nén gồm: cảm quan, độ đồng khối lượng, độ cứng, độ mài mòn, định tính định lượng hàm lượng acid glycyrrhizic theo chuyên luận viên nén Dược điển Việt Nam V(3) Các bước tiến hành bào chế viên nén ngậm Với thành phần tá dược nêu trên, viên thành phẩm bào chế qua bước: a/ Rây tinh bột biến tính, gơm, tá dược hút, mannitol qua rây 0,5 mm Trộn b/ Thêm cao dược liệu vào khối bột khô, nhồi trộn để tạo thành khối ẩm đồng Tối ưu hóa cơng thức phần mềm BC-Pharsoft Đầu vào liệu bào chế giá trị thông số yi 14 công thức c/ Xát hạt qua rây mm d/ Sấy cốm 60°C đến độ ẩm 3% Kiểm chứng công thức tối ưu Bào chế lô thành phẩm theo công thức tối ưu Thành phẩm kiểm nghiệm tương tự giai đoạn thiết kế công thức e/ Sửa hạt, rây lại qua rây 1,2 mm f/ Trộn hoàn tất: thêm aerosil, magnesi stearat, bột mùi chocola, aspartam vào cốm sấy khô, trộn đến đồng KẾT QUẢ g/ Dập viên, khối lượng trung bình khoảng 570 mg, độ cứng 140-170N Kết xác định MIC cao Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chủng vi khuẩn thử nghiệm MRSA S.aureus 6,25 mg/ml (Hình 1) h/ Đóng gói Đánh giá thành phẩm Thiết kế tối ưu hóa cơng thức Q trình thiết kế tối ưu hóa gồm giai đoạn sau: 2 2 1 1 1 1 2 2 Hình Tác động ức chế phát triển S.aureus MRSA cao với đĩa thạch có nồng độ cao dược liệu từ trái sang phải từ xuống 100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,2; 1,6; 0,8 0,4 mg/ml 1:S.aureus 2: MRSA 108 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 khơng có Kết đường kính vòng kháng khuẩn (mm) mẫu mức nồng độ C1, C2, C3 thể Bảng Hình cho thấy đường kính vòng vơ khuẩn mẫu cốm M2 (150 mg cao/đơn vị phân liều) cao đáng kể so với mẫu cốm M1 (100 mg cao/đơn vị phân liều) Trong đó, so sánh mẫu cốm M3 (200 mg cao/đơn vị phân liều) với mẫu cốm M2 thấy đường kính vòng vơ khuẩn có tăng khơng đáng kể Vì tỉ lệ cao 150 mg/đơn vị phân liều chọn để nghiên cứu Kết xây dựng công thức phương pháp bào chế viên nén ngậm Kết xác định tỉ lệ cao đơn vị phân liều Bảng Kết đường kính vòng vơ khuẩn (mm) mẫu cốm C1 C2 C3 M1 16,67 14,50 11,33 M2 18,00 16,33 13,17 M3 18,17 17,50 14,67 M4 (chứng) 0 Ở mẫu, nồng độ thấp thể hoạt tính kháng khuẩn nồng độ C3 Ở mức nồng độ C4, C5, vòng kháng khuẩn gần C1 C2 Nghiên cứu Y học C4 C3 4 C5 1m Hình Tác động kháng vi khuẩn S.aureus mẫu cốm với nồng độ cao giảm dần (C1 - C5) 1: mẫu cốm 1, 2: mẫu cốm 2, 3: mẫu cốm 3, 4: mẫu cốm (không chứa cao) độc lập q trình thiết kế tối ưu hóa Kết xây dựng công thức phương pháp công thức bào chế viên nén ngậm Thành phần cơng thức thăm dò (Bảng 3), công thức bào chế với cỡ lô 200 viên Kết sau: CT1: tạo khối dẻo, dễ xát cốm vị chưa ngon, cảm giác nhiều bột lưỡi ngậm CT2: thay tinh bột β-cyclodextrin, mục đích cải thiện vị khơng hiệu CT3: giảm lượng tinh bột, hỗn hợp nhão, khó xát cốm, vị chưa chấp nhận CT4: thêm tá dược hút, dễ xát cốm có cảm giác nhiều bột lưỡi ngậm CT5 CT6 thêm gôm vào thành phần công thức, hai công thức dễ xát cốm dập viên CT5 vị chưa tốt, cảm giác nhiều bột lưỡi, CT6 khó dập viên dính chày cối Từ công thức cho thấy tinh bột, tá dược hút gơm có ảnh hưởng đến việc xát hạt vị thuốc sử dụng Do đó, tỉ lệ tinh bột, tá dược hút gôm chọn làm thông số Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Bảng Thành phần cơng thức thăm dò Thành phần viên (mg) Cao dược liệu β-cyclodextrin Tinh bột biến tính Gơm Tá dược hút Aspartam Bột mùi chocola Aerosil Magnesi stearat Mannitol vđ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 150,0 200,0 3,0 75,0 3,9 5,6 570,0 150,0 300,0 3,0 75,0 3,9 5,6 570,0 150,0 100,0 3,0 75,0 3,9 5,6 570,0 150,0 100,0 2,0 3,0 75,0 3,9 5,6 570,0 150,0 200,0 40,0 3,0 75,0 3,9 5,6 570,0 150,0 50,0 40,0 2,0 3,0 75,0 3,9 5,6 570,0 Thiết kế tối ưu hóa cơng thức Thiết kế mơ hình thực nghiệm Mơ hình thực nghiệm 14 cơng thức với x1 x2 khảo sát mức; x3 hai mức Dữ liệu bào chế kiểm nghiệm Bảng dùng làm đầu vào cho phần mềm BC-Pharsoft để xác định mối liên quan nhân-quả tối ưu hóa thành phần cơng thức 109 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Pharsoft bao gồm thông số tối ưu thành phần công thức giá trị dự đốn tính chất sản phẩm trình bày Bảng Tối ưu hóa cơng thức Nhập liệu khai báo Biến độc lập: x1, x2, x3, Bảng Kết tối ưu hóa phần mềm BC - Pharsoft Biến phụ thuộc: y1, y2, y3 Điều kiện tối ưu hóa cho biến phụ thuộc y1: nhỏ tốt, y2: từ 20-30 (phút), y3: Bảng Dữ liệu bào chế kiểm nghiệm 14 công thức 10 11 12 13 14 x1 100 150 100 150 100 100 50 50 50 50 150 50 100 150 x2 39,2 39,2 28 28 16,8 28 16,8 39,2 28 28 16,8 16,8 39,2 16,8 x3 1 3 3 1 3 x1: lượng tinh bột (mg) x2: lượng gôm (mg) y1 0,276 0,260 0,322 0,310 0,385 0,319 0,412 0,242 0,356 0,362 0,332 0,398 0,284 0,335 y2 35,56 36,56 28,65 29,45 27,12 28,41 18,12 30,16 22,46 22,47 27,12 18,82 35,42 31,25 y3 0 0 1 1 1 y1: độ mài mòn (%), y2: thời gian rã (phút), x3: lượng tá dược hút (mg) y3: vị nhận = 1, không chấp nhận = 0) (chấp Kết luyện mạng Bảng Kết luyện mạng y1 y2 y3 R luyện 0,95 0,98 0,98 R thử 0,95 0,97 1,00 Thuật toán Backpropagation Backpropagation Backpropagation Kết R2 luyện R2 thử cho thấy có liên quan nhân thành phần cơng thức (X) với tính chất sản phẩm (Y) Khả dự đốn mơ hình tốt với R2 lớn 0,9 (Bảng 5) Thành phần cơng thức xi Giá trị tìm x1 50,00 x2 39,16 x3 2,00 Tính chất sản phẩm yi Giá trị dự đốn y1 0,162 y2 29,50 y3 0,995 Cơng thức tối ưu Thành phần viên (mg) 2000 viên (g) Cao dược liệu 150,00 300,00 Tinh bột biến tính 50,18 100,36 Gôm 39,16 78,36 Tá dược hút 2,00 4,00 Aspartam 3,00 6,00 Bột mùi chocola 75,00 150,00 Aerosil 3,90 7,80 Magnesi stearat 5,60 11,20 Mannitol vđ 570,00 vđ 1140,00 Kiểm chứng công thức tối ưu Thành phẩm từ công thức tối ưu điều chế lô, cỡ lô 2000 viên với điều kiện qui trình Sản phẩm kiểm nghiệm tương tự giai đoạn thiết kế, kết (Bảng 7) cho thấy tính chất sản phẩm lơ thực nghiệm khơng khác có ý nghĩa đạt yêu cầu đề Vậy công thức qui trình bào chế viên có tính lặp lại Bảng Kết thực nghiệm dự đốn Tính chất sản phẩm y1 y2 y3 KQ thực nghiệm Lô Lơ Lơ TB KQ dự đốn 0,15 25,2 0,16 25,8 0,16 25,2 0,157 25,40 0,162 29,50 0,995 Đánh giá tiêu thành phẩm Kết tối ưu hóa Kết Bảng cho thấy thành phẩm từ lô, cỡ lô 2000 viên đạt yêu cầu chất lượng Kết tối ưu hóa phần mềm BC Bảng Kết kiểm nghiệm lô thành phẩm từ công thức tối ưu cỡ lô 2000 viên Chỉ tiêu Mức chất lượng Cảm quan Viên nén ngậm hình tròn, màu nâu nhạt, hương chocola, vị ± 5% so với khối lượng trung bình Độ ĐĐKL 110 Lơ Kết Lô Lô Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Chỉ tiêu Mức chất lượng Độ rã Độ mài mòn Độ cứng Giới hạn nhiễm khuẩn 30-40 phút Không 0,3% 140-170 N -Tổng số vi khuẩn hiếu khí: ≤ 5.10 cfu/g (ml) -Tổng số Enterobacteria: ≤ 500 cfu/g (ml) -Tổng số nấm mốc men: ≤ 500 cfu/g (ml) - Khơng có Samonella 10 g (ml), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, S aureus 1g (ml) Định tính Thời gian lưu pic AG sắc ký đồ mẫu thử tương ứng với thời gian lưu sắc ký đồ AG chuẩn Hàm lượng acid glycyrhizic viên phải đạt từ Định lượng 0,112-0,136 mg BÀN LUẬN Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn đĩa thạch cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chủng vi khuẩn thử nghiệm MRSA S.aureus 6,25 mg/ml Đây nồng độ ức chế tối thiểu đưa vào nghiên cứu bào chế dạng rắn phân liều Hàm lượng cao chiết sử dụng điều chế viên nén đánh giá mức 100 mg, 150 mg 200 mg Hàm lượng mức 150 mg chọn để đưa vào viên nén có tác động ức chế vi khuẩn hàm lượng tương đối nhỏ, phối hợp tá dược để điều chế viên ngậm Công thức bào chế xây dựng dựa thay đổi thành phần tá dược nhằm đánh giá cảm giác người ngậm, khả tạo hạt có tính kết dính, che giấu mùi vị cao dược liệu khơng để lại cảm giác khó chịu ngậm Khảo sát công thức để xây dựng công thức Từ đó, tiến hành tối ưu hố công thức phần mềm thông minh Công thức tối ưu đạt mục tiêu đề thời gian rã nhanh, khơng mài mòn nhiều che giấu tốt vị cao dược liệu Hàm lượng cao viên nén khảo sát để có tác động ức chế S aureus MRSA Lô Đạt (27,3 phút) Đạt (0,157%) Đạt (165 N) Nghiên cứu Y học Kết Lô Đạt (25,8 phút) Đạt (0,137%) Đạt (158 N) Lô Đạt (26,5 phút) Đạt (0,161%) Đạt (163 N) Sẽ thực triển khai sản xuất Đúng Đúng Đúng Đạt (0,125 mg) Đạt (0,130 mg) Đạt (0,128 mg) định Thành phẩm đạt yêu cầu đề viên ngậm cảm quan, độ đồng khối lượng, độ cứng, độ mài mòn, định tính định lượng có tính kháng khuẩn in vitro chủng vi khuẩn S.aureus Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu chân thành cảm ơn ThS Phạm Thị Hóa cung cấp cao dược liệu để thực đề tài này; PGS.TS Đỗ Quang Dương hỗ trợ việc tối ưu hóa thành phần công thức phần mềm BC-PharSoft TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ mơn Vi sinh (2013) Giáo trình thực tập Vi sinh học Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, tr 39-43 Bộ Y tế (2005) Kiểm nghiệm dược phẩm NXB Y học Hà Nội, pp.131-137 Bộ Y tế (2019) Dược điển Việt Nam V NXB Y học Hà Nội, PL1.20, PL-6.5, PL-9.6, PL-9.7, PL-9.8, PL-9.9, PL-11.3, PL-11.6, PL13.6 He J, Chen L, Heber D, et al (2006) “Antibacterial compounds from Glycyrrhiza uralensis” Journal of Natural Products, 69:121124 Maiti B, Singh R, Kumar P, et al (2011) “Recent trends in herbal drugs: a review” International Journal of Drug Research and Technology, 1(1):17-25 Ngô Văn Thu, Trần Hùng (2011) Dược liệu học NXB Y học Hà Nội, 1: 205-211, 215-221, 227-231, 256, 424-425 Ren P, Sun G (2008) “HPLC determination of glycyrrhizic acid and glycyrrhetic acid in Fuzilizhong Pills” Asian Journal of Traditional Medicines, 3(3): 110-116 KẾT LUẬN Ngày nhận báo: 28/07/2019 Cơng thức qui trình bào chế viên ngậm nghiên cứu chứa cao dược liệu xác Ngày phản biện nhận xét báo: 20/08/2019 Ngày báo đăng: 14/09/2019 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 111 ... tiêu bào chế vi n nén ngậm chứa cao dược liệu đạt tiêu chuẩn đề có tác dụng kháng khuẩn Staphylococcus aureus MRSA in vitro Các vi khuẩn tồn khơng khí, da mũi Khi người bệnh vi m họng, vi khuẩn. .. chuyên luận vi n nén Dược điển Vi t Nam V(3) Các bước tiến hành bào chế vi n nén ngậm Với thành phần tá dược nêu trên, vi n thành phẩm bào chế qua bước: a/ Rây tinh bột biến tính, gơm, tá dược hút,... (khơng chứa cao) độc lập q trình thiết kế tối ưu hóa Kết xây dựng cơng thức phương pháp công thức bào chế vi n nén ngậm Thành phần cơng thức thăm dò (Bảng 3), công thức bào chế với cỡ lô 200 vi n