Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6687:2000 giới thiệu đến các bạn nội dung về thực phẩm từ sữa dùng cho trẻ nhỏ - xác định hàm lượng chất béo - phương pháp khối lượng của Rose – Gottlied (phương pháp chuẩn).
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 6687 : 2000 THỰC PHẨM TỪ SỮA DÙNG CHO TRẺ NHỎ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG CỦA ROSE – GOTTLIED (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Milk – based infant foods – Determination of fat content Rose – Gottlied gravimetric method (Reference method) Lời nói đầu TCVN 6687 : 2000 hồn tồn tương đương với ISO 8381 : 1987 TCVN 6687 : 2000 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn – Đo lường – Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trường ban hành Phạm vi lĩnh vực áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng chất béo thực phẩm từ sữa dạng lỏng, dạng cô đặc dạng khô, không chứa chứa nhỏ 5% (m/m) (tính theo chất khơ) tinh bột dextrin, rau, quả, thịt … (Các Malto-Dextrin không chứa dextrin có phân tử lượng cao thường có mặt thực phẩm dành cho trẻ nhỏ, MaltoDextrin có mặt với lượng lớn khơng cản trở việc chiết quy trình RG) Chú thích – Nếu sản phẩm khơng hòa tan hồn tồn amoniac có mặt lượng nhỏ tinh bột dextrin, miếng sản phẩm cứng, sản phẩm có chứa lượng đáng kể axit béo tự do, kết xác định thu thấp Trong trường hợp thế, nên sử dụng nguyên tắc Weibull-Berntrop (WB) Tiêu chuẩn trích dẫn TCVN 6400 : 1998 (ISO 707) Sữa sản phẩm sữa – Phương pháp lấy mẫu ISO 3889 Sữa sản phẩm sữa – Xác định hàm lượng chất béo – Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier Định nghĩa Hàm lượng chất béo thực phẩm từ sữa dùng cho trẻ nhỏ: Tất chất xác định phương pháp quy định tiêu chuẩn này, biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Chiết dung dịch etanol amoniac phần mẫu thử dạng lỏng, mẫu pha lỗng mẫu hòa tan dietyl ete xăng nhẹ, loại bỏ dung môi chưng cất cho bay xác định khối lượng chất chiết hòa tan xăng nhẹ (Điều thường gọi nguyên tắc Rose-Gottlieb) Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng tinh khiết phân tích xác định phương pháp không để lại lượng cặn đáng kể Chỉ sử dụng nước cất nước có độ tinh khiết tương đương Để kiểm tra chất lượng thuốc thử, tiến hành thử mẫu trắng theo quy định 8.3 Dùng bình thu nhận chất béo rỗng chuẩn bị 8.4 để kiểm tra khối lượng (xem 10.1) Thuốc thử không để lại lượng cặn 0,5mg Nếu lượng cặn thuốc thử mẫu trắng lớn 0,5 mg, xác định lượng cặn dung môi cách riêng rẽ cách chưng cất 100 ml dietyl ete xăng nhẹ tương ứng Sử dụng bình kiểm tra khối lượng để thu khối lượng thực cặn, mà không vượt 0,5 mg Thay thuốc thử chưng cất lại dung môi, chúng không thỏa mãn yêu cầu 5.1 Dung dịch amoniac, chứa khoảng 25% NH (m/m), ρ20 ≈ 910 g/l Chú thích – Nếu khơng có sẵn dung dịch amoniac nồng độ sử dụng dung dịch có nồng độ cao biết (xem 8.5.2) 5.2 Etanol, etanol bị metanol làm biến tính, có độ tinh khiết tối thiểu 94% (V/V) (Xem 10.5) 5.3 Dung dịch phẩm đỏ Congo Hòa tan g đỏ Congo nước pha lỗng đến 100ml Chú thích – Việc sử dụng dung dịch để phân biệt rõ ranh giới dung môi lớp nước không bắt buộc (xem 8.5.4) Có thể sử dụng dung dịch màu dạng lỏng khác với điều kiện chúng không ảnh hưởng đến kết xác định 5.4 Ete dietyl, không chứa peroxit (xem 10.3) không chứa chứa khơng q mg/kg chất chống oxi hóa phù hợp yêu cầu thử mẫu trắng (xem đoạn đầu điều 5, 10.1 10.4) 5.5 Xăng nhẹ, có nhiệt độ sơi khoảng từ 30 0C đến 600C 5.6 Dung môi hỗn hợp, chuẩn bị trước sử dụng cách trộn thể tích ete dietyl (5.4) xăng nhẹ (5.5) Thiết bị, dụng cụ Cảnh báo – Vì việc xác định cần phải sử dụng dung môi bay dễ cháy, nên thiết bị điện dùng phải tuân theo quy định an toàn sử dụng dung môi Sử dụng thiết bị thí nghiệm thơng thường đặc biệt sau: 6.1 Cân phân tích 6.2 Máy li tâm, có bình chiết chất béo có ống (6.6) quay từ 500 vòng phút đến 600 vòng phút để tạo trường hấp dẫn khoảng 80 g đến 90 g miệng bình ống Chú thích – Nên sử dụng máy li tâm không bắt buộc (xem 8.5.7) 6.3 Thiết bị chưng cất làm bay hơi, để làm bay dung mơi etanol khỏi bình thu nhận chất béo từ cốc đĩa (xem 8.5.10 8.5.14) nhiệt độ không vượt 1000C 6.4 Tủ sấy, đốt nóng điện, có cửa thơng gió mở hồn tồn, trì nhiệt độ 1020C ± 20C suốt khoang sấy Tủ gắn với nhiệt kế thích hợp 6.5 Nồi cách thủy, trì nhiệt độ sau: 400C đến 600C (xem 8.1.1); 300C đến 400C (xem 8.1.2); 400C đến 500C (xem 8.5.1); 600C đến 700C (xem 8.5.3) 6.6 Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier, quy định ISO 3889 Chú thích – Cũng dùng ống chiết chất béo (hoặc bình), có si phơng nối với chai rửa, quy trình có khác quy định phần phụ lục Các bình (hoặc ống, xem thích) phải đậy nút bần chất lượng tốt, đậy nắp làm vật liệu khác (thí dụ cao su silicon polytetrafluoroetylen) để không bị ảnh hưởng thuốc thử sử dụng Nút bần phải rửa ete dietyl (5.4), giữ 15 phút nhiệt độ 600C lớn (không để sôi) sau làm lạnh nước cho chúng bão hòa nước sử dụng 6.7 Giá để giữ bình (hoặc ống) chiết chất béo (xem 6.6) 6.8 Chai rửa, thích hợp để dùng với dung mơi hỗn hợp (5.6) Khơng dùng chai rửa chất dẻo 6.9 Bình thu nhận chất béo, thí dụ bình đun sơi (đáy phẳng), dung tích từ 125 ml đến 250 ml, bình nón dung tích 250 ml, đĩa kim loại Nếu sử dụng đĩa kim loại, tốt đĩa thép khơng gỉ, đáy phẳng, có rãnh rót, đường kính từ 80 mm đến 100 mm có chiều cao khoảng 50 mm 6.10 Chất trợ sơi, không chứa chất béo, sứ không xốp cacbua silicon bi thủy tinh (không bắt buộc trường hợp dùng đĩa kim loại) 6.11 Ống đong, dung tích ml 25 ml 6.12 Pipet chia độ, dung tích 10 ml 6.13 Bộ kẹp, kim loại thích hợp để giữ bình, cốc đĩa Lấy mẫu Xem TCVN 6400:1998 (ISO 707) Bảo quản tất mẫu thí nghiệm dạng lỏng, sánh nhão nhiệt độ từ 0C đến 40C kể từ lấy mẫu bắt đầu quy trình thử Trong trường hợp mẫu đựng bao bì kín để nguyên nhiệt độ 20 0C Cách tiến hành Chú thích – Quy trình khác có sử dụng ống chiết chất béo có si phơng nối với chai rửa (xem thích 6.6) mô tả phụ lục 8.1 Chuẩn bị mẫu thử 8.1.1 Sản phẩm dạng lỏng Lắc đảo chiều hộp chứa Mở nắp hộp, rót từ từ sản phẩm sang hộp chứa thứ hai (có nắp đậy kín) trộn cách chuyển qua chuyển lại sản phẩm, tránh để chất béo thành phần khác mẫu sót lại thành đáy hộp thứ Cuối cùng, chuyển hết sản phẩm sang hộp chứa thứ hai Đậy nắp hộp Nếu cần, để hộp đậy kín vào nồi cách thủy (6.5) nhiệt độ từ 40 0C đến 600C Cứ 15 phút lại lấy lắc mạnh Sau h, lấy hộp chứa ra, làm khơ mặt ngồi khăn khơ để nguội đến nhiệt độ phòng, Mở hẳn nắp trộn kỹ lượng chứa thìa dao trộn (Nếu chất béo tách hẳn, khơng thử mẫu) Chuyển hết sản phẩm sang hộp chứa thứ hai Đậy nắp hộp 8.1.2 Sản phẩm dạng sánh nhão Mở nắp hộp chứa trộn kỹ lượng chứa bên dao trộn Nếu có thể, sử dụng máy quay để trộn lên theo cách cho lớp với phần góc hộp chứa trộn với Tránh để chất béo thành phần khác mẫu sót lại thành đáy hộp chứa Chuyển hết sản phẩm sang hộp chứa thứ hai (có nắp đậy kín) Đậy nắp hộp Nếu cần, để hộp chứa đậy kín vào nồi cách thủy (6.5) nhiệt độ từ 30 0C đến 400C Lấy hộp chứa ra, dùng khăn khơ lau mặt ngồi mở nắp hộp Vét tất sản phẩm phía hộp chứa cho sang đĩa đủ rộng để trộn kỹ thu sản phẩm đồng Chuyển hết sản phẩm sang hộp chứa thứ hai Đậy nắp hộp 8.1.3 Sản phẩm dạng khô Trộn kỹ cách quy đảo chiều hộp chứa Nếu cần, chuyển mẫu thí nghiệm sang hộp chứa kín thích hợp có dung tích đủ rộng để thực thao tác 8.2 Phần mẫu thử Trộn mẫu thử (8.1) cách khuấy nhẹ (trong trường hợp sản phẩm dạng sánh, nhão dạng khô) cách đảo chiều hộp chứa nhẹ nhàng ba bốn lần (trường hợp sản phẩm dạng lỏng) cân từ 1,5 g đến 10 g mẫu thử, xác đến mg, tương ứng với 1,0 g đến 1,5 g chất khô cho vào bình chiết chất béo (6.6) Phần mẫu thử phải chuyển hết sang bầu thấp (bầu nhỏ) bình chiết (6.6) 8.3 Thử mẫu trắng Tiến hành thử mẫu trắng đồng thời với phép xác định, sử dụng trình tự loại thuốc thử, thay phần mẫu thử pha loãng (xem 8.5.1) 10 ml nước (xem 10.2) 8.4 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Sấy khơ bình (6.9) vài hạt trợ sôi (6.10) tủ sấy (6.4) nhiệt độ 102 0C ± 20C vòng h (Xem thích 1) Để bình nguội (bảo vệ tránh bụi) đến nhiệt độ phòng cân (bình thủy tinh để 1h, đĩa kim loại 30 phút) (Xem thích 2) Dùng kẹp (6.13) (đặc biệt tránh thay đổi nhiệt độ), đặt bình lên cân cân xác đến 0,1 mg Chú thích 1) Chất trợ sơi để giúp cho sơi nhẹ suốt q trình loại bỏ dung môi, đặc biệt trường hợp bình thủy tinh; khơng bắt buộc phải dùng trường hợp đĩa kim loại 2) Khơng nên đặt bình tủ hút ẩm, tránh chưa đủ nguội thời gian làm nguội bị kéo dài 8.5 Xác định 8.5.1 Nếu cần, thêm nước nhiệt độ 650C ± 50C vào phần mẫu thử để có tổng thể tích từ 10 ml đến 11 ml để vét phần mẫu thử sang bầu nhỏ bình Lắc nhẹ nồi cách thủy (6.5) có nước ấm, kiểm sốt nhiệt độ từ 40 0C đến 500C sản phẩm đồng Làm nguội dòng nước chảy 8.5.2 Cho thêm từ 1,5 ml đến ml dung dịch amoniac (5.1), thể tích tương đương dung dịch amonic đậm đặc (xem thích 5.1) trộn kỹ với phần mẫu thử đồng bầu nhỏ bình Sau thêm amoniac tiến hành xác định 8.5.3 Làm nóng bình nồi cách thủy (6.5) từ 15 phút đến 20 phút nhiệt độ 65 0C ± 50C, lắc bình (trong trường hợp sản phẩm dạng lỏng khơng bắt buộc) sau để nguội đến nhiệt độ phòng thí nghiệm 8.5.4 Thêm 10 ml etanol (5.2), trộn kỹ cách nhẹ nhàng, cách cho lượng chứa bình chạy qua chạy lại hai bầu, khơng để chất lỏng chạm đến sát cổ bình Nếu cần, thêm giọt dung dịch phẩm đỏ côngo (5.3) 8.5.5 Thêm 25 ml ete dietyl (5.4), đậy bình nút bần bão hòa nước đậy nút làm chất liệu khác (xem 6.6) làm ướt nước, lắc mạnh bình vòng phút không lắc mạnh (để tránh tạo nhũ) giữ tư nằm ngang bầu nhỏ hướng lên trên, cho chất lỏng bầu lớn chảy sang bầu nhỏ cách định kỳ Nếu cần, làm mát bình dòng nước chảy, sau mở nút cách cẩn thận, dùng chai rửa (6.8) để tráng nút cổ bình dung mơi hỗn hợp (5.6) sau cho nước tráng chảy vào bình bình thu nhận chất béo (8.4) 8.5.6 Thêm 25 ml xăng nhẹ (5.5), đậy bình nút bần nút khác làm ướt lại nước (ngâm nước) lắc bình nhẹ nhàng vòng 30 giây mơ tả 8.5.5 8.5.7 Li tâm bình đậy nút từ phút đến phút tốc độ quay từ 500 vòng/phút đến 600 vòng/phút (xem 6.2) Nếu khơng có máy ly tâm, đặt bình giá đỡ (6.7) 30 phút thấy có lớp bề mặt rõ rệt phân biệt rõ với lớp chất lỏng Nếu cần, làm mát bình dòng nước chảy 8.5.8 Cẩn thận tháo bỏ nút, tráng nút tráng phía cổ bình dung mơi hỗn hợp cho nước rửa chảy vào bình bình thu nhận chất béo Nếu mặt lớp phân cách thấp chỗ thắt cổ bình, nâng cao lớp phân cách lên cách cho thêm nước nhẹ theo thành bình (xem hình 1) để dung mơi kết tủa dễ dàng Chú thích – Trong hình hình mơ tả ba loại bình quy định ISO 3889 chọn, điều khơng có nghĩa ưu tiên loại khác Hình – Trước gạn Hình – Sau gạn (8.5.8, 8.5.12, 8.5.13) (8.5.9, 8.5.12, 8.5.13) 8.5.9 Giữ bình chiết bầu nhỏ, cẩn thận gạn nhiều tốt lớp bề mặt vào bình nhận chất béo (8.4) có chứa chất trợ sơi (6.10) trường hợp bình thủy tinh (còn đĩa kim loại tùy ý) tránh khơng gạn tí chất lỏng vào bình (xem hình 2) 8.5.10 Tráng phía ngồi cổ bình chiết dung mơi hỗn hợp, thu lấy nước tráng vào bình nhận chất béo ý không để dung môi hỗn hợp tràn thành ngồi bình chiết Nếu cần, loại bỏ dung môi phần dung môi khỏi bình nhận cách chưng cất làm bay mô tả 8.5.14 8.5.11 Thêm ml etanol (5.2) vào lượng chất chứa bình chiết, dùng etanol để tráng thành cổ bình trộn mô tả 8.5.4 8.5.12 Thực chiết lần hai (không cho thêm etanol) cách lặp lại thao tác mô tả 8.5.5 đến hết 8.5.10, dùng 15 ml ete dietyl (5.4) 15 ml xăng nhẹ (5.5); dùng ete để tráng thành cổ bình chiết Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình (xem hình 1) để gạn hết dung mơi nhiều tốt (xem hình 2) 8.5.13 Thực chiết lần ba (không cho thêm etanol), cách lặp lại thao tác mô tả 8.5.5 đến hết 8.5.9, dùng 15 ml ete dietyl (5.4) 15 ml xăng nhẹ (5.5); dùng ete để tráng thành cổ bình chiết Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách cao q cổ bình (xem hình 1) để gạn hết dung mơi nhiều tốt (xem hình 2) Chú thích – Bỏ qua việc chiết lần ba sản phẩm có hàm lượng chất béo nhỏ 3% (m/m) tính theo hàm lượng chất khơ 8.5.14 Loại bỏ dung môi (kể etanol) nhiều tốt khỏi bình cách chưng cất, loại khỏi cốc hay đĩa cách cho bay (xem 6.3), tráng thành cổ bình dung môi hỗn hợp (5.6) trước bắt đầu chưng cất 8.5.15 Sấy bình thu nhận chất béo (đặc bình nằm nghiêng để dung mơi được) h tủ sấy (6.4) nhiệt độ 1020C ± 20C Lấy bình thu nhận chất béo khỏi tủ, để nguội (khơng để bình hút ẩm, tránh bụi) tới nhiệt độ phòng cân (đối với bình thủy tinh tối thiểu h, đĩa kim loại tối thiểu 0,5 h) cân xác đến 0,1mg Khơng lau bình trước lúc cân Dùng kẹp (6.13) để đặt bình lên cân (đặc biệt, tránh thay đổi nhiệt độ) 8.5.16 Lặp lại thao tác 8.5.15 khối lượng bình thu nhận chất béo hai lần cân liên tiếp chênh lệch khoảng 0,5 mg Ghi khối lượng tối thiểu khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết 8.5.17 Cho thêm 25 ml xăng nhẹ vào bình thu nhận chất béo để kiểm tra xem chất béo có tan hết hay khơng Đun nóng nhẹ khuấy dung mơi tan hết chất béo Nếu chất chiết tan hết xăng nhẹ, hàm lượng chất béo hiệu số khối lượng cuối bình chiết (xem 8.5.16) khối lượng ban đầu bình (xem 8.4) 8.5.18 Nếu chất chiết không tan hết xăng nhẹ, nghi ngờ mục đích quy định trường hợp có tranh cãi, cần chiết hết chất béo khỏi bình cách rửa liên tục với xăng nhẹ ấm Chú thích – Trong trường hợp chung trường hợp cụ thể, luật quốc gia bắt buộc quy định cách chiết Để cho vết chất không tan lắng hết cẩn thận gạn bỏ xăng nhẹ mà không làm chất không tan Lặp lại thao tác ba lần nữa, dùng xăng nhẹ để tráng phía cổ bình Cuối cùng, tráng phía bình dung môi hỗn hợp cho dung môi không tràn ngồi bình Loại bỏ xăng nhẹ khỏi bình cách đun nóng bình 1h tủ sấy (6.4) 1020C ± 20C, để nguội cân theo mô tả 8.5.15 8.5.16 Khối lượng chất béo hiệu số khối lượng xác định 8.5.16 khối lượng cuối Biểu thị kết 9.1 Phương pháp tính cơng thức Hàm lượng chất béo, biểu thị phần trăm khối lượng, theo công thức: (m1 m2 ) (m3 m ) x 100 m0 Trong m0 khối lượng phần mẫu thử (8.2), tính gam; m1 khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết 8.5.16, tính gam; m2 khối lượng bình thu nhận chất béo (xem 8.4), hoặc, trường hợp chất rắn khơng hòa tan khối lượng bình thu nhận chất béo cặn khơng tan xác định 8.5.18, tính gam; m3 khối lượng bình thu nhận chất béo sử dụng thử mẫu trắng (8.3) chất chiết xác định 8.5.16, tính gam; m4 khối lượng bình thu nhận chất béo (xem 8.4) sử dụng thử mẫu trắng (8.3), trường hợp chất rắn khơng hòa tan khối lượng bình nhận chất béo cặn khơng tan xác định 8.5.18, tính gam Ghi kết xác đến 0,01% (m/m) 9.2 Độ xác Chú thích – Giá trị độ lặp lại độ tái lập biểu thị mức xác suất 95% lấy từ kết thử nghiệm liên phòng thí nghiệm phù hợp với TCVN 4550 – 88 (ISO 5725) Độ xác phương pháp thử - Xác định độ lặp lại độ tái lập phép thử liên phòng thí nghiệm 9.2.1 Độ lặp lại Chênh lệch hai kết thử riêng rẽ nguyên liệu thử người phân tích khoảng thời gian ngắn không vượt giá trị sau đây: - Đối với sản phẩm có hàm lượng chất béo lớn 5% (m/m): 0,2g chất béo 100 g sản phẩm; - Đối với sản phẩm có hàm lượng chất béo nhỏ 5% (m/m); 0,1 g chất béo 100g sản phẩm; - Đối với sản phẩm dạng lỏng: 0,05 g chất béo 100 g sản phẩm; 9.2.2 Độ tái lập Chênh lệch hai kết thử riêng rẽ độc lập nguyên liệu thử hai người phân tích thực phòng thí nghiệm khác nhau, khơng vượt giá trị sau đây: - Đối với sản phẩm có hàm lượng chất béo lớn 5% (m/m): 0,4g chất béo 100 g sản phẩm; - Đối với sản phẩm có hàm lượng chất béo nhỏ 5% (m/m); 0,2 g chất béo 100g sản phẩm; - Đối với sản phẩm dạng lỏng: 0,1 g chất béo 100 g sản phẩm; 10 Các ý cách tiến hành 10.1 Thử mẫu trắng để kiểm tra thuốc thử Trong phép thử mẫu trắng này, sử dụng bình kiểm tra khối lượng để có thay đổi điều kiện khơng khí phòng cân ảnh hưởng nhiệt độ bình thu nhận chất béo khơng đánh giá sai có mặt hay khơng có mặt chất khơng bay có chất chiết thuốc thử Bình sử dụng làm bình đối trọng trường hợp cân có hai đĩa Mặt khác, chênh lệch biểu kiến (m3 – m4 công thức 9.1) bình kiểm tra phải xem xét kiểm tra khối lượng bình thu nhận chất béo sử dụng thử mẫu trắng Do thay đổi khối lượng biểu kiến bình thu nhận chất béo, hiệu chỉnh cho khối lượng biểu kiến bình kiểm tra, khơng vượt q 0,5 mg Rất dung môi chứa chất bay bị giữ lại nhiều chất béo Nếu có mặt chất đó, tiến hành thử mẫu trắng tất thuốc thử dung môi sử dụng bình chất béo với khoảng g butterfat Nếu cần, chưng cất dung mơi có mặt 1g butterfat khan 100 ml dung môi Chỉ nên sử dụng dung môi chưng cất 10.2 Tiến hành thử mẫu trắng đồng thời với phép xác định Giá trị thu phép thử mẫu trắng tiến hành đồng thời với phép xác định đưa khối lượng biểu kiến chất chiết từ phần mẫu thử (m – m2) dùng để hiệu chỉnh có mặt chất khơng bay thuốc thử dùng để hiệu chỉnh thay đổi điều kiện khơng khí phòng cân chênh lệch nhiệt độ bình thu nhận chất béo nhiệt độ phòng cân hai lần cân (8.4, 8.5.16 8.5.18) Trong điều kiện thích hợp (chỉ số trắng thuốc thử thấp, nhiệt độ phòng cân cân thời gian làm đủ nguội bình thu nhận chất béo), giá trị thường nhỏ 0,5mg sau bỏ qua phần tính kết trường hợp xác định thông thường Cũng thường gặp phải giá trị cao hơn, lên đến 2,5 mg (dương âm) Sau chỉnh lại giá trị mẫu trắng, kết xác Khi thực hiệu chỉnh với giá trị lớn 2,5 mg phải nêu thực tế báo cáo kết (xem điều 11) Nếu giá trị thu phép thử mẫu trắng thường vượt 0,5 mg, phải kiểm tra lại thuốc thử trước chưa kiểm tra) thay làm lại (xem đoạn đầu điều 10.1) 10.3 Thử peroxit ete dietyl Để thử perxit, thêm ml dung dịch kali iodua 100 g/l chuẩn bị vào 10 ml ete dietyl đựng ống đong nhỏ có nắp thủy tinh trước tráng ete Lắc ống đong sau để n phút Phải khơng thấy màu vàng lớp Có thể sử dụng phương pháp thử nghiệm thích hợp khác để kiểm tra peroxit Để đảm bảo ete dietyl khơng chứa peroxit, xử lý ete ba ngày trước sử dụng sau: Cắt kẽm thành dải để chúng chạm đến nửa chai đựng ete, dùng khoảng 80 cm2 kẽm cho lít ete Trước sử dụng, nhúng tồn dải kẽm phút dung dịch chứa 10 g đồng (II) sunfat ngậm phân tử nước (CuSO 4.5H2O) ml axit sunfuric đậm đặc lít [98%(m/m)] Rửa kỹ dải nhẹ nhàng nước, đặt dải mạ đồng ướt vào chai đựng ete để chúng chai Có thể dùng phương pháp khác với điều kiện chúng không làm ảnh hưởng đến kết xác định 10.4 Ete diety có chứa chất chống oxi hóa Ở số nước có bán sẵn ete dietyl chứa khoảng mg chất chống oxi hóa kilogam, đặc biệt dùng để xác định chất béo Hàm lượng khơng dùng cho mục đích đối chiếu Ở số nước khác, có bán sẵn ete dietyl chứa hàm lượng chất chống oxi hóa cao hơn, thí dụ lên đến 7mg/kg Những ete nên sử dụng xác định thông thường phải tiến hành thử mẫu trắng đồng thời với phép xác định, để điều chỉnh sai số hệ thống lượng dư chất chống oxi hóa gây Đối với mục đích đối chiếu, loại ete phải chưng cất trước sử dụng 10.5 Etanol Có thể sử dụng etanol biến tính metanol với điều kiện etanol khơng làm ảnh hưởng đến kết việc xác định 11 Báo cáo kết Báo cáo kết phải rõ phương pháp sử dụng kết thu Cũng phải liên quan đến tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết Phải ghi lại số trắng (m – m4, xem 9.1) vượt 2,5 mg Báo cáo kết bao gồm tất thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử PHỤ LỤC QUY TRÌNH KHÁC DÙNG ỐNG CHIẾT CHẤT BÉO CĨ SI PHƠNG HOẶC CĨ NỐI VỚI CHAI RỬA (XEM THÍ DỤ Ở HÌNH 3) (phụ lục phần tiêu chuẩn) A.0 Giới thiệu Nếu sử dụng ống chiết chất béo có si phơng có nối với chai rửa (xem thích 6.6), tiến hành theo quy định phụ lục A.1 Cách tiến hành A.1.1 Chuẩn bị mẫu thử Xem 8.1 A.1.2 Phần mẫu thử Tiến hành theo quy định 8.2 sử dụng ống chiết chất béo (xem 6.6) Nên chuyển hết phần mẫu thử sang đáy ống chiết A.1.3 Thử mẫu trắng Xem 8.3 10.2 A.1.4 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Xem 8.4 A.1.5 Xác định A.1.5.1 Nếu cần, thêm nước nhiệt độ 650C ± 50C vào phần mẫu thử để thu tổng thể tích từ 10 ml đến 11 ml để rửa phần mẫu thử đáy ống Lắc nhẹ ống với nước ấm nồi cách thủy (6.5) nhiệt độ từ 40 0C đến 500C sản phẩm tan hết Làm nguội dòng nước chảy A.1.5.2 Thêm từ 1,5ml đến ml dung dịch amoniac (5.1), thể tích tương ứng dung dịch amoniac đậm đặc (xem thích 5.1), lắc kỹ với phần mẫu thử xử lý trước đáy ống Sau thêm amoniac, tiến hành xác định A.1.5.3 Làm nóng ống nhiệt độ 650C ± 50C nồi cách thủy (6.5) từ 15 phút đến 20 phút đồng thời lắc định kỳ (trường hợp sản phẩm dạng lỏng khơng bắt buộc) để nguội đến nhiệt độ phòng thí nghiệm A.1.5.4 Thêm 10 ml etanol (5.2) lắc kỹ cách nhẹ nhàng đáy ống Tốt thêm giọt dung dịch phẩm đỏ Congo (5.3) A.1.5.5 Thêm 25 ml ete dietyl (5.4), đậy nắp ống nút bần bão hòa nước (xem 6.6) nắp làm chất liệu khác làm ướt nước (xem 6.6) lắc mạnh ống, không mạnh (để tránh tạo nhũ) cách đảo chiều khoảng phút Nếu cần, làm mát ống dòng nước chảy, sau cẩn thận tháo bỏ nút, dùng chai rửa (6.8) tráng nút cổ ống dung môi hỗn hợp (5.6) cho nước rửa chảy vào ống A.1.5.6 Thêm 25 ml xăng nhẹ (5.5), đậy ống nút bần nút khác thấm lại nước (bằng cách ngâm vào nước) lắc nhẹ ống 30 giây mô tả A.1.5.5 A.1.5.7 Li tâm ống đậy nút từ phút đến phút tốc độ quay từ 500 vòng/phút đến 600 vòng/phút (xem 6.2) khơng có máy li tâm, đặt ống giá đỡ (6.7) 30 phút thấy rõ lớp lên bề mặt phân biệt rõ với lớp chất lỏng Nếu cần, làm mát ống dòng nước chảy A.1.5.8 Cẩn thận tháo bỏ nút, tráng nút phía ống dung môi hỗn hợp cho nước tráng chảy vào ống A.1.5.9 Lắp khớp nối si phông nối với chai rửa vào ống đẩy ống nối bên khoảng mm cao mặt tiếp xúc lớp Ống nối phía bên phải song song với trục ống chiết Cẩn thận gạn nhiều tốt lớp bề mặt ống vào bình nhận chất béo (8.4) có chứa chất trợ sơi (6.10) trường hợp bình (còn đĩa kim loại tùy ý) không để lớp chất lỏng lẫn vào Tráng phía ngồi khớp nối dung mơi hỗn hợp, thu lấy nước rửa vào bình thu nhận chất béo A.1.5.10 Tháo lỏng khớp nối khỏi cổ ống, nâng nhẹ ống nối tráng phần thấp ống nối bên dung mơi hỗn hợp Hạ thấp chèn lại ống nối chuyển nước rửa vào bình thu nhận chất béo Tráng rửa khớp nối dung mơi hỗn hợp, cho nước rửa vào bình nhận chất béo Tốt loại bỏ dung môi phần dung môi khỏi bình nhận cách chưng cất làm bay 8.5.14 A.1.5.11 Tháo lại khới nối khỏi cổ ống, nâng nhẹ ống nối thêm ml etanol vào lượng chứa ống, dùng etanol để tráng thành bình khớp nối lắc mơ tả A.1.5.4 A.1.5.12 Thực chiết lần hai (không thêm etanol) cách lặp lại thao tác mô tả A.1.5.5 đến hết A.1.5.10, dùng 15 ml ete dietyl (5.4) 15 ml xăng nhẹ (5.5) Dùng ete để tráng thành khớp nối suốt trình tháo khớp nối khỏi ống sau lần chiết lần trước A.1.5.13 Thực chiết lần ba (không thêm etanol), cách lặp lại thao tác mô tả A.1.5.5 đến A.1.5.10, dùng 15 ml ete dietyl 15 ml xăng nhẹ tráng thành khớp nối mô tả A.1.5.12 Chú thích – Lần chiết ba nên bỏ qua sản phẩm có hàm lượng béo nhỏ 5% (m/m) tính theo hàm lượng chất khơ A.1.5.14 Tiến hành mơ tả 8.5.14 đến 8.5.18 Kích thước tính milimet a) Nối với si phơng b) Nối với chai rửa Hình – Các thí dụ ống chiết ... (phụ lục phần tiêu chuẩn) A.0 Giới thiệu Nếu sử dụng ống chiết chất béo có si phơng có nối với chai rửa (xem thích 6.6), tiến hành theo quy định phụ lục A.1 Cách tiến hành A.1.1 Chuẩn bị mẫu thử... phải rõ phương pháp sử dụng kết thu Cũng phải liên quan đến tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết Phải ghi lại số trắng... khác có sử dụng ống chiết chất béo có si phơng nối với chai rửa (xem thích 6.6) mơ tả phụ lục 8.1 Chuẩn bị mẫu thử 8.1.1 Sản phẩm dạng lỏng Lắc đảo chiều hộp chứa Mở nắp hộp, rót từ từ sản phẩm