Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9519-1:2012 - EN 1988-1:1998 trình bày nội dung về thực phẩm - xác định Sulfit- phần 1: phương pháp Monier-Williams đã được tối ưu hóa. Mời các bạn tham khảo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9519-1:2012 EN 1988-1:1998 THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH SULFIT- PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP MONIER-WILLIAMS ĐÃ ĐƯỢC TỐI ƯU HÓA Foodstuffs - Determination of sulfite - Part 1:Optimized Monier - Williams method Lời nói đầu TCVN 9519-1:2012 hoàn toàn tương đương với EN 1988-1:1998; TCVN 9519-1:2012 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Lời giới thiệu Sulfit dùng để bảo quản thực phẩm Để giảm thiểu ảnh hưởng không tốt đến sức khỏe, nhiều quốc gia quy định việc sử dụng sulfit thực phẩm Do đó, cần thiết phải xây dựng số phương pháp phân tích để phát có mặt xác định hàm lượng sulfit loại thực phẩm khác THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH SULFIT - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP MONIER-WILLIAMS ĐÃ ĐƯỢC TỐI ƯU HÓA Foodstuffs - Determination of sulfite - Part 1:Optimized Monier - Williams method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp chưng cất để xác định hàm lượng sulfit, biểu thị lưu huỳnh dioxit (SO2) thực phẩm có chứa hàm lượng sulfit 10 mg/kg Phương pháp áp dụng có mặt hợp chất lưu huỳnh bay khác Tiêu chuẩn không áp dụng bắp cải, tỏi khô, hành khô, gừng, tỏi tây protein đậu tương1) Tiêu chuẩn cho kết dương tính giả protein đậu tương Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Xác định sulfit tự với phần sulfit liên kết sinh (như sản phẩm bổ sung carbonyl) thực phẩm Phần mẫu thử gia nhiệt với dung dịch axit clohydric đối lưu để chuyển sulfit thành lưu huỳnh dioxit Dòng nitơ đưa vào bề mặt dung dịch đối lưu để đẩy lưu huỳnh dioxit qua sinh hàn làm lạnh nước có bầu gắn vào sinh hàn, để vào dung dịch hydro peroxit, lưu huỳnh dioxit oxi hóa thành axit sulfuric Axit sulfuric tạo thành chuẩn độ dung dịch natri hydroxit chuẩn Hàm lượng sulfit liên quan trực tiếp đến axit sulfuric tạo thành, xem [1], [2] Thuốc thử 1) Việc phân tích protein đậu tương cho kết dương tính giả dải 20 mg/kg đến 30 mg/kg, biểu thị lưu huỳnh dioxit Vì vậy, phân tích sản phẩm chứa protein đậu tương cho kết cao thực tế Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích sử dụng nước loại quy định TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có quy định khác 4.1 Axit clohydric, nồng độ c(HCl) = mol/l Đối với phép phân tích, chuẩn bị 90 ml dung dịch cách cho cẩn thận 30 ml axit clohydric đậm đặc (36 %) vào 60 ml nước trộn Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng 4.2 Dung dịch chuẩn natri hydroxit, c(NaOH) = 0,010 mol/l 4.3 Chất thị đỏ metyl Hòa tan 250 mg đỏ metyl 100 ml etanol 4.4 Dung dịch hydro peroxit, (H2O2) = % thể tích Ngay trước sử dụng, thêm giọt chất thị đỏ metyl chuẩn độ dung dịch chuẩn natri hyđroxit (4.2) đến điểm kết thúc màu vàng Nếu thêm điểm kết thúc chuẩn bị lại 4.5 Etanol rượu metyl hóa 4.6 Hỗn hợp etanol-nước, etanol = % thể tích 4.7 Nitơ Nitơ có độ tinh khiết cao, sử dụng với điều chỉnh để trì tốc độ dòng 200 ml/min Để bảo đảm khí nitơ khơng chứa oxy, sử dụng chất hấp phụ dùng phân tích sắc kí khí Cách khác, dùng dung dịch khử oxy, ví dụ sử dụng kiềm 1,2,3 trihydroxibenzen (pyrogallol), chai rửa khí Chuẩn bị chai rửa khí sau: cho 4,5 g 1,2,3 trihydroxibenzen vào chai rửa khí Làm chai rửa khí nitơ đến Chuẩn bị dung dịch kali hydroxit cách cho 65 g kali hydroxit vào 85 ml nước (Chú ý: có phản ứng sinh nhiệt) Cho dung dịch kali hydroxit vào chai rửa khí trì mơi trường khí nitơ chai rửa khí Thiết bị, dụng cụ 5.1 Thiết bị chưng cất Lắp thiết bị 2) (xem Hình 1) với phận sau - Đầu vào điều chỉnh (1) có ống nối bầu cao su để cấp áp lực dung dịch Không nên dùng phễu nhỏ giọt cân áp suất phần ngưng tụ chứa lưu huỳnh dioxit đọng phễu tay cầm - Phễu nhỏ giọt hình trụ (2) dung tích 100 ml - Bình cầu ba cổ đáy tròn (3), dung tích lít - Ống dẫn khí (4) có chiều dài đủ để đưa nitơ vào, cách đáy bình cầu khoảng 25 mm - Sinh hàn bầu (5), dài 300 mm - Bầu (6) thủy tinh, kích thước Hình - Bình (7), đường kính khoảng 25 mm dài khoảng 180 mm CHÚ THÍCH: Nếu áp suất ngược giữ thấp đến mức có thể, tránh thất lưu huỳnh dioxit qua kẽ hở Bôi lớp mỡ mỏng lên bề mặt tiếp giáp tất khớp nối, trừ khớp nối phễu nhỏ giọt hình trụ bình cầu Các khớp giữ chặt với giúp cho việc đảm bảo kín hồn tồn q trình phân tích 2) Việc mơ tả thiết bị chưng cất nêu Tài liệu tham khảo [1], Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn Tiêu chuẩn không ấn định tên dụng cụ thủy tinh, sử dụng dụng cụ thủy tinh tương tự [ví dụ thiết bị chưng cất mô tả TCVN 6641 (ISO 5522), xem [3]) cho kết tương tự CHÚ DẪN Đầu vào điều chỉnh Sinh hàn bầu Phễu nhỏ giọt hình trụ Bầu Bình cầu đáy tròn Lọ nhỏ Ống dẫn khí Hình - Thiết bị chưng cất dùng cho phương pháp Monier-Williams tối ưu Kích thước tính milimet Hình - Sơ đồ bầu dùng cho thiết bị chưng cất phóng to 5.2 Buret, dung tích 10 ml, có ống tràn ống bảo vệ chứa natri hydroxit hấp thụ silic dioxit dụng cụ rửa khí tương tự cho phép trì mơi trường khơng khí khơng chứa cacbon dioxit dung dịch chuẩn natri hydroxit (4.2) 5.3 Chất làm lạnh sinh hàn Làm lạnh sinh hàn chất làm lạnh, ví dụ hỗn hợp tuần hồn thể tích metanol thể tích nước, dòng nước liên tục trì khơng q 15 °C 5.4 Thiết bị gia nhiệt, kiểm sốt nhiệt độ từ 20 °C đến 120 °C 5.5 Máy xử lý thực phẩm máy trộn 5.6 Chất hấp thụ oxy, để loại oxi khỏi nitơ (4.7) 6 Cách tiến hành 6.1 Yêu cầu chung Chuẩn bị phân tích mẫu nhanh tốt để tránh làm thất dạng sulfit khơng bền CHÚ THÍCH: Để làm quen thành thạo phương pháp trước sử dụng, nên phân tích phần mẫu thực phẩm có chứa hàm lượng sulfit biết Tiến hành phân tích theo cách cho ngăn ngừa thất thoát sulfit oxi hóa phản ứng với thành phần có thực phẩm Vì sulfit phản ứng với khơng khí, chất thực phẩm thường không bền, nên phần mẫu thử bổ sung góc sulfit bền, khơng chứa muối natri sulfil loại muối tương tự Natri hydroxymethylsulfonate (HMS) sản phẩm bổ sung bisulfit dạng formadehyt có cấu trúc tương tự với số dạng kết hợp sulfit có thực phẩm có ích để chuẩn bị vật liệu thử nghiệm bổ sung bền Để phân tích chuyển vào bình cầu (chi tiết 3: Hình 1) 50 g mẫu thực phẩm chuẩn bị không chứa sulfit Cho vào bình lượng dung dịch muối natri HMS Dung dịch phân tích Độ thu hồi HMS từ chất thực phẩm bổ sung mức 10 mg/kg cần lớn 80 % để đảm bảo liệu phân tích xác 6.2 Chuẩn bị mẫu 6.2.1 Mẫu dạng rắn Chuyển 50 g thực phẩm, lượng thực phẩm chứa từ 500 g đến 1500 g lưu huỳnh dioxit vào máy xử lý thực phẩm máy trộn Thêm 100 ml hỗn hợp etanol/nước (4.6) nghiền nhanh hỗn hợp Tiếp tục nghiền trộn thực phẩm cắt thành miếng nhỏ đủ để lọt qua khớp nối thủy tinh mài bình cầu (chi tiết 3, Hình 1) 6.2.2 Mẫu dạng lỏng Trộn 50 g mẫu thử, lượng thực phẩm có chứa từ 500 g đến 1500 g lưu huỳnh dioxit với 100 ml hỗn hợp etanol/ nước (4.6) 6.3 Chuẩn bị hệ thống Dùng thiết bị chưng cất (5.1) lắp ráp Hình 1, đặt bình cầu (chi tiết 3; Hình 1) vào thiết bị gia nhiệt (5.4) thêm 400 ml nước vào bình Đóng khóa phễu (chi tiết 2; Hình 1) thêm 90 ml dung dịch axit clohydric (4.1) vào phễu Bắt đầu thổi khí nitơ tốc độ 200 ml/min ±10 ml/min bắt đầu làm lạnh sinh hàn (5.3) Thêm 30 ml dung dịch hydro peroxit % (4.4) vào lọ nhỏ (chi tiết 7, Hình 1) Sau 15 min, oxy loại khỏi nước cho phần mẫu thử vào thiết bị 6.4 Cho mẫu vào thiết bị chưng cất Tháo phễu nhỏ giọt (chi tiết 2; Hình 1) chuyển định lượng phần mẫu thử etanol pha nước vào bình cầu (chi tiết 3; Hình 1) Làm cổ bình khăn giấy sạch, tra mỡ vào phía khớp nối phễu đưa phễu trở lại bình cầu Kiểm tra khớp nối để chắn kín Dùng bầu cao su có khóa để tạo sức nén dung dịch axit clohydric phễu Mở khóa phễu cho dung dịch axit clohydric chảy vào bình cầu Tiếp tục trì đủ áp lực dung dịch axit clohydric để ép dung dịch dung dịch chảy vào bình cầu Có thể đóng khóa, cần, để bơm áp suất axit, sau mở khóa lại Đóng khóa trước ml đến ml chảy khỏi phễu để bảo vệ tránh thất thoát lưu huỳnh dioxit phễu Bật nguồn nhiệt, điều chỉnh nguồn nhiệt cho tạo tốc độ ngưng tụ từ 80 giọt/min đến 90 giọt/min quay trở lại bình cầu từ ngưng Đun sơi hỗn hợp 105 min, sau tháo lọ nhỏ (chi tiết 7; Hình 1) 6.5 Xác định tính kết 6.5.1 Chuẩn độ Chuẩn độ (5.2) lượng chứa bình (chi tiết 7; Hình 1) dung dịch chuẩn natri hydroxit (4.2) đến điểm kết thúc màu vàng ổn định lâu 20 s Tính phần khối lượng sulfit, W, làm tròn kết đến số nguyên biểu thị hàm lượng sulfit theo miligam lưu huỳnh dioxit kilogam, dùng Công thức (1) w 32,03 x V x 1000 x N m (1) Trong 32,03 đương lượng gam SO2, tính gam mol (g/mol); N nồng độ mol dung dịch chuẩn natri hydroxit, tính mol/lit (mol/l); V thể tích dung dịch chuẩn natri hydroxit, với N = 0,010 mol/l tiêu tốn để đạt điểm kết thúc, tính mililit (ml); 000 hệ số chuyển đổi đương lượng gam thành mili đương lượng gam; m khối lượng phần mẫu thử cho vào bình cầu đáy tròn (chi tiết 3; Hình 1), tính gam (g) 6.5.2 Phép xác định trắng Thực phép xác định trắng thuốc thử cách chuẩn độ hiệu chỉnh kết tương ứng, cần Độ chụm 7.1 Yêu cầu chung Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp theo ISO 5725:1986 (xem [4]) nêu Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất phân tích chất khác với dải nồng độ phân tích chất nêu Phụ lục A 7.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm độc lập, riêng rẽ thu sử dụng phương pháp vật liệu giống thử hệt nhau, người thực hiện, sử dụng thiết bị thực khoảng thời gian ngắn nhất, không % trường hợp vượt giới hạn lặp lại r Các giá trị là: Cháo ngơ x = 9,2 mg/kg r = 3,7 mg/kg Nước x = 8,1mg/l r = 3,8 mg/l Thực phẩm có nguồn gốc thủy sản x = 10,4 mg/kg r = 4,1 mg/kg 7.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ thu sử dụng phương pháp, tiến hành thử vật liệu giống thử hệt nhau, hai phòng thử nghiệm khơng q % vượt giới hạn tái lập R Các giá trị là: Cháo ngô x = 9,2 mg/kg r = 4,0 mg/kg Nước x =8,1mg/l r = 4,5 mg/l Thực phẩm có nguồn gốc thủy sản x = 10,4 mg/kg r = 7,8 mg/kg Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thơng tin sau: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu; - viện dẫn tiêu chuẩn này; - kết đơn vị biểu thị kết quả; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu (nếu biết); - ngày nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - điểm đặc biệt quan sát thử nghiệm; - chi tiết thao tác khác với quy định tiêu chuẩn tùy chọn cố bất thường ảnh hưởng đến kết PHỤ LỤC A (tham khảo) Dữ liệu độ chụm Theo ISO 5725:1986 (xem [4]), thông số sau xác định phép thử liên phòng thử nghiệm (xem [2]) Phép thử Cơ quan Quản lý Dược phẩm Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) thực Bảng A.1 Mẫu Cháo ngô Nước Thực phẩm có nguồn gốc thủy sản 1986 1986 1986 Số lượng phòng thử nghiệm tham gia 21 21 21 Số lượng mẫu 9 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau loại trừ ngoại lệ 18 21 20 Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ Số lượng kết chấp nhận 39 42 41 Giá trị trung bình x 9,17 mg/kg 8,05 mg/1 10,41 mg/kg Độ lệch chuẩn lặp lại (Sr) 1,33 mg/kg 1,36 mg/l 1,47 mg/kg 14,49 % 16,90 % 14,13% Giới hạn lặp lại (r) 3,72 mg/kg 3,81 mg/l 4,12 mg/kg Độ lệch chuẩn tái lập (SR) 1,42 mg/kg 1,62 mg/l 2,77 mg/kg 15,50 % 20,14% 26,62 % 3,98 mg/kg 4,54 mg/l 7,76 mg/kg Năm tiến hành phép thử liên phòng thử nghiệm Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại (RSDr) Đô lệch chuẩn tương đối lặp lại (RSDR) Giới hạn tái lập (R) THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Association of Official Analytical Chemists (AOAC International): Official Methods of Analysis (1995), 16th Edition, method 990.28, 47.3.43 [2] Hillary et al: J Assoc Off Anal Chem (Vol 72 No.3, 1989), p 470 [3] TCVN 6641:2000 (ISO 5522:1981), Rau, sản phẩm rau - Xác định hàm lượng lưu huỳnh dioxit tổng số [4] ISO 5725:1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests ... sau: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu; - viện dẫn tiêu chuẩn này; - kết đơn vị biểu thị kết quả; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu (nếu biết); - ngày nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; -. .. dụng kiềm 1,2,3 trihydroxibenzen (pyrogallol), chai rửa khí Chuẩn bị chai rửa khí sau: cho 4,5 g 1,2,3 trihydroxibenzen vào chai rửa khí Làm chai rửa khí nitơ đến Chuẩn bị dung dịch kali hydroxit... tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn Tiêu chuẩn không ấn định tên dụng cụ thủy tinh, sử dụng dụng cụ thủy tinh tương tự [ví dụ thiết bị chưng cất mô tả TCVN 6641 (ISO 5522), xem [3]) cho