Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8677-2:2013 - ISO 17764-2:2002. Tiêu chuẩn về Thức ăn chăn nuôi - xác định hàm lượng axit béo - phần 2: Phương pháp sắc ký khí. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm bắt nội dung của tiêu chuẩn này.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8677-2:2013 ISO 17764-2 : 2002 THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT BÉO - PHẦN 2: PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ Animal feeding stuffs - Determination of the content of fatty acids - Part 2: Gas chromatographic method Lời nói đầu TCVN 8677-2:2013 hoàn toàn tương đương với ISO 17764-2:2002; TCVN 8677-2:2013 Cục Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố; Bộ TCVN 8677 (ISO/TS 17764), Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng axit béo bao gồm phần sau: - TCVN 8677-1:2011 (ISO/TS 17764-1:2002), Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng axit béo Phần 1: Phương pháp chuẩn bị metyl este; - TCVN 8677-2:2013 (ISO/TS 17764-2:2002), Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng axit béo Phần 2: Phương pháp sắc ký khí THỨC ĂN CHĂN NI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT BÉO - PHẦN 2: PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ Animal feeding stuffs - Determination of the content of fatty acids - Part 2: Gas chromatographic method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp định lượng axit béo riêng rẽ tổng axit béo (axit béo rửa giải) Tiêu chuẩn qui định phương pháp sử dụng sắc ký khí cột mao quản detector ion hóa lửa (FID) để xác định hàm lượng axit béo chất béo cách sử dụng metyl este axit béo thu theo phương pháp quy định TCVN 8677-1 (ISO/TS 17764-1) Tiêu chuẩn dùng để nghiên cứu loại dầu mỡ động vật thực vật, hỗn hợp axit béo có thành phần thức ăn chăn nuôi, dịch chiết chất béo thức ăn chăn nuôi nguyên liệu thức ăn hỗn hợp, kể chất béo hỗn hợp axit béo có chứa axit butyric Phương pháp không áp dụng cho axit béo polime hóa Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987) Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - u cầu kỹ thuật phương pháp thử TCVN 8677-1 (ISO/TS 17764-1), Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng axit béo - Phần 1: Phương pháp chuẩn bị metyl este Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Hàm lượng axit béo (fatty acid content) Phần khối lượng axit béo có phần mẫu thử dầu, mỡ, dịch chiết chất béo, axit béo tự xà phòng CHÚ THÍCH: Hàm lượng axit béo biểu thị gam kilogam 3.2 Hàm lượng chất rửa giải (content of elutable material) Khối lượng tổng axit béo rửa giải được, sử dụng cột sắc ký khí quy định tiêu chuẩn Nguyên tắc Các metyl este chuẩn bị từ axit béo theo TCVN 8677-1 (ISO/TS 17764-1) tách sắc ký khí-lỏng, sử dụng cột mao quản Các pic sắc đồ xác định theo mẫu đối chứng biết thành phần định lượng cách sử dụng chất chuẩn nội Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử dung môi đạt chất lượng tinh khiết phân tích 5.1 Nước, phù hợp với loại quy định TCVN 4851:1989 (ISO 3696:1987) 5.2 n-Hexan n-heptan 5.3 n-Pentan 5.4 Mẫu đối chứng: mẫu dầu mỡ biết xác dạng axit béo, hỗn hợp mẫu metyl este axit béo đối chứng mẫu axit béo đối chứng CHÚ THÍCH: Nếu sử dụng phương pháp BF3 để este hóa, hỗn hợp metyl este axit béo đối chứng không dùng cho hiệu chuẩn hệ số điều chỉnh axit béo có mạch 10 ngun tử cácbon, metyl este hòa tan pha nước Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 6.1 Máy sắc ký khí, bao gồm cột mao quản hệ thống bơm thiết kế đặc biệt để sử dụng với cột sắc ký Hệ thống bơm loại phân dòng khơng phân dòng bơm cột lạnh Tuy nhiên, bơm khơng phân dòng ấm khơng phù hợp để phân tích chất béo sữa pic dung môi chồng lên pic axit butyric 6.2 Cột, chế tạo vật liệu trơ (silica nóng chảy thủy tinh) có pha tĩnh thích hợp cho liên kết hóa học vào thành cột Kích thước cột độ dày lớp màng yếu tố quan trọng việc xác định hiệu tách khả tách cột Độ phân giải tối thiểu 1,25 axit béo C16:0 C16:1, C18:0 C18:1 CHÚ THÍCH: Trong hầu hết trường hợp, cột pha tĩnh phân cực vừa phải phù hợp để sử dụng Trong trường hợp đặc biệt, ví dụ, để tách đồng phân cis-trans- và/hoặc đồng phân vị trí cần chắn khơng có pic trùng nhau, nên dùng cột phân cực cao Cần xem xét hiệu mong muốn khả cột kích thước độ dày màng pha tĩnh Ví dụ, cột pha tĩnh phân cực vừa phải phù hợp với este poly (etylen glycol) khác Cột pha tĩnh phân cực cao thường dạng cyano-propyl-polysiloxan 6.3 Hệ thống bơm mẫu, để bơm tay, có dung tích phần lớn 10 l chia vạch 0,1 l, phù hợp với bơm (6.2) hệ thống bơm mẫu tự động CHÚ THÍCH: Tốt nên dùng hệ thống bơm mẫu tự động cải thiện độ lặp lại độ tái lập 6.4 Thiết bị chuyển đổi tín hiệu, hệ thống điện tử gắn với máy ghi để chuyển tín hiệu detector sang sắc đồ (bộ tích phân trạm liệu) Cách tiến hành 7.1 Chuẩn bị metyl este Chuẩn bị metyl este axit béo phần mẫu thử mẫu đối chứng (5.4) theo TCVN 8677-1 (ISO/TS 17764-1) 7.2 Chọn điều kiện vận hành tối ưu Tối ưu hóa thiết bị theo hướng dẫn nhà sản xuất Tối ưu hóa tốc độ dòng khí mang theo khuyến cáo nhà sản xuất cột sắc ký cột chọn khí mang Duy trì nhiệt độ detector từ 200C đến 500C cao nhiệt độ cao cột chương trình gia nhiệt, tối thiểu 1500C Nhiệt độ bơm phụ thuộc vào kiểu loại bơm; theo hướng dẫn sổ tay thiết bị Khi sử dụng bơm phân dòng cài đặt tỷ lệ phân dòng từ 1:30 đến 1:100 7.3 Phân tích 7.3.1 Hòa tan metyl este axit béo phần mẫu thử phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội vào n-hexan (5.2) đến hàm lượng 1% (khối lượng) sử dụng bơm phân dòng, đến hàm lượng 0,05% (khối lượng) sử dụng bơm không phân dòng bơm cột lạnh Chuẩn bị dung dịch metyl este axit béo mẫu đối chứng (7.1) n-hexan với nồng độ tương tự Bơm riêng rẽ từ 0,1 l đến l mẫu thử, mẫu thử có chứa chất chuẩn nội mẫu đối chứng cần Khi dùng hệ thống bơm cột lạnh cần sử dụng n-pentan làm dung mơi tách tốt metyl este axit béo có chiều dài mạch chứa 10 ngun tử cacbon Hòa tan metyl este axit béo có phần mẫu thử mẫu đối chứng dung môi 7.3.2 Việc lựa chọn chương trình nhiệt độ phụ thuộc vào thành phần axit béo, để phân giải hiệu khoảng thời gian ngắn Cần xem xét tiêu chí nêu 6.3 Chương trình nhiệt độ 600C, mẫu có chứa axit béo với chiều dài mạch gồm 12 nguyên tử cacbon Sau chương trình đạt nhiệt độ cao nhất, chạy đẳng nhiệt tất thành phần rửa giải, cần Khi sử dụng bơm cột lạnh, khởi động với nhiệt độ lò khơng cao q 10 0C so với điểm sôi dung môi áp suất thường dùng (đối với n-pentan 50 0C) Khởi động chương trình nhiệt sau bơm mẫu Sau thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Nhận biết pic Nhận biết pic metyl este phần mẫu thử theo thời gian lưu cách so sánh với thời gian lưu pic metyl este axit béo biết mẫu đối chứng Các pic sắc đồ phần mẫu thử có thời gian lưu pic mẫu đối chứng coi pic axit béo Tính kết 9.1 Hiệu axit heptadecanoic phần mẫu thử Đối với axit heptadecanoic có nguồn gốc từ phần mẫu thử hiệu diện tích pic axit heptadecanoic phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, sử dụng công thức: Arsr = Asr17:0 Trong đó: Arsr diện tích hiệu theo pic chất chuẩn nội phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr16:0 diện tích theo pic axit hexadecanoic (axit palmitic) phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr17:0 diện tích theo pic axit heptadecanoic (axit margarinic) phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị thể tích; Asr18:0 diện tích theo pic axit octadecanoic (axit stearic) phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr18:1 diện tích theo pic axit octadecenoic (axit oleic) phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr16:0 diện tích theo pic axit hexadecanoic (axit palmitic) phần mẫu thử không bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr17:0 diện tích theo pic axit heptadecanoic (axit margarinic) phần mẫu thử khơng bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr18:0 diện tích theo pic axit octadecanoic (axit stearic) phần mẫu thử không bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Asr18:1 diện tích theo pic axit octadecenoic (axit oleic) phần mẫu thử không bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; Khơng cần hiệu axit heptadecanoic mẫu thử hàm lượng tương đối axit heptadecanoic không vượt 0,5% tổng axit béo 9.2 Xác định hệ số hiệu chuẩn tương đối Xác định hệ số hiệu chuẩn tương đối axit béo với chiều dài mạch chứa 10 ngun tử cacbon Nếu khơng sử dụng hệ thống bơm cột lạnh cần tính đến bay chọn lọc metyl este axit béo Trong trường hợp này, cần xác định hệ số hiệu chuẩn tương đối toàn dải metyl este axit béo Hiệu số hiệu chuẩn sử dụng để chuyển đổi diện tích pic phần khối lượng Việc xác định hệ số hiệu chuẩn nhờ vào sắc đồ thu phân tích hỗn hợp chuẩn (5.4) thực điều kiện tương tự điều kiện dùng cho phân tích mẫu thử Tính hệ số hiệu chuẩn axit béo i theo công thức: kj = đó: ki hệ số hiệu chuẩn axit béo i, tính đơn vị khối lượng đơn vị diện tích; mi khối lượng axit béo i mẫu đối chứng, tính đơn vị khối lượng; Ai diện tích pic axit béo i mẫu đối chứng, tính đơn vị diện tích Nếu khơng thể xác định hệ số hiệu chuẩn khơng có axit béo chuẩn, sử dụng hệ số hiệu chuẩn axit béo sẵn có đứng trước gần với axit béo đối chứng Các hệ số tiêu chuẩn biểu thị liên quan đến hệ số hiệu chuẩn chuẩn nội C17:0 Hệ số hiệu chuẩn tương đối cuối là: ki = đó: k'i hệ số hiệu chuẩn tương đối axit béo i; ki hệ số hiệu chuẩn axit béo i; tính đơn vị khối lượng đơn vị thể tích; kr hệ số hiệu chuẩn axit béo chuẩn nội, tính đơn vị khối lượng đơn vị diện tích 9.3 Dải hệ số hiệu chuẩn tương đối Các hệ số hiệu chuẩn tương đối có khác biệt nhỏ so với giá trị nghịch đảo hệ số đáp ứng tương đối Sự đáp ứng coi độ lớn tín hiệu từ detector ion hóa lửa axit béo cụ thể Tính giá trị lý thuyết hệ số đáp ứng tương đối metyl este axit béo no mạch thẳng cơng thức sau: Ri = Trong đó: Ri hệ số đáp ứng tương đối lý thuyết axit béo i; Mr phân tử lượng axit béo nội chuẩn (C17:0) tính gam mol (g/mol); Mi phân tử lượng axit béo i, tính gam mol (g/mol); nr số lượng nguyên tử cacbon axit béo nội chuẩn; ni số lượng nguyên tử cacbon axit béo i Hệ số hiệu chuẩn tương đối (k'i) không khác 5% so với giá trị Ri-1 Trong trường hợp có chênh lệch lớn kiểm tra xem có sai số hệ thống khơng Các hệ số chấp nhận có vài mẫu đối chứng sử dụng CHÚ THÍCH: Hầu hết sai số hệ thống bay chọn lọc thành phần khỏi xyranh bơm bơm ấm, phân dòng trường hợp sử dụng bơm phân dòng Trong trường hợp này, axit béo mạch ngắn bị đánh giá mức Điều dẫn đến hệ số hiệu chuẩn axit béo mạch ngắn bị thấp so với giá trị lý thuyết Một nguyên nhân khác gây sai số hệ thống chiết khơng hồn toàn metyl este axit béo mạch ngắn pha alkan 9.4 Tính hàm lượng axit béo Tính hàm lượng axit béo riêng rẽ chất béo theo công thức sau: wi = x k'i x 1000 đó: wi phần khối lượng axit béo i mẫu chất béo, tính gam kilogam (g/kg); Aisr diện tích pic tương ứng với axit béo i chất béo bổ sung chất nội chuẩn, tính đơn vị diện tích; Arsr diện tích hiệu theo pic chất chuẩn nội phần mẫu thử bổ sung chất chuẩn nội, tính đơn vị diện tích; mr khối lượng chất chuẩn nội bổ sung vào phần mẫu thử mẫu chất béo, tính gam (g); ms khối lượng phần mẫu thử mẫu chất béo, tính gam (g); k'I hệ số hiệu chuẩn tương đối axit béo i Biểu thị kết xác đến g/kg 9.5 Tính hàm lượng chất rửa giải Tính hàm lượng chất rửa giải cách cộng giá trị w i tất axit béo riêng lẻ 9.6 Tính hàm lượng axit béo mẫu chứa chất béo Tính hàm lượng axit béo riêng rẽ cách nhân hàm lượng axít béo chất béo với hàm lượng chất béo mẫu 10 Độ chụm 10.1 Yêu cầu chung Độ chụm phương pháp thiết lập năm 1999 phép thử liên phòng thử nghiệm tiến hành theo ISO 5725[1] Các chi tiết phép thử nêu Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng không áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu 10.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử riêng rẽ độc lập, thu sử dụng phương pháp thử vật liệu thử giống hệt nhau, người phân tích, sử dụng thiết bị thực phòng thử nghiệm, khoảng thời gian ngắn, không 5% trường hợp vượt giới hạn lặp lại r nêu thu từ Bảng 10.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết riêng rẽ độc lập, thu sử dụng phương pháp thử vật liệu thử giống hệt nhau, người phân tích khác thực phòng thử nghiệm khác nhau, sử dụng thiết bị khác nhau, không 5% trường hợp vượt giới hạn tái lập R nêu thu Bảng Bảng - Giới hạn độ lặp lại (r) giới hạn độ tái lập (R) Mẫu/axit béo r R g/kg g/kg C16:0 (axit palmitic; axit hexadecanoic) 30 C18:1 (axit oleic; axit cis-9-octadecenoic) (hàm lượng < 200 g/kg) 10 C18:1 (axit oleic; axit cis-9-octadecenoic) (hàm lượng > 200 g/kg) 22 38 C16:0 (axit palmitic; axit hexadecanoic) 15 C18:1 (axit oleic; axit cis-9-octadecenoic) (hàm lượng < 200 g/kg) 15 C18:1 (axit oleic; axit cis-9-octadecenoic) (hàm lượng > 200 g/kg) 40 Loại B (cần thủy phân) Loại A (không cần thủy phân) 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất chi tiết thao tác không qui định tiêu chuẩn này, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết thử; - kết thử nghiệm thu hai kết thử nghiệm thu đáp ứng yêu cầu độ lặp lại PHỤ LỤC A (Tham khảo) Kết phép thử liên phòng thử nghiệm Độ chụm phương pháp thiết lập năm 2001 phép thử liên phòng thử nghiệm NEN tổ chức thực phù hợp với ISO 5725 1) Trong phép thử này, 11 phòng thí nghiệm tham gia Tuy nhiên, bốn phòng thử nghiệm khơng có kinh nghiệm với phương pháp không đưa liệu yêu cầu Các mẫu kiểm tra đánh giá dầu cá thô, dầu chiên qua sử dụng, dầu dừa, chất béo chiết từ dừa ép chất béo chiết từ bột thịt bột xương Trong Bảng từ A.1 đến A.3 nêu kết thống kê phép thử CHÚ THÍCH: Xem thêm thông tin tài liệu ISO/TC 34/SC 10 N 880 Bảng A.1 - Độ chụm tổng axit béo a Mẫub Thông số 6 6 Hàm lượng axit béo trung bình, g/kg 787 851 868 830 786 Độ lệch chuẩn lặp lại (sr), g/kg 6,0 10,1 15,8 13,2 58,1 Hệ số biến thiên lặp lại, % 0,8 1,2 1,8 1,6 2,6 Giới hạn lặp lại, (r) [r=2,8 sr], g/kg 16,7 28,3 44,2 36,9 58,1 Độ lệch chuẩn tái lập (sR) g/kg 52,7 42,0 34,4 26,2 34,4 Hệ số biến thiên tái lập, % 6,7 4,9 4,0 3,2 4,4 147,0 118,0 96,2 73,3 96,2 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ Giới hạn tái lập (R) [R = 2,8 sR], g/kg a Tổng tất pic sắc đồ nhận biết axit béo b Mẫu 1: dầu cá thô Mẫu 2: dầu sử dụng Mẫu 3: dầu dừa Mẫu 4: chất béo chiết từ dừa ép Mẫu 5: chất béo chiết từ bột thịt bột xương Bảng A.2 - Dữ liệu độ chụm axit palmitic (axit-hexadecanoic) Mẫua 1) ISO 5725:1986 sử dụng để thu lấy liệu độ chụm Hiện ISO 5725:1986 thay ISO 5725:1994 (gồm phần) 1 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 7 7 Hàm lượng axit béo trung bình, g/kg 149 180 82 64 201 Độ lệch chuẩn lặp lại (sr), g/kg 1,6 2,8 1,3 3,1 3,2 Hệ số biến thiên lặp lại, % 1,1 1,6 1,6 3,7 1,6 Giới hạn lặp lại, (r) [r=2,8 sr], g/kg 4,5 7,9 3,5 8,6 9,0 Độ lệch chuẩn tái lập (sR) g/kg 3,1 5,9 2,9 7,0 10,7 Hệ số biến thiên tái lập, % 2,1 3,3 3,6 8,4 5,3 Giới hạn tái lập (R) [R = 2,8 sR], g/kg 8,6 16,6 8,2 19,7 29,9 a Mẫu 1: dầu cá thô Mẫu 2: dầu sử dụng Mẫu 3: dầu dừa Mẫu 4: chất béo chiết từ dừa ép Mẫu 5: chất béo chiết từ bột thịt bột xương Bảng A.3 - Dữ liệu độ chụm axit oleic (axit cis-9-octadecanoic) Mẫua Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 6 Hàm lượng axit béo trung bình, g/kg 146 329 59 56 282 Độ lệch chuẩn lặp lại (sr), g/kg 1,1 3,1 1,2 1,1 7,9 Hệ số biến thiên lặp lại, % 0,8 0,9 2,0 1,9 2,8 Giới hạn lặp lại, (r) [r=2,8 sr], g/kg 3,2 8,7 3,3 3,0 22,2 Độ lệch chuẩn tái lập (sR) g/kg 6,2 14,1 3,2 2,2 13,7 Hệ số biến thiên tái lập, % 4,3 4,3 5,5 4,0 4,9 Giới hạn tái lập (R) [R = 2,8 sR], g/kg 17,4 39,4 9,1 6,3 38,4 a Mẫu 1: dầu cá thô Mẫu 2: dầu sử dụng Mẫu 3: dầu dừa Mẫu 4: chất béo chiết từ dừa ép Mẫu 5: chất béo chiết từ bột thịt bột xương THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] ISO 5725:1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests [2] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung [3] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp đo tiêu chuẩn [4] TCVN 4331:2001 (ISO 6492:1999), Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng chất béo [5] TCVN 4325:2007 (ISO 6497:2002), Thức ăn chăn nuôi - Lấy mẫu [6] TCVN 6952:2001 (ISO 6498:1998), Thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử ... đo tiêu chuẩn [4] TCVN 4331:2001 (ISO 6492:1999), Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng chất béo [5] TCVN 4325:2007 (ISO 6497:2002), Thức ăn chăn nuôi - Lấy mẫu [6] TCVN 6952:2001 (ISO 6498:1998),... rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất chi tiết thao tác không qui định tiêu chuẩn. .. giải được, sử dụng cột sắc ký khí quy định tiêu chuẩn Nguyên tắc Các metyl este chuẩn bị từ axit béo theo TCVN 867 7-1 (ISO/ TS 1776 4-1 ) tách sắc ký khí-lỏng, sử dụng cột mao quản Các pic sắc đồ