Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 530:2002

Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 530:2002 về Cây giống chuối tiêu nhân bằng phương pháp nuôi cấy mô áp dụng cho các vùng trồng chuối trên cả nước và áp dụng cho cây chuối được nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô. Mời các bạn cùng tham khảo.

TIÊU CHUẨN NGÀNH 10 TCN 530:2002 CÂY GIỐNG CHUỐI TIÊU NHÂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ Standard of banana seedlings multiflied by tissue culture Chương I: PHẠM VI ÁP DỤNG - Phạm vi áp dụng cho vùng trồng chuối nước; - Áp dụng cho chuối nhân giống phương pháp nuôi cấy mô Chương II: TIÊU CHUẨN CÂY GIỐNG Tiêu chuẩn mẫu giống thu thập làm nguồn vật liệu nhân giống 1.1 Nguyên tắc xác định giống trồng Việc xác định giống trồng phải dựa sở là: - Khả thích ứng giống với điều kiện tự nhiên vùng trồng chuối - Yêu cầu đối tượng tiêu thụ sản phẩm - Giống chuối tiêu trung(Musa sp.)có đủ tiêu chuẩn suất, chất lượng mà Bộ Nông nghiệp PTNT cho phép nhân giống 1.2 Chất lượng mẹ (cây cho chồi dùng làm vật liệu nhân giống) - Cây mẹ phải giống phép nhân - Cây mẹ phải có đặc tính sinh học sau: chiều cao:2,2–2,5m; đường kính thân giả: 22-25 cm (đo độ cao 80 cm kể từ chân bẹ ngoài); số trỗ: 12-13 lá; số thu quả: 5-7 lá; trọng lượng buồng: 18-20 kg; buồng hình trụ, số nải trung bình: 8-12 nải; số quả/nải:14-16 quả, đều, dạng hình đẹp khơng có biểu dị dạng 1.3 Kích cỡ chất lượng chồi (mầm) tách từ mẹ dùng làm vật liệu nhân giống(xem mô tả phụ lục 1) + Kích cỡ: - Cao từ mặt đất đến đỉnh (lá búp): 70-80 cm (đo từ chân bẹ đến điểm giao hai cuống cùng) - Đường kính gốc thân giả: 8-10 cm (đo cách mặt đất 30 cm) - Thân giả có hình búp măng - Có từ 3-4 hình lưỡi mác (xem phụ lục 1) + Chồi (mầm) tách từ mẹ kiểm dịch cần tránh bệnh nêu mục 1.4 + Bệnh tuyến trùng chồi mầm cần kiểm tra để xác định mức độ bệnh( xem phụ lục 6) 1.4 Kiểm tra dịch bệnh mẹ chồi Cây mẹ chồi phải đánh giá số bệnh hại như: chùn (BBTV), héo rũ, đốm lá, tuyến trùng, thối vi khuẩn… - Bệnh chùn cần đánh giá mẹ chồi trước lấy mẫu phương pháp ELISA(xem phụ lục 2) - Bệnh héo rũ nấm Fusarium oxysporum f sp cubense gây phải đánh giá mẹ hàng tháng, tháng lần từ tháng thứ sau trồng đến thu hoạch (theo hướng dẫn INIBAP) (xem phụ lục 3) - Bệnh Sigatoka phải đánh giá mẹ tháng lần, từ tháng thứ sau trồng đến thu hoạch (theo hướng dẫn INIBAP) (xem phụ lục 4) - Bệnh thối thân vi khuẩn Pseudomonas solanacearum gây phải kiểm tra xác định mức độ bệnh mẹ tháng lần, từ tháng thứ sáu sau trồng đến thu hoạch (theo hướng dẫn INIBAP) (xem phụ lục 5) - Bệnh tuyến trùng chồi (cây hệ thứ nhất) phải kiểm tra để xác định mức độ bệnh (xem phụ lục 6) Các tiêu mô tả tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô 2.1 Độ đồng - Đường kính thân giả (mm) đo cách gốc cm - Chiều cao (cm) đo từ gốc đến điểm giao hai cuống cùng) - Số thật số tính với phát triển đầy đủ 2.2 Tần số biến dị dòng soma Được tính tỷ số số bị biến dị sinh lý, hình thái xuất chu kỳ nhân giống tổng số mẫu thu cuối chu kỳ Tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô 3.1 Tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô ống nghiệm - Đúng giống phép nhân (đã nêu mục 1.1) - Được tái sinh từ nguồn vật liệu vơ trùng(theo quy trình nhân giống- phụ lục7), khơng bị nhiễm số bệnh hại (đã nêu mục 1.4) - Cây chuối giống nhân ống nghiệm không cấy chuyển nhiều lần (dưới 7lần) để tránh tượng biến dị dòng soma Tần số biến dị hình thái ni cấy mơ khơng vượt q 3-5% - Cây giống khơng có biến dị diệp lục phiến - Cây rễ ống nghiệm phải có độ lớn đồng đều, thân giả to khoẻ cao từ 5-8 cm, đường kính thân 5-7 mm, có từ rễ trở lên, rễ trắng, dài từ 2-4 cm, có 3-4 thật 3.2 Tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô giai đoạn vườn ươm xuất vườn - Cây giống nuôi cấy mô vườn ươm (10-15 ngày sau trồng): cao 7-10 cm, đường kính thân giả 5-7 mm, có 3-4 thật - Cây giống nuôi cấy mô bầu đất xuất vườn phải có độ lớn đồng đều, thân giả to khoẻ cao từ 25-30 cm, đường kính thân 10-15 mm, có 5-7 thật Thành phần giá thể vườn ươm túi bầu trồng 4.1 Giá thể vườn ươm - Sử dụng hỗn hợp cát đen : đất phù sa theo tỷ lệ : Đất phù sa cát đen phải sạch, qua xử lý nấm, khuẩn loại mầm bệnh khác, khơng lấy từ vùng có mầm bệnh nấm hay tuyến trùng - Độ dày giá thể vườn ươm: 7-10 cm - Luống cao 0,2 m, rộng 0,8 - 1m, hai bên có lối (rộng 40cm), có rãnh nước - Thường xun tiến hành phòng trừ sâu bệnh hại khác vườn ươm 4.2 Thành phần kích cỡ túi bầu trồng - Thành phần đất để làm bầu gồm: đất, cát, pha trộn với giá thể hữu khác - Giá thể làm bầu phải đảm bảo độ tơi xốp, thống khí, có độ ẩm từ 60-70% đủ dinh dưỡng cho rễ phát triển khoẻ - Túi bầu có màu đen, chắn, có độ bền đảm bảo cho q trình vận chuyển - Kích thước túi bầu: rộng 15cm x cao 18cm Các biện pháp kỹ thuật làm tăng độ đồng di truyền chuối nuôi cấy mô - Mẫu giống ban đầu phải lấy từ mẹ giống, có đặc tính nơng học tốt bền vững mặt di truyền trình vi nhân giống - Số lần nhân giống không vượt lần, số chuối tối đa tạo từ mẫu chồi ban đầu nên dừng mức 2000 - Các chồi chuối phát triển không bình thường (nhỏ có biểu sai khác so với giống gốc) xuất lần cấy chuyển không sử dụng cho chu kỳ nhân giống - Các dạng biến dị hình thái cần phải loại bỏ tất giai đoạn từ tái sinh đến giai đoạn cuối đưa vườn ươm Kiểm tra bệnh vườn ươm dựa triệu chứng bệnh để tránh nhiễm bệnh trở lại - Các bệnh nấm - Các bệnh vi khuẩn, tuyến trùng - Các loại sâu bệnh côn trùng khác có Quy cách nhãn giống nuôi cấy mô - Chữ ghi rõ ràng lên giấy, ép plastic ghi nhãn nhựa mực sơn chống ướt - Nội dung ghi nhãn: Gồm nội dung quy định thông tư số 75//2000/TT-BNN/KHCN ngày tháng năm 2000 Bộ Nông nghiệp PTNT hướng dẫn thực Quyết định số 178/1999/QĐ TTg ngày 30/8/1999 Thủ tướng Chính phủ quy chế ghi nhãn hàng hố lưu thơng nước hàng hoá xuất nhập Tên giống chuối (tên khoa học) Lô sản xuất ngày tháng năm Cơ sở sản xuất: tên, địa KCS: quan kiểm tra chất lượng giống - Thời hạn trồng từ ngày xuất giống đến ngày - Thời gian sinh trưởng (từ trồng đến lúc bắt đầu chín): 12-14 tháng tuỳ thuộc vùng thời vụ trồng Bảo quản vận chuyển 8.1 Bảo quản - Cây nuôi cấy mơ bầu bảo quản điều kiện bình thường, song cần giữ đủ ẩm tránh nắng nóng mùa hè chiếu trực tiếp - Khơng để trơ rễ gốc thân giả giống - Nếu để lâu tháng cần tưới thêm hỗn hợp đạm ure (N) : lân (P 2O5) : kali (K2O) theo tỷ lệ 3:1:1, nồng độ tưới 2% - Phun thuốc phòng sâu ăn lá, sâu đục thân 8.2 Vận chuyển - Cây bầu phải xếp thành lớp để tránh gãy búp - Trong vận chuyển giống phải che nắng, gió - Vận chuyển cự ly gần (thời gian vận chuyển 2-3 ô tô): thời gian vận chuyển tưới nước bổ sung - Vận chuyển cự ly xa (trên vận chuyển ô tô): sau phải tưới nước bổ sung, ngày tưới lần - Tránh làm đổ vỡ bầu, gãy thân, - Khi vận chuyển đến nơi cần để chỗ râm mát tưới nước đủ ẩm cho - Phải tạo thông thống q trình vận chuyển PHỤ LỤC THAM KHẢO PHỤ LỤC MƠ TẢ HÌNH DÁNG CHỒI (MẦM) CỦA CÂY MẸ PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN XÁC ĐỊNH VÀ KIỂM TRA BỆNH CHÙN NGỌN (CHUỐI RỤT, ĐẦU GÀ) Bệnh chùn virus gây nên, vector truyền bệnh loại rệp có tên Pentalonia nigronervosa Để phát bệnh xác định mắt thường (nếu phát bệnh) Xác định bệnh phương pháp ELISA (có thể phát bệnh giai đoạn ủ bệnh) Hướng dẫn đánh giá bệnh chùn phương pháp ELISA bao gồm bước sau: I- Chọn mẫu vật Cây lấy mẫu có độ tuổi từ 3-6 tháng Mẫu dùng để xét nghiệm lá, gân (lá thứ kể từ ngọn) hay phận khác Mẫu thu đựng túi nilon nhỏ có đánh số ghi thơng số có liên quan đến lấy mẫu Mỗi lấy mẫu nhắc lại, lấy khóm để tăng tính đại diện mẫu Mẫu chưa làm đến cất giữ tủ lạnh đến ngày hôm sau Đĩa dùng để làm xét nghiệm ELISA có loại + Loại chưa bọc kháng thể giếng + Loại bọc sẵn kháng thể (ở dùng loại đĩa bọc sẵn hãng sản xuất bán, việc tiến hành nhanh tiện lợi) II- Các bước tiến hành Chiết dịch từ chuối a Chuẩn bị mẫu - Dùng túi nghiền mẫu cối sứ để nghiền nhỏ mẫu - Lá dùng làm mẫu có trọng lượng khoảng g cắt từ nhiều khóm để tăng tính đại diện mẫu - Mẫu lấy từ hơm trước, cất vào túi chiết sau bảo quản tủ lạnh (7 – 13 oC) - Nên chọn bị bệnh điển hình để làm đối chứng so sánh với mẫu dương tính có bán kèm theo kit b Chuẩn bị dung dịch chiết - Lấy 16,5 g dung dịch chiết (trong kít) hồ tan 500 ml nước cất lần Nhỏ thêm 15 ml Tween vào dung dịch (dung dịch chuẩn bị trước dùng) - Cho 10 ml dung dịch chiết vào mẫu nghiền theo tỷ lệ 1g/10 ml Nghiền nát mẫu để lấy dịch - Mỗi giếng cho 100 ml dịch vào để thử ELISA Lập sơ đồ mẫu đo Mỗi đĩa 96 giếng ln bố trí mẫu dương tính hãng bán kèm theo kit, mẫu bệnh lấy từ bị nhiễm điển hình, mẫu trắng có dung dịch chiết lỗ giếng lại bố trí mẫu dịch chiết từ chuối Nhỏ 100 ml dịch chiết vào lỗ giếng, đánh dấu theo sơ đồ sau đặt đĩa vào hộp kín, ủ nhiệt độ phòng hay để qua đêm oC Chuẩn bị dung dịch enzym Dung dịch enzym chuẩn bị 10 phút trước dùng, khơng nên để lâu làm giảm hoạt tính enzym Dung dịch gồm hỗn hợp loại dung dịch: ECI, enzym liên kết A B với tỷ lệ: - ml dung dịch ECI pha với ml nước cất lần 10 ml dung dịch ECI (1X) - 100 ml enzym A + 100 ml enzym B Trộn lẫn tất loại ta dung dịch enzym cần dùng Rửa đĩa Sau cho dịch chiết vào giếng đem ủ giờ, xong tiến hành rửa đĩa từ 4-8 lần dung dịch 1X PBS -T (đã có sẵn kèm theo kit) Thêm 100 ml dung dịch enzym vào giếng Ủ đĩa hộp kín giữ ẩm nhiệt độ phòng Chuẩn bị dung dịch PNP (chuẩn bị trước dùng 15 phút) cách lấy 12 viên PNP cho vào 60 ml PNP 1X (dung dịch cần tránh ánh sáng mạnh vi khuẩn yếu tố gây đổi màu làm ảnh hưởng đến kết phép đo) Rửa đĩa lần PBS-T từ 4-8 lần Sau nhỏ 100 ml PNP vào giếng, tiếp ủ đĩa hộp kín từ 30-60 phút Tiếp theo nhỏ 50 ml 3M NaOH vào giếng để dừng phản ứng Cho điểm mức độ chuyển màu lỗ giếng - Bằng mắt thường - Đo máy ELISA bước sóng 405 nm Số liệu đo in giấy theo sơ đồ bố trí lúc ban đầu - Tổng hợp kết đọc máy thành thang điểm từ 1-5 so sánh với mẫu dương tính hay mẫu bệnh tự chọn để đánh giá mức độ nhiễm bệnh mẫu chọn không bị nhiễm bệnh III- Ghi chép số liệu - Mô tả trạng thái lấy mẫu, đánh số lấy mẫu lô theo dõi, chụp ảnh tư liệu cần - Xác định mức độ bệnh mắt thường (nếu có thể) - Phân tích số liệu đo từ mẫu thu thập - So sánh kết đánh giá mắt thường với kết đo máy phân tích ELISA   PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN ĐÁNH GIÁ BỆNH HÉO RŨ DO NẤM (Fusarium oxysporum f sp cubense) GÂY RA - Vườn chuối chọn để đánh giá bệnh héo rũ nên xác định thêm số yếu tố ảnh hưởng môi trường loại đất, chất đất độ pH đất, nhiệt độ, độ ẩm, lượng mưa - Sau trồng số liệu môi trường cần thu thập thu hoạch, để bổ sung cho việc đánh giá bệnh xác loại trừ yếu tố ngoại cảnh, sử dụng bảng: Tuần Lượng mưa nhiệt độ cao nhiệt độ thấp nhiệt độ trung bình Số ngày mưa - Mức độ nhiễm bệnh (triệu chứng bên ngoài) cần ghi lại cho cây, tháng lần từ tháng thứ sau trồng thu hoạch, cách sử dụng bảng sau: Bảng điểm đánh giá triệu chứng bệnh quan sát mắt thường Triệu chứng bệnh Điểm Mức độ bệnh Không vàng Vàng nhạt Vàng nhiều Không nứt Nứt vừa phải Nứt nhiều Không đổi màu Đổi màu vừa phải Đổi màu mạnh Thay đổi mọc Khơng có triệu chứng (Mép bạc khơng bình thường, hẹp, gân bị cháy nhăn, mọc đứng bình thường) Có triệu chứng Các đốt dày Khơng dày (Triệu chứng khó phát lùn nửa lùn) Hơi dày Dày Không rũ Hơi rũ Rũ nhiều Gẫy Gẫy nhiều Vàng phiến Nứt phần gốc thân giả Đổi màu bó mạch bẹ Rũ lá Gãy oằn, cong gập cuống - Triệu chứng bệnh bên ngồi phát triển mạnh từ lúc hoa đến thu hoạch - Các số liệu nông học chiều cao cây, trọng lượng buồng, số nải cần ghi nhận theo dõi Bảng theo dõi số liệu nông học (Theo Drs D Vuylsteke R.Ortiz, IITA) Ngày trồng Ngày trỗ hoa Chiều cao trỗ hoa ( m ) Số ngày từ lúc trồng đến trỗ Ngày thu Số ngày từ lúc trồng đến thu hoạch Chiều cao chồi lúc thu Trọng lượng buồng (kg) Số nải buồng Số nải Trọng lượng trung bình nải (g) Số liệu triệu chứng bệnh bên cần thu thập theo dõi thu hoạch Triệu chứng bên phát cách cắt phần thân củ theo chiều ngang vị trí 1/4 củ Lát cắt dùng để đánh giá đổi màu gây héo rũ Fusarium 1- Củ hoàn toàn sạch, sáng khơng có đổi màu bó mạch 2- Có điểm riêng biệt đổi màu mơ bó mạch 3- Đổi màu chiếm 1/3 phần mơ bó mạch 4- Đổi màu chiếm 1/3 đến 2/3 mơ bó mạch 5- Đổi màu chiếm nhiều 2/3 mơ bó mạch 6- Hầu hết đổi màu đổi màu bẹ thân giả Mẫu bệnh thân giả củ bị bệnh cần thu thập theo cách sau (Phụ lục 3, hình 1) gửi quan giám định để phân loại mầm bệnh Hình 1: Các bước tách mẫu để kiểm tra bệnh héo rũ Fusarium oxysporum f sp cubense gây (Theo K Pegg, QDPI) PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN ĐÁNH GIÁ BỆNH ĐỐM LÁ SIGATOKA Bảng 1: Các tiêu đánh giá bệnh Sigatoka đồng ruộng A Trồng E Thu hoạch 1- Ngày trồng 10- Mức độ nhiễm bệnh B Giai đoạn phát triển  11- Thời gian từ trồng đến thu hoạch (từ tháng thứ đến trổ hoa) 12- Độ cao chồi lúc thu hoạch 2- Thời gian bệnh phát triển 13-Trọng lượng buồng lúc thu hoạch 3- Lá non nhiễm bệnh 14- Số nải buồng 4- Tỉ lệ phát sinh 15- Số buồng 5- Mức độ nhiễm bệnh 16- Trọng lượng trung bình (6 tháng sau trồng) (lúc thu hoạch) C Trỗ hoa F Yếu tố môi trường 6- Mức độ nhiễm bệnh 17- Số liệu môi trường 7- Chiều cao (tính đến buồng) G Yếu tố nông học 8-Thời gian từ lúc trồng 18- Số liệu thực tiễn quản lí đến trỗ buồng D Từ trỗ buồng đến thu hoạch H Yếu tố bệnh 9- Lá non bị bệnh 19- Bệnh Sigatoka Hướng dẫn chi tiết đánh giá tiêu bảng 1: 1- Thời gian trồng Tính từ lúc đặt thí nghiệm 2- Thời gian phát triển bệnh (DDT) - Đánh giá bệnh tháng thứ sau trồng - Cây trồng sát bờ không dùng để đánh giá - Cây cần theo dõi lần tuần - Cây có búp giai đoạn B (phụ lục 4, hình 3) chọn để đánh giá (lá búp to dài 10 cm chưa đến độ dài nhất) - Lá cần theo dõi lần tuần, đến nốt đốm thứ 10 nhiều Thời gian xuất vết đốm già cần đánh giá chúng xuất lần theo dõi + Các nốt đốm già Sigatoka đen xác định rõ giai đoạn (hướng dẫn1) + Các nốt đốm già Sigatoka vàng xác định giai đoạn (hướng dẫn 2) - Quá trình cần nhắc lại tuần, có nghĩa tuần có búp giai đoạn B cần chọn để quan sát Quan sát để kiểm tra 10 vết đốm già cần làm lần tuần 3,9- Lá non bị đốm (YLS) - Đây số liệu 10 nhiều nốt đốm già (hay vết hoại tử) mở hoàn toàn vùng hoại tử lớn với 10 điểm có màu sáng bị khơ - Nốt đốm già bệnh Sigatoka đen đánh giá giai đoạn (hướng dẫn 1) - Nốt đốm già bệnh Sigatoka vàng đánh giá giai đoạn 6(hướng dẫn 2) - Những thông tin nên ghi lại chọn để xác định thời gian phát triển bệnh - Sau trỗ bơng, ngừng phát sinh số liệu theo dõi cần ghi lại tuần thu hoạch 4-Tỷ lệ phát sinh (LER) - Tỉ lệ nên tính đặn (hàng tháng) thí nghiệm liên quan, tháng sau trồng kết thúc theo dõi lúc hoa - LER làm riêng khơng trùng với mục (DDT) - LER biểu thị " số sinh tuần" giá trị nhỏ - Các số liệu DDT, YLS LER nêu bảng Bảng 2: Các số liệu DDT, YLS LER Ngày ghi Số liệu 10 Thời gian phát nhận búp nhiều triển bệnh giai đoạn B đốm già (ngày) YLS tính theo ngày cột Lá xuất LER/ tuần thời gian ghi cột 5,6,10- Mức độ nhiễm bệnh Đánh giá mức độ nhiễm bệnh sigatoka sử dụng hệ thống tính Gauhl cải tiến Stover (xem phụ lục 4, hình 2) Tỉ lệ vùng bị phá huỷ mầm bệnh Sigatoka cần theo dõi sử dụng bảng Bảng 3: Đánh giá mức độ nhiễm bệnh theo thời kì phát triển Số 1* 10 11 12 13 14 tháng 0 2 6 - - Trỗ buồng 0 2 - 6 - - Thu hoạch 5 6 - - - - - - - Gđ st&pt * - Lá thứ mở hồn tồn = Khơng có triệu chứng = Nhỏ 1% diện tích phiến bị nhiễm bệnh (chỉ có vệt dài có đến 10 vết đốm ) = Có từ 1-5% diện tích phiến bị nhiễm bệnh = Có từ 6-15% diện tích phiến bị nhiễm bệnh = Có từ 16-33% diện tích phiến bị nhiễm bệnh = Có từ 34-50% diện tích phiến bị nhiễm bệnh = Có từ 51-100% diện tích phiến bị nhiễm bệnh (-) = Lá bị héo, chết treo thân giả (lá khơng tính bảng đánh giá) Chỉ số nhiễm bệnh đánh giá cho theo dõi, tính theo cơng thức sau: Id = Σ n.b ( N -1 ) T x 100 Id = Chỉ số nhiễm bệnh b = Điểm đánh giá bệnh n = Số mức độ bệnh T = Tổng số theo dõi bệnh N = Số thang điểm dùng (7) Ví dụ: Ở giai đoạn trỗ buồng theo số điểm thu bảng ta có: Id = 3(0) + 1.(1) + 2.(2) + 1.(4) + 1.(5) + 3.(6) (7 -1).11 ( Chỉ số Dr R Romaro lập CORBANA ) x 100 = 1+4 + + +18 x11 = 48,5 Số liệu nông học ghi theo bảng 4: Bảng 4: Số liệu nông học Ngày trồng Ngày trỗ hoa Số ngày từ ngày trồng đến trỗ hoa Chiều cao trỗ hoa (m) Ngày thu Số ngày từ trồng đến thu hoạch Chiều cao lúc thu hoạch Trọng lượng buồng (kg) Số nải/buồng Số quả/buồng Trọng lượng trung bình (g) Số liệu môi trường (17) theo bảng 5: - Nhiệt độ, độ ẩm, lượng mưa, chất đất thu thập nhờ trạm, trung tâm nghiên cứu gần -Số liệu bón phân, tưới tiêu, bệnh tuyến trùng sâu đục thân, củ cần ghi lại Bảng 5: Số liệu môi trường Tuần Lượng mưa (mm) Nhiệt độ cao Nhiệt độ thấp Nhiệt độ trung bình Độ ẩm cao Độ ẩm thấp Độ ẩm trung bình Số ngày mưa Số mưa trung bình Độ ẩm đạt đến 90 % Hình 3: Các giai đoạn phát triển búp từ xuất đến mở Giai đoạn A: Búp cao khoảng 10 cm lộ khỏi bẹ Giai đoạn B: Búp to chưa đạt tới độ dài tối đa Giai đoạn C: Búp tự hoàn toàn, nới lỏng độ đọ dài đạt cao Giai đoạn D: Búp bắt đầu mở chưa hoàn toàn Giai đoạnE: Phần mở rộng phần mở phần Hướng dẫn 1: Triệu chứng đốm Sigatoka đen - Giai đoạn 1: triệu chứng bệnh xuất với nốt nhỏ màu trắng bạc vàng, nhìn thấy quan sát từ mặt - Giai đoạn 2: xuất sọc mầu nâu, nhìn thấy mặt lá, muộn xuất phía mặt tạo thành sọc vằn Màu sắc sọc thay đổi nhanh sang màu nâu chuyển sang màu đen mặt lá, mặt có màu nâu - Giai đoạn 3: Khác với giai đoạn trước độ lớn Các sọc trở nên dài, rộng to từ 2-3cm - Giai đoạn 4: xuất mặt nốt màu nâu, mặt có màu đen - Giai đoạn 5: đốm có hình elip, hầu hết có màu đen trải rộng khắp mặt Xung quanh bao quầng màu vàng, bắt đầu xẹp xuống - Giai đoạn 6: tâm vết đốm khô đi, chuyển sang màu xám sáng bọc vòng màu đen, bọc quầng màu vàng sáng Các đốm nhìn thấy sau bị khơ Hướng dẫn 2: Triệu chứng đốm Sigatoka vàng Giai đoạn phát sinh vạch Các đốm nhìn thấy mắt thường hạt nhỏ li ti màu xanh vàng (khoảng 1x1,5mm) Giai đoạn sọc: sọc phát sinh tăng kích cỡ (chủ yếu tăng chiều dài chiều rộng), giữ màu xanh vàng Giai đoạn sọc: sọc bắt đầu phát triển rộng tăng chiều dài, đốm chuyển màu đỏ sẫm, thường vết đốm Giai đoạn đốm: vạch đốm chuyển sang màu nâu sẫm Trong khoảng thời gian 24 quầng ngấm nước màu nâu sáng hình thành chung quanh đốm bị phồng rộp Quầng đặc biệt dễ nhìn ngược ánh nắng mặt trời vào buổi sáng Đốm tăng đáng kể kích cỡ giai đoạn Vạch đốm đạt đến giai đoạn phát rõ ràng vết đốm Giai đoạn đốm: phần nâu tối đốm co lại, xuất vết lõm, quầng ngấm nước màu nâu sáng chuyển vào màu nâu tối Giai đoạn vết đốm: vết đốm phát triển hoàn toàn, vết lõm chuyển sang màu xám quầng bọc xung quanh ln có màu nâu sẫm đen Vết đốm bao bọc đường viền nhìn rõ Như vết đốm lại rõ bị chết Vòng viền màu tối đốm lại dễ phân biệt PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN XÁC ĐỊNH BỆNH THỐI VI KHUẨN(BỆNH MOKO) Bệnh Moko vi khuẩn Pseudomonas solanacearum gây ra, bệnh phát tất giai đoạn phát triển Để kiểm tra đánh giá nhiễm bệnh thối vi khuẩn mẹ chồi (mầm) cần dựa vào triệu chứng hình thái phân lập mẫu bệnh môi trường vi sinh chọn lọc Triệu chứng bệnh Triệu chứng bên Các triệu chứng bên thường khác tuỳ thuộc vào giai đoạn phát triển bệnh, phương thức nhiễm bệnh chủng vi khuẩn gây bệnh Ở giống chuối tiêu, vi khuẩn gây bệnh thường lây nhiễm thơng qua rễ củ chuối Triệu chứng phát sớm trưởng thành: bị vàng nhanh Các già bị thối gãy gục phần gốc cuống Các mảng trắng hay xanh nhạt phát triển vài non nhất, sau trở nên nhũn hoại tử Sự phát triển buồng bị ngừng Ở buồng số bị chín ép hay bị nứt Các chồi mầm từ mẹ bị héo, bị màu Triệu chứng bên Các bó mạch thân giả bị màu, trước tiên xuất màu kem hay màu vàng, sau chuyển sang màu nâu đen Hiện tượng thấy toàn Ở trỗ buồng tượng xuất cuống gốc cuống non, bánh tẻ Nếu dùng dao cắt ngang chuối thấy lớp vòng màu nâu đen sát lớp vỏ xanh Sự màu bó mạch xuất củ, rễ hệ sau PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN ĐÁNH GIÁ BỆNH TUYẾN TRÙNG (BỆNH NEMATODE) Bệnh tuyến trùng Radopholus similis gây Cách lấy mẫu Thời điểm tốt để lấy mẫu mẹ rụng bắc, khơng có rễ hình thành rễ cũ Dùng xẻng để lấy phần củ có rễ phía bên (tránh làm tổn thương mẹ) Mẫu lấy nên có kích thước 25x25x25cm (xem mơ tả phụ lục 6, hình 4) Lấy 100 rễ từ 20 mẫu rửa nhẹ Dùng dao cắt đôi dọc theo chiều dài rễ Để đánh giá mức độ nhiễm bệnh sử dụng bảng dựa vào vết tổn thương màu đỏ nâu vùng vỏ rễ Bảng 6: Đánh giá mức độ nhiễm bệnh tuyến trùng rễ chuối Tỷ lệ rễ bị tổn thương (%) Mức độ nhiễm bệnh không bị tổn thương 1-25% 26-50% 51-75% 76-100% Hình 4: Cách lấy mẫu để kiểm tra bệnh tuyến trùng PHỤ LỤC PHỤ LỤC CÁC GIAI ĐOẠN CHĂM SÓC CÂY CHUỐI NI CẤY MƠ Ở VƯỜN ƯƠM Chăm sóc chuối nuôi cấy mô vườn ươm bầu đất Thời gian vườn ươm kéo dài 20-25 ngày tuỳ theo thời tiết trồng bầu kéo dài 50-60 ngày Yếu tố quan trọng giai đoạn vườn ươm việc cung cấp nước chiếu sáng - Chế độ nước tưới liên quan tới độ ẩm khơng khí hàm lượng nước hỗn hợp giá thể vườn ươm Trong 2-3 ngày đầu độ ẩm khơng khí phải trì 90% sau giảm dần Cây cần che phủ để tăng độ ẩm bóng mát, giảm nhiệt độ Độ ẩm đất thường xuyên giữ 70-80% - Giá thể giữ ẩm(nhưng không ẩm gây thối rễ thân giả) Trong ngày đầu cường độ chiếu sáng nên giảm tới 80% cách dùng lưới che, sau tuần giảm 60% - Khoảng tuần trước đưa trồng ruộng sản xuất cần bỏ hết lưới che để cứng cáp, quen dần với điều kiện đồng ruộng - Nhiệt độ thích hợp giai đoạn từ 25-32 0C - Việc bổ sung chất dinh dưỡng cho khoảng 10 ngày sau chuyển vườn ươm thực cách phun dung dịch khoáng MS có nồng độ giảm nửa sau tuần lần vòng tuần - Trong điều kiện bình thường, sau 4-5 ngày rễ xuất mọc vòng 1015 ngày Cây vườn ươm có rễ phát triển chuyển sang trồng bầu đất - Sau tuần chuyển bầu điều kiện chiếu sáng tự nhiên - Đối với túi bầu sau hồi xanh sử dụng phân đạm ure (N) : lân (P2O5) : kali (K2O), nồng độ 0,2-0,4% (tức 2-4 g hỗn hợp dinh dưỡng cho lít nước) Dùng bình bơm phun ướt tồn Định kỳ tuần phun lần theo tỷ lệ 2:1:1 Quản lý phòng trừ sâu bệnh Các bệnh nấm côn trùng gây hại thường không xuất giai đoạn vườn ươm vòng 68 tuần Tuy nhiên, chuối nuôi cấy mô giai đoạn thường hay bị thối gốc, gây Erwinia spp với triệu chứng ngừng sinh trưởng, khơng hình thành mới, xuất vết đốm, vàng, dẫn đến chết Ngồi ra, chuối ni cấy mơ bị loại rệp, côn trùng công, cần phải có biện pháp phòng chống cách: - Xung quanh khu vực vườn ươm cần phải làm cỏ chuối cũ - Có thể sử dụng Thiabendazole, benlat C, Rovral, Tilt để phun phòng nhiễm bệnh nấm Phun thuốc trừ sâu khoang, rệp dùng Dipterex, Padan Đánh bả ốc sên, cóc, nhái, chuột cắn ăn chuối  ... biến dị sinh lý, hình thái xuất chu kỳ nhân giống tổng số mẫu thu cuối chu kỳ Tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô 3.1 Tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô ống nghiệm - Đúng giống phép nhân (đã nêu mục 1.1) -... trắng, dài từ 2-4 cm, có 3-4 thật 3.2 Tiêu chuẩn giống nuôi cấy mô giai đoạn vườn ươm xuất vườn - Cây giống nuôi cấy mô vườn ươm (10- 15 ngày sau trồng): cao 7 -10 cm, đường kính thân giả 5-7 mm,... chiết từ chuối Nhỏ 100 ml dịch chiết vào lỗ giếng, đánh dấu theo sơ đồ sau đặt đĩa vào hộp kín, ủ nhiệt độ phòng hay để qua đêm oC Chuẩn bị dung dịch enzym Dung dịch enzym chuẩn bị 10 phút trước dùng,