luận văn thạc sĩ nghiên cứu tinh chế và phân tích đặc điểm cấu trúc của fucoidan từ rong nâu sargassum oligocystum

Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân dƣới hƣớng dẫn TS Phạm Đức Thịnh tham khảo thêm tài liệu đáng tin cậy, có nguồn gốc rõ ràng Các số liệu, kết luận văn hoàn tồn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Nha Trang, ngày 12 tháng 12 năm 2019 Tác giả luận văn Lê Đỗ Thùy Vi Lời cảm ơn Trong trình nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận đƣợc nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực đồng nghiệp bạn bè Đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Phạm Đức Thịnh gợi mở cho tơi ý tƣởng nghiên cứu, tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện tốt giúp hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam thông qua đề tài Hợp tác quốc tế mã số QTRU04.06/18-19 hỗ trợ kinh phí thực đề tài luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Ban chủ nhiệm Khoa Hóa học Phòng Đào tạo tổ chức cơng tác giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thiện luận văn thủ tục cần thiết Tôi chân thành cảm ơn giúp đỡ tạo điều kiện mặt Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Ứng dụng Công nghệ Nha Trang nhƣ anh chị em cơng tác phòng Hóa Phân tích tạo điều kiện tốt để làm thực nghiệm động viên, giúp đỡ để tơi hồn thành đề tài luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn tới ban giám hiệu trƣờng Đại học Khánh Hòa, Khoa Khoa học Tự nhiên Công nghệ tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin gửi lời tri ân tới gia đình, bạn bè, ngƣời thân động viên giúp đỡ suốt q trình học tập hồn thành luận văn Nha Trang, ngày 12 tháng 12 năm 2019 Xin chân thành cảm ơn! Lê Đỗ Thùy Vi Danh mục kí hiệu chữ viết tắt Carbon-13 NMR Spectroscopy Phổ CHTHN Carbon 13 DMSO Dimethylsulfoxide Dimethylsulfoxid EtOH Ethanol Ethanol Fuc Fucose Đƣờng fucose Fucf Fucofuranose Fucofuranose Fucp Fucopyranose Fucopyranose Galactose Đƣờng galactose Gel permeation chromatography Sắc ký lọc gel Gluc Glucose Đƣờng glucose GlucA Glucuronic Axit Axit glucuronic HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng cao áp Proton NMR Spectroscopy Phổ CHTHN proton IR Infrared Spectroscopy desorption/ionization Phổ hồng ngoại Man Mannose Đƣờng mannose MeOH Methanol Methanol NMR Nuclear Magnetic Cộng hƣởng từ hạt nhân 13 C-NMR Gal GPC H-NMR Resonance (CHTHN) TFA Trifluoroacetic axit Axit trifluoroacetic Xyl Xylose Đƣờng xylose DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hố học (%) số lồi rong biển 10 Bảng 1.2 Thành phần hóa học số fucoidan 21 Bảng 1.3 Sự phân bố trọng lƣợng phân tử fucoidan 29 Bảng 1.4 Cấu trúc hóa học fucoidan từ số lồi rong nâu 39 Bảng 1.5 Hàm lƣợng, thành phần hóa học KLPT trung bình mẫu fucoidan phân lập từ loài rong nâu Việt Nam 48 Bảng 1.6 Hoạt tính gây độc tế bào mẫu fucoidan dòng tế bào ung thƣ gan Hep-G2 ung thƣ mô liên kết RD 50 Bảng 2.1 Các đỉnh phổ đặc trƣng fucoidan phổ hồng ngoại 59 Bảng 3.1 Hiệu thu nhận fucoidan chiết dung môi khác 67 Bảng 3.2 Hàm lƣợng fucoidan thu nhận từ 08 loài rong nâu Việt Nam 69 Bảng 3.3.Hàm lƣợng thu nhận fucoidan tổng phân đoạn 76 Bảng 3.4 Thành phần hóa học fucoidan thu nhận từ rong S oligocystum 76 Bảng 3.5 Thành phần hóa học phân đoạn chiết từ rong S oligocystum 79 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Bản đồ vị trí khu vực điều tra phân bố số chi rong nâu tỉnh Khánh Hòa 14 Hình 1.2 Cấu trúc fucoidan từ F vesiculosus đƣợc mô tả vào năm 1950 22 Hình 1.3 Cấu trúc fucoidan có sunfat vị trí liên kết 3-O-linked từ lồi rong E Kurome đƣợc mơ tả vào năm 1991 23 Hình 1.4 Cấu trúc fucoidan phân đoạn F32 tách từ rong nâu Hizikia fusiforme 25 Hình 1.5 Cấu trúc phân đoạn fucoidan tách phân lập từ rong nâu A.nodusum 25 Hình 1.6 Cấu trúc phân đoạn Fucoidan tách phân lập từ rong nâu Cladosiphon okamuranus 26 Hình 1.7 Cấu trúc phân đoạn fucoidan tách phân lập từ rong nâu Chorda filum 27 Hình 1.8 Cấu trúc fucoidan từ Fucus serratus 28 Hình 1.9 Cấu trúc fucoidan từ Sargassum polycystum 45 Hình 1.10 Mảnh cấu trúc fucoidan chiết tách từ rong Turbinaria decurrens 49 Hình 1.11 Sơ đồ cấu trúc deS-2, deS-4, deS-6 rong Sargassum aquifolium 51 Hình 2.1 Mẫu rong Sargassum oligocystum 54 Hình 2.2 Sơ đồ chiết theo quyền Nga (Paten WO 2005,014657) 56 Hình 2.3 Độ dịch chuyển hóa học phổ NMR polysaccharide 60 Hình 3.1 Sắc ký đồ GPC fucoidan từ rong nâu Sargassum oligocystum 70 Hình 3.2 Phân đoạn fucoidan đƣợc chiết từ rong S.oligocystum sắc ký trao đổi anion cột DEAE-cellulose 72 Hình 3.3 Sắc ký đồ HPLC mẫu đƣờng đơn chuẩn 74 Hình 3.4 Sắc ký đồ HPLC mẫu fucoidan chiết tách từ rong S.oligocystum 74 Hình 3.5 Sắc ký đồ HPLC xác định thành phần đƣờng đơn phân đoạn F4 75 Hình 3.6 Sắc ký đồ HPLC xác định thành phần đƣờng đơn phân đoạn F5 75 Hình 3.7 Phổ hồng ngoại IR phân đoạn F4(Sargassum oligocystum) 81 Hình 3.8 Phổ hồng ngoại IR phân đoạn F5(Sargassum oligocystum) 82 Hình 3.9 Phổ 1H-NMR phân đoạn F4 84 Hình 3.10 Phổ 1H-NMR phân đoạn F5 84 Hình 3.11 Phổ 13C-NMR phân đoạn F4 85 Hình 3.12 Phổ 13C-NMR phân đoạn F4 85 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ RONG NÂU 1.1.1 Giới thiệu rong biển 1.1.2 Giới thiệu rong nâu 10 1.1.2.1 Phân loại phân bố rong nâu giới 11 1.1.2.2 Phân loại phân bố rong nâu Việt Nam 12 1.1.3 Thành phần hóa học rong Nâu 15 1.1.3.1 Polysaccharide 15 1.1.3.2 Một số hợp chất khác 18 1.2 TỔNG QUAN VỀ FUCOIDAN 19 1.2.1 Giới thiệu chung fucoidan 19 1.2.2 Thành phần hóa học fucoidan số loài rong nâu 20 1.2.3 Cấu trúc hóa học fucoidan 22 1.2.4 Tính chất hóa lý fucoidan 28 1.2.5 Hoạt tính sinh học ứng dụng fucoidan 29 1.2.5.1 oạt t nh chống ng t máu chống hu ết khối 29 1.2.5.2 oạt t nh chống virus 32 1.2.5.3 oạt t nh kháng u iều hòa miễn dịch 33 1.2.5.4 oạt t nh chống ox hóa 34 1.2.5.5 Giảm lipid máu 35 1.2.5.6 Kháng viêm 35 1.2.5.7 Chống lại bệnh gan 36 1.2.5.8 oạt t nh kháng khuẩn 36 1.2.5.9 ác d ng giảm l ợng ng hu ết máu 37 1.2.5.1 Các ng d ng c a fucoidan 37 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM LIÊN QUAN ĐẾN NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CỦA LUẬN VĂN 38 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 38 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 43 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 53 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 53 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 55 2.2.1 Phƣơng pháp chiết tách phân đoạn fucoidan 55 2.2.1.1 Ph ơng pháp chiết tách fucoidan từ rong nâu 55 2.2.1.2 Ph ơng pháp phân oạn fucoidan 55 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu cấu trúc fucoidan 57 2.2.2.1 Ph ơng pháp xác ịnh hàm l ợng tổng carboh drate 57 2.2.2.2 Ph ơng pháp xác ịnh thành phần monosaccharide 57 2.2.2.3 Ph ơng pháp xác ịnh hàm l ợng sulfate 57 2.2.2.4 Ph ơng pháp xác ịnh hàm l ợng uronic axít 57 2.2.2.5 Sắc ký thẩm thấu gel (GPC) 57 2.2.2.6 Ph ơng pháp phổ hồng ngoại IR 58 2.2.2.7 Ph ơng pháp phổ cộng h ởng từ hạt nhân NMR 60 2.3 THỰC NGHIỆM 62 2.3.1 Chiết tách phân đoạn tinh chế fucoidan từ rong nâu 62 2.3.2 Phân tích hàm lƣợng tổng carbohydrate 64 2.3.3 Phân tích thành phần monosaccharide 64 2.3.4 Phân tích hàm lƣợng sulfate 65 2.3.5 Phân tích hàm lƣợng uronic axít 65 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 66 3.1 CHIẾT TÁCH VÀ PHÂN LẬP FUCOIDAN TỪ RONG NÂU 66 3.2 TÁCH PHÂN ĐOẠN VÀ PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN HĨA HỌC CÁC PHÂN ĐOẠN FUCOIDAN 70 3.3 PHÂN TÍCH ĐẶC TRƢNG CẤU TRÚC CỦA FUCOIDAN 80 3.3.1 Các đặc trƣng cấu trúc thu đƣợc từ phổ hồng ngoại IR 80 3.3.2 Các đặc trƣng cấu trúc thu đƣợc từ phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NMR 83 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 87 4.1 KẾT LUẬN 87 4.2 KIẾN NGHỊ 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO 92 93 11 Trần Đình Toại, Châu Văn Minh, 2004, Tiềm rong biển Việt Nam, NXBKHKT, Hà Nội 12 Li Bo, Fei Lu, Xinjun Wei and Ruixiang Zhao, 2008, Fucoidan: Structure and Bioactivity, Molecules, 13, pp 1671-1695 13 Huynh QN, Nguyen HD, 1998, The seaweed resources of Vietnam, In Critchley AT, Ohno M, Seaweed Resources of the World Japan International Cooperation Agency, Yokosuka, pp 62-69 14 Ngô Quốc Bƣu, Nguyễn Hữu Dinh, Huỳnh Quang Năng, Bùi Minh Lý cs, 1999, Báo cáo nghiệm thu đề tài Điều tra bản: “Hiện trạng nguồn lợi rong biển kinh tế ven biển phía Nam Việt Nam”, Nghiệm thu ội ồng cấp trung tâm K N CNQG Nội, tr 1-41 15 Zvyagintseva Tatiana N, Nataliya M Shevchenko, Alexander O Chizhov, Tatiana N Krupnova, Elena V Sundukova, Vladimir V Isakov, 2003, Water-soluble polysaccharides of some far-eastern brown seaweeds Distribution, structure, and their dependence on the developmental conditions, J Exp Mar Biol Ecol 294, pp 1-13 16 Kylin, H, 1913, Zur biochemie der Meersalgen, Z Physiol, Chem, 83, pp 171 -197 17 Ejaz Hussain, Li-Jun Wang, Bo Jiang, Saba Riaz, Ghazala Yasmeen Buttd and Da-Yong Shia, 2015, Components of brown seaweeds are potential candidate for cancer therapy - a review, RSC Advances, pp 122 18 Hồ Đức Cƣờng, 2014, Nghiên c u cấu tr c khảo sát hoạt t nh sinh học c a fucoidan alginate từ hai loài rong nâu Sargassum henslowianun Sargassum swartzii c a Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Hóa học, Đại học Bách Khoa Hà Nội 94 19 Park, Y.H., Jang D.S and Kim S.B, 1997, Utilization of marine products (2nd edition); Chapter 4, Seaweed composition, Hyoungsul press, pp 283-336 20 Koo Jae-Geun, 199, Structural Characterization of Purified Fucoidan from Laminaria religiosa, Sporophylls of Undaria pinnatifida, Hizikia fusiforme and Sagassum fulvellum in Korea, Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, Volume 30, Issue 1, pp 128-131 21 Li, B.; Xu, S.Y, 2007, Structural investigation of oligosaccharides in partial acid hydrolyzed products of fucoidan isolated from Hizikia fusiforme, Nat Prod Res Dev, 19, pp 550-553 22 Percival, E.G.V and Ross, A.G, 1950, Fucoidin Part I: The isolation and purification of fucoidin from brown seaweeds Journal of the Chemical Society, pp 717-720 23 Percival, E and McDowell, R.H, 1967, Chemistry and enzymology of marine algal polysaccharides, Academic Press, London and NEW YORK, pp 6-28 & 73-96 &157-174 24 Dillon T., Kristensen, K and O'hEcoha, C, 1953, The seed mucilage of Ascophyllum nodosum, Proceedings of the Royal Irish Academy, Section B: Biological, Geological, and Chemical Science, 55, pp 189194 25 M.I.Bilan, E.V.Vinogradova, E.A.Tsvetkova, A.A.Grachev, A.S.Shashkov, N.E, A.I.Usov, 2008, A sulfated glucuronofucan containing both fucofuranose and fucopyranose residues from the brown alga Chordaria flagelliformis Carbohydrate Research, 343 (15), pp 2605-2612 26 Bilan M.I., Grachev A.A., Shashkov A.S, Thuy T.T.T, Van T.T.T, Ly B.M, Nifantiev N.E, Usov A.I, 2013, Preliminary investigation of 95 a highly sulfateed galactofucan fraction isolated from the brown alga Sargassum polycystum, Carbohydrate Research, 377, pp 48-57 27 Chevolot, L.; Mulloy, B.; Racqueline, J, 2001, A disaccharide repeat unit is the structure in fucoidans from two species of brown algae, Carbohydrate Research, 330, pp 529-535 28 Bilan, M.I.; Grachev, A.A.; Ustuzhanina, N.E.; Shashkov, A.S.; Nifantiev, N.E.; Usov, A.I, 2004, A Highly regular fraction of a fucoidan from the brown seaweed Fucus distichus L, Carbohydrate Research, 339, pp 511-517 29 Nishino, T., Nishioka, C., Ura, H and Nagumo, T, 1994, Isolation and partial characterization of a novel amino sugar-containing fucan sulfate from commercial Fucus vesiculosus fucoidan, Carbohydrate Research, 255, pp 213-224 30 Nishino, T., Aizu, Y., & Nagumo, T, 1991, The influence of sulfate content and molecular weight of a fucan sulfate from the brown seaweed Ecklonia kurome on its antithrombin activity, Thrombosis Research, 64(6), pp 723-731 31 Seng Joe Lim, Wan Mustapha, Wan AidaMohamad, Yusof Maskat Jalifah, Latip Khairiah, Haji Badri, Osman Hassan, Bohari M.Yamin, 2016, Characterisation of fucoidan extracted from Malaysian Sargassum binderi, Food Chemistry, 209(15), pp 267-273 32 Chevolot, L.; Foucault, A.; Chauber, F, 1999, Further data on the structure of brown seaweed fucans: relationships with anticoagulant activitity, Carbohydrate Research, 319, pp 154-165 33 Daniel, R., Berteau, O., Chevolot, L., Varenne, A., Gareil, P and Goasdoue, N, 2001, Regioselective desulfateion of sulfated Lfucopyranoside by a new sulfoesterase from the marine mollusk Pecten maximus: Application to the structural study of algal fucoidan 96 (Ascophyllum nodosum), European Journal of Biochemistry, 268, pp 5617-5626 34 Daniel, R.; Chevolot L.; Carrascal M.; Tissot, B.; Mourão, P.A.S.; Abian, J, 2007, Electrosprayionization oligosaccharides derived from fucoidan of mass spectrometry of Ascophyllum nodosum, Carbohydrate Research 342, pp 826-834 35 Nagaoka, M., Shibata, H., Kimura-Takagi, I., Hashimoto, S., Kimura, K., Makino, T., Aiyama, R., Ueyama, S., and Yokokura, T, 1999, Structural study of fucoidan from Cladosiphon okamuranus Tokida, Glycoconj J 16 (1), pp 19-26 36 Daniel, R.; Berteau, O.; Jozefonvicz, J.; Goasdoue, N, 1999, Degradation of algal (Ascophyllum nodosum) fucoidan by an enzymatic activity contained in digestive glands of the marine mollusk Pecten maximus, Carbohydrate Research, 322, pp 291-297 37 Bilan, M.I, Grachev A.A., Ustuzhanina N.E, 2002, Structure of a fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C Ag, Carbohydrate Research, 337, pp 719-730 38 Bilan, M.I.; Grachev, A.A.; Shashkov, A.S.; Nifantiev, N.E.; Usov, A.I, 2006, Structure of a fucoidan from the brown seaweed Fucus serratus L Carbohydrate Research, 341, pp 238-245 39 Qiu, X.D.; Amarasekara, A.; Doctor, V, 2006, Effect of oversunphation on the chemical and biological properties of fucoidan, Carbohydrate Polymers, 63, pp 224-228 40 Hemmingson, J.A.; Falshaw, R.; Furneaux, R.H.; Thompson, K, 2006, Structure and antiviral activity of the galactofucan sunphates exppacted from Undaria pinnatifida (Phaeophyta), J Appl Phycol, 18, pp 185-193 97 41 Mandal, P.; Mateu, C.G.; Chattopadhyay, K.; Pujol, C.A.; Damonte, E.B.; Ray, B, 2007, Structural features and antiviral activity of sulphated fucans from the brown seaweed Cystoseira indica Antivir, Chem Chemother, 18, pp 153-162 42 Silva, T.M.A.; Alves, L.G.; Queiroz, K.C.S.; Santos, M.G.L.; Marques, C.T.; Chavante, S.F.; Rocha, H.A.O.; Leite, E.L, Partial characterization and anticoagulant activity of a heterofucan from the brown seaweed Padina gymnospora, Braz J Med Biol Res, 38, pp 523-533 43 Dohura, K.; Kuge, T.; Uomoto, M.; Nishizawa, K.; Kawasaki, Y.; Iha, M, 2007, Prophylactic effect of dietary seaweed fucoidan against enteral prion infection, Antimicrob Agents Chemother, 51, pp 22742277 44 Dobashi, K.; Nishino, T.; Fujihara, M, 1989, preliminary characterization of Isolation and fucose-containing sunphated polysaccharides with blood-anticoagulant activity from seaweed Hizikia fusiforme, Carbohydrate Research, 194, pp 315-320 45 Nishino, T.; Yokoyama, G.; Dobahi, K, 1989, Isolation, purification and characterization of fucose-containing sunphated polysaccharides from the brown seaweed Ecklonia kurome and their bloodanticoagulant activities, Carbohydrate Research, 186, pp 119-129 46 Phạm Đức Thịnh, 2015, Nghiên c u phân t ch thành phần, cấu tr c hóa học c a fucoidan có hoạt t nh sinh học từ số lồi rong nâu Vịnh Nha Trang, Luận án tiến sĩ Hóa học, Viện Hóa học, Hà Nội 47 Mourão, P.A.S, 2004, Use of sunphated fucans as anticoagulant and antithrombotic agents: future perspectives, Curr Pharmaceut, Des, 10, pp 967-981 98 48 Ponce, N.M.A.; Pujol, C.A.; Damonte, E.B, 2003, Fucoidans from the brown seaweed Adenocystis uppicularis: extraction methods, antiviral activity and structural studies, Carbohydrate Research, 338, pp 153-165 49 Hemmingson, J.A., Falshaw, R, Furneaux, R.H, Thompson, K, 2006, Structure and antiviral activity of the galactofucan sunphates exppacted from Undaria pinnatifida (Phaeophyta), J Appl Phycol, 18, pp 185-193 50 Mandal, P.; Mateu, C.G.; Chattopadhyay, K.; Pujol, C.A.; Damonte, E.B.; Ray, B, 2007, Structural features and antiviral activity of sulphated fucans from the brown seaweed Cystoseira indica, Antivir, Chem Chemother, 18, pp 153-162 51 Hayashi, K.; Nakano, T.; Hashimoto, M.; Kanekiyo, K.; Hayashi, T, 2008, Defensive effects of a fucoidan from brown alga Undaria pinnatifida against herpes simplex virus infection, Int, Immunopharmacol, 8, pp 109-116 52 Doh-ura, K.; Kuge, T.; Uomoto, M.; Nishizawa, K.; Kawasaki, Y.; Iha, M, 2007, Prophylactic effect of dietary seaweed fucoidan against enteral prion infection, Antimicrob, Agents Chemother, 51, pp 22742277 53 Shi, Z.Y.; Guo, Y.Z.; Wang, Z, 2000, Pharmacological activity of fucoidan from Laminaria japonic, J Shanghai Fish Univ, 9, pp 268271 54 Aisa, Y.; Miyakawa, Y.; Nakazato, T.; Shibata, H.; Saito, K.; Ikeda, Y.; Kizaki, M, 2004, Fucoidan induces apoptosis of human HS-Sultan cells accompanied by activation of caspase-3 and down-regulation of ERK pathways, Am J Hematol 78, pp 7-14 99 55 Cumashi, A.; Ushakova, N.A.; Preobrazhenskaya, M.E.; D'Incecco, A.; Piccoli, A.; Totani, L.; Tinari, N.; Morozevich, G.E.; Berman, A.E.; Bilan, M.I.; Usov, A.I.; Nadezhda E.; Grachev, A.A.; Sanderson, C.J.; Kelly, M.; Rabinovich, G.A.; Iacobelli, S, 2007, A comparative study of the anti-inflammatory, anticoagulant, antiangiogenic, and antiadhesive activities of nine different fucoidans from brown seaweeds, Glycobiology, 17, pp 541-552 56 Haneji, K.; Matsuda, T.; Tomita, M.; Kawakami, H.; Ohshiro, K.; Uchihara, J.; Masuda, M.; Takasu, N.; Tanaka, Y.; Ohta, T.; Mori, N, 2005, Fucoidan exppacted from Cladosiphon okamuranus Tokida induces apoptosis of human T-Cell leukemia virus type 1-infected TCell lines and primary adult T-Cell leukemia cells, Nuppit, Cancer, 52, pp 189-201 57 Maruyamaa, H.; Tamauchib, H.; Iizuka, M.; Nakano, T, 2006, The role of NK cells in antitumor activity of dietary fucoidan from Undaria pinnatifida Sporophylls (Mekabu), Planta Med, 72, pp 1415-1417 58 Wijesinghe, W A J P., & Jeon, Y J, 2011b, Biological activities and potential cosmeceutical applications of bioactive components from brown seaweeds: a review, Phytochemisppy Reviews, 10, pp 431–443 59 Wu, X.W.; Yang, M.L.; Huang, X.L.; Yan, J.; Luo, Q, 2004, Effect of Laminaria japonica polysaccharides on radioprotection and splenic lymphocyte apoptosis, Med J Wuhan Univ, 25, pp 239-241 60 Shimizu, J.; Wada-Funada, U.; Mano, H.; Matahira, Y.; Kawaguchi, M.; Wada, M, 2005, Proportion of murine cytotoxic T cells is increased by high molecular-weight fucoidan exppacted from Okinawa mozuku (Cladosiphon okamuranus), J Health Sci,51, pp 394-397 100 61 Kima, M.H.; Joo, H.G, 2008, Immunostimulatory effects of fucoidan on bone marrow-derived dendritic cells, Immunol Lett, 115, pp 138-143 62 Li, D.Y.; Xu, Z.; Huang, L.M.; Wang, H.B.; Zhang, S.H, 2001, Effect of fucoidan of L japonica on rats with hyperlipidaemia, Food Sci, 22, pp 92-95 63 Li, D.Y.; Xu, Z.; Zhang, S.H, 1999, Prevention and cure of fucoidan of L japonica on mice with hypercholesterolemia, Food Sci, 20, pp 45-46 64 Fu, X.Y.; Xue, C.H.; Ning, Y.; Li, Z.J.; Xu, J.C, 2004, Acute antihypertensive effects of fucoidan oligosaccharides prepared from Laminaria japonica on renovascular hypertensive rat, J Ocean Univ Qingdao, 34, pp 560-564 65 Saito, A., Yoneda, M.,Yokohama, S, Okada, M, Haneda, M, Nakamura, K, 2006, Fucoidan prevents concanavalin A-induced liver injury through induction of endogenous IL-10 in mice, Hepatol Research, 35(3), pp 190-198 66 Kawano, N.; Egashira, Y.; Sanada, H, 2007, Effect of dietary fiber in edible seaweeds on the development of D-galactosamine-induced hepatopathy in rats, J Nupp Sci Vitaminol (Tokyo), 53, pp 446450 67 Hayashi, K.; Nakano, T.; Hashimoto, M.; Kanekiyo, K.; Hayashi, T, 2008, Defensive effects of a fucoidan from brown alga Undaria pinnatifida against herpes simplex virus infection, Int Immunopharmacol, 8, pp 109-116 68 Nguyễn Duy Nhứt, Bùi Minh Lý, Thành Thị Thu Thủy, Nguyễn Mạnh Cƣờng, Trần Văn Sung, 2009, Nghiên cứu fucoidan có hoạt 101 tính gây độc tế bào tách từ rong nâu Sargasum swartzii phƣơng pháp phổ khối nhiều lần, ạp ch óa học ,47 (3), tr 300 - 307 69 Nguyễn Duy Nhứt, 2008, Nghiên c u thành phần hóa học hoạt t nh sinh học c a pol saccharide từ số lồi rong nâu tỉnh Khánh Hòa, Luận án tiến sỹ Hóa học, Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Hà Nội 70 M I BilanA N ZakharovaA A GrachevA S ShashkovN E NifantievA I Usov, 2007, Polysaccharides of algae: 60 Fucoidan from the pacific brown alga Analipus japonicus (Harv.) winne (Ectocarpales, Scytosiphonaceae), Russian Journal of Bioorganic Chemisppy, Volume 33, Issue 1, pp 38–46 71 Marais Marie-France , Jean-Paul Joseleau, 2001, A fucoidan fraction from Ascophyllum nodosum, Carbohydrate Research, 336 (2), pp 155-159 72 Chizhov, A.O.; Dell, A; Morris, H.R, 1999, A study of fucoidan from the brown seaweed Chorda filum, Carbohydrate Research, 320, pp 108-119 73 Usov A I ; Smirnova G P ; Bilan M I., 1998, Polysaccharides of brown alga Laminaria Saccharina (l.) lam asa source of fucoidan, Bioorganic chemisppy, 24 (6), pp 437-445 74 Adhikari Utpal Cecilia, G.Mateu, KausikChattopadhyay, Carlos A.Pujol, Elsa B.Damonte, BimalenduRay, 2006, Structure and antiviral activity of sulfated fucans from Stoechospermum Marginatum, Phytochemisppy, 67(22), pp 2474-2482 75 Daniel, R., Berteau, O., Chevolot, L., Varenne, A., Gareil, P and Goasdoue, N., 2001, Regioselective desulfation of sulfated Lfucopyranoside by a new sulfoesterase from the marine mollusk Pecten maximus, European Journal of Biochemistry, 268, pp 5617–5626 102 76 T.NishinoY.AizuT.Nagumo, 1991, The influence of sulfate content and molecular weight of a fucan sulfate from the brown seaweed Ecklonia kurome on its antithrombin activity, Thrombosis Research, 64(6), pp 723-731 77 Seng Joe Lim, Wan Mustapha, Wan AidaMohamad, Yusof Maskat Jalifah Latip Khairiah Haji Badri Osman Hassan Bohari M.Yamin, 2016, Characterisation of fucoidan extracted from Malaysian Sargassum binderi, Food Chemisppy, 209(15), pp 267-273 78 Roza V Usoltseva, Stanislav D Anastyuk, Natalia M Shevchenko, Valerii V Surits, Artem S Silchenko, Vladimir V Isakov, Tatiana N Zvyagintseva, Pham Duc Thinh, Svetlana P Ermakova, 2017, Polysaccharides from brown algae Sargassum duplicatum: The structure and anticancer activity in vitro, Carbohydrate Research 79 Roza V Usoltseva, Stanislav D Anastyuk, Irina A Ishina, Vladimir V Isakov, Tatiana N Zvyagintseva , Pham Duc Thinh, Pavel A Zadorozhny, Pavel S Dmitrenok, Svetlana P Ermakova, 2017, Structural characteristics and anticancer activity in vitro of fucoidan from brown alga Padina boryana, Carbohydrate Research 80 Thuy Thi Thanh Thu, Van Thi Thanh Tran, Yoshiaki Yuguchi, Ly Minh Bui and Tai Tien Nguyen, 2013, Structure of fucoidan from brown seaweed Turbina ornata as Studied by Elecppospray ionization Mass spectrometry (MSIMS) and Small Angle X-ray Scattering (SAXS) Techniques, Mar.Drugs, 11, pp 2431-2443 81 Bùi Văn Nguyên, 2019, Nghiên c u ặc iểm cấu pp c hoạt t nh sinh học c a ucoidan từ số loài rong nâu Việt Nam, Luận án tiến sĩ Hóa học, Viện Hóa học, Hà Nội 82 Bilan M.I., Grachev A.A., Shashkov A.S, Thuy T.T.T, Van T.T.T, Ly B.M, Nifantiev N.E, Usov A.I, 2013, Preliminary investigation of a highly sulfated galactofucan fraction isolated from the brown alga 103 Sargassum aquifolium, Carbohydrate Research, 377, pp 48-57 83 Zvyagintseva, T.N.; Shevchenko, N.M.; Popivnich, I.B, 1999, A new procedure for the separation of water-soluble polysaccharides from brown seaweeds Carbohydrate Research, 322, pp 32-39 84 Dubois, M., Gilles, K A., Hamilton, J K., Rebers, P A., and Smith, F 1956, Colorimeppic method for determination of sugars and related substances, Anal Chem, 28, pp 350-356 85 Dodgson, K S.; Price, R G A, 1962, Note on the Determination of the Ester Sulfate Content of Sulfated Polysaccharides, Biochem J 84, pp 106 - 110 86 Bitter, T.; Muir, H.M, 1962, A modified uronic acid carbazole reaction Anal Biochem, 4, pp 330–334 87 Peter N Pusey, Dennis E Koppel, Dale E Schaefer, Rafael D Camerini-Otero, and Seymour H Koenig, 1974, Intensity fluctuation specpposcopy of laser light scattered by solutions of spherical viruses, R17, Q.beta., BSV, PM2, and T7 I Light-scattering technique, Biochemisppy, 13 (5), pp 952–960 88 Duarate, M.; Cardoso, M.; Noseda, M, 2001, Structural studies on fucoidans from the brown seaweed Sargassum stenophyllum, Carbohydrate Research, 333, pp 281-293 89 Hiroe Mori and Kazutosi Nisizawa, 1982, Sugar Constituents of Sulfated Polysaccharides from the Fronds of Sargassum ringgoldianum, Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries 48 (7), pp 981-986 90 Cun Zhuang, Hiroko Itoh, Takashi Mizuno, and Hitoshi Ito, 1995, Antitumor Active Fucoidan from the Brown Seaweed, Umitoranoo (Sargassum thunbergii), Biosci, Biotech, Biochem 59 (4), pp 563-567 91 Riki Shiroma, Teruko Konishi, Shuntoku Uechi and Masakuni Tako, 2008, Structural Study of Fucoidan from the Brown Seaweed Hizikia 104 fusiformis, Food Sci, Technol Research, 14 (2), pp 176 - 182 92 Eluvakkal T, Sivakumar S.R and Arunkumar K, 2010, Fucoidan in Some Indian Brown Seaweeds Found along the Coast Gulf of Mannar, Inter Journal of Botany, (2), pp 176-181 93 Virginia García-Ríos, Elvira Ríos-Lea, Daniel Robledo and Yolanda Freile-Pelegrin, 2012, Polysaccharides composition from Tropical brown seaweeds, Phycological Research, 60, pp 305-315 94 Riki Shiroma, Teruko Konishi, Shuntoku Uechi and Masakuni Tako 2008, Structural Study of Fucoidan from the Brown Seaweed Hizikia fusiformis,Food Sci, Technol Research, 14 (2), pp 176 - 182 95 Pham, D Thinh, Menshova R.V., Ermakova SP., Anastyuk S D., Bui Ly, Zvyagintseva T N, 2013, Structural characteristics and anticancer activity of fucoidan from the brown alga Sargassum mcclurei, Mar Drugs, 11, pp 1456-1476 105 106 107 ... liệu cho việc sản xuất fucoidan vào mục đích làm thực phẩm chức làm thuốc Vì vậy, thực đề tài Nghiên cứu tinh chế phân tích đặc điểm cấu trúc fucoidan từ rong nâu Sargassum oligocystum cần thiết... nghiên cứu fucoidan từ rong nâu Việt Nam theo hƣớng phát triển hoạt chất nhƣ khả ứng dụng hiệu fucoidan lĩnh vực y dƣợc - - Mục tiêu luận văn: Nghiên cứu tinh chế phân đoạn fucoidan từ rong nâu. .. lập từ rong nâu A.nodusum 25 Hình 1.6 Cấu trúc phân đoạn Fucoidan tách phân lập từ rong nâu Cladosiphon okamuranus 26 Hình 1.7 Cấu trúc phân đoạn fucoidan tách phân lập từ