Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8321:2010 về Chè xác định dư lượng chlorpyriphos – Phương pháp sắc kí khí quy định phương pháp xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật chlorpyriphos trong chè khô bằng sắc kí khí. Mời các bạn tham khảo nội dung chi tiết.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 8321:2010 CHÈ – XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG CHLORPYRIPHOS – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ Tea – Determination of chlorpyriphos residues – Gas chromatographic method Lời nói đầu TCVN 8321 : 2010 Cục Bảo vệ thực vật biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố CHÈ – XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG CHLORPYRIPHOS – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ Tea – Determination of chlorpyriphos residues – Gas chromatographic method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật chlorpyriphos chè khô sắc kí khí Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm – u cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Dư lượng chlorpyriphos mẫu thử chiết dung môi axeton, sau làm qua cột florisil xác định thiết bị sắc kí khí với detector cộng kết điện tử (ECD) Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích, nước loại TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có quy định khác 4.1 Axeton, tinh khiết phân tích 4.2 Toluen, tinh khiết phân tích 4.3 Ete dầu mỏ, nhiệt độ sơi dải từ 40oC đến 60oC 4.4 Diclometan, tinh khiết phân tích 4.5 Natri sulfat khan, hoạt hóa 130oC h, để nguội bình hút ẩm, bảo quản bình kín 4.6 Florisil (từ 60 mesh đến 100 mesh), hoạt hóa 130oC 12 h, để nguội bình hút ẩm, bảo quản bình kín 24 h trước sử dụng 4.7 Hỗn hợp dung môi 1, chứa n-hexan toluen với tỉ lệ thể tích : 4.8 Hỗn hợp dung mơi 2, chứa diclorometan, acetonitril n-hexan với tỉ lệ thể tích tương ứng 50 : 1,5 : 48,5 4.9 Chất chuẩn chlorpyriphos, biết độ tinh khiết 4.10 Dung dịch chuẩn gốc, nồng độ 1000 µg/ml Dùng cân phân tích (5.10) cân 0,01g chất chuẩn chlorpyriphos (4.9), xác đến 0,01 mg, cho vào bình định mức dung tích 10 ml (5.1), thêm toluen (4.2) đến vạch trộn 4.11 Dung dịch chuẩn trung gian, nồng độ 10 µg/ml Dùng micropipet (5.3) lấy 200 µl dung dịch chuẩn gốc chlorpyriphos (4.10) cho vào bình định mức dung tích 20 ml (5.1), thêm hỗn hợp dung môi (4.7) đến vạch trộn 4.12 Dung dịch chuẩn làm việc Pha loãng liên tục dung dịch chuẩn trung gian (4.11) để thu dung dịch chuẩn làm việc với nồng độ tương ứng µg/ml (dung dịch chuẩn làm việc 1), 0,5 µg/ml (dung dịch chuẩn làm việc 2) 0,02 µg/ml (dung dịch chuẩn làm việc 3) Các dung dịch chuẩn làm việc bảo quản 4oC có thời hạn sử dụng tháng 4.13 Khí ni tơ, có độ tinh khiết khơng nhỏ 99,999 % Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm sau: 5.1 Bình định mức, dung tích 10 ml, 20 ml 25 ml 5.2 Pipet, dung tích ml, ml ml 5.3 Micropipet, dung tích từ 50 µl đến 200 µl 5.4 Cốc ly tâm, dung tích 250 ml 5.5 Bình nón, dung tích 100 ml 5.6 Cột làm có khóa teflon, dài 35 cm, đường kính 1,5 cm, loại tương đương 5.7 Xyranh, dung tích 10 µl, chia vạch đến µl 5.8 Bơng thủy tinh, silan hóa 5.9 Ống đong, dung tích 25 ml, 50 ml 100 ml 5.10 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 5.11 Cân kỹ thuật, cân xác đến 0,01 g 5.12 Thiết bị đồng hóa Ultra-Turrax, có tốc độ khơng nhỏ 13 500 r/min 5.13 Thiết bị cô quay chân không 5.14 Máy nghiền mẫu 5.15 Máy ly tâm, tốc độ khơng nhỏ 000 r/min, có ống ly tâm dung tích 250 ml 5.16 Thiết bị sắc ký khí, trang bị sau: - buồng bơm mẫu chia dòng khơng chia dòng; - detector cộng kết điện tử (ECD); - cột mao quản DB-5, dài 30 m, đường kính 0,32 mm, chiều dày pha tĩnh 0,25 µm, loại tương đương; - máy vi tính Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 5139 : 2008 (CAC/GL 33-1999) Phương pháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với giới hạn dư lượng tối đa (MRL) Cách tiến hành 7.1 Yêu cầu chung Toàn quy trình phân tích cần thực ngày Nếu khơng phân tích ngày phải bảo quản dịch mẫu 4oC 7.2 Chuẩn bị mẫu Mẫu thử nghiền máy nghiền mẫu (5.14) đến đồng 7.3 Chuẩn bị phần mẫu thử 7.3.1 Chiết tách Dùng cân (5.11) cân khoảng 10 g (m) mẫu thử đồng (xem 7.2), xác đến 0,01 g, vào cốc ly tâm dung tích 250 ml (5.4), thêm vào 20 ml nước cất, để yên h nhiệt độ phòng Thêm vào cốc 40 ml axeton, đồng hóa 30 s thiết bị Ultra-Turrax (5.12) với tốc độ 13 500 r/min, thêm 40 ml ete dầu mỏ, 40 ml diclometan, g natri sulfat khan, đồng hóa 30 s thiết bị Ultra-Turrax (5.12) với tốc độ 13 500 r/min, sau ly tâm thiết bị ly tâm (5.15) với tốc độ 000 r/min 10 min, thu toàn dịch chiết ghi lại thể tích (V 1) Dùng ống đong (5.9) lấy 60 ml (V2) dịch lỏng thu cho vào bình nón dung dịch 100 ml (5.5) cô cạn (làm bay hơi) thiết bị cô quay chân không (5.13) 40 oC 7.3.2 Làm 7.3.2.1 Chuẩn bị cột làm Cho vào cột làm (5.6): - thủy tinh (5.8); - g natri sulfat khan (4.5); - 10 g florisil (4.6); - g natri sulfat khan (4.5) Dùng ống đong (5.9) chuyển 50 ml n-hexan vào cột để rửa cột, loại bỏ dịch rửa Đóng khóa cột làm sạch, lưu ý không để cột khô (để cm dung môi bề mặt chất làm sạch) 7.3.2.2 Tiến hành làm Dùng pipet (5.2) lấy ml n-hexan để hòa tan dư lượng bình nón (xem 7.3.1), chuyển vào cột làm chuẩn bị (xem 7.3.2.1) Mở khóa cột, dùng 50 ml hỗn hợp dung môi (4.8) rửa giải với tốc độ ml/min, thu dịch rửa giải Cô cạn (làm bay hơi) thiết bị quay chân khơng (5.13) 40oC, hòa tan phần cặn với ml (V2) hỗn hợp dung môi (4.7) thu phần mẫu thử 7.4 Chuẩn bị phần mẫu trắng Mẫu trắng mẫu biết khơng có dư lượng chlorpyriphos, chuẩn bị theo quy trình 7.3 7.5 Chuẩn bị phần mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi Dùng cân (5.11) cân khoảng 10 g mẫu trắng đồng (7.2), xác đến 0,01 g, vào cốc ly tâm dung tích 250 ml (5.4), thêm vào 20 ml nước cất, để yên h nhiệt độ phòng Dùng micropipet (5.3) thêm 50 µl dung dịch chuẩn trung gian (4.11), để yên nhiệt độ phòng tối thiểu 15 Tiếp tục thực theo 7.3 7.6 Điều kiện phân tích Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 240 oC; Thể tích bơm mẫu: µl, khơng chia dòng; Nhiệt độ cột tách: Nhiệt độ ban đầu 80oC giữ min, tăng 40oC/min đến nhiệt độ 160oC, tăng 3oC/min đến 250oC, tăng 10oC/min đến nhiệt độ cuối 280oC giữ 10 min; Tốc độ khí mang (N2): ml/min; Nhiệt độ detector: 300oC; Tốc độ nitơ bổ trợ: 60 ml/min 7.7 Dựng đường chuẩn Dựng đường chuẩn chlorpyriphos (tương quan diện tích/chiều cao pic nồng độ chất chuẩn) điểm có nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn làm việc 1, dung dịch chuẩn làm việc dung dịch chuẩn làm việc (4.12) 7.8 Xác định Bơm dung dịch mẫu trắng (7.4), dung dịch mẫu thử (7.3), dung dịch mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi (7.5) vào thiết bị sắc kí khí (5.16) Xác định nồng độ mẫu thử mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi đường chuẩn Nếu nồng độ mẫu thử nằm ngồi đường chuẩn điều chỉnh cách pha loãng dung dịch phần mẫu thử (khơng pha lỗng lượng mẫu bơm) Tính kết Dư lượng chlorpyriphos, X, biểu thị miligam kilogam (mg/kg), tính theo cơng thức: X = X0 x VE V1 P V2 m 100 đó: X0 nồng độ chlorpyriphos mẫu thử xác định theo đường chuẩn (7.8), tính microgam mililit (µg/ml); VE thể tích phần mẫu thử thu (xem 7.3.2.2), tính mililit (ml); V1 thể tích dịch chiết thu (xem 7.3.1), tính mililit (ml); V2 thể tích dịch chiết lấy để làm (7.3.1), tính mililit (ml); m khối lượng mẫu thử, tính gam (g); P độ tinh khiết chất chuẩn, tính phần trăm (%) Hiệu suất thu hồi giới hạn xác định 9.1 Hiệu suất thu hồi phương pháp: từ 70 % đến 110 % 9.2 Giới hạn định lượng phương pháp (LOQ): 0,01 mg/kg 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn, chi tiết có ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu ... đường chuẩn Dựng đường chuẩn chlorpyriphos (tương quan diện tích/chiều cao pic nồng độ chất chuẩn) điểm có nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn làm việc 1, dung dịch chuẩn làm việc dung dịch chuẩn. .. thu dung dịch chuẩn làm việc với nồng độ tương ứng µg/ml (dung dịch chuẩn làm việc 1), 0,5 µg/ml (dung dịch chuẩn làm việc 2) 0,02 µg/ml (dung dịch chuẩn làm việc 3) Các dung dịch chuẩn làm việc... b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn, chi tiết có ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử