Nghiên cứu tỷ lệ mang staphylococcus aureus và độ nhạy cảm với kháng sinh của chúng ở trẻ dưới 5 tuổi ở địa bàn phường Vĩnh Ninh, thành phố Huế

Đề tài nghiên cứu nhằm: Điều tra tỷ lệ mang Staphylococcus aureus ở niêm mạc mũi ở trẻ dưới 5 tuổi; đánh giá một số tiêu chuẩn sinh vật học dùng để xác định Staphylococcus aureus; xác định mức độ nhạy cảm của Staphylococcus aureus với kháng sinh.

TẠP CHÍ KHOA HỌC, Đại học Huế, Số 24, 2004 NGHIÊN CỨU TỶ LỆ MANG STAPHYLOCOCCUS AUREUS VÀ  ĐỘ NHẠY CẢM VỚI KHÁNG SINH CỦA CHÚNG Ở TRẺ DƯỚI 5  TUỔI Ở ĐỊA BÀN PHƯỜNG VĨNH NINH, THÀNH PHỐ HUẾ Trần Thị Như Hoa Trường Đại học Y khoa, Đại học Huế I. ĐẶT VẤN ĐỀ Lồi Staphylococcus aureus là một trong số  các vi khuẩn ký sinh   trên  da và niêm mạc, nhiều nhất là   mũi. Có khoảng 10­40% người khỏe mạnh  mang Staphylococcus aureus. Khi có những tổn thương   da và niêm mạc kèm  theo những rối loạn về chức năng thì các nhiễm trùng do Staphylococcus aureus  dễ dàng xuất hiện     Hiện nay, hiện tượng  Staphylococcus aureus  kháng kháng sinh trở  nên  khá phổ  biến do tình trạng sử  dụng kháng sinh ngày càng nhiều   cộng đồng  với những kháng sinh có hoạt phổ rộng, nhiều loại kháng sinh khác nhau và với   liều lượng khơng đúng. Hiện tượng kháng thuốc khơng chỉ  xuất hiện  ở các vi  khuẩn   trong bệnh viện mà còn trên các vi khuẩn   cộng đồng ngồi bệnh   viện      Việc nghiên cứu mức độ kháng thuốc khơng chỉ được thực hiện trên các  vi khuẩn tại bệnh viện, mà còn trên cả vi khuẩn ở cộng đồng ngồi bệnh viện   là vấn đề  rất cần thiết nhằm theo dõi diễn biến kháng thuốc, dự  báo xu thế  kháng thuốc và đề  ra những biện pháp thích hợp nhằm hạn chế  mức gia tăng  tính kháng thuốc từ đó giúp cho việc sử dụng kháng sinh ở cộng đồng hợp lý và  tiết kiệm Vì tất cả những lý do trên, chúng tơi đã thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu tỷ   lệ mang Staphylococcus aureus và độ nhạy cảm với kháng sinh của chúng ở trẻ   dưới 5 tuổi ở một số địa bàn thành phố Huế” nhằm mục tiêu: 1. Điều tra tỷ lệ mang Staphylococcus aureus ở niêm mạc mũi ở trẻ dưới 5  tuổi 57   Đánh   giá     số   tiêu   chuẩn   sinh   vật   học   dùng   để   xác   định  Staphylococcus aureus  3. Xác định mức độ nhạy cảm của Staphylococcus aureus với kháng sinh II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. Đối tượng: a. Đối tượng nghiên cứu:     Là những trẻ  em khỏe mạnh dưới 5 tuổi  ở một số nhà trẻ  và mẫu giáo  phường Vĩnh Ninh.      Tiến hành lấy mẫu nghiệm dịch ngốy mũi bằng que tăm bơng vơ trùng  ở 110 trẻ em dưới 5 tuổi khơng phân biệt giới tính tại trường mầm non 2 Ngơ   Quyền, thành phố Huế từ tháng 11 năm 2001 đến tháng 1 năm 2002 b.Vi khuẩn: Các chủng Staphylococcus aureus đã phân lập được từ niêm  mạc mũi trẻ khỏe mạnh 2. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu: 2.1.Vật liệu nghiên cứu: ­ Mơi trường ni cấy, phân lập và xác định vi khuẩn: + Blood Agar: để chế mơi trường thạch máu + Canh thang BHI (Brain Hear Infusion broth) + Thạch dinh dưỡng (Nutrient Agar) + Thạch máu thỏ + Thạch chapman: khảo sát sự lên men mannit + Thạch Mueller ­ Hinton + 5% NaCl: Xác định tính chất đề kháng với  oxacillin ­ Sinh vật phẩm: + H2O2 3% để làm thử nghiệm catalaza    + Máu tim thỏ để chế mơi trường thạch máu         + Huyết tương thỏ vơ trùng để làm thử nghiệm Coagulase        + Các khoanh giấy kháng sinh để làm kháng sinh đồ   ­ Giấy thấm màu trắng để xác định sắc tố của vi khuẩn        ­ Lam kính, ống nghiệm, pipét             ­ Các mơi trường sử dụng trong đề  tài này của hãng OXOID (Anh) và  các khoanh giấy kháng sinh của hãng Sanofi (Pháp) do bộ mơn Vi sinh Trường   Đại học Y khoa Huế cung cấp.   d. Chủng vi khuẩn chuẩn quốc tế được sử dụng để kiểm tra chất lượng   kháng sinh đồ là S. aureus ATCC 25923.            2.2. Phương pháp nghiên cứu: a. Ngốy mũi (cả 2 hốc mũi)  b. Qui trình ni cấy phân lập: Mẫu nghiệm là dịch ngốy mũi được:  58     ­ Nhuộm Gram xem hình thể vi khuẩn có mặt    ­ Que tăm bơng sau khi ngốy mũi được cấy ngay vào mơi trường thạch  máu đĩa, canh thang ống, ủ ấm 370C qua đêm    ­ Sau 24 giờ từ các mơi trường ni cấy ghi nhận khuẩn lạc của tụ cầu  trên các mơi trường trên bằng cách nhuộm gram để  nhận biết hình thể, tính   chất bắt  màu, trích  biệt  và xác  định  tụ  cầu gây bệnh theo  thường quy xét   nghiệm của phòng thí nghiệm. Sau khi đã định danh, xác định tính nhạy cảm   với kháng sinh của các chủng phân lập được: tiến hành làm kháng sinh đồ bằng  kỹ  thuật khoanh giấy khuếch tán trong thạch theo phương pháp Kirby­Bauer   cải tiến đã được chương trình giám sát quốc gia về tính kháng thuốc của các vi   khuẩn gây bệnh đưa vào thường qui từ năm 1988 đến nay.     Đánh giá kết quả bằng cách so sánh đường kính vòng  ức chế  đo được   với bảng chuẩn của hãng sản xuất khoanh giấy kháng sinh cung cấp để  phân   loại mức độ nhạy cảm của vi khuẩn thành 3 mức: nhạy cảm, trung gian và đề  kháng ­ Các số liệu thu được được xử lý thống kê và lập bảng ở phần sau III. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 1.Tỷ lệ mang S. aureus: Có   110   mẫu   nghiệm   dịch   ngốy   mũi       ni   cấy   để   tìm  Staphylococcus aureus. Kết quả phân lập được 40 chủng  Staphylococcus aureus  chiếm tỷ lệ 36,3% Trong 53 trẻ  nam được xét nghiệm thì có 18 trẻ  mang   Staphylococcus   aureus   niêm mạc mũi chiếm tỷ  lệ  33,9%. Trong 57 trẻ nữ được xét nghiệm  thì có 22 trẻ mang Staphylococcus aureus ở mũi chiếm 38,5 % Bảng 1: Tỷ lệ mang S. aureus ở trẻ Số mẫu xét nghiệm Số mẫu có S. aureus Tỷ lệ % dương tính Nam 53 18 33,9% Nữ 57 22 38,5% Tổng cộng 110 40 36,3% Bảng 1 cho thấy tỷ  lệ 36,3% trẻ có mang Staphylococcus aureus ở  mũi  và tỷ  lệ  mang Staphylococcus aureus giữa hai giới khác nhau khơng có ý nghĩa  thống kê (p > 0,05 ) Bảng 2: Phân bố tỷ lệ phân lập được theo nhóm tuổi Nhóm tuổi Tổng số cấy Số (+) tính Tỷ lệ 3 tuổi 68 26 38,2% 59 Kết quả bảng trên cho thấy: Có 42 trẻ   3 tuổi được xét nghiệm thì có 26 trẻ  mang  Staphylococcus   aureus chiếm tỷ lệ 38,2%   Bảng 2 cho thấy tỷ lệ mang  Staphylococcus aureus giữa hai nhóm tuổi  là tương đương nhau.  2. Đánh giá các chủng phân lập được theo 4 tiêu chuẩn chẩn đốn  Staphylococcus aureus Bảng 3: Tỷ lệ các chủng phân lập được đạt các tiêu chuẩn Staphylococcus aureus Số chủng Tỷ lệ (%) Tổng số  Coagulase chủng phân  (+) lập được 40 40 36,3  100 Chapman (+) Tan máu (+) Sắc tố  vàng (+) 40 100 34 85 32 80 Kết quả bảng 3 cho thấy: 100% các chủng Staphylococcus aureus có coagulase dương tính; 100% các chủng  Staphylococcus aureus  cho phản  ứng lên men đường  mannit; 85% số chủng gây tan máu và 80% chủng tạo sắc tố màu vàng thẫm   Xác   định   độ   nhạy   cảm   với   kháng   sinh     40   chủng   Staphylococcus aureus  Bảng 4: Mức độ kháng kháng sinh của 40 chủng Staphylococcus aureus Kháng sinh Penicillin G (PG) Oxacillin Cefuroxim (CXM) Erythromycin (EM) Vancomycin (VA) Gentamycin (GM) Co ­ trimoxazol (SXT) Tetracyclin (TE) Chloramphenicol (CL) Norfloxacin (NOR) Số thử  nghiệm n 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 Nhạy cảm Trung gian Đề kháng S.c % S.c % S.c % 34 31 36 38 34 12 37 2,5 85 2,5 20 90 90 95 85 30 92,5 18 7,5 45 17,5 22,5 7,5 2,5 15 7,5 39 21 25 1 22 97,5 7,5 52,5 65 2,5 2,5 55 60 Ghi chú: S.c: số chủng  Qua kết quả    bảng 4 cho thấy các chủng  Staphylococcus aureus ở trẻ  đề  kháng cao với penicillin G là 97,5%, erythromycin là 65,0%, cefuroxim là  52,5%   Các   kháng   sinh   có   tỷ   lệ   đề   kháng   thấp     gentamicin   (2,5%),   co   ­   trimoxazol   (2,5%),   tetracyclin   (5,0%)   Kháng   sinh   chưa   bị   đề   kháng     vancomycin và norfloxacin. Tỷ  lệ  các chủng  Staphylococcus aureus  đề  kháng  với oxacillin (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus viết tắt là MRSA) là  7,5 % Bảng 5: Tính chất đề kháng với nhiều kháng sinh của các chủng Staphylococcus   aureus Tổng  số Số  chủng Tỷ lệ % Nhạy  cảm 1KS 40 0 0 Đề kháng với 2KS 3KS 4KS 5KS 6KS 17,5 15 37,5 15 37,5 7,5 0 Ghi chú: KS: kháng sinh Qua bảng 5 ta thấy: 100%  các chủng đều đề kháng từ 2 loại kháng sinh  trở  lên và 82,5 % các chủng đề  kháng từ  3 loại kháng sinh trở  lên. Có 45% số  chủng đề kháng từ 4 loại kháng sinh trở lên. Khơng có chủng nào nhạy cảm với   tất cả các kháng sinh được thử nghiệm Bảng 6: So sánh mức độ đề kháng với các loại kháng sinh khác giữa  các chủng Staphylococcus aureus nhạy cảm với oxacillin và  các chủng Staphylococcus aureus đề kháng với oxacillin Staphylococcus aureus nhạy cảm Kháng  sinh Staphylococcus aureus kháng oxacillin n Đề  kháng Trung  gian oxacillin Nhạy  cảm 61 n Đề  kháng Trung  gian Nhạy  cảm PG 37 97,3 2,7 100 0 CXM 37 50 50 100 0 VA 37 24,4 75,6 0 100 EM 37 65 16,2 18,8 33,3 33,3 33,3 SXT 37 2,7 97,3 0 100 GM 37 2,7 97,3 0 100 CL 37 54,1 16,2 29,7 66,6 33,3 TE 37 10,8 5,4 86,4 33,3 66,6 NOR 37 8,1 91,9 0 100 Qua bảng 6 cho thấy: các chủng  Staphylococcus aureus  đề  kháng với  oxacillin thì có tỷ lệ đề kháng với các kháng sinh khác cao hơn các chủng nhạy   cảm với oxacillin.  Bảng 7: Tỷ lệ MRSA của các chủng Staphylococcus aureus  khi so sánh với các nghiên cứu khác Địa điểm Số chủng Số MRSA Tỷ lệ % NC của chúng tôi 40 7,5 Trần Văn Hưng và cs 51 15,7 Hà nội 50 TP. Hồ Chí Minh 50 Qua bảng 7 cho thấy: tỷ lệ MRSA trong NC của chúng tôi là 7,5% Bảng 8: Các kiểu đa kháng của 3 chủng Staphylococcus aureus kháng oxacillin Kiểu đa kháng Số chủng/Tổng số MRSA Tỷ lệ  % PG + CXM+ CL 1/3 33,3 PG + CXM+ TE 1/3 33,3 PG+ CXM+ CL+ EM 1/3 33,3 V. KẾT LUẬN 1. Tỷ lệ mang Staphylococcus aureus ở mũi trẻ em dưới 5 tuổi là 36,3% 2. 100% các chủng phân lập được đều có coagulaza và lên men đường   mannit; 85% số chủng làm tan máu và 80% số chủng tạo sắc tố vàng thẫm 62 3. Các chủng Staphylococcus aureus đã đề kháng với tỷ lệ cao với nhiều  loại kháng sinh như penicillin G, erythromycin, cefuroxim. Kháng sinh có tỷ  lệ  đề kháng thấp là: gentamycin, co­ trimoxazol và tetracyclin. Kháng sinh chưa bị  đề kháng là: vancomycin và norfloxacin 4. 7,5% chủng Staphylococcus aureus kháng Methiciilin (MRSA) TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ  mơn vi sinh,  Bài giảng vi sinh y học, ĐHY Hà Nội, NXBYH Hà Nội  (2002): 63 ­ 67 Lê Huy Chính  Cấy mủ  tìm tụ  cầu vàng gây bệnh. Tài liệu tập huấn dùng  cho lớp vi sinh lâm sàng. Bộ Y tế. Hà Nội (1998) 17 ­ 19 Lê Huy Chính. Tụ cầu­ Staphylococci. Tài liệu dùng cho lớp tập huấn vi sinh   lâm sàng. Bộ Y tế. Hà Nội (1998) 41 ­ 47 Lê Đăng Hà, Lê Huy Chính và cs. Tình hình kháng thuốc kháng sinh hiện nay   của 10 vi khuẩn thường gặp ở Việt Nam năm 1998. Viện Y học lâm sàng các  bệnh nhiệt đới, Hà Nội (1999) 3 ­ 8    Lê Đăng Hà, Phạm Văn Ca  Tình hình kháng thuốc của một số vi khuẩn    người khoẻ mạnh tại cộng đồng năm 1999. Viện Y học Lâm sàng các bệnh  nhiệt đới, Hà Nội (1999) 32 ­ 41 Trần Văn Hưng, Ngơ Viết Quỳnh Trâm. Tính đề kháng kháng sinh của các   chủng Staphylococcus aureus phân lập được từ  người bệnh và từ  người   khoẻ mạnh ở Huế năm 1995. Nghiên cứu và thơng tin y học. Trường ĐH Y  Khoa Huế, 1 (1996) 70 ­ 7 Lê Bá Nhàn  Tìm hiểu giá trị  của những tiêu chuẩn chẩn đốn tụ  cầu gây   bệnh. Tập san NCKH. Trường Đại Học Y khoa Huế, 2 (1991) 29 ­ 34 Đinh Thành Phương. Khảo sát tính chất chống đối kháng sinh và khả  năng   sinh  B ­   lactamase của tụ   cầu  phân lập  trên người   lành    Nha  Trang   Chuyên đề tốt nghiệp  Bác sỹ y khoa Huế (1986) 10 ­ 14  Phan   Quốc   Việt,   Nguyễn   Thái   Học,   Nguyễn   Thành   Mỹ   Tỷ   lệ   mang  S.auresu ở người lành và độ nhạy cảm với kháng sinh của chúnh tại xã Thuỷ   Dương. Tiểu luận tốt ngiệp bác sĩ y khoa Huế (1995) 10 Jorgensen   J.H,   Klos   W.E  Staphylococcal   infections.  Diagnostic  procedures for bacterial infection. 7th edition, 471 ­ 474 63 11 Vandepitte   J,   Engback   K,   Piot   P   Exudats,   plaies   et   abces   purulents.  Bacteriologie clinique: tecniques de base pour le laboratoire. OMS, Geneve,  (1994) 62 ­ 72 12 Reverdy M.E., Roure Ch. Les antistaphylococciques en 1995, Etat actuel  de la sensibilite de Staphylococcus aureus,  La lettre de linfectiologue  (1995)  362 ­ 71 TÓM TẮT Từ  tháng 11/2001 đến tháng 2/2002, tác giả  đã điều tra 110 trẻ  dưới 5 tuổi    một số địa bàn thành phố Huế đã thu được một số kết quả sau: ­ Tỷ lệ mang S.aureus ở trẻ dưới 5 tuổi là 36,3% ­ 100 % các chủng phân lập được có coagulaza và lên men đường mannit. 85%   số chủng làm tan máu và 80 % số chủng tạo sắc tố màu vàng thẩm ­  Các chủng  S.aureus  kháng với  nhiều kháng sinh   Penicillin G  (97,5%),   Erythromycin (65,0%), Cefuroxim (52,5%) . Kháng sinh có tỷ lệ đề kháng thấp là   Gentamycin (2,5%), Co­ trimoxazol (2,5%) và tetracyclin (5,0%). Kháng sinh còn   có tác dụng tốt là Vancomycin và Norfloxacin ­ 7,5 % chủng S.aureus kháng Methiciilin (MRSA) 64 FIGURES OF ANTIBIOTIC RESISTANCE  OF STAPHYLOCOCCUSAUREUS ISOLATED  FROM HEALTHY CHILDREN UNDER FIVE YEARS  OF AGE IN VINH NINH WARD OF HUE CITY Tran Thi Nhu Hoa College of Medicine, Hue University SUMMARY From   Oct,   2002   to   Jan   2002,   the   author   undertook   an   investigation   on   110   healthy children under 5 years of age in a number of places in Hue City and got the   following results: ­ The percentage of the carriers of staphylococcus aneurus in the children under   five was 36.3% ­ The resistance to penicillin of almost all the strains of S. aneurus to penicillin is   very high, (97.5%), to erythromycin is 65%, to Cefuroxim 52.5% and to chloramphenicol   55%. Antibiotics with low resistance are gentamicin (2.5%), co­trimoxazol (2.5%), and   tetracyclin (5%) ­   The   antibiotics   that   still   showed   to   be   of   good   effect   are   Vancomycin   and   Norfloxacin ­ 7.5% of the species S.aureus are resistant to Methicillin (MRSA) 65 ... 40 40 40 Nhạy cảm Trung gian Đề kháng S.c % S.c % S.c % 34 31 36 38 34 12 37 2 ,5 85 2 ,5 20 90 90 95 85 30 92 ,5 18 7 ,5 45 17 ,5 22 ,5 7 ,5 2 ,5 15 7 ,5 39 21 25 1 22 97 ,5 7 ,5 52 ,5 65 2 ,5 2 ,5 55 60 Ghi chú: S.c: số chủng ... 4KS 5KS 6KS 17 ,5 15 37 ,5 15 37 ,5 7 ,5 0 Ghi chú: KS: kháng sinh Qua bảng 5 ta thấy: 100%  các chủng đều đề kháng từ 2 loại kháng sinh trở  lên và 82 ,5 % các chủng đề kháng từ  3 loại kháng sinh trở... Bảng 6: So sánh mức độ đề kháng với các loại kháng sinh khác giữa  các chủng Staphylococcus aureus nhạy cảm với oxacillin và các chủng Staphylococcus aureus đề kháng với oxacillin Staphylococcus aureus nhạy cảm Kháng sinh Staphylococcus aureus kháng oxacillin