Nghiên cứu với mục tiêu nhằm khảo sát thành phần và đánh giá tác dụng xua muỗi aedes aegypti của tinh dầu chiết từ lá khuynh diệp, và đánh giá tác dụng xua muỗi theo qui trình “Khảo nghiệm hóa chất, chế phẩm diệt côn trùng, diệt khuẩn dùng trong lĩnh vực gia dụng và y tế” ‐ Bộ Y Tế.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học THÀNH PHẦN VÀ TÁC DỤNG XUA MUỖI AEDES AEGYPTI CỦA TINH DẦU LÁ KHUYNH DIỆP Huỳnh Kha Thảo Hiền*, Dương Phước An**, Lê Thành Đồng* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Sử dụng các hợp chất tự nhiên có nguồn gốc thực vật và thân thiện với mơi trường trong cơng tác phòng chống vector truyền bệnh đã và đang nhận được sự quan tâm rất lớn, đặc biệt là các chất xua cơn trùng. Các chất xua cơn trùng đóng vai trò quan trọng trong việc làm giảm sự tiếp xúc của vector truyền bệnh với con người. Từ xa xưa, con người đã biết sử dụng các chất xua cơn trùng có nguồn gốc từ thực vật vì chúng có mùi hương đặc trưng, dễ chịu, khơng gây độc qua đường tiếp xúc và dễ dàng phân hủy trong mơi trường tự nhiên. Mục tiêu: Khảo sát thành phần và đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti của tinh dầu chiết từ lá khuynh diệp. Phương pháp nghiên cứu: Chưng cất tinh dầu bằng phương pháp cất lơi cuốn theo hơi nước. Thành phần hóa học của mẫu tinh dầu được được phân tích bằng phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC‐MS). Đánh giá tác dụng xua muỗi theo qui trình “Khảo nghiệm hóa chất, chế phẩm diệt cơn trùng, diệt khuẩn dùng trong lĩnh vực gia dụng và y tế” ‐ Bộ Y Tế. Kết quả: Tinh dầu Khuynh diệp chưng cất bằng phương pháp cất lơi cuốn theo hơi nước có màu vàng nhạt, mùi thơm đặc trưng, tỉ trọng 0,9150, năng suất quay cực +60 đến +15º, chỉ số chiết quang 1,457 – 1,469. Thành phần tinh dầu phân tích bằng GC‐MS thu được 21 hợp chất trong đó có các hợp chất đặc trưng: 1R‐ alpha pinene, Beta – pinene, Eucalyptol, Borneol, Terpineol Đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti cho thấy hệ số bảo vệ của tinh dầu khuynh diệp trong ethanol ở các nồng độ 20%, 25% và 30% là trên 80% sau 30 phút với lượng dùng là 1ml trên 25 cm2 diện tích da từ cổ tay đến khuỷu tay hoặc từ ống cổ chân đến gối. Kết luận: Tính chất lý – hóa và thành phần tinh dầu thu được từ lá khuynh diệp (Eucalyptus globulus) phù hợp với công bố thành phần trong Dược điển Việt Nam. Đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti của tinh dầu khuynh diệp với nồng độ tinh dầu 30% tương ứng 0,857 (l/ cm2) có hệ số bảo vệ là 93,65 ± 0,728% (sau 30 phút). Từ khóa: Tinh dầu, lá khuynh diệp, muỗi, eucalyptol. ABSTRACT CHEMICAL COMPOSITIONS AND EFFECT OF ESSENTIAL OIL FROM EUCALYPTUS LEAVES AGAINST AEDES AEGYPTI Huynh Kha Thao Hien, Duong Phuoc An, Le Thanh Dong * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 6‐ 2014: 261 ‐ 265 Background: Products that have plant‐derived to control transmission vectors friendly with environment have been considered, especially mosquito repellents. They play an important role to reduce disease transmission. In the past, people used substances of plant‐derived to repelled mosquitoes, because it had pleasant odor, non – hazard, easy degrt tinh dầu Khuynh diệp Thả 50 con muỗi vào lồng có kích thước 40 x 40 x 40 cm và 100 con muỗi vào lồng có kích thước 2 x 2 x 2 m. Bảng 1: Hiệu suất chưng cất bằng phương pháp cất lơi cuốn theo hơi nước Trước khi tiến hành thử nghiệm, người thử nghiệm phải rửa tay bằng xà phòng khơng mùi, sau đó lau khơ. Xoa đều 1ml dung dịch tinh dầu pha trong ethanol lên bề mặt da có diện tích 25 cm2, từ cổ tay đến khuỷu tay cho vào lồng 1 hoặc từ đầu gối đến bàn chân của người thử nghiệm rồi cho vào lồng 2. Cho tay, chân vào lồng muỗi 3 phút và nghỉ 30 phút. Lặp lại cho đến khi số muỗi đốt bằng 10 % tổng số muỗi trong lồng thì thử nghiệm kết thúc (nếu muỗi đậu lên da nhưng khơng đốt thì người thử nghiệm lắc nhẹ tay, chân cho muỗi bay). Chuyên Đề Y Tế Công Cộng Nguyên Khối lượng Độ ẩm Lượng tinh liệu (kg) (%) dầu (ml) 10 30 91 Lá khuynh diệp Hiệu suất(%) 1,3 Bảng 2: Tính chất lý – hóa của tinh dầu lá khuynh diệp Tính chất Màu sắc, mùi Tinh dầu khuynh diệp Màu vàng nhạt, mùi thơm đặc trưng Tỉ trọng 25º C 0,9150 Năng suất quay cực Từ +6º đến +15º Chỉ số chiết quang 25oC 1,457 – 1,469 Tính tan Tan tốt dung môi phân cực Ethanol Nhận xét: Tinh dầu thu được có đặc điểm và hiệu suất phù hợp với các tài liệu đã cơng bố trước đây(3,7). 263 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Phân tích thành phần hóa học tinh dầu Bảng 3: Kết quả phân tích thành phần hóa học tinh dầu lá khuynh diệp STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Thành phần 1R- alpha pinene 1R-2,2-dimethyl-3-methylene-bicyclo [2,2,1] heptane Beta – pinene Eucalyptol 1-methyl-4-(1-methylethyl)-1,4-cyclohexadien 1-methyl-4-(1-methylethylidene)-cyclohexadien 1,3,3-trimethyl-bicyclo[2,2,1]heptan-2-ol Trans-pinocarveol Borneol 4-methyl-1-(1-methylethyl)-3-cyclohexen-1-ol Terpineol Terpinyl acetate Alpha – Gurjunene Beta – caryophyllene Decahydro-1,1,7-trimethyl-4-methylene- 1H-cycloprop [e] azulene Aromadendrene Gamma- Elemene Globulol Gamma - Eudesmol Beta – Eudesmol Alpha – Eudesmol CT phân tử RT(phút) C10H16 9,719 C10H16 10,221 C10H16 11,507 C10H18O 14,100 C10H16 15,491 C10H16 16,913 C10H18O 17,948 C10H16O 19,130 C10H18O 20,416 C10H18O 21,085 C10H18O 21,744 C12H20O2 28,844 C15H24 31,187 C15H24 31,574 C15H24 32,410 C15H24 33,278 C15H24 34,753 C15H26O 38,214 C15H26O 40,044 C15H26O 40,713 C15H26O 40,839 Hàm lượng % 26,066 0,895 18,434 25,262 1,948 0,954 0,643 0,640 1,060 2,286 7,347 2,301 0,306 0,473 3,121 1,024 1,680 2,449 0,796 0,620 1,694 Nam(3). Tuy nhiên không phát hiện PMD (para‐ Nhận xét: Kết quả phân tích tinh dầu menthane‐3,8‐diol), một thành phần có tác dụng khuynh diệp (Eucalyptus globulus) cho thấy xua cơn trùng mạnh đã được chứng minh(2). thành phần hóa học có trong tinh dầu phù hợp với cơng bố thành phần trong Dược điển Việt Kết quả thử nghiệm hệ số bảo vệ của tinh dầu khuynh diệp Thử nghiệm hệ số bảo vệ trong lồng 40 x 40 x 40 cm Bảng 4: Kết quả thử nghiệm hệ số bảo vệ của tinh dầu khuynh diệp Số lần thử Trung bình Nồng độ 15% 60,75 61,37 53,89 65,11 55,14 59,25 ± 2,081 Hệ số bảo vệ (%) Nồng độ 20% Nồng độ 25% 96,95 88,42 62,50 90,96 78,05 57,91 89,63 91,81 84,45 92,09 82,32 ± 5.845 84,24 ± 6.614 Nhận xét: Hệ số bảo vệ sau 30 phút của tinh dầu khuynh diệp nồng độ 30% cao nhất (93,65 ± 0,728%) nhưng so với nồng độ 20% và 25% thì sự khác nhau này khơng có ý nghĩa về mặt thống kê (p > 0,05). Tiếp tục theo dõi sau 60 phút tất cả các nồng độ tinh dầu khuynh diệp khơng có tác dụng bảo vệ theo qui ước. Thử nghiệm hệ số bảo vệ trong lồng 2 x 2 x 2 m 264 Nồng độ 30 % 95,95 93,58 92,91 94,26 91,55 93,65 ± 0.728 Kết quả thử nghiệm cho thấy, thời gian bảo vệ của tinh dầu khuynh diệp ngắn (dưới 30 phút) và sự khác biệt của các hệ số bảo vệ ở các nồng độ không ý nghĩa thống kê nên chỉ chọn nồng độ cao nhất để thử nghiệm kiểm chứng. Kết quả cho thấy khơng có sự bảo vệ của tinh dầu khuynh diệp trong thử nghiệm lồng 2 x 2 x 2 m. Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ Kết luận Chất lượng tinh dầu thu được bằng phương pháp chưng cất lơi cuốn hơi nước đạt tính chất lý – hóa. Tiếp tục khảo sát các lồi khác của chi Eucalyptus để tìm thành phần có giá trị xua muỗi PMD. TÀI LIỆU THAM KHẢO Barnard DR, Xue RD. (2004). Laboratory Evaluation of Mosquito Repellents Against Aedes albopictus, Culex nigripalpus, and Ochlerotatus triseriatus (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. 41 (4) 726‐730. Debboun M, Frances S, Strickman D (2006). Insect repellents: Principle, methods and uses. CRC Press. Pp. 114‐116. Đỗ Tất Lợi (2003). Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam.NXB Y học Hà Nội Tr. 742‐744. Ibrahim J, Zaki ZM (1998). Development Of Environment ‐ Friendly Insect Repellents From The Leaf Oils Of Selected Malaysian Plants. ASEAN Review of Biodiversity and Environmental Conversation. 3‐5. Masetti A, Maini S (2006). Arm in cage tests to compare skin repellents against bites of Aedes albopictus. Bulletin Insectology. 59 (2) 157‐160. Rajkumar S, Jebanesan A (2007). Repellent activity of selected plant essential oils against the malarial fever mosquito Anopheles stephensi. Tropical Biomedicine. 24 (2)71–75. Văn Đình Đề (2002). Sản xuất chất thơm thiên nhiên tổng hợp. NXB Khoa học và Kỹ thuật. Hà Nội. 7‐22. WHO/HTM/NTD/WHOPES (2009). Guidelines for efficacy testing of mosquito to repellents for human skin.Geneva. Pp 4‐10. Về hiệu suất thu được tương đối cao so với các tài liệu công bố. Thành phần hóa học tinh dầu Phù hợp với hầu hết các tài liệu đã cơng bố trước đây. Mẫu tinh dầu khuynh diệp khơng thấy thành phần PMD (para‐menthane ‐3,8‐diol) một thành phần có tác dụng xua cơn trùng mạnh. Đánh giá tác dụng xua của tinh dầu khuynh diệp trên Aedes aegypti Trên mơ hình thử nghiệm lồng 40 x 40 x 40 cm Nồng độ tinh dầu 30% tương ứng 0,857 (l/ cm ) có hệ số bảo vệ là 93,65 ± 0.728% (sau 30 phút). Nghiên cứu Y học Trên mơ hình thử nghiệm lồng 2 x 2 x 2 m Kết quả chưa thể hiện sự bảo vệ của tinh dầu khuynh diệp trong thử nghiệm lồng 2 x 2 x 2 m. Ngày nhận bài báo: Kiến nghị Ngày phản biện nhận xét bài báo: 12/6/2014 Ngày bài báo được đăng: 14/11/2014 Nghiên cứu điều chế sản phẩm để tăng tính ổn định của tinh dầu và kéo dài thời gian bảo vệ. 10/5/2014 Chun Đề Y Tế Cơng Cộng 265 ... Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Phân tích thành phần hóa học tinh dầu Bảng 3: Kết quả phân tích thành phần hóa học tinh dầu lá khuynh diệp STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Thành phần 1R- alpha... thành phần có tác dụng xua cơn trùng mạnh. Đánh giá tác dụng xua của tinh dầu khuynh diệp trên Aedes aegypti Trên mơ hình thử nghiệm lồng 40 x 40 x 40 cm Nồng độ tinh dầu 30% tương ứng 0,857 (l/ ... các tài liệu cơng bố. Thành phần hóa học tinh dầu Phù hợp với hầu hết các tài liệu đã cơng bố trước đây. Mẫu tinh dầu khuynh diệp khơng thấy thành phần PMD (para‐menthane ‐3,8‐diol) một thành phần có tác dụng xua cơn trùng mạnh.