Cây sả là một loài thực vật được trồng phổ biến tại Việt Nam để làm gia vị, làm thuốc chữa cảm sốt... Tinh dầu sả từ lâu đã được sử dụng như một tác nhân xua muỗi và diệt côn trùng. Mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát thành phần hóa học tinh dầu và đánh giá tác dụng xua muỗi aedes aegypti của tinh dầu sả.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 THÀNH PHẦN VÀ TÁC DỤNG XUA MUỖI AEDES AEGYPTI CỦA TINH DẦU SẢ (CYMPOBOGON NARDUS) Huỳnh Kha Thảo Hiền*, Lê Thành Đồng*, Dương Phước An** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Cây Sả loài thực vật trồng phổ biến Việt Nam để làm gia vị, làm thuốc chữa cảm sốt… Tinh dầu Sả từ lâu sử dụng tác nhân xua muỗi diệt côn trùng Mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát thành phần hóa học tinh dầu đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti tinh dầu Sả Phương pháp nghiên cứu: Chưng cất tinh dầu phương pháp cất lơi theo nước Thành phần hóa học mẫu tinh dầu được phân tích phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) Đánh giá tác dụng xua muỗi theo qui trình “Khảo nghiệm hóa chất, chế phẩm diệt côn trùng, diệt khuẩn dùng lĩnh vực gia dụng y tế” - Bộ Y tế Kết nghiên cứu: Tinh dầu Sả chưng cất có màu vàng nhạt, mùi thơm đặc trưng, tỉ trọng 0,8915, suất quay cực từ - 1,25º đến - 5º, số chiết quang 1,4850 - 1,4936 Thành phần tinh dầu phân tích GCMS thu thành phần có phân tử đặc trưng: anpha beta Citral Đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti cho thấy hệ số bảo vệ tinh dầu Sả 90% sau 90 phút xoa tinh dầu nồng độ tinh dầu 25% ethanol lượng dùng 1ml 25 cm2 diện tích da từ cổ tay đến khuỷu tay từ ống cổ chân đến gối Kết luận: Tính chất lý - hóa thành phần tinh dầu thu từ Sả phù hợp với công bố thành phần thuốc vị thuốc Việt Nam Tác dụng xua Aedes aegypti với nồng độ tinh dầu sả 25% ethanol có hệ số bảo vệ (92,93 ± 1, 415%) thời gian bảo vệ 90 phút lồng 40 x 40 x 40 cm Từ khóa: tinh dầu, Sả , Aedes aegypti, Citral ABSTRACT COMPOSITION AND REPELLENT ACTIVITY OF ESSENTIAL OIL OF LEMONGRASS IN AEDES AEGYPTI Huynh Kha Thao Hien, Le Thanh Dong, Duong Phuoc An, * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - Supplement of No - 2013: 216 - 219 Background: Lemongrass is planted popularly in Vietnamese as a spice, as well as a medicine and essential oil that has long been used as an anti-mosquito & anti-insecticide agent Objectives: surveying chemical composition and evaluating the effect of oil extracts from Lemongrass in repelling Aedes aegypti Methods: Essential oil from Lemongrass plant is extracted by heat hydro-distillation The chemical composition was identified and quantified by GC-MS analyses Evaluating the effect of lemongrass oil in repelling Aedes aegypti by using protocol “Examining of chemicals, insecticides, bactericides applied by household and sanitation” - Ministry of Health Results: Essential oil from Lemongrass have yellowish, specific odor, d = 0.8915, Optical rotation from 1.25º to - 5º, refraction index 1.4850 - 1.4936, a total of eight compounds were identified from essential oil using GC-MS analyses which are specific constituent: Alpha - citral, Beta - citral, … Evaluating the effect of essential oil extracted from citronellal herb in repel Aedes aegypti showed protection coefficient over 90% and protection * Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – CT TPHCM, ** Khoa Dược ĐH Y Dược TPHCM Tác giả liên lạc: KS Huỳnh Kha Thảo Hiền, ĐT: 0909317936, Email : thaohienhuynh@gmail.com 216 Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học time after 90 minutes expose essential oil to concentration 25% in ethanol which ml essential oil was applied to 25 cm2 of volunteer’s forearm or knee Conclusion: Physic-chemical properties and essential oil composition from Lemongrass (cympobogon nardus) match with essential oil composition published in the “Vietnamese medicinal plants and herbs” Evaluating the effect of essential oil extracted from Lemongrass in repelling Aedes aegypti shows 25% oil concentration with a protection coefficient of 92.93 ± 415% after 90 minutes in a test cage 40 x 40 x 40 cm Key words: essential oil, Lemongrass, Aedes aegypti, citral Poaceae) ĐẶT VẤN ĐỀ Để phòng tránh bệnh muỗi lây truyền: sốt rét, sốt xuất huyết biện pháp phun tồn lưu tẩm biện pháp phòng tránh cá nhân chủ yếu Một biện pháp đơn giản tiện lợi sử dụng kem xoa dung dịch xua muỗi Trên thị trường nước có nhiều loại sản phẩm dạng kem xua muỗi Soffell, Off ! Remos …mà thành phần chủ yếu hợp chất DEET, hóa chất tổng hợp Cây Sả (Cympobogon nardus Renld - Poaceae) loài thực vật trồng phổ biến Việt Nam để làm gia vị thực phẩm, thuốc chữa cảm sốt… Tinh dầu Sả từ lâu sử dụng tác nhân xua muỗi diệt côn trùng Trong năm qua, cơng trình nghiên cứu chế phẩm dịch chiết diệt xua trùng có nguồn gốc thực vật công bố kết cho thấy hiệu bảo vệ chúng cao, tiêu biểu sản phẩm tinh dầu(1,3,4,5,6,7) Với nguồn nguyên liệu thực vật tương đối dễ tìm, giá thành khơng cao dễ dàng phân hủy môi trường tự nhiên Đây triển vọng cho công tác nghiên cứu sản xuất sản phẩm xua côn trùng truyền bệnh nói chung muỗi nói riêng ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Cây Sả cung cấp từ nhà Vườn khu vực Đức Hòa tỉnh Long An Muỗi thử nghiệm Muỗi Aedes aegypti - ngày tuổi, cung cấp phòng ni Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng TP.HCM, đủ tiêu chuẩn, chưa hút máu nuôi dung dịch glucose 10% Phương pháp nghiên cứu Phương pháp chưng cất tinh dầu Chưng cất tinh dầu phương pháp chưng cất lôi nước Xác định thành phần hóa học tinh dầu phương pháp GC-MS Tinh Sả sau chiết xuất xác định thành phần hóa học phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) Phân viện Khoa học vật liệu TP.HCM với máy Agilent 190918-433, cột TR-5MS (30 m; 0,25 mm; 0,25 m film) Sử dụng Helium làm khí mang áp suất 7,05 bar, thể tích bơm ml Chu trình nhiệt: bắt đầu 600C, tăng 30C/ phút đến 2400C Sử dụng thư viện phổ NIST để nhận danh thành phần tinh dầu - Chiết xuất tinh dầu từ Sả phương pháp chưng cất lôi theo nước Phương pháp đánh giá tác dụng xua tinh dầu Sả Theo qui trình “Khảo nghiệm hóa chất, chế phẩm diệt côn trùng, diệt khuẩn dùng lĩnh vực gia dụng y tế - Bộ Y tế” - Khảo sát thành phần hóa học tinh dầu đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti tinh dầu chiết từ Sả (Cympobogon nardus - Tinh dầu pha lỗng dung mơi thích hợp (ethanol) điều chế thành nồng độ khác (4 mức nồng độ 15%, 20%, 25%, 30% Xuất phát từ thực tế tiến hành nghiên cứu “Thành phần tác dụng xua muỗi Aedes aegypti tinh dầu Sả” nhằm mục tiêu: Chuyên Đề Ký Sinh Trùng 217 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học ) Mơ hình lồng thử nghiệm, gồm loại có kích thước sau: - Lồng 1: Kích thước 40 x 40 x 40 (cm) - Lồng 2: Kích thước x x (m) Đánh giá hiệu lực xua theo công thức hệ số bảo vệ (HSBV) X (%) K x100 K hiệu suất phù hợp với tài liệu công bố trước đây(2,8) Phân tích thành phần hóa học tinh dầu Bảng Kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu Cây Sả TT Thành phần Beta - pinene Beta - trans ocimene 4,6,6 - trimethyl bicyclo [3,3,1] hept -3-en-2-ol Beta - citral Alpha - citral Selina-6-en-4-ol Alpha-Cadiol 1,4a-dimethyl-7-(1methylethylidene)d ecahydro-1naphtalenol X: hệ số bảo vệ K: số lần muỗi đậu vào tay (chân) lồng đối chứng : số lần muỗi đậu vào tay (chân) lồng thử nghiệm Phương pháp xử lý kết nghiên cứu Kết hệ số bảo vệ trình bày dạng Mean ± SEM So sánh kết trung bình HSBV sử dụng phép kiểm “t - test” So sánh phương sai HSBV trung bình sử dụng Anova yếu tố “F - test” Đánh giá tính an tồn tinh dầu Sả Tính an tồn tinh dầu khuynh diệp đánh giá dựa bảng câu hỏi vấn tác dụng phụ loại hóa chất, chế phẩm KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Chiết xuất tinh dầu Sả Bảng Hiệu suất chưng cất phương pháp cất lôi theo nước Nguyên liệu Sả Độ ẩm Lượng tinh Hiệu suất Khối lượng (kg) (%) dầu (ml) (% ) 50 25 52,5 0,14 Bảng Tính chất lý - hóa tinh dầu Sả Tính chất Màu sắc, mùi Tỉ trọng 25º C Năng suất quay cực Chỉ số chiết quang o 25 C Tính tan Tinh dầu Sả Màu vàng nhạt Mùi thơm đặc trưng 0,8915 Từ - 1.25º đến - 5º 1.4850 - 1.4936 Tan tốt dung môi phân cực Ethanol Nhận xét: Tinh dầu thu có đặc điểm 218 CT phân Thời gian tử lưu (phút) C10H16 7,659 Hàm lượng% 5,536 C10H16 9,551 0,396 C10H16O 15,480 1,352 C10H16O C10H16O C15H26O C15H26O 17,802 19,151 32,902 34,345 36,437 52,258 2,489 1,229 C15H26O 35,788 0,303 Nhận xét: Kết phân tích tinh dầu sả (Cympobogon nardus) cho thấy thành phần hóa học có tinh dầu phù hợp với thành phần hóa học cơng bố “Những thuốc vị thuốc Việt Nam GS Đỗ Tất Lợi” Các thành phần tinh dầu chủ yếu dẫn xuất terpen dẫn chất aldehyd Kết thử nghiệm hệ số bảo vệ tinh dầu khuynh diệp Thử nghiệm hệ số bảo vệ lồng 40 x 40 x 40 cm Bảng Kết thử nghiệm hệ số bảo vệ tinh dầu Sả Thời gian bảo vệ Nồng độ 15% 59,25 ± Sau 30 phút 2,081 Sau 60 phút 92,92 ± 0,797 Sau 90 phút Hệ số bảo vệ (%) Nồng độ Nồng độ 20% 25% 82,32 ± 84,24 ± 5.845 6.614 98,01 ± 93,68 ± 0,375 1,396 92,93 ± 1,415 Nồng độ 30% 93,65 ± 0.728 94,89 ± 0,730 Nhận xét: Thời điểm sau 90 phút khả bảo vệ tinh dầu Sả nồng độ sử dụng 25% 92,93 ± 1, 415 (%) nồng độ 15%, 20%, 30% theo quy ước kết thúc thử nghiệm khơng tác dụng bảo vệ Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Thử nghiệm hệ số bảo vệ lồng x x 2m Bảng Kết thử nghiệm hệ số bảo vệ tinh dầu sả Thời gian bảo vệ Nồng độ 15% 90,30 ± Sau 30 phút 2,093 Sau 60 phút Hệ số bảo vệ (%) Nồng độ Nồng độ 20% 25% 97,22 ± 97,72 ± 0,306 0,196 59,50 ± 65,05 ± 1,567 3,736 Nồng độ 30% 94,79 ± 0,532 Nhận xét: So sánh kết trung bình hệ số bảo vệ thời điểm sau 60 phút nồng độ tinh dầu sả sử dụng hệ số bảo vệ nồng độ 25% cao (65,05 ± 3,736%) Tuy nhiên, kết thống kê so sánh hệ số bảo vệ trung bình nồng độ 25% với 20% khác khơng có ý nghĩa (p > 0,05) Các nồng độ 15% 30% theo quy ước không bảo vệ Kết thử nghiệm lồng x x 2m khẳng định nồng độ tinh dầu Sả 25% có hệ số bảo vệ tốt so với nồng độ thử nghiệm khác điều kiện KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ Kết luận Về tính chất lý - hóa tinh dầu Sả Chất lượng tinh dầu Sả thu phương pháp chưng cất lơi nước đạt tính chất lý - hóa Về hiệu suất thu phù hợp so với tài liệu công bố Thành phần hóa học tinh dầu Thu thành phần có thành phần đặc trưng Sả Anpha Beta Citral Đánh giá tác dụng xua tinh dầu Sả Aedes aegypti Mơ hình thử nghiệm lồng 40 x 40 x 40 cm Ở nồng độ 25%, hệ số bảo vệ tinh dầu sả cao (92,93 ± 1, 415) thời gian bảo vệ 90 phút Tiếp tục theo dõi sau 90 phút bảo vệ khơng (theo quy ước) Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Nghiên cứu Y học Mô hình thử nghiệm lồng x x m Ở nồng độ 25% hệ số bảo vệ tinh dầu sả 65,05 ± 3,736, cao nồng độ 20% (59,50 ± 1,567) thời gian bảo vệ nồng độ 60 phút Tiếp tục theo dõi sau 60 phút bảo vệ khơng (theo quy ước) Tinh dầu Sả (Cymbopogon nardus Rendl) xem sản phẩm tiềm có tác dụng xua trùng Tính an tồn tinh dầu thử nghiệm Theo kết vấn bảng câu hỏi không thấy tác dụng phụ suốt trình khảo nghiệm Đề nghị - Nghiên cứu điều chế sản phẩm để tăng tính ổn định tinh dầu kéo dài thời gian bảo vệ - Khảo sát biến đổi thành phần tinh dầu Sả theo thời điểm, theo mùa tác dụng chúng - Đánh tác dụng xua tinh dầu Sả lồi trùng truyền bệnh hay gây bệnh khác TÀI LIỆU THAM KHẢO Barnard DR and Xue RD(2004), Laboratory Evaluation of Mosquito Repellents Against Aedes albopictus, Culex nigripalpus, and Ochlerotatus triseriatus (Diptera: Culicidae), J Med Entomol 41 (4), 726-730 Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 688-689, 742-744 Guidelines for efficacy testing of mosquito to repellents for human skin WHO/HTM/NTD/WHOPES/2009.4 Jantan Iand Zaki ZM(1998), Development Of EnvironmentFriendly Insect Repellents From The Leaf Oils Of Selected Malaysian Plants, ASEAN Review of Biodiversity and Environmental Conversation (ARBEC) Masetti A, Maini S (2006), Arm in cage tests to compare skin repellents against bites of Aedes albopictus, Bulletin insectology 59 (2):157-160 Mustapha D, Frances SP, Stricman D(2006), Insect repellents: Principle, methods and uses CRC Press Rajkumar S and Jebanesan A (2007) Repellent activity of selected plant essential oils against the malarial fever mosquito Anopheles stephensi, Tropical Biomedicine 24 (2), 71-75 Văn Đình Đệ (2002), Sản xuất chất thơm thiên nhiên tổng hợp, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 7-22 219 ... tế” - Khảo sát thành phần hóa học tinh dầu đánh giá tác dụng xua muỗi Aedes aegypti tinh dầu chiết từ Sả (Cympobogon nardus - Tinh dầu pha lỗng dung mơi thích hợp (ethanol) điều chế thành nồng độ... phù hợp so với tài liệu công bố Thành phần hóa học tinh dầu Thu thành phần có thành phần đặc trưng Sả Anpha Beta Citral Đánh giá tác dụng xua tinh dầu Sả Aedes aegypti Mơ hình thử nghiệm lồng... phân tích tinh dầu sả (Cympobogon nardus) cho thấy thành phần hóa học có tinh dầu phù hợp với thành phần hóa học cơng bố “Những thuốc vị thuốc Việt Nam GS Đỗ Tất Lợi” Các thành phần tinh dầu chủ