Nghiên cứu với mục tiêu nhằm xây dựng quy trình pha chế và tiêu chuẩn hóa bộ kit định lượng creatinin trong huyết thanh. Nghiên cứu ứng dụng các phần mềm vi tính (Design-Expert, FormRules, INForm, Microsoft Office Excel) để tối ưu hoá công thức bộ kit.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHA CHẾ BỘ KIT ĐỊNH LƯỢNG CREATININ TRONG HUYẾT THANH Nguyễn Thị Phương Thảo*, Trần Thanh Nhãn** TÓM TẮT: Mở đầu: Việc sản xuất kit thử dùng cho định lượng chất lĩnh vực xét nghiệm sinh hóa vấn đề giải lâu nước châu Âu, Mỹ, Nhật Trong đó, nước ta hầu hết kit dùng lĩnh vực phải nhập Sản xuất nước kit thử cho xét nghiệm hóa sinh với chất lượng ổn định, giá thành rẻ đòi hỏi cấp thiết Mục tiêu: Xây dựng quy trình pha chế tiêu chuẩn hóa kit định lượng creatinin huyết Phương pháp nghiên cứu: Ứng dụng phần mềm vi tính (Design-Expert, FormRules, INForm, Microsoft Office Excel) để tối ưu hố cơng thức kit Sự ổn định kit xác định phương pháp tự nhiên phương pháp lão hóa cấp tốc Kết quả: Đề tài khảo sát thông số tối ưu kit Các thông số tối ưu sau: nồng độ acid picric = 21,06 mmol/L; nồng độ NaOH = 333,55 mmol/L; nồng độ creatinin chuẩn = 5,41 mg/dL; thời gian t1 = 10 giây; thời gian t2 = 104 giây Thời hạn sử dụng kit dự đoán 42 tháng kể từ pha chế điều kiện bảo quản mát từ - 0C Bộ kit sử dụng để định lượng nồng độ creatinin huyết 327 bệnh nhân 21 huyết nội kiểm tra phòng sinh hố, bệnh viện Quận 4, thành phố Hồ Chí Minh có so sánh thống kê kết với kit ngoại nhập (ISE - Ý) sử dụng Kết cho thấy, kit có chất lượng tương đương với kit ngoại nhập Kết luận: Đã thực việc tối ưu hóa cơng thức pha chế kit định lượng creatinin huyết thẩm định cơng thức tối ưu Từ khóa: creatinin, huyết thanh, kit thử, tối ưu hóa ABSTRACT ESTABLISHMENT OF PROCESS OF MANUFACTURING FOR THE KIT USING SERUM CREATININE QUANTIFY Nguyen Thi Phuong Thao, Tran Thanh Nhan * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 652 - 659 Background: The production of the kit used to quantify substances in the field of biochemistry is a problem has been solved a long time in European countries, American and Japan Meanwhile, in Viet Nam almost of the kits used in this field is imported The production of test kits for the biochemical tests with stable quality, low price is an urgent requirement Objective: Process development and standardization of the kit for the quantification of the creatinin in serum Methods: Computer softwares (Design - Expert, FormRules, INForm, Microsoft Office Excel) were applied in the optimum mixing formular of the kit Real time method and accelerated study were used to determine the stability of the kit *Bệnh viện đa khoa Quận TPHCM ** Khoa Dược ĐHYD TPHCM Tác giả liên lạc: PGS TS Trần Thanh Nhãn ĐT: 0908593032 Email: nhanchi2002@yahoo.com 652 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Results: This study has investigated to optimize parameters of the kit Resulting conditions are as followed: concentration of picric acid = 21.06 mmol/L, concentration of NaOH = 333.55 mmol/L, concentration of standard creatimin = 5.41 mg/dL, time t1 = 10 seconds, time t2 = 104 seconds The expiry date of the kit was predicted 42 months from the manufacture date at - 80C The kit was used for the quantitative determination of the creatinin in the serum of 327 patients and 21 samples control (Internal Quality Control) at Biochemistry department of District hospital, at Ho Chi Minh city And then we compare with imported kit (ISE - Italy) are using currently at hospital The results showed the quality of this kit is the same with the kit imported (I.S.E - Italy) Conclusion: We have investigated to optimize parameters of the kit using serum creatinine quantify and evaluated the optimal formula of this kit Keywords: creatinin, serum, kit, optimize ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh lý thận bệnh lý thường gặp Một biểu bệnh tăng nồng độ creatinin máu Do việc định lượng creatinin huyết xét nghiệm sinh hóa quan trọng cần thực để giúp cho việc chẩn đốn sớm điều trị bệnh có hiệu Ở Việt Nam nay, số phòng thí nghiệm trường Đại học Đại học Khoa học Tự nhiên thành phố Hồ Chí Minh, Đại học Nơng nghiệp thành phố Hồ Chí Minh cơng ty Nam Khoa có nghiên cứu sản xuất kit thử, chủ yếu dùng sinh học phân tử nhằm xác định tác nhân gây bệnh người động vật như: kit PCR (Polymerase Chain Reaction) chẩn đoán lao, PCR chẩn đoán sốt xuất huyết, PCR chẩn đoán thương hàn, PCR chẩn đoán bệnh đốm trắng cho tôm, …Việc nghiên cứu sản xuất kit dùng xét nghiệm hóa sinh chưa quan tâm Bộ mơn Sinh Hóa - Độc Chất, khoa Dược Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh năm gần theo hướng nghiên cứu Trong lĩnh vực xét nghiệm hóa sinh lâm sàng, hầu hết phòng xét nghiệm sử dụng kit ngoại nhập Đó nguyên nhân làm tăng giá thành xét nghiệm, đồng thời làm tăng thêm gánh nặng điều trị cho bệnh nhân Việc sản xuất nước kit cho xét nghiệm hóa sinh với chất lượng ổn định, giá thành rẻ đòi hỏi Chuyên Đề Dược Khoa cấp thiết Xuất phát từ tình hình trên, thực nghiên cứu với mục tiêu xây dựng quy trình pha chế tiêu chuẩn hóa kit định lượng creatinin huyết NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên vật liệu: Picric acid Merck – Germany NaOH Merck – Germany Na2HPO4 Merck – Germany Creatinin chuẩn (2 mg/dL) I.S.E – Italy Multicalibrator serum Bio Rad – USA Huyết bệnh nhân Phương pháp nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm tối ưu hố quy trình pha chế kit(1,4,6) Quy trình định lượng creatinin: Hút xác 500 μL thuốc thử R1 (dung dịch acid picric) 500 μL thuốc thử R2 (dung dịch NaOH Na2HPO4) Trộn hai dung dịch để tạo thành 1000 μL thuốc thử R Hút xác 100 μL dung dịch mẫu thử Trộn đo mật độ quang bước sóng 500 nm thời gian chọn Thiết kế mơ hình thực nghiệm D-Optimal phần mềm Design-Expert v6, 2002 (Stat – Ease Inc, USA) Tối ưu hóa quy trình phần mềm INForm 3.0, 2003 (Intelligensys Ltd., UK) Thẩm định quy trình tối ưu(1,6,5) Pha chế kit định lượng creatinin theo công thức tối ưu tiến hành thẩm định quy trình tối ưu: 653 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Miền giá trị: Lấy mức tối ưu nồng độ creatinin làm mức sở, tiến hành pha dãy nồng độ creatinin thấp cao mức sở với khoảng biến thiên mg/dL Đo độ hấp thu mức thiết lập Vẽ đường tuyến tính Khi có lệch khỏi đường tuyến tính điểm đó, tiến hành pha dãy nồng độ creatinin khoảng mức lệch mức tuyến tính kề cận, với khoảng biến thiên 0,1 mg/dL Từ xác định khoảng tuyến tính cần tìm Xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính: Pha dãy nồng độ creatinin với nồng độ khác nhau, đo độ hấp thu lần nồng độ, lấy giá trị trung bình Với hỗ trợ phần mềm Ms Excel, tìm phương trình hồi quy tương quan độ hấp thu (biến số phụ thuộc y) nồng độ (biến số độc lập x), R2 hệ số hồi quy Vẽ đường tuyến tính Độ đặc hiệu: Xác định giá trị độ hấp thu nồng độ creatinin mg/dl mẫu chuẩn mẫu thử (mẫu huyết thanh).So sánh giá trị trung bình độ hấp thu mẫu chuẩn mẫu thử, dùng trắc nghiệm t tương ứng cặp (t - Test: Paired Two Sample for Means) để đánh giá khác có ý nghĩa thống kê hay khơng (với hỗ trợ phần mềm Ms-Excel) ta phân biệt ba khái niệm: độ lặp lại, độ xác trung gian độ lại Trong đó: SD (Standard Deviation): độ lệch chuẩn : giá trị trung bình giá trị CV%: hệ số phân tán Độ lặp lại (repeatibility): Thể mức độ xác hay mức độ lặp lại, mức độ dao động kết thực nghiệm thực trong: Cùng phòng thí nghiệm Cùng mẫu thử đồng Cùng kiểm nghiệm viên Cùng khoảng thời gian Đo lần lặp lại nồng độ miền giá trị phương pháp phân tích tính CV, yêu cầu CV ≤ 5% Độ xác trung gian (intermediate precision): Biểu thị độ xác phương pháp theo biến số phòng thí nghiệm tại: Nhiều ngày khác Với nhiều kiểm nghiệm viên Với dụng cụ khác Độ chép lại (reproducibility): Biểu thị độ xác nhiều phòng thí nghiệm tiến hành nghiên cứu mẫu đồng Tương tự độ lặp lại với điều kiện: Trong đó: n1 - số lần thực thí nghiệm mẫu x n2 - số lần thực thí nghiệm mẫu y s - phương sai Nếu | t | < tp(f): kit có tính đặc hiệu Độ xác (precision) Là mức độ sát gần giá trị riêng lẻ với giá trị trung bình thu áp dụng phương pháp đề xuất cho mẫu thử đồng điều kiện xác định Người Phòng thí nghiệm thay đổi Thay đổi phương pháp Độ đúng: Pha dung dịch creatinin mức nồng độ (80%, 100%, 120%) so với nồng độ tối ưu Từ độ hấp thu thu được, dựa vào đường chuẩn suy nồng độ thực tế (Oi), sau tính tỷ lệ phục hồi F% độ lệch thực nghiệm B% theo biểu thức (với yêu cầu B% ≤ 2%, F%: 100 ± 2%.): N B = ∑( 654 Oi − Ei Ei 100) / N Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 F = N Oi ∑ ( Ei 100 ) / N Trong - B: độ lệch thực nghiệm F: tỷ lệ phục hồi Kt = Nghiên cứu Y học − ln( C / C ) Δt Trong đó: C C0: hàm lượng thuốc thời điểm trước t0 sau t Ei: nồng độ theo lý thuyết Δt = khoảng thời gian = t0 - t Oi: nồng độ theo thực tế k: hệ số Van’t Hoff = 2Δ/10 Δ: mức chênh lệch nhiệt độ (với: Δ = t1 - t2) Thử nghiệm độ ổn định kit(2,7,8) Sản xuất quy mơ phòng thí nghiệm lơ thuốc thử định lượng creatinin, tiến hành thử nghiệm độ ổn định kit phương pháp điều kiện theo dõi Điều kiện theo dõi nhiệt độ 40 ± oC: tương tự nhiệt độ 25 ± oC Theo dõi độ ổn định kit theo phương pháp dài hạn Áp dụng phương trình Arrhenius để tính tuổi thọ kit Điều kiện bảo quản kit theo phương pháp dài hạn ± 30C Khi lô kit vừa pha chế xong, chúng tiến hành định lượng mẫu creatinin chuẩn, kết thu độ hấp thu trung bình lần thí nghiệm lơ Thực lặp lại thao tác tháng so sánh kết với lần để kiểm tra độ ổn định kit Thời gian kết thúc thực nghiệm thời gian mà tiêu chí thuốc thử không đạt (màu sắc, độ kết tủa, độ nhớt, ) cho kết định lượng mẫu có sai số ≥10% Thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính liên quan thời gian bảo quản nồng độ đo (ln[C]) Từ dự đốn tuổi thọ thuốc Từ hệ số K tìm nhiệt độ bảo quản 250C 400C, tính lnK điều kiện bảo quản Theo dõi độ ổn định kit theo phương pháp già hoá cấp tốc Điều kiện theo dõi nhiệt độ 25 ± oC Khi lô kit vừa pha chế xong, chúng tiến hành định lượng mẫu creatinin chuẩn, kết thu độ hấp thu trung bình lần thí nghiệm lơ Thực lặp lại thao tác tháng so sánh kết với lần để kiểm tra độ ổn định kit Thời gian kết thúc thực nghiệm thời gian mà tiêu chí thuốc thử không đạt (màu sắc, độ kết tủa, độ nhớt, ) cho kết định lượng mẫu có sai số ≥ 10% Áp dụng phương trình Van’t Hoff: Chuyên Đề Dược Khoa Tính tuổi thọ kit với nhiệt độ già hóa 250C nhiệt độ bảo quản thật 50C Thiết lập bảng tương ứng lnK 1000/T tương ứng nhiệt độ (T: nhiệt độ tuyệt đối Kelvins, với T = 273 + tbảo quản ) Lập đường tuyến tính liên quan lnK 1000/T Suy lnK nhiệt độ bảo quản Từ lnK nhiệt độ bảo quản tính t90 nhiệt độ bảo quản với: t90 = 0,1053/K nhiệt độ bảo quản Tuổi thọ xác định kit: kết tuổi thọ có thời gian ngắn tìm từ phương pháp thử nghiệm nghiên cứu Ứng dụng kit mẫu huyết bệnh nhân(6) Chúng sử dụng kit pha chế để định lượng creatinin 21 mẫu huyết nội kiểm tra (IQC: Internal Quality Control) 327 mẫu huyết bệnh nhân bệnh viện quận So sánh kết với kit ngoại nhập (I.S.E Italy) Dùng trắc nghiệm F so sánh phương sai (F - Test: Paired Two Sample for Variances) trắc nghiệm t phương sai khác (t - Test: Two - Sample Assuming Equal Variances) (t - Test: Two - Sample Assuming Unequal Variances) để đánh giá khác có ý nghĩa thống kê hay khơng 655 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Độ hấp thu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu KẾT QUẢ Thiết kế thực nghiệm tối ưu hố quy trình pha chế kit Quy trình định lượng creatinin chịu ảnh hưởng yếu tố sau: Acid picric, NaOH, nồng độ creatinin chuẩn, thời gian đo cuối Bảng Các mức yếu tố ảnh hưởng Yếu tố Acid picric (mmol/ L) NaOH (mmol/ L) Creatinin chuẩn (mg/dL) Thời gian đo cuối (giây) 4,37 120 1,0 60 Mức 15,28 240 3,5 90 26,2 360 6,0 120 Thông số tối ưu: liệu đầu phần mềm thông minh INForm v3 thơng số quy trình tối ưu hố, gồm có: Acid picric = 21,06 mmol/ L NaOH) = 333,55 mmol/ L Thời gian đo cuối Thẩm định quy trình tối ưu Khoảng tuyến tính: 0,4 – 16 mg/dl 0.8 0.7 Nồng độ Creatinin thực (mg/dL) 5,4 5,4 5,4 5,4 5,4 5,4 Độ hấp thu 0,2622 0,2613 0,2608 0,2618 0,2627 0,2618 Nồng độ Creatinin từ đường chuẩn (mg/dL) 5,47 5,39 5,31 5,50 5,42 5,43 Độ xác trung gian 0.6 Độ hấp thu (OD500) Bảng Kết thực nghiệm độ lặp lại Từ kết bảng 3, chúng tơi tính CV% = 1,12% < 5% Kết cho thấy quy trình tối ưu có độ lặp lại đạt yêu cầu quy trình phân tích Phương trình hồi quy tuyến tính ŷ= 0,0479x + 0,0031 Độ hấp thu tương ứng với nồng độ creatinin chuẩn có nồng độ 5,4 mg/dl mẫu xác định ba kỹ thuật viên ba máy phân tích hố học: LCD - Echo, Humalyzer 2000 BSA 3000 0.5 0.4 ŷ = 0,0479x + 0,0031 R2 = 0,9999 0.3 0.2 0.1 0.0 Đường chuẩn 10 15 20 Nồng độ Creatinin (mg/dL) Hình Đường chuẩn độ hấp thu nồng độ Độ đặc hiệu Bảng Kết độ hấp thu thử nghiệm độ đặc hiệu Độ hấp thu Mẫu Mẫu 656 Độ lặp lại Kết đánh giá độ lặp lại quy trình tối ưu trình bày bảng (với nồng độ creatinin 5,4 mg/dL) = 104 giây Mẫu chuẩn 0,0989 0,0992 0,0995 0,0990 Trắc nghiệm t tương ứng cặp (t-Test: Paired Two Sample for Means) cho thấy khơng khác có ý nghĩa thống kê giá trị độ hấp thu mẫu chuẩn mẫu thử (| tSta | = 2,13 < t0,05 = 2,507) Lần lặp lại Creatinin chuẩn= 5,41 mg/ dL Mẫu thử 0,0990 0,0993 0,0988 0,0982 Mẫu thử 0,0991 0,0993 Mẫu chuẩn 0,0994 0,0997 Từ kết bảng 4, tính CV% = 1,07 % < 5% Kết cho thấy quy trình tối ưu đạt độ xác trung gian Bảng Kết thẩm định độ xác trung gian Lần lặp lại Nồng độ Creatinin thực (mg/dL) 5,4 5,4 5,4 Nồng độ creatinin đo từ máy LCD - Humalyzer BSA 3000 Echo 2000 5,52 5,47 5,43 5,42 5,39 5,54 5,32 5,46 5,48 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Lần lặp lại Nồng độ Creatinin thực (mg/dL) 5,4 5,4 Nồng độ creatinin đo từ máy LCD - Humalyzer BSA 3000 Echo 2000 5,49 5,41 5,45 5,42 5,35 5,37 Lần lặp lại Nghiên cứu Y học Nồng độ Creatinin thực (mg/dL) 5,4 CV% máy Nồng độ creatinin đo từ máy LCD - Humalyzer BSA 3000 Echo 2000 5,32 5,48 5,46 1,41% 0,87% 0.94% Độ chép lại Bảng Kết thử nghiệm độ chép lại Ngày thử nghiệm Tên mẫu thử 26/05/09 30/06/09 28/07/09 25/08/09 29/09/09 27/10/09 EQAS7 - 11 EQAS7 - 12 EQAS8 - 01 EQAS8 - 02 EQAS8 - 03 EQAS8 - 04 NỒNG ĐỘ CREATININ (mg/dL) CV% Cùng Thử nghiệm Cùng Cùng nhóm Cùng nhóm phương pháp (MS: 8723) phương pháp 7,17 7,07 7,38 1,39 2,93 3,59 3,48 3,71 3,06 3,34 6,22 6,07 6,45 2,41 3,70 1,21 1,25 1,18 3,31 2,48 2,80 2,89 2,97 3,21 6,07 8,02 8,22 8,80 2,49 9,73 Qua bảng phân tích kết thử nghiệm độ chép lại quy trình định lượng creatinin huyết kit, nhận thấy: Độ Bảng Kết thử nghiệm độ Mức % - Đối với nhóm có phương pháp thử nghiệm (động học dựa phản ứng Jaffé), kết 80% định lượng creatinin từ kit so với kết trung bình nhóm có CV% < 5% 100% - Đối với nhóm nhóm (cùng nhóm máy phân tích mẫu), kết định lượng creatinin từ kit so với kết trung bình 120% Ei (mg/dL) 4,3 4,3 4,3 5,4 5,4 5,4 6,5 6,5 6,5 Ai 0,21094 0,20854 0,20854 0,26182 0,26566 0,26518 0,32854 0,31942 0,32374 Oi (mg/dL) 4,33 4,28 4,28 5,39 5,47 5,46 6,78 6,59 6,68 nhóm lần so sánh có lần cho Dựa vào số liệu bảng 3, chúng tơi tính kết có CV% > 5% Vì nhóm sử dụng độ lệch thực nghiệm B = 1,41% tỷ lệ nhiều phương pháp khác nhau, nên phân tán tương đối rộng Nhóm có giá trị tham khảo Thử nghiệm độ chép xác định quy trình định lượng creatinin huyết kit đạt độ chép theo yêu cầu Qua thử nghiệm độ lặp lại, độ xác trung gian độ chép lại cho thấy hồi phục F = 102 % Kết cho thấy quy trình tối ưu đạt độ đạt theo yêu cầu Thử nghiệm độ ổn định kit Phương pháp dài hạn Đánh giá mặt cảm quan: quan sát qua chu kỳ dùng thuốc thử định lượng creatinin lọ R1 R2 lơ cho thấy quy trình định lượng creatinin huyết thuốc thử trong, không đổi màu, không xuất kit nghiên cứu đạt độ xác kết tủa Kết xác định nồng độ thay đổi gồm độ lặp lại, độ xác trung gian độ theo thời gian phương pháp thể chép lại bảng sau Chuyên Đề Dược Khoa 657 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Bảng Sự thay đổi nồng độ theo thời gian (phương pháp dài hạn) Chu kỳ Bắt đầu tháng tháng tháng 12 tháng Lô 2,047 2,035 2,017 2,001 1,987 Nồng độ creatinin Lô 2,022 2,010 1,999 1,988 1,977 Lô 2,027 2,020 2,000 1,990 1,976 Với hỗ trợ phần mềm Excel, chúng tơi thiết lập đường tuyến tính liên quan thời gian bảo quản nồng độ (ln[C]) Từ xác định tuổi thọ lơ kit theo phương pháp dài hạn: Bảng 8.Tuổi thọ theo phương pháp dài hạn Lô 42 tháng Lô 56 tháng Lơ 48 tháng Phương pháp già hóa cấp tốc Áp dụng phương trình Van’t Hoff tính tuổi thọ kit Điều kiện 250C có hệ số Van’t Hoff k = 22 Tuổi thọ lô kit Bảng Tuổi thọ kit 25 C Lô 52 tháng Lô 59 tháng Lơ 55 tháng Điều kiện 400C có hệ số Van’t Hoff k = 23,5 Tuổi thọ lơ kit tìm bảng sau: Bảng 10 Tuổi thọ kit 400C Lô 51 tháng Lô 56 tháng Lô 54 tháng Áp dụng phương trình Arrhenius tính tuổi thọ kit Bảng 11.Tuổi thọ kit tính theo phương trình Arrhenius 1000/T 50C lnK K 50C t90 (ngày) Tuổi thọ (tháng) Nhiệt độ 0C (273 + độ K) Lô Lô Lô 3,59 3,59 3,59 - 9,6437 - 9,8006 - 9,7414 0,000069 0,000059 0,000063 1521 1778 1677 51 59 56 Xác định tuổi thọ kit: 42 tháng 658 Ứng dụng kit mẫu huyết bệnh nhân so sánh với kit ngoại nhập: Bảng 12 So sánh kết định lượng creatinin kit Tên mẫu Nội kiểm Bệnh nhân Số lượng n = 21 n = 327 tSta 0,052 0,455 F 1,135 0,718 Trắc nghiệm F so sánh phương sai(F-Test: Paired Two Sample for Variances) Mẫu huyết F = 1,135 < F0,05 = 2,124 nội kiểm: Mẫu huyết F = 0,718 < F0,05 = 0,833 bệnh nhân: Trắc nghiệm F so sánh phương sai (F Test: Paired Two Sample for Variances) mẫu huyết nội kiểm huyết bệnh nhân cho kết F < F0,05, điều chứng tỏ phương sai khơng khác có ý nghĩa thống kê Trắc nghiệm t phương sai so sánh giá trị trung bình (t - Test: Two - Sample Assuming Equal Variances) Mẫu huyết tSta = 0,052 < t0,05 = 2,021 nội kiểm: Mẫu huyết tSta = 0,4553 < t0,05 = 0,833 bệnh nhân: Từ trắc nghiệm cho thấy nồng độ creatinin huyết đo từ kit theo dõi kit I.S.E khơng khác có ý nghĩa thống kê KẾT LUẬN Trong đề tài nghiên cứu này, thực việc tối ưu hóa cơng thức pha chế kit định creatinin huyết thẩm định cơng thức tối ưu; Bên cạnh đó, tiến hành thử nghiệm độ ổn định kit ứng dụng kit để định lượng creanin mẫu huyết bệnh nhân có so sánh với kết định lượng với kit ngoại nhập Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Đề tài giới hạn quy mơ phòng thí nghiệm, cần tiếp tục khảo sát điều kiện cơng nghiệp để đưa sản xuất quy mô lớn TÀI LIỆU THAM KHẢO Asean (2005), Guideline On Stability Study Of Drug Product, update revision 22 Bộ mơn Hóa Phân Tích Kiểm Nghiệm (2006), Giáo trình lý thuyết kiểm nghiệm thuốc, tr 41- 66, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Carstesen CA (1993), Development and Evaluation of a Reagent Carrier with a new Reaction Sequence for the Determination of Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học Creatinine in Blood, Plasma, Serum and Urine, Eur J Chem Clin Biochem., Vol 31, No 5, (12 pages) Đặng Văn Giáp (2002),Thiết kế tối ưu hóa cơng thức quy trình, tr.1-97, Nhà xuất bảnY học Tp Hồ Chí Minh Đặng Văn Giáp (2003), Phân tích thống kê kiểm nghiệm dược phẩm, tr.36-44, 50-57, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Đặng Văn Giáp (2003), Trắc nghiệm giả thiết thống kê nghiên cứu khoa học, tr.1-61, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Đặng Văn Hòa (2008), Võ Thị Bạch Huệ, Các phương pháp tính tuổi thọ thuốc, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Lê Thị Thiên Hương (2006), Lý thuyết độ ổn định thuốc, tr.113, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Mutnick AH, Swanson LH, Shargel L, Souney PF (2001), Comprehensive pharmacy review, fouth edition, Lippincott Williams and Wilkins, A Wolters Kluwer company, pp 970989 659 ... Tối ưu hóa quy trình phần mềm INForm 3.0, 2003 (Intelligensys Ltd., UK) Thẩm định quy trình tối ưu(1,6,5) Pha chế kit định lượng creatinin theo công thức tối ưu tiến hành thẩm định quy trình tối... nghiệm độ ổn định kit Phương pháp dài hạn Đánh giá mặt cảm quan: quan sát qua chu kỳ dùng thuốc thử định lượng creatinin lọ R1 R2 lô cho thấy quy trình định lượng creatinin huyết thuốc thử trong, không... LUẬN Trong đề tài nghiên cứu này, thực việc tối ưu hóa cơng thức pha chế kit định creatinin huyết thẩm định cơng thức tối ưu; Bên cạnh đó, tiến hành thử nghiệm độ ổn định kit ứng dụng kit để định