Đang tải... (xem toàn văn)
Cladosporium spp. có mức độ nhiễm trong không khí nhà ở khá cao và gây nguy hại cho sức khoẻ con người, đặc biệt ở những người suy giảm miễn dịch. Do đó, cần có biện pháp kiểm soát chúng. Nội dung bài viết với mục tiêu nhằm dò tìm hoạt tính kháng cladosporium sp. của các hỗn hợp 2 tinh dầu cho tác dụng hiệp lực hay cộng lực.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG CLADOSPORIUM SP CỦA HỖN HỢP TINH DẦU Đoàn Thị Hồng Mai*, Lê Thị Ngọc Huệ* TĨM TẮT Cladosporium spp có mức độ nhiễm khơng khí nhà cao gây nguy hại cho sức khoẻ người, đặc biệt người suy giảm miễn dịch Do đó, cần có biện pháp kiểm sốt chúng Mục tiêu : Dò tìm hoạt tính kháng Cladosporium sp hỗn hợp tinh dầu cho tác dụng hiệp lực hay cộng lực Phương pháp : Để xác định MID tinh dầu sử dụng phương pháp thử hoạt tính kháng nấm mốc phần bay tinh dầu thực hộp nhựa tích 0,56 L Dùng phương pháp bàn cờ số FIC (Fractional Inhibitory Concentration) để dò tìm hoạt tính kháng nấm phối hợp tinh dầu Kết : TD Quế có hoạt tính kháng Cladosporium sp mạnh tinh dầu khác Dò tìm cặp TD: TD Quế – TD Sả chanh, TD Quế – TD Màng tang kháng Cladosporium sp với hoạt tính kháng nấm mạnh thể tích tinh dầu nhỏ 2,5 µl Kết luận : Sự phối hợp tinh dầu giúp tăng hoạt tính kháng nấm, giảm thể tích sử dụng tinh dầu dùng tinh dầu riêng lẻ, giảm đến lần nhờ khắc phục nhược điểm số tinh dầu mùi hăng, tính kích ứng tinh dầu Với kết đưa cặp tinh dầu phối hợp ứng dụng vào thực tế tạo chế phẩm kiểm soát nấm sau Từ khoá: Tinh dầu, hỗn hợp tinh dầu, hoạt tính kháng nấm ABSTRACT RESEARCH ON THE ANTIFUNGAL ACTIVTY OF ESSENTIAL OILS MIXTURE AGAINST CLADOSPORIUM SP Doan Thi Hong Mai, Le Thi Ngoc Hue * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 226 - 229 Background: The polluted level of Cladosporium spp indoor air environment is rather high, and Cladosporium spp are harmful to human health, especially on the acquired immune deficiency patients So, we need the method to control them Objectives: Screening for essential oil mixtures against Cladosporium sp with synergism or additive effect Methods: Identifying MID of essential oils with the plastic box (volume 0.56 L) Using chessboard method and FIC (Fractional Inhibitory Concentration) index to evaluate the effect of combinations of two essential oils on inhibition of fungal growth Results: Cinnamon oil effects to Cladosporium sp stronger than the others There are essential oil pairs (Cinnamon – lemon grass, Cinnamon – Litsea cubeba) with the strong antifungal activities and the smallest essential oil’s volume (2.5 µl) Conclusions: A usefulness of the combination essential oils leads to increase the antifungal activities and decrease the volume up to times in comparison with using the single essential oil This also makes good weakness of essential oils (strong fragrance, irritation) Base on these results, the essential oils mixtures will be used for creating the household spraying product, fumigant to control moulds afterwards * Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Lê Thị Ngọc Huệ ĐT: 0906394895 226 Email: ngochue_l@yahoo.com Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học Keywords: Essential oils, essential oils mixture, antifungal activitive ĐẶT VẤN ĐỀ Qua báo cáo ngồi nước cơng trình khảo sát mức độ nhiễm nấm mốc mơi trường khơng khí cho thấy Cladosporium spp có mức độ nhiễm cao(6,2) Cladosporium spp gây dị ứng gây bệnh cho người quan da, móng, mắt, mũi Năm 2008, VN có ca bệnh não Cladosporium bantiana gây ra(5) Trong tình hình bệnh nấm mốc ngày tăng cao đặc biệt người suy giảm miễn dịch Để làm giảm thiểu bệnh nấm mốc cần có biện pháp kiểm sốt chúng Với mục đích dùng tinh dầu làm chế phẩm xơng phòng diệt nấm mốc, cơng trình nghiên cứu nước khảo sát hoạt tính kháng nấm tinh dầu số chủng nấm, nhiên chưa có nghiên cứu thực chủng nấm Cladosporium spp ĐỐI TƯỢNG- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng thử nghiệm Tinh dầu thử nghiệm: tinh dầu (TD) thử nghiệm (tinh dầu Quế, Sả chanh, Màng tang, Tràm) mua cơng ty thành phố Hồ Chí Minh kiểm định thành phần có tinh dầu (%) Trung Tâm Thuốc có nguồn gốc tự nhiên-Khoa Dược-ĐHYD Tp.HCM thực Cách tính kết MID = v.d ( mg / L ) V MID: lượng tinh dầu tối thiểu ức chế nấm mốc lít khơng khí (mg/ L) v: thể tích tinh dầu tối thiểu ức chế nấm (ml) d: tỉ trọng tinh dầu (g/ ml) V: thể tích hộp nhựa 0,56 L Phương pháp phối hợp tinh dầu(1) Phối hợp TD theo phương pháp bàn cờ dựa theo số FIC (Fractional Inhibitory Concentration) để xác định hiệu phối hợp sau: FIC ≤ 0,5 0,5 < FIC ≤ 1< FIC Hiệp lực Cộng lực Đối kháng Chọn phối hợp hiệp lực cộng lực để có hỗn hợp tinh dầu cho haot5 tính kháng nấm mạnh tinh dầu riêng lẻ Thực cặp TD phối hợp: TD Quế - TD Sả chanh TD Quế - TD Tràm TD Sả chanh – TD Tràm TD Quế - TD Màng tang TD Sả chanh – TD Màng tang TD Màng tang – TD Tràm KẾT QUẢ Phát hoạt tính kháng nấm tinh dầu PP1 Qua bảng cho kết quả: Nấm mốc thử nghiệm: Cladosporium sp ly trích từ mơi trường - Cả TD có hoạt tính kháng nấm tốt, với thể tích TD dùng < 50 ul Phương pháp nghiên cứu (4,3 - Độ mạnh TD giảm dần từ TD Quế > TD Màng tang > TD Sả chanh > TD Tràm Thực qua bước: Ổn định huyền dịch nấm Phát hoạt tính kháng nấm tinh dầu dùng phương pháp1 (PP1) Xác định MID (Minimum Inhibited Dose) TD (Màng tang, Quế, Sả chanh, Tràm gió) nấm Cladosporium sp dùng phương pháp (PP2) Dò tìm hoạt tính kháng Cladosporium sp hỗn hợp TD dùng PP2 Bảng 1: Hoạt tính kháng Cladosporium sp TD PP1 Tinh dầu Thể tích TD (ul) Ф vòng ức chế (mm) MID (mg/L) Quế 0,06 60 2,25 Màng tang 0,5 60 15,53 Sả chanh 0.5 60 16,25 Tràm 32 60 1040 Bước 1-3 tóm tắt theo sơ đồ 1: Chuyên Đề Dược Học 227 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học Hoạt hóa nấm Huyền dịch nấm Vortex 30”, để lắng 7’ Đo OD, λ = 530 nm Chỉnh huyền dịch nấm 1-5.106 CFU/ml PP1 PP2 Gây nhiễm nấm/ PDA Phát hoạt tính kháng nấm TD Xác định MID (mg/L) TD Đặt đĩa giấy TD vào tâm nắp hộp petri Đặt đĩa thạch nấm vào hộp nhựa Úp đáy hộp lên phần nắp, bao kín plastic Cho TD vào đĩa đặt cạnh đĩa thạch nấm 250C/ ngày 250C/ ngày Đo vòng kháng nấm Quan sát tăng trưởng nấm Sơ đồ 1: Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng nấm phần bay tinh dầu PP1 PP2 Vhộp = 0,56 L Đĩa TD Đĩa giấy tẩm TD Đĩa thạch nấm Hình 1: Mơ hình thử nghiệm hoạt tính kháng nấm TD Chứng TD Quế TD Sả chanh TD Màng tang TD Tràm Hình 2: Hoạt tính kháng nấm TD PP1 228 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học Xác định MID TD PP2 KẾT LUẬN Bảng 2: Hoạt tính kháng Cladosporium sp TD (PP2) Sự phối hợp TD có ưu điểm: tăng tác dụng kháng nấm, giảm thể tích TD sử dụng, giảm nhược điểm số TD Do đó, đưa kết cặp TD phối hợp dò tìm vào nghiên cứu tạo chế phẩm xơng, phun xịt phòng diệt nấm, đặc biệt cặp TD tích nhỏ TD Quế – TD Sả chanh, TD Quế – TD Màng tang Tinh dầu (TD) Quế (Q) Màng tang (MT) Sả chanh (SC) Tràm (T) Thể tích TD (ul) 8 64 MID (mg/L) 1,875 12,43 13 104 TD Quế có hoạt tính kháng Cladosporium sp mạnh nhất, phù hợp với cơng trình nghiên cứu báo cáo(6) Hoạt tính kháng nấm hỗn hợp TD Bảng 3: Thể tích hỗn hợp TD ức chế Cladosporium sp TD phối hợp Thể tích TD (µ µl) Quế – Sả 2,5 µl (0,5µl Q – 2µl SC) Quế – Màng tang 2,5 µl (0,5µl Q – 2µl MT) Quế – Tràm 16,25 µl (0,25µl Q – 16µl T) Sả – Màng tang µl (4µl SC – 4µl MT) Sả – Tràm Màng tang – Tràm 20 µl (4µl SC – 16 µl T) 20 µl (4µl MT – 16 µl T) TÀI LIỆU THAM KHẢO Thể tích TD giảm (µ µl) 3,6 lần 3,6 lần Inouye S (2000) Inhibitory effect of essential oils on apical growth of Aspergillus fumigatus by vapour contact Mycoces, 43(1-2): 17-23 lần Nakahara K, Alzoreky NS (2004) Growth-inhibitory activity against maize weevil and the antifungal activities of volatile compounds from citronella grass JARQ (Japan International research center for Agricultural Sciences),2:14 Pham Van Linh, Truong Quang Anh, Ton Nu Phuong Anh, Tran Duc Thai, Nguyen Thi Hoa (2008) Cladophialophora bantiana and Candida albicans mixed infection in cerebral abscess of an HIV- negative patient J Infect Developing Countries, 2(3): 245-248 Phan Thị Hồng Ân, Lê Thị Ngọc Huệ (2009) Khảo sát nấm mốc độc phòng máy lạnh thử tác dụng số tinh dầu chúng Tạp chí Y học Tp Hồ Chí Minh, 13(1):143149 lần 3,6 lần 3,6 lần Qua kết dò tìm hoạt tính phối hợp TD kháng Cladosporium sp bảng cho thấy: - Phối hợp TD giúp giảm thể tích TD sử dụng- so với dùng TD đơn lẻ (3,6-4 lần) - cặp phối hợp TD tích kháng nấm nhỏ 2,5 µl: TD Quế – Sả chanh, TD Quế – Màng tang - Cặp TD Quế – Tràm giúp khắc phục nhược điểm tính kháng nấm yếu TD Tràm, giảm mùi hăng TD Quế Chuyên Đề Dược Học Bruton LL, Lazo JS, Parker KL (2006) Goodman and Gilman’s, The pharmacological: Basic of Therapeutics, 11th ed, 1102-1104 Cetinkaya Z, Fidan F (2005) Assessment of indoor air fungi in Western-Anatolia, Turkey Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology, 23(2-3):87-92 Ngày nhận báo 13.12.2012 Ngày nhận xét phản biện 24.12.2013 Ngày báo đăng: 10.03.2014 229 ... FIC Hiệp lực Cộng lực Đối kháng Chọn phối hợp hiệp lực cộng lực để có hỗn hợp tinh dầu cho haot5 tính kháng nấm mạnh tinh dầu riêng lẻ Thực cặp TD phối hợp: TD Quế - TD Sả chanh TD Quế - TD Tràm... Cladosporium sp dùng phương pháp (PP2) Dò tìm hoạt tính kháng Cladosporium sp hỗn hợp TD dùng PP2 Bảng 1: Hoạt tính kháng Cladosporium sp TD PP1 Tinh dầu Thể tích TD (ul) Ф vòng ức chế (mm) MID (mg/L)... vòng kháng nấm Quan sát tăng trưởng nấm Sơ đồ 1: Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng nấm phần bay tinh dầu PP1 PP2 Vhộp = 0,56 L Đĩa TD Đĩa giấy tẩm TD Đĩa thạch nấm Hình 1: Mơ hình thử nghiệm hoạt