Mục tiêu của nghiên cứu nhằm khảo sát mức độ nhiễm nấm và aflatoxin B1 (AFB1) trên một số mẫu dược liệu được bán ở Quận 5 -Thành phố Hồ Chí Minh. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT MỨC ĐỘ NHIỄM NẤM MỐC VÀ AFLATOXIN TRONG MỘT SỐ DƯỢC LIỆU BÁN Ở QUẬN – THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Nguyễn Đinh Nga*, Nguyễn Thị Kiều Khanh**, Văn Phố*** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Các tiêu chuẩn vi nấm độc tố nấm có dược liệu quan tâm nhằm đảm bảo chất lượng, hiệu quả, an toàn cho người sử dụng Mục tiêu nghiên cứu: Khảo sát mức độ nhiễm nấm aflatoxin B1 (AFB1) số mẫu dược liệu bán quận – thành phố Hồ Chí Minh Vật liệu phương pháp: Tổng số nấm mốc nấm men 141 mẫu dược liệu xác định phương pháp pha loãng thạch khoai tây đường (xác định CFU/1g dược liệu) Định danh nấm mốc dựa vào đặc điểm khóm nấm mơi trường thơng thường chọn lọc; quan sát hình thái vi nấm kính hiển vi Hàm lượng aflatoxin B1 dược liệu xác định kit ELISA Kết quả: 86/141 mẫu dược liệu khảo sát có mức độ nhiễm vượt 500 CFU/g chi nấm thường găp với tỉ lệ giảm dần từ Aspergillus (A niger, A flavus, A flavus AF+, A glaucus) Mucor/Rhizopus, Penicillium, Paecilomyces nấm men 31/55 mẫu dược liệu có hàm lược AFB1 cao ppb chiếm 56,36% Kết luận: Cần quan tâm đến mức độ nhiễm nấm, giới hạn chủng loại vi nấm, giới hạn độc tố nấm dược liệu Từ khóa: Dược liệu, nấm mốc, A flavus, aflatoxin B1 ABSTRACT SURVEY ON MOULD CONTAMINATION AND AFLATOXIN B1 IN SOME KINDS OF MATERIAL MEDICINE IN DISTRICT – HO CHI MINH CITY Nguyen Dinh Nga, Nguyen Thi Kieu Khanh, Van Pho * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No - 2012: 93 - 96 Background: In order to guarantee the quality of the material medicine Objective: Determine contaminated level of mould, yeast and aflatoxin in material medicine Methods: Colony forming unit of mould and yeast were determined by dilution plating in general enumeration medium (PDA) Mould identification by examination of the colony characters in general and selective media and using microscope Aflatoxin B1 was quantitative by ELISA Outcome: Material medicine in our survey contaminated moulds, yeast and aflatoxin B1 in high level Aspergillus included A flavus appears in high rate Conclusion: It should be interested to specified limits of fungal and mycotoxin contamination in material medicine Key words: material medicine, mould, A flavus, aflatoxin B1 Đại học Y Dược Tp HCM, Khoa Dược Đại học Mở Tp HCM Công ty CTCBIO VINA Tác giả liên lạc: TS Nguyễn Đinh Nga ĐT: 0908 836969 Email: nganguyendinh@yahoo.com Chuyên Đề Ký Sinh Trùng 93 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, yêu cầu sử dụng sản phẩm thuốc, thực phẩm chức năng, mỹ phẩm,…có nguồn gốc từ dược liệu ngày gia tăng Vì vấn đề hiệu quả, an toàn, tác dụng ý… cho người sử dụng đặt ra, có tiêu chuẩn chất lượng vi sinh vật nói chung tiêu chuẩn vi nấm độc tố nấm có dược liệu quan tâm(3,5,7) Trong phạm vi đề tài, tập trung khảo sát mức độ nhiễm nấm aflatoxin B1 (AFB1) số mẫu dược liệu bán quận – thành phố Hồ Chí Minh VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP Mẫu dược liệu 141 mẫu thuộc loại dược liệu phổ biến thu mua cửa hàng đường Hải Thượng Lãn Ông – Phường 10 – Quận – Thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 10/2010 đến tháng 3/2011 Phương pháp nghiên cứu Xác định độ ẩm dược liệu Bằng phương pháp sấy khô theo Dược điển Việt Nam IV(1) Xác định mức độ nhiễm nấm mốc nấm men dược liệu Tổng số nấm mốc nấm men 1g xác định phương pháp pha lỗng mơi trường thạch khoai tây đường -PDA (đếm khóm nấm có 1g dược liệu phát triển môi trường (CFU/ 1g dược liệu)(8, 9) Định danh nấm mốc: Nấm mốc nhiễm dược liệu định danh đến mức chi dựa vào đặc điểm khóm nấm hình thái kính hiển vi(4) Phát Aspergillus flavus A parasiticus môi trường AFPA (Aspergillus Flavus and Parasiticus Agar), 94 Czapeck-Dox(2) Aspergillus flavus sản sinh aflatoxin (Aspergillus AF+) môi trường CCA (Coconut Cream Agar)(5) Hàm lượng aflatoxin B1 Trong dược liệu xác định kit ELISA KẾT QUẢ Độ ẩm mẫu dược liệu Trong 141 mẫu dược liệu khảo sát, có 66 mẫu vượt giới hạn độ ẩm cho phép DĐVN IV(1) chiếm 46,81% Các mẫu có độ ẩm cao rơi vào loại dược liệu thịt, củ, vỏ Câu kỷ tử, Táo tàu, Trần bì Điều phản ảnh điều kiện chế biến bảo quản dược liệu sở chưa đảm bảo Đây nguyên nhân ảnh hưởng đến chất lượng dược liệu, mức độ nhiễm nấm mốc Mức độ nhiễm nấm mốc, nấm men dược liệu Bảng Tổng số nấm mốc-nấm men có mẫu dược liệu Dược liệu Câu kỷ tử Diệp hạ châu Hạt sen Táo tàu Thảo Trần bì Ý dĩ Tổng cộng Số mẫu nhiễm TS.VN/1 g DL (cfu/g) 5 ≤ 5.10 10 – 10 > 10 15 11 55 (39%) 10 21 11 26 79 (56%) 0 (5%) n 15 15 32 15 15 15 34 141 Kết bảng cho thấy 60% mẫu dược liệu khảo sát có mức độ nhiễm vượt 500 CFU/g (giới hạn cho phép thuốc có nguồn gốc dược liệu theo Dược điển Việt Nam IV)(1) Các dược liệu có tỉ lệ nhiễm cao gồm Diệp hạ châu ( 93,3%), Hạt sen (65,6%), Táo tàu (53,3%), Trần bì (73,3%) Ý dĩ (76,5%) Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học Bảng Phân bố chi nấm dược liệu Dược liệu Câu kỷ tử Diệp hạ châu Hạt sen Táo tàu Thảo Trần bì Ý dĩ Tổng cộng Aspergillus Số lượng dược liệu bị nhiễm Penicillium Mucor/Rhizopus Paecilomyces Nấm men (40%) 15 (100%) 30 (93,8%) (13,3%) 10 (66,7%) 12 (80%) 32 (94,1%) 117 (83,0%) (40%) 13 (40,6%) (6,7%) (40%) 18 (52,9%) 44 (31,2%) (20%) (9,4%) (46,7%) (13,3%) (11,7%) 19 (13,5%) Các dược liệu khảo sát nhiễm chi Aspergillus với tỉ lệ cao nhất, Mucor/Rhizopus Penicillium Các dược liệu có tỉ lệ nhiễm Aspergillus cao gồm Diệp hạ châu (100%), ý dĩ, Hạt sen, trần bì,…Kết phù hợp với khảo sát mẫu dược liệu nước(3,5,7): Dược liệu thường nhiễm Aspergillus Penicillum, nấm mốc khơng phân hủy dược liệu mà sản sinh độc tố như: aflatoxin, citrinin, ochratoxin Trong 117 mẫu nhiễm Aspergillus spp., Aspergillus niger xuất với tỉ lệ cao (56%), A flavus chiếm 32%, A flavus AF+ chiếm 17%, A glaucus chiếm (10,64%) A flavus A falvus AF+ nhiễm với tỉ lệ cao Hạt sen (34,4%) Ý dĩ (20,6%) hai dược liệu dùng phỗ biến chế phẩm bổ cho trẻ em thực phẩm Từ kết bảng 1, kết định danh Aspergillus, chọn dược liệu có mức độ nhiễm nấm cao để khảo sát có hay khơng có diện aflatoxin B1 dược liệu Bảng Hàm lượng aflatoxin B1 mẫu dược liệu Dược liệu Diệp hạ châu Sen Trần bì ý dĩ Tổng cộng Số lượng dược liệu nhiễm AFB1 ≤ ppb >5–10 ppb > 10 ppb 24 (43,64%) 4 13 25 (45,45%) AFB1: aflatoxin B1 Chuyên Đề Ký Sinh Trùng 2 (10,91%) (26,7%) (33,3%) 21 (65,6%) (13,3%) (40%) (20%) 17 (50%) 58 (41,1%) (6,7%) (18,8%) (6,7%) (6,7%) (6,7%) (11,7%) 14 (9,9%) Giới hạn aflatoxin B1 thực phẩm (Bộ Y tế Việt Nam) dược liệu (WHO)(10) phải không ppb Kết bảng cho thấy 50% mẫu nhiễm aflatoxin B1 vượt giới hạn cho phép BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN Thuốc từ cỏ người dân Việt Nam sử dụng từ đời sang đời khác, nguồn thiếu phòng trị bệnh Các kết nhận từ khảo sát cở mẫu nhỏ, chủng loại dược liệu giới hạn, địa điểm lấy mẫu hẹp cho thấy chất lượng dược liệu cung cấp cho người tiêu dùng không đảm bảo tiêu chuẩn vi sinh Do dược liệu môi trường tốt cung cấp đầy đủ nguồn dinh dưỡng cho vi nấm phát triển, cộng với khí hậu nóng ẩm Việt Nam nên khơng thể u cầu dược liệu hồn tồn vơ trùng Tuy nhiên, để có nguồn dược liệu tốt, đảm bảo an toàn, hiệu quả, tránh tác động ngồi ý cho người dùng, cần có quan tâm kiểm sốt tồn diện từ khâu trồng trọt, thu hái, chế biến, chuyên chở, bảo quản,… Vì vậy, cần có nhiều nghiên cứu để đề nghị tiêu chí hợp lý mức độ nhiễm, giới hạn chủng loài vi nấm nhiễm giới hạn độc tố nấm dược liệu TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2010) Dược Điển Việt Nam IV Fente CA, Jaimez OJ, Vázquez BI, Franco CM and Cepeda A (2001) New additive for culture media for rapid identification of aflatoxin-producing Aspergillus strains Applied and enviromental microbiology, 67(10): 4858-4862 Hitokoto H et al (1978) Fugal contamination and mycotoxin detection of powdered herbal drugs Applied and Enviromental 95 Nghiên cứu Y học 96 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Microbiology, (Aug 1978), 252-256 Kennenth BR, Dorothy, Fennel I (1965) Aspergillus flavus In: Rapper KB The genus Aspergillus, pp 357-404 The William & Wilkin Company Lin MT and Dianese JC (1976) A coconut-agar medium for rapid detection of aflatoxin production of Aspergillus spp Phytopathology, 66: 1466-1469 McDonald I et al (2010) Microbial load of some medicinal plants sold in some local market in Abeokuta, Nigeria Tropical Journal of pharmaceutical Research, 9(3): 251-256 10 Nagy HA, Yousseef YA et al (1998) Contamination of some comon medicinal plant samples and spices by fungi and their mycotoxin Bot Bull Acad Sin 39: 279-285 Pitt, John I, Ailsa D, Hocking (2009) Fungi and food spoilage Springer science + Business Media, www.springer.com, 275-323 Trần Linh Thước (2006) Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm Nxb Giáo Dục WHO (2007) WHO guidlines for assessing quality of herbal medicines with reference to contaminants and residues Chuyên Đề Ký Sinh Trùng ... chuẩn vi nấm độc tố nấm có dược liệu quan tâm(3 ,5, 7) Trong phạm vi đề tài, tập trung khảo sát mức độ nhiễm nấm aflatoxin B1 (AFB1) số mẫu dược liệu bán quận – thành phố Hồ Chí Minh VẬT LIỆU – PHƯƠNG... bảo Đây nguyên nhân ảnh hưởng đến chất lượng dược liệu, mức độ nhiễm nấm mốc Mức độ nhiễm nấm mốc, nấm men dược liệu Bảng Tổng số nấm mốc -nấm men có mẫu dược liệu Dược liệu Câu kỷ tử Diệp hạ châu... cộng Số mẫu nhiễm TS.VN/1 g DL (cfu/g) 5 ≤ 5. 10 10 – 10 > 10 15 11 55 (39%) 10 21 11 26 79 (56 %) 0 (5% ) n 15 15 32 15 15 15 34 141 Kết bảng cho thấy 60% mẫu dược liệu khảo sát có mức độ nhiễm