Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá tác dụng kháng virut viêm gan B (HBV) của các nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ cây Nhó đông. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG VIRUT VIÊM GAN B CỦA CÁC NHĨM HOẠT CHẤT TỪ RỄ CÂY NHĨ ĐƠNG (Morinda longissima) IN VITRO Đặng Thành Chung*; Trần Thu Hường**; Nguyễn Cơng Thùy Trâm** Đồn Thị Vân**; Vũ Thị Hà**; Nguyễn Trung Hưng*; Lương Cao Đồng* Hồ Anh Sơn*; George B Lenon***; Nguyễn Mạnh Cường**; Nguyễn Lĩnh Tồn* TĨM TẮT Mục tiêu: đánh giá tác dụng kháng virut viêm gan B (HBV) nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng Phương pháp: tác dụng kháng HBV hoạt chất HCTN-213, HCTN-214, HCTN-215, HCTN-216 HCTN-217 từ rễ Nhó đơng tế bào (TB) Hep3B nhiễm HBV đánh giá kỹ thuật realtime-PCR Kết quả: nồng độ HBV-ADN TB Hep3B giảm rõ rệt tác dụng nhóm hoạt chất từ rễ Nhó đông: HCTN-213 giảm 90,68%; HCTN-215 giảm 93,77% HCTN-216 giảm 98,11%, mạnh so với nhóm lamivudine 86,64% thời điểm 72 sau thử thuốc, so với chứng không điều trị (p < 0,05) Kết luận: hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng có tác dụng ức chế nhân lên HBV in vitro * Từ khóa: Virut viêm gan B; Nhó đơng; Morinda longissima; Kháng virut; Hep3B Anti-Hepatitis B Virus Activity of Components from the Roots of the Morinda longissima in Vitro Model Summary Objectives: To evaluate anti-HBV activity of components produced from the roots of Morinda longissima Methods: Anti-HBV activity of components HCTN-213, HCTN-214, HCTN-215, HCTN-216 and HCTN-217, produced from the roots of Morinda longissima on human HBV infected Hep3B cell line were examined by using realtime-PCR Results: The HBV-DNA levels in Hep3B cells were significantly reduced after treament with components Components HCTN-213 (90.68%), HCTN-215 (93.77%) and HCTN-216 (98.11%) and lamivudine (86.64%) remarkly reduced HBV-DNA levels in comparison to untreated control groups (p < 0.05) after 72h of post treatments Conclusion: The components produced from the roots of Morinda longissima were significantly redution of HBV replication in vitro * Key words: HBV; Morinda longissima; Antivirus; Hep3B * Học viện Quân y ** Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam *** Đại học RMIT Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Lĩnh Toàn (toannl@vmmu.edu.vn) Ngày nhận bài: 20/10/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 27/12/2015 Ngày báo đăng: 05/01/2016 85 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 ĐẶT VẤN ĐỀ Virut viêm gan B (HBV) thuộc họ Hepadnaviridae, loại virut hướng gan có cấu trúc ADN Bệnh biểu viêm gan cấp tính với thể nặng dẫn đến tử vong thể viêm gan mạn dẫn đến xơ gan ung thư gan [4, 5] Viêm gan virut B mạn nguyên nhân hàng đầu bệnh gan nhiều khu vực giới, đặc biệt khu vực châu Á Thái Bình Dương, khoảng > 400 triệu người có nguy dẫn đến xơ gan carcinoma TB gan (HCC) [3] Hiện có nhiều loại thuốc điều trị viêm gan B mạn Các thuốc chia làm nhóm chính, sử dụng điều trị riêng lẻ hay phối hợp Nhóm 1: thuốc gọi điều hoà miễn dịch, chúng tác động lên hệ thống miễn dịch thể kháng nguyên HBV bề mặt TB gan interferon (IFN) Nhóm thứ 2: thuốc chống virut, có tác dụng ức chế nhân lên virut, ngăn cản tượng nhiễm virut lên TB gan bình thường, khơng ảnh hưởng trực tiếp lên hệ thống điều hoà miễn dịch, mà ảnh hưởng gián tiếp Hiện nay, có thuốc kháng virut loại nucleotit chất tương đồng nucleotit lamivudin, adefovir, entecavir telbivudine, thuốc hàng đầu điều trị viêm gan virut B mạn [7] Việc nghiên cứu tìm kiếm thuốc có nguồn gốc tự nhiên nhà khoa học giới quan tâm Gần đây, nhà khoa học Trung Quốc tiến hành nghiên cứu sàng lọc 171 mẫu thực vật 76 loài, phát 13 hợp chất dịch chiết có tác dụng kháng viêm gan virut B dòng HepG2.2.15 Đặc biệt, hợp chất chrysophanol 8-O-beta-D-glucoside phân lập từ Rheum palmatum wogonin 86 phân lập từ Scutellaria baicalensis thể tác dụng mạnh [8] Hiện Việt Nam chưa có cơng bố khoa học mơ hình thử viêm gan virut B in vitro tác dụng ức chế nhân lên thuốc Việt Nam Tuy có nhiều cơng trình nghiên cứu đánh giá tác dụng Nhó đơng việc hỗ trợ bảo vệ TB gan chữa viêm gan mạn tính độc [1, 3] Nhưng chưa có cơng trình cơng bố thành phần phần hoạt chất có rễ Nhó đơng có tác dụng kháng HBV Vì chúng tơi tiến hành đề này nhằm: Đánh giá thay đổi nồng độ HBV-ADN tác dụng nhóm hoạt chất HCTN-213, HCTN-214, HCTN215, HCTN-216 HCTN-217 tách chiết từ rễ Nhó đơng mô h nh TB ung thư gan Hep3B nhiễm HBV ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tách chiết hoạt chất từ rễ Nhó đơng Bột rễ khơ Nhó đơng ngâm chiết tạo cao cồn (HCTN-210) Tiến hành xử lý cao chiết phương pháp hóa học thu sản phẩm A dạng bột màu vàng (HCTN-211) Sản phẩm A tiếp tục chiết tổng anthranoid thu sản phẩm B màu nâu đỏ (HCTN-212) Sản phẩm B phân tách sắc ký cột thu nhóm hoạt chất số (HCTN-213), (HCTN-214), (HCTN-215), (HCTN216), (HCTN-217) Mơ hình thử tác dụng kháng viêm gan virut B in vitro * Nuôi cấy TB Hep3B (ATCC): Để đánh giá hoạt tính kháng viêm gan virut B in vitro, chúng tơi sử dụng TB Hep3B TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 nhiễm HBV TB nuôi cấy môi trường nuôi cấy chuẩn Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM/F12) (Invitrogen, Mỹ) với 100 U/ml penicillin 100 mg/ml streptomycin (Hãng Invitrogen, Mỹ), nhiệt độ 37oC môi trường 5% CO2 Khi TB nuôi cấy đạt tỷ lệ 70 - 80% diện tích đĩa ni, tiến hành cấy chuyển sử dụng 0,05% trypsin/EDTA (Hãng Invitrogen, Mỹ), phút 37°C để tách TB khỏi đĩa nuôi cấy chuyển sang đĩa nuôi cấy với môi trường * Chuẩn bị thuốc thử: Để đánh giá tác dụng nhóm hoạt chất phân lập từ rễ Nhó đông HBV TB Hep3B so sánh với chứng dương thuốc lamivudine (STADAR 100 mg) chứng âm DMSO (Fisher Chemical) Tiến hành hòa tan hoạt chất thử DMSO với nồng độ 10 mg/ml, riêng với lamivudine 10 mM/l Sau h a tan hoạt chất vào dung dịch nuôi cấy TB với nồng độ cuối theo bảng sau: Bảng 1: Nồng độ sản phẩm từ rễ Nhó đơng DMSO dịch nuôi cấy TB Code Code thử Nồng độ DMSO Nồng độ dịch nuôi cấy TB Lamivudine Lamivudine 10 mM/l 50 M/l DMSO 100% 0,5% Nhóm hoạt chất số HCTN-213 10 mg/ml 50 g/ml Nhóm hoạt chất số HCTN-214 10 mg/ml 25 g/ml Nhóm hoạt chất số HCTN-215 10 mg/ml 50 g/ml Nhóm hoạt chất số HCTN-216 10 mg/ml 50 g/ml Nhóm hoạt chất số HCTN-217 10 mg/ml 50 g/ml DMSO * Cho thuốc thử vào TB nuôi cấy Hep3B thu sản phẩm sau thử thuốc: TB Hep3B gieo vào đĩa ni cấy giếng (đường kính cm) với nồng độ 105 TB/ml, tổng lượng TB ml x 105 TB/giếng môi trường nuôi cấy chuẩn Sau 24 giờ, tiến hành thay dịch nuôi cấy chứa thuốc thử với nồng độ cuối dịch nuôi cấy bảng Tiến hành thu TB thời điểm 48 72 sau thử thuốc (riêng nhóm đánh giá sau 72 thử thuốc, tiến hành thay dịch chứa thuốc thử thời điểm 48 giờ, sau thu TB thời điểm 72 tính từ lúc bắt đầu thử thuốc) TB nuôi cấy sử dụng để tách ADN dùng để định lượng HBV-ADN * Định lượng HBV-ADN: Tách chiết vật liệu di truyền virut (HBV-ADN) sử dụng sinh phẩm QIAgen (CHLB Đức) Các bước tiến hành thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Sau định lượng HBV-ADN TB Hep3B kỹ thuật realtime-PCR Mồi primer đặc hiệu quy trình ln nhiệt mơ tả chi tiết nghiên cứu công bố gần [9] * Phương pháp xử lý số liệu thử nghiệm sinh học: Sử dụng thuật toán one-way analysis of Variance (ANOVA) phần mềm XLSTAT 2014 Kết trình bày dạng trung bình SEM Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 87 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Sử dụng TB Hep3B đánh giá tác dụng kháng HBV hoạt chất tách chiết từ rễ câ Nhó Đơng in vitro Để đánh giá tác dụng ức chế nhân lên HBV in vitro sản phẩm từ rễ Nhó đơng, chúng tơi sử dụng TB Hep3B (ATCC) TB ung thư gan người nhiễm HBV nuôi cấy mơi trường có sản phẩm chiết xuất từ rễ Nhó đơng Các thuốc thử h a tan dung môi DMSO trước cho vào môi trường nuôi cấy Đánh giá hiệu sản phẩm chiết xuất từ rễ Nhó đơng lên HBV thơng qua so sánh với lamivudine (sử dụng làm chứng dương thuốc có tác dụng ức chế nhân lên HBV chứng minh lâm sàng) DMSO (sử dụng làm chứng âm, dung mơi để hòa tan sản phẩm chiết xuất từ rễ Nhó đơng) Trước tiên, tiến hành xác định nồng độ tối ưu thuốc thử bao gồm sản phẩm chiết xuất từ rễ Nhó đơng, lamivudine DMSO, phép thử đánh giá tác dụng ức chế nhân lên HBV Nồng độ tối ưu thuốc thử liều cao thuốc thử mà khơng gây chết TB (Hep3B) Thông qua bước này, xác định nồng độ tối ưu cho thuốc thử môi trường nuôi cấy TB (bảng 1) TB Hep3B gieo vào giếng với nồng độ 105 TB/ml, tổng lượng TB ml x 105 TB/giếng Sau 24 gieo TB, TB bám tốt lên bề mặt đĩa nuôi đạt tỷ lệ 70 - 80% diện tích đĩa ni Tiến hành thử thuốc theo nồng độ tối ưu (bảng 1) đánh giá phát triển TB thời điểm 48 72 sau thử thuốc (hình 1, hình 2) Lamivudine DMSO Nhó đơng A B Hình 1: Hình ảnh TB ni cấy tác dụng thuốc thử thời điểm 48 (Các TB nuôi cấy thời điểm 48 sau cho thuốc thử Hình A: TB ni cấy chụp vật kính 4x Hình B: TB ni cấy chụp vật kính 10x) 88 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QN SỰ SỐ 1-2016 Lamivudine Nhó đơng DMSO A B Hình 2: Hình ảnh TB ni cấy tác dụng thuốc thử thời điểm 72 (Các TB nuôi cấy thời điểm 72 sau cho thuốc thử Hình A: TB ni cấy chụp vật kính 4x Hình B: TB ni cấy chụp vật kính 10x) Kết cho thấy, TB phát triển khỏe mạnh phủ hầu hết bề mặt đĩa đến thời điểm 72 sau thử thuốc, tất nhóm thử (lamivudine (50 M/l); DMSO 0,5% nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng (HCTN-214 25 g/ml HCTN-213, HCTN-215, HCTN-216, HCTN-217 50 g/ml) Như vậy, với nồng độ chất không làm ảnh hưởng đến phát triển tự nhiên TB Hep3B Đánh giá hiệu ức chế nhân lên HBV hoạt chất tách chiết từ rễ câ Nhó đơng thơng qua định ƣợng HBV TB Hep3B thời điểm 48 72 sau thử thuốc Để đánh giá hiệu ức chế nhân lên HBV tác dụng sản phẩm từ rễ Nhó đơng, chúng tơi tiến hành thử thuốc tế bào nuôi cấy Hep3B nhiễm HBV (sử dụng lamivudine làm chứng dương dung môi DMSO làm chứng âm) với nồng độ thuốc thử theo bảng 1, thu TB để định lượng HBV-ADN thời điểm 48 72 sau thử thuốc kỹ thuật realtime-PCR Bảng 2: Kết realtime-PCR định lượng HBV-ADN nhóm TB tác dụng mẫu sản phẩm từ rễ Nhó đơng thời điểm 48 Ký hiệu mẫu HBV tƣơng đối x 10e9/1 mg ADN tổng số SE % ức chế % lỗi % ức chế nhân lên HBV DMSO 1.023,63 209,97 100 20,51 Lamivudine 138,12 200,08 13,49 19,54 86,50 89 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 HCTN-213 35,14 166,58 3,43 16,27 96,56 HCTN-214 100 84,06 9,76 8,21 90,23 HCTN-215 176,84 145,35 17,27 14,20 82,72 HCTN-216 278,08 148,73 27,16 14,52 72,83 HCTN-217 51,82 221,24 5,06 21,61 94,93 Bảng 3: Kết realtime-PCR định lượng HBV-ADN nhóm TB tác dụng mẫu sản phẩm từ rễ Nhó đông thời điểm 72 Ký hiệu mẫu HBV tƣơng đối x 10e9/1 mg ADN tổng số SE % ức chế % lỗi % ức chế nhân lên HBV DMSO 1.250 222,05 100 17,76 Lamivudine 166,90 137,79 13,35 11,02 86,64 HCTN-213 116,37 141,93 9,31 11,35 90,68 HCTN-214 517,5 3,41 41,4 0,27 58,6 HCTN-215 77,77 182,8 6,22 14,62 93,77 HCTN-216 23,6 159,04 1,88 12,72 98,11 HCTN-217 259,03 119,83 20,72 9,58 79,27 Lượng HBV sau 48 72 thử thuốc Hình 3: So sánh khả ức chế nhân lên HBV có TB Hep3B thời điểm 48 72 sau thử thuốc 90 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 Kết cho thấy, lượng HBV TB Hep3B giảm rõ rệt tác dụng sản phẩm tách chiết từ rễ Nhó đơng so với nhóm chứng âm DMSO hai thời điểm 48 72 sau thử thuốc Lượng virut TB Hep3B tác dụng sản phẩm tách chiết từ rễ Nhó đơng, số có kết thấp hơn, số gần tương đương số cao khơng đáng kể so với nhóm TB tác dụng lamivudine hai thời điểm thử thuốc (hình 3) Lượng HBV có xu hướng giảm theo thời gian (so sánh thời điểm 48 72 sau thử thuốc) số nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng (HCTN213, HCTN-214, HCTN-217), nhóm thử với DMSO nhóm hoạt chất lại tách chiết từ rễ Nhó đơng (HCTN-215, HCTN-216) có xu hướng tăng thay đổi khơng đáng kể nhóm thử lamivudine (bảng bảng 3) Như vậy, số nhóm hoạt chất tách chiết HCTN-215, HCTN-216 từ rễ Nhó đơng kéo dài sử dụng làm giảm dần lượng virut TB Hep3B Đánh giá hiệu ức chế nhân lên HBV (%) tác dụng hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng so sánh với nhóm chứng âm DMSO (quy ước 100%, khơng có tác dụng ức chế nhân lên HBV) Kết cho thấy, nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng có tác dụng ức chế nhân lên virut dao động từ 72,8 - 96,6% 58,6 93,8% thời điểm 48 72 sau thử thuốc, nhóm thử lamivudine chứng dương ức chế 86,5% 86,6% thời điểm 48 72 Như vậy, hiệu ức chế nhân lên HBV tác dụng nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng số thấp hơn, số tương đương với tác dụng lamivudine (hình 3) Đặc biệt, nhóm hoạt chất số (HCTN-213, 90,68%), nhóm hoạt chất số (HCTN-215, 93,77%), nhóm hoạt chất số (HCTN-216; 98,11%), đối chứng dương lamivudine (86,64%) thời điểm 72 sau thử thuốc, nhiên, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Hiệu ức chế nhân lên virut tác dụng hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng có xu hướng tăng theo thời gian (so sánh thời điểm 48 72 sau thử thuốc) số hoạt chất (HCTN-215 HCTN-216) có xu hướng giảm theo thời gian số hoạt chất lại (HCTN-213, HCTN-214, HCTN-217), khơng đổi thuốc thử lamivudine đối chứng với nhóm khơng dùng thuốc tác dụng lên HBV (DMSO) (hình 3) BÀN LUẬN Kết xác định nồng độ tối ưu thuốc thử cho thấy TB phát triển khỏe mạnh phủ hầu hết bề mặt đĩa thời điểm 72 sau thử thuốc, tất nhóm thử (lamivudine (50 M/l); DMSO 0,5% sản phẩm từ rễ Nhó đơng (HCTN-214 25 g/ml HCTN-213, HCTN-215, HCTN-216, HCTN-217 50 g/ml) 91 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 Kết thử nghiệm cho thấy, nhóm hoạt chất tách chiết từ rễ Nhó đơng có tác dụng ức chế mạnh nhân lên HBV, thể qua kết định lượng trực tiếp HBV-ADN TB Hep3B phương pháp realtime-PCR Hiệu kháng HBV hoạt chất từ rễ Nhó đơng nghiên cứu so sánh với tác dụng lamivudine, thuốc có tác dụng kháng HBV thường sử dụng lâm sàng Kết cho thấy, nhóm hoạt chất số (HCTN-213; 90,68%), nhóm hoạt chất số (HCTN-215, 93,77%), nhóm hoạt chất số (HCTN-216; 98,11%) có tác dụng ức chế nhân lên HBV cao lamivudine (86,64%), nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Các nhóm hoạt chất số (HCTN-215) số (HCTN-216) từ rễ Nhó đơng có tác dụng kháng HBV mơ hình in vitro, đặc biệt có tác dụng mạnh theo thời gian (72 giờ) Đây kết tốt, có ý nghĩa, cần nghiên cứu đánh giá tiếp tương lai Nhóm hợp chất số 1, mức độ ức chế nhân lên virut bị giảm từ thời điểm 48 tới 72 giờ, tương đương nhóm dùng lamivudine Như vậy, qua sàng lọc tác dụng sinh học 05 nhóm hoạt chất chiết tách từ rễ Nhó đơng phát 03 nhóm hoạt chất HCTN-213, HCTN-215 HCTN-216 có tác dụng ức chế HBV cao nhóm lamivudine, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Kết sở để phát triển sản phẩm dược từ 03 nhóm hoạt chất có tiềm cho thử nghiệm in vitro, in vivo lâm sàng điều trị bệnh viêm gan B mạn tính 92 Chúng tơi xây dựng thành cơng mơ hình phát hiện, đánh giá dịch chiết, hoạt chất có tác dụng kháng HBV in vitro cách sử dụng TB ung thư gan Hep3B có nhiễm HBV Đây mơ hình thử nghiệm kháng HBV in vitro thực Việt Nam, phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế, đồng thời mở triển vọng nghiên cứu đánh giá thử nghiệm thuốc hoạt chất nhằm tìm phương thuốc điều trị viêm gan virut B ứng dụng lâm sàng KẾT LUẬN Đã xây dựng thành cơng mơ hình phát hiện, đánh giá dịch chiết, hoạt chất có tác dụng kháng HBV in vitro cách sử dụng TB ung thư gan Hep3B có nhiễm HBV Tiến hành đánh giá tác dụng kháng HBV nhóm hoạt chất HCTN-213, HCTN-214, HCTN-215, HCTN-216 HCTN-217 tách chiết từ rễ Nhó đơng TB ung thư gan Hep3B nhiễm HBV Kết quả: nồng độ HBV-ADN TB Hep3B giảm rõ rệt tác dụng nhóm hoạt chất từ rễ Nhó đơng, dao động khoảng 72,8 - 96,6% thời điểm 48 58,6 - 93,8% thời điểm 72 sau thử thuốc, tương đương với tác dụng lamivudine (p > 0,05) Lời cảm ơn: Nghiên cứu thực nhờ hỗ trợ kinh phí từ chương tr nh “Nghiên cứu ứng dụng phát triển công nghệ tiên tiến phục vụ bảo vệ chăm sóc sức khỏe cộng đồng” Mã số: KC.10.45/11-15 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2016 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đào Văn Phan, Nguyễn Duy Thuần Tác dụng Nhó đơng tổn thương gan paracetamol chuột cống trắng Tạp chí Dược liệu 2003, (5), tr.139-142 Phạm Minh Hưng, Đỗ Trung Đàm, Nguyễn Kim Phượng Tác dụng bảo vệ gan rễ Nhó đơng tổn thương gan thực nghiệm Tạp chí Dược liệu 2004, (3), tr.95-98 Khu NX Nghiên cứu tác dụng bảo vệ TB gan cao Nhó đơng (Morinda sp Rubiaceae) thực nghiệm Tạp chí Dược học 2011, 422 (51), tr.24-27 Grimm D, Thimme R, Blum HE HBV life cycle and novel drug targets Hepatol Int 2011, 5, pp.644-653 Stein LL, Loomba R Drug targets in hepatitis B virus infection Infect Disord Drug Targets 2009, 9, pp.105-116 WHO Guidelines for the prevention, care and treatment of persons with chronic hepatitis B infection available online: http://www.who.int/ hiv/http://www.who.int/hiv/pub/hepatitis/hepatitisb-guidelines/en/(accessed on July 2015) Lei Kang 1, Jiaqian Pan 1, Jiaofen Wu 2, Jiali Hu 3, Qian Sun and Jing Tang Anti-HBV drugs: Progress, unmet needs and new hope Viruses 2015, 7, pp.4960-4977 Y Chen, J Zhu Anti-HBV effect of individual traditional Chinese herbal medicine in vitro and in vivo J Viral Hepat 2013, 20 (7), pp.445-452 Toan NL, S.l.H, Kremsner PG, Duy DN, Binh VQ, Koeberlein B, Kaiser S, Kandolf R, Torresi J, Bock CT Impact of the hepatitis B virus genotype and genotype mixtures on the course of liver disease in Vietnam Hepatology 2006, 43 (6), pp.1375-1384 93 ... tác dụng kháng HBV in vitro cách sử dụng TB ung thư gan Hep 3B có nhiễm HBV Tiến hành đánh giá tác dụng kháng HBV nhóm hoạt chất HCTN-213, HCTN-214, HCTN-215, HCTN-216 HCTN-217 tách chiết từ rễ Nhó. .. đương nhóm dùng lamivudine Như vậy, qua sàng lọc tác dụng sinh học 05 nhóm hoạt chất chiết tách từ rễ Nhó đơng phát 03 nhóm hoạt chất HCTN-213, HCTN-215 HCTN-216 có tác dụng ức chế HBV cao nhóm. .. chất tách chiết từ rễ câ Nhó Đơng in vitro Để đánh giá tác dụng ức chế nhân lên HBV in vitro sản phẩm từ rễ Nhó đơng, chúng tơi sử dụng TB Hep 3B (ATCC) TB ung thư gan người nhiễm HBV ni cấy mơi