Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá mối tương quan giữa đường kính, chiều dày màng trong suốt với các đặc điểm hình thái của phôi nuôi cấy ngày 3. Xây dựng phương trình tương quan giữa số lượng phôi bào (PB), mảnh vỡ bào tương của phôi nuôi cấy ngày 3 với kích thước phôi.
Tạp chí y - dợc học quân số 6-2016 MỐI LIÊN QUAN GIỮA ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VỚI KÍNH THƯỚC VÀ CHIỀU DÀY MÀNG TRONG SUỐT CỦA PHÔI NUÔI CẤY NGÀY Dương Đình Hiếu*; Nguyễn Đình Tảo*; Quản Hồng Lâm* TĨM TẮT Mục tiêu: đánh giá mối tương quan đường kính, chiều dày màng suốt với đặc điểm hình thái phơi ni cấy ngày Xây dựng phương trình tương quan số lượng phôi bào (PB), mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày với kích thước phơi Đối tượng phương pháp: nghiên cứu mô tả tiến cứu 1.323 phôi nuôi cấy đến ngày 181 chu kỳ thụ tinh ống nghiệm (TTTON) có chuyển phơi tươi Trung tâm Công nghệ Phôi, Học viện Quân y Kết quả: có mối tương quan kích thước phơi chiều dày màng suốt với số lượng PB, độ đồng PB, tỷ lệ mảnh vỡ bào tương chất lượng phôi nuôi cấy ngày Phơi ngày chất lượng tốt có đường kính lớn màng suốt mỏng so với phôi có chất lượng xấu Kết luận: có tương quan thuận kích thước phơi chiều dày màng suốt với số lượng PB, độ đồng PB, tỷ lệ mảnh vỡ bào tương chất lượng phôi nuôi cấy ngày Phôi ngày chất lượng tốt có đường kính lớn màng suốt mỏng so với phơi có chất lượng xấu * Từ khóa: Thụ tinh ống nghiệm; Đường kính; Chiều dày màng suốt; Phôi ngày The Correlation between Morphological Characteristics and Diameter, ZP's Thickness of Day Embryos Summary Objectives: To assess the correlations between diameters, ZP's thickness and morphological characteristics of day embryos We also established correlative equation between them Subjects: 1,323 day embryos of 181 IVF cycles with fresh embryo transfer at the IVF Centre of VMMU Results: There were the correlations between day embryo's size, ZP's thickness with the number of blastomeres, the symmetry, fragments and the quality of embryos The good day embryos had longer diameters and thinner zona pellucida than the poor embryos Conclusions: There is a positive correlation between the size of the embryo and the zona pellucida thickness blastomere numbers, homogeneity between the embryo, cytoplasmic fragments rates and quality cultured embryo at day Day embryos had a good quality larger diameter and thiner ZP than poor quality embryos * Key words: IVF; Diameter; Thickness of ZP of embryo; day embryos * Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Dương Đình Hiếu (ddhieuembryo@gmail.com) Ngày nhận bài: 30/05/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 19/07/2016 Ngày báo đăng: 22/07/2016 62 T¹p chÝ y - dợc học quân số 6-2016 T VN Hin nay, đa số trung tâm Việt Nam thực kỹ thuật hỗ trợ sinh sản nói chung kỹ thuật TTTON nói riêng chủ yếu áp dụng chuyển phôi nuôi cấy giai đoạn phôi ngày tuổi Giai đoạn phơi có từ - PB Ở giai đoạn này, tiêu chuẩn đánh giá hình thái phôi nuôi cấy, chủ yếu dựa vào số lượng PB, tỷ lệ mảnh vỡ bào tương "cân đối" PB tồn khối phơi [3] Đã có số nghiên cứu đánh giá mối tương quan đặc điểm hình thái phơi ni cấy ngày ảnh hưởng đến kết có thai chuyển phôi Tuy nhiên, chưa nhiều nghiên cứu chuyên sâu lĩnh vực hình thái, câu hỏi đặt mối tương quan đặc điểm hình thái Nghiên cứu Công nghệ Phôi, Học viện Quân y * Tiêu chuẩn lựa chọn BN nghiên cứu: - BN ≤ 35 tuổi - BN có niêm mạc tử cung ngày chuyển phôi từ - 14 mm siêu âm - Có nỗn thu ngày chọc hút noãn * Tiêu chuẩn loại trừ BN nghiên cứu: - BN ≥ 35 tuổi - BN có chiều dày niêm mạc tử cung ngày chuyển phôi < mm > 14 mm - Trường hợp có < nỗn ngày chọc hút - Trường hợp có < phơi có - PB ni cấy đến ngày (căn theo nghiên cứu Racowsky năm 2000) [10] thông số đo đạc đặc trưng cho phát - Có bệnh lý dị dạng tử cung âm đạo triển phôi nuôi cấy ngày Vì vậy, - Trường hợp xin nỗn hay xin phơi thực nghiên cứu nhằm: - Đánh giá mối tương quan đường kính, chiều dày màng suốt với đặc điểm hình thái phơi ni cấy ngày - Xây dựng phương trình tương quan số lượng PB, mảnh vỡ bào tương phôi ni cấy ngày với kích thước phơi ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 181 chu kỳ TTTON (với 1.323 phôi) lựa chọn ngẫu nhiên để tiến hành nuôi cấy phôi ngày Trung tâm Đào tạo Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả tiến cứu: Áp dụng công thức tính cỡ mẫu để ước tính tỷ lệ với giá trị lớn nhất, cho kết cần đánh giá tối thiểu 385 phôi nuôi cấy ngày (Nguyễn Văn Tuấn, 2007) [2] * Tiêu chuẩn đánh giá hình thái phôi nuôi cấy ngày 3: Căn phân độ phôi theo tiêu chuẩn đồng thuận Alpha dựa cứ: số lượng PB, đồng PB, tỷ lệ mảnh vỡ bào tương [1, 4, 5] Từ phân chia phơi ngày theo tiêu chuẩn: 63 Tạp chí y - dợc học quân số 6-2016 - Tốt (A): phơi có PB, số PB đồng đều, khơng có có (không đáng kể) < 10% mảnh vỡ bào tương, PB đa nhân Tỷ lệ vơ sinh độ I 77,9% vơ sinh độ II 22,1% Số nang nỗn trung bình thu 10,4 ± 2,5 nỗn Tỷ lệ thụ tinh trung bình 72,6 ± 10,6% - Trung bình (B): phơi có số PB PB, PB khơng đồng và/hoặc có tỷ lệ mảnh vỡ bào tương ≤ 25% thể tích phơi Kích thước chiều dày màng - Xấu (C): phơi có PB, PB không đồng tỷ lệ mảnh vỡ bào tương > 25% thể tích phơi * Phương pháp đo kích thước phơi: Các thơng số đo đạc hình ảnh phơi ni cấy chụp ảnh phần mềm chuyên dụng đo đạc RI (Hãng Research Instruments) (Anh), với khả đo xác tới 0,1 μm Lưu trữ hình ảnh phơi ni cấy ngày 1, ngày ngày dạng file ảnh để đảm bảo thời gian phôi chịu phơi nhiễm, rút ngắn kết phân tích, khơng làm ảnh hưởng đến chất lượng phôi nuôi cấy * Địa điểm nghiên cứu: Tiến hành nghiên cứu Trung tâm Đào tạo, Nghiên cứu Công nghệ Phôi, Học viện Quân y KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Nghiên cứu tiến hành 181 BN làm TTTON, tương đương với 181 chu kỳ, với tổng số phôi ngày đánh giá 1.323 phơi Tuổi trung bình 30,3 ± 2,6; thời gian vơ sinh trung bình 5,7 ± 2,7 năm 64 suốt phôi nuôi cấy ngày Sử dụng phần mềm RI đo đường kính chiều dày màng suốt 1.323 phôi nuôi cấy ngày Bảng 1: Đường kính phơi chiều dày ZP phôi ngày Thông số đo đạc n = 1323 X ± SD Lớn Nhỏ nhất Đường kính phơi (μm) 154,2 ± 2,6 162,7 145,6 Chiều dày ZP (μm) 15,7 ± 1,4 21,5 10,9 Phôi nuôi cấy ngày có đường kính trung bình 154,2 ± 2,6 μm chiều dày màng suốt trung bình 15,7 ± 1,4 μm Đặc điểm hình thái có liên quan đến kích thước phơi ni cấy ngày Một vấn đề đặt cần tìm hiểu xem có hay khơng mối liên quan đặc điểm hình thái phôi nuôi cấy ngày số lượng PB, đồng PB tỷ lệ mảnh vỡ bào tương với thơng số đo đạc đường kính phôi chiều dày màng suốt * Mối tương quan số lượng PB với đường kính, chiều dày màng suốt phôi nuôi cấy ngày 3: Tạp chí y - dợc học quân số 6-2016 Chiều dày ZP (μm) Đường kính phơi (μm) Đường kính phôi = 145,65 + SLPB x 1,31 Chiều dày ZP = 18,38 - SLPB x 0,41 22 165 20 160 18 16 155 14 150 12 10 145 10 10 Số lượng phôi bào phơi ni cấy ngày Hình 1: Mối tương quan số lượng PB phôi nuôi cấy ngày với đường kính phơi chiều dày màng suốt (n = 1.323) Có mối tương quan thuận đường kính phơi số lượng PB phơi nuôi cấy ngày 3, với hệ số tương quan r = 0,67 Phương trình tương quan đường kính phơi số lượng PB phơi ngày 3: Đường kính phôi (μm) = 145,65 + (số lượng PB) x 1,31 Có tương quan nghịch chiều dày màng suốt số lượng PB phôi nuôi cấy ngày với hệ số tương quan r = -0,4 Phương trình tương quan chiều dày màng suốt số lượng PB phôi ngày 3: Chiều dày màng suốt (μm) = 18,38 - (số lượng PB) x 0,41 * Mối tương quan đồng PB với đường kính, chiều dày màng suốt: Bảng 2: So sánh kích thước phơi phơi có PB đồng không đồng Sự đồng PB n Đường kính phơi X ± SD (μm) Đồng 561 155,2 ± 2,2 Không đồng 762 153,4 ± 2,6 r 0,34 p < 0,01 Chiều dày ZP X ± SD (μm) 15,4 ± 1,4 15,8 ± 1,3 p < 0,01 - 0,17 (p tính theo kiểm định t-student test không ghép cặp, r hệ số tng quan Pearson) 65 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 6-2016 Kết cho thấy kích thước chiều dày màng suốt trung bình phơi ngày có PB đồng 155,2 ± 2,2 μm 15,4 ± 1,4 μm; phơi ngày 3, PB không đồng 153,4 ± 2,6 μm 15,8 ± 1,3 μm Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 * Mối tương quan tỷ lệ mảnh vỡ bào tương với đường kính, chiều dày màng suốt phơi ni cấy ngày 3: Đường kính phơi (μm) ĐK phơi = 155,96 - (%MVBT) x 0,11 165 Chiều dày ZP (μm) Độ dày ZP = 15,19 + (%MVBT) x 0,03 22 20 160 18 155 16 14 150 12 145 10 0% 20% 40% 60% 80% 0% 20% 40% 60% 80% Tỷ lệ phần trăm mảnh vỡ bào tương Hình 2: mối tương quan tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phơi ni cấy ngày với đường kính phơi chiều dày màng suốt (n = 1.323) Có mối tương quan nghịch đường kính phơi tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày với hệ số tương quan r = -0,55 Phương trình tương quan đường kính phơi với tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày 3: Đường kính phơi (μm) = 155,96 - (% mảnh vỡ bào tương) x 0,11 66 Có mối tương quan thuận chiều dày màng suốt tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày 3, với hệ số tương quan r = 0,3 Phương trình tương quan chiều dày màng suốt với tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày 3: Chiều dày màng suốt (μm) = 15,19 + (% mảnh v bo tng) x 0,03 Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 6-2016 Mối tương quan chất lượng phơi ni cấy ngày với đường kính, chiều dày màng suốt Bảng 3: So sánh kích thước phơi phơi có chất lượng khác theo tiêu chuẩn phân loại đồng thuận ALPHA Phân loại n Đường kính phơi X ± SD (μm) Tốt 374 155,8 ± 1,6 Trung bình 574 154,5 ± 2,3 Xấu 375 152,1 ± 2,5 r 0,54 p Chiều dày ZP X ± SD (μm) p 15,1 ± 1,4 < 0,01 15,7 ± 1,2 < 0,01 16,1 ± 1,3 -0,29 (p tính theo so sánh phương sai ANOVA yếu tố, r hệ số tương quan Pearson đo lường mức độ tương quan) Phơi ni cấy ngày có chất lượng tốt, có kích thước lớn chiều dày màng suốt mỏng so với phơi có chất lượng Sự khác biệt giá trị trung bình có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Có mối tương quan thuận chất lượng phôi với đường kính phơi ni cấy ngày Phơi có chất lượng tốt có kích thước trung bình lớn rõ rệt với hệ số tương quan Pearson 0,54 (p < 0,01) Có mối liên quan nghịch chất lượng phơi với chiều dày màng suốt phôi nuôi cấy ngày Phơi có chất lượng tốt, chiều dày màng suốt mỏng với hệ số tương quan Pearson -0,29 (p < 0,01) Kích thước phơi chiều dày màng suốt thay đổi suốt trình phơi phát triển biến đổi giai đoạn nuôi cấy khác Các thông số đo đạc phản ánh hoạt động sống, hoạt động trao đổi chất phôi Nghiên cứu Munne (2006), Magli (2007) Finn (2010) mối liên quan đặc điểm hình thái phơi bất thường nhiễm sắc thể Phơi có đặc điểm hình thái tốt có tỷ lệ bất thường nhiễm sắc thể thấp, làm cho hoạt động chuyển hóa phơi diễn bình thường so với phơi có chất lượng [6, 7, 8, 9] Điều giải thích khác biệt kích thước chiều dày màng suốt phơi có chất lượng đặc điểm hình thái khác phơi ni cấy ngày KẾT LUẬN Nghiên cứu 1.323 phôi ngày 181 chu kỳ TTTON liên quan đường kính, kích thước, chiều dày màng suốt, chúng tơi rút số kết luận: - Đường kính trung bình phơi ngày 154,2 ± 2,6 μm; chiều dày màng suốt trung bình 15,7 ± 1,4 μm - Có mối tương quan thuận kích thước phôi chiều dày màng suốt với số lượng PB, độ đồng PB, tỷ lệ mảnh vỡ bào tương chất lượng phôi nuôi cấy ngy 67 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 6-2016 - Phôi ngày chất lượng tốt có đường kính lớn màng suốt mỏng so với phơi có chất lượng xấu Baczkowski T, Kurzawa R, Glabowski W Methods of embryo scoring in in vitro fertilization Reprod Biol 2004, (1), pp.5-22 TÀI LIỆU THAM KHẢO Finn A, Scott L, O’leary T et al Sequential embryo scoring as a predictor of aneuploidy in poor-prognosis patients Reprod Biomed Online 2010, 21, pp.381-390 Nguyễn Viết Tiến, Ngơ Văn Tồn, Bùi Xn Ngun CS Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật cao chẩn đốn điều trị vơ sinh Việt Nam Báo cáo tổng hợp kết khoa học đề tài độc lập cấp nhà nước 2011, tr.126-127 Nguyễn Văn Tuấn Phân tích số liệu biểu đồ R, Garvan Institute of Medical Research Sydney, Australia 2007, tr.111-112 Hồ Mạnh Tường, Đặng Quang Vinh, Vương Thị Ngọc Lan Thụ tinh ống nghiệm Nhà xuất Gi áo dục Việt Nam TP Hồ Chí Minh 2011, tr.239-271 Alpha Scientists in Reproductive, M and ESIG Embryology The Istanbul consensus workshop on embryo assessment: proceedings of an expert meeting Hum Reprod 2011, 26 (6), pp.1270-1283 68 Liu Q, Zhu G, Hu J et al Relationship between pronuclear scoring and embryo quality and implantation potential in IVF-ET J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci 2008, 28 (2), pp.204-206 Magli MC, Gianaroli L, Ferraretti AP, et al Embryo morphology and development are dependent on the chromosomal complement Fertil Steril 2007, 87, pp.534-540 Munne S Chromosome abnormalities and their relationship to morphology and development of human embryos Reprod Biomed Online 2006, 12, pp.234-253 10 Racowsky C, Jackson KV, Cekleniak NA et al The number of eight-cell embryos is a key determinant for selecting day or day transfer Fertil Steril 2000, 73, pp.558-564 ... mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày 3, với hệ số tương quan r = 0 ,3 Phương trình tương quan chiều dày màng suốt với tỷ lệ mảnh vỡ bào tương phôi nuôi cấy ngày 3: Chiều dày màng suốt (μm) = 15,19... chiều dày màng suốt phơi có chất lượng đặc điểm hình thái khác phôi nuôi cấy ngày KẾT LUẬN Nghiên cứu 1 .32 3 phôi ngày 181 chu kỳ TTTON liên quan đường kính, kích thước, chiều dày màng suốt, rút... tương quan chiều dày màng suốt số lượng PB phôi ngày 3: Chiều dày màng suốt (μm) = 18 ,38 - (số lượng PB) x 0,41 * Mối tương quan đồng PB với đường kính, chiều dày màng suốt: Bảng 2: So sánh kích thước