Trong đề tài này nhằm nghiên cứu xác định các týp HPV thường gặp trong ung thư cổ tử cung. Tìm hiểu mối liên quan giữa nhiễm HPV theo phân týp với týp mô bệnh học ung thư cổ tử cung. Nghiên cứu thực hiện trên 86 bệnh nhân, 52 trường hợp ung thư cổ tử cung xâm nhập, 34 trường hợp loạn sản ở cổ tử cung được đọc và phân loại mô học, các khối nến được cắt để tách chiết DNA và được làm phản ứng PCR với các cặp mồi đặc hiệu HPV 6, 11, 16, 18.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH CÁC TÝP HPV THƯỜNG GẶP TRONG UNG THƯ CỔ TỬ CUNG Nguyễn Phi Hùng*, Nguyễn Thị Lan Anh**, Tạ Văn Tờ*, Nguyễn Văn Chủ* TÓM TẮT Ung thư cổ tử cung loại ung thư sinh dục thường gặp phụ nữ Nhiễm HPV nguyên nhân gây tân sản cổ tử cung Tại Việt Nam nghiên cứu tần suất nhiễm phân týp HPV mẫu ung thư cổ tử cung vùi nến týp mô học ung thư cổ tử cung chưa thực Mục đích: Nghiên cứu xác định týp HPV thường gặp ung thư cổ tử cung Tìm hiểu mối liên quan nhiễm HPV theo phân týp với týp mô bệnh học ung thư cổ tử cung Đối tượng phương pháp: 86 bệnh nhân, 52 trường hợp ung thư cổ tử cung xâm nhập, 34 trường hợp loạn sản cổ tử cung đọc phân loại mô học, khối nến cắt để tách chiết DNA làm phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu HPV 6, 11, 16, 18 Kết quả: Tỷ lệ nhiễm HPV cao tổn thương tiền ung thư ung thư xâm nhập cổ tử cung (97% 80,8%) Tỷ lệ nhiễm HPV nguy thấp HPV nguy cao khác biệt có ý nghĩa thống kê theo mức độ loạn sản (P=0,00004) Tỷ lệ nhiễm phân týp HPV 16 HPV 18 ung thư cổ tử cung cao tổn thương SIL có ý nghĩa thống kê (P=0,009) Tỷ lệ nhiễm HPV 16 HPV 18 khác phân týp mô bệnh học carcinôm cổ tử cung HPV 16 gặp chủ yếu carcinôm vảy, HPV 18 gặp chủ yếu carcinôm tuyến tuyến vảy (P=0,008) Từ khóa: HPV, tổn thương biểu mơ tế bào gai, ung thư cổ tử cung ABSTRACT IDENTIFICATION OF COMMON TYPES OF HPV IN CERVICAL CANCER Nguyen Phi Hung, Nguyen Thi Lan Anh, Ta Van To, Nguyen Van Chu * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 160 - 167 Introduction: Cervical cancer is the most common gynecological cancer in women HPVs are the major etiological causes of the disease In Viet Nam, there is no research of the prevalence of type specific HPV in biopsied cervical cancer samples and the correl ation between histology and HPV types Purposes: to idenify type-specific human papilloma virus in cervical cancer and the correlation between HPV types and histological categories of cervical cancer Material and methods: 86 patients including 52 invasive cervical cancers and 34 intraepithelial neoplasms were reviewed and classified as WHO-2003 classification Paraffin blocks were cut for DNA extraction PCR assay with HPV 6, 11, 16 and 18 probes Results: HPV infection in intraepithelial neoplasms and invasive cervical cancers were 97% and 80.8%, respectively Prevalence of low risk HPV and of high risk HPV differed in LSIL and HSIL Prevalence of HPV 16 and 18 were higher in invasive cancers compare to SIL HPV 16 infection was higher in squamous cell carcinoma, whereas HPV 18 was more common in adenocarcinoma and adenosquamous carcinoma (47.6% and 14.2%, respectively) * Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện K Hà nội Khoa Miễn dịch Sinh học phân tử, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Tác giả liên lạc: TS Nguyễn Phi Hùng Email: phihung134@gmail.com ** 160 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Key words: HPV, SIL, cervical cancer GIỚI THIỆU Ung thư cổ tử cung chiếm khoảng 12% ung thư phụ nữ loại ung thư sinh dục nữ đứng hàng thứ toàn giới Nhiều nghiên cứu chứng minh hiệu chương trình sàng lọc tế bào học cổ tử cung dẫn tới giảm tỷ lệ chết ung thư cổ tử cung Nhiễm HPV nguyên nhân gây tân sản cổ tử cung Tại Việt Nam nghiên cứu tần suất nhiễm phân týp HPV mẫu ung thư cổ tử cung vùi nến thể ung thư cổ tử cung chưa thực Chúng thực đề tài nhằm mục đích: - Nghiên cứu xác định týp HPV thường gặp ung thư cổ tử cung - Tìm hiểu mối liên quan nhiễm HPV theo phân týp với týp mô bệnh học ung thư cổ tử cung ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Bệnh nhân Bệnh nhân ung thư cổ tử cung xét nghiệm giải phẫu bệnh Khoa Giải Phẫu Bệnh, Bệnh viện K Hà Nội từ năm 2007- 2008 Bệnh nhân có đủ tiêu bệnh phẩm sinh thiết cố định paraffin lựa chọn vào nghiên cứu Tổng số 86 bệnh nhân 52 trường hợp ung thư cổ tử cung xâm nhập, 34 trường hợp loạn sản cổ tử cung Mô bệnh học Các trường hợp thuộc nhóm nghiên cứu đọc lại tiêu phân loại týp mô bệnh học theo phân loại Tổ chức Y tế Thế giới năm 2003 Các khối nến cắt dày 8µm dùng để tách DNA Xác định nhiễm HPV Nhiễm HPV xác định mẫu bệnh phẩm ung thư cổ tử cung cố định vùi nến ADN tổng số tách chiết từ lát cắt dày sinh phẩm QIAamp DNA FFPE Tisue (QIAGEN) theo hướng dẫn nhà sản xuất Tất mẫu ADN đo nồng độ máy Nanodrop, kiểm tra có mặt gene Beta-Globin phản ứng PCR với cặp mồi PCO3/PCO5 để khẳng định trình tách chiết ADN thành cơng Để đánh giá tình trạng nhiễm HPV, mẫu kiểm tra phản ứng PCR với cặp mồi GP5+/GP6+, cặp mồi nằm vùng bảo tồn gene L1 Các mẫu có HPV dương tính, tiếp tục xác định nhiễm týp 6, 11, 16, 18 phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu cho týp Bảng : Trình tự mồi Vị trị mồi Độ dài sản phẩm (bp) 120-139 310-329 210 6764-6786 6879-6902 139 HPV.6.1 HPV.6.2 Genotype 5' TAGTGGGCCTATGGCTCGTC 3' E5/genotype 5' TCCATTAGCCTCCACGGGTG 3' E5/genotype 4671-4690 4931-4950 280 HPV.11.1 HPV.11.2 Genotype 11 5' GGAATACATGCGCCATGTGG 3' L1/genotype 11 5' CGAGCAGACGTCCGTCCTCG 3' L1/genotype 11 6841-6860 7181-7200 360 HPV.16.1 HPV.16.2 Genotype 16 5' TGCTAGTGCTTATGCAGCAA 3' L1/genotype 16 5' ATTTACTGCAACATTGGTAC 3' L1/genotype 16 6028-6047 6160-6179 152 Mồi PCO3 PCO5 GP5+ GP6+ Trình tự mồi Gen đích Mồi khuếch đại gen Beta-globin ACACAACTGTGTTCACTAGC Beta-globin GAAACCCAAGAGTCTTCTCT Beta-globin Mồi phát ADN genotype HPV 5'-TTTGTTACTGTGGTAGATACTAC-3' L1 5'-GAAAAATAAACTGTAAATCATATTC-3' L1 Mồi đặc hiệu phát HPV genotype Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh 161 Nghiên cứu Y học Mồi HPV16 E6F HPV16 E6R HPV.18.1 HPV.18.2 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Trình tự mồi 5'-CAAGCAACAGTTACTGCGA-3' 5'-CAACAAGACATACATCGACC-3' Gen đích E6/genotype 16 E6/genotype 16 Genotype 18 5' AAGGATGCTGCACCGGCTGA 3' L1/genotype 18 5' CACGCACACGCTTGGCAGGT 3' L1/genotype 18 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Bảng 2: Tỷ lệ nhiễm HPV bệnh nhân ung thư cổ tử cung theo nhóm tuổi HPV dương tính HPV âm tính Nhóm tuổi Vị trị mồi Độ dài sản phẩm (bp) 321 6903-6922 7100-7119 216 Bảng4: Tỷ lệ nhiễm HPV theo thể tổn thương tiền ung thư ung thư xâm nhập cổ tử cung Tổn thương HPVâm tính MBH n % HPV dương tính Tổng số n % n % n % n % SIL 2,9 33 97,1 34 39,5