BC DƯỢC LIỆU 2 ĐỊNH LƯỢNG ALKALOID TRONG CÀ ĐỘC DƯỢC

2. Giải thích quy trìnhLàmm bằng hỗn hợp ethanol amoniac đậm đặc ether (5 4 10), để yên 12 giờ V alkaloid tồn tại trong Cà độc dượcdạng muối nên làm ẩm với hỗn hợp trên để chuyển alkaloid dạng muối sang dạng base nhờ NH3 đậm đặc Sử dụng hỗn hợp trên để làm ẩm mà không dùng riêng ammonic vamoniac là chất thân nước nên khi cho nhiều ammonic th khi chiết bằng ether (chất thân dầu) sẽ có sự tách lớp > ethanol trong hỗn hợp đóng vai trò là chất trung gian hòa tan giữa chất thân nước với chất thân dầu > tạo hỗn hợp đồng nhấtChi tng etherl n mỗi lần 15 phút, lần 1 100ml ether, lần 2 và lần 350ml ether, chiết bằng phương pháp siêum và có sd ng nhi t V alkaloid dạng base tan trong dung môi hữu cơ k m phân cực nên dùng ether để chiết alkaloid tdược liệu Chiết 3 lần, lần sau sử dụng lượng dung môi t hơn lần trước để đ m b o chiết kiệt được hoạt chất đồng thời phương pháp siêu âm giúp rút ngắn thời gian và t ng hiệu suất chiết (do phương pháp siêu âm tạo cácung động vào tận bên trong tế bào dược liệu > t ng sự hòa tan, khuyếch tán hoạt chất) Nhiệt độ giúp rút ngắn quá tr nh chiết uấtc hơi dịch chi t trên cách th y choay hơi g n h t ether Không bốc hơi hết dung môi v nếu bốc hơi hết ether ch còn lại cắn th khi cho H2SO4 vào sẽ khó hòa tan được cắnThêmml dung dịch acid sulfuricN ti p t cc hơi cho đ n h t ether.cid sulfuric 0,5 N giúp chuyển alkaloid dạng base tdịch chiết ether sang alkaloid dạng muối Bốc hơi hết ether đến khi không thấy váng n i trên bề mặt là do ether là dung môi hữu cơ không phân cực, nước acid thân nước do đó ether và nước acid không hỗn hòa với nhau > tách lớp, ether có t trọng nhỏ hơn nước acid nên n i lên trên.L c dịch l c c n hơim quang để loại tạp và lọc nóng giúp tránh kết tủaalkaloid > tránh mất một phần alkaloid do bị giữ lại trên bông. R aả cặn dược li ungml dung dịch acid sulfuricN vàl n với nước m i l nml để đ m b o lấy được tối đa lượng alkaloid còn d nh lại trên ch n sứGộp các nước r a với dung dịch acid vào trong b nh gạn V khi lắc phân bố dịch chiết nước acid với ether sẽ không thể chiết kiệt được hết alkaloid có trong nước acid > gộp nước rửa với dung dịch acid (sau khi lắc phân bố với ether) để tránh mất mác alkaloid trong dung dịch acid.Chi tl n với chloroform với 10 ml, 5 ml, 5 ml cloroform đến khi chloroform không còn có màu Chloroform có tác dụng loại bỏ các tạp tan trong dầu còn l n trong dịch chiết acid để thu được dịch chiết tinh khiết hơn và loại bỏ sự nh hư ng của tạp trong quá tr nh định lượngGộp các dung dịch chloroform và chi tngml dung dịch acid sulfuricN g nlớp chloroform gộp các dịch chi t acid sulfuric l i Vbước trên khi loại tạp bằng chloroform một phần nhỏ alkaloid tdịch acid sẽ phân bố sang lớp chloroform > lắc phân bố với acid sulfuric để lấy hết alkaloid có l n trong lớp chloroform.Trung h ang amoniac đậm đặc (pH = 7) và thêmml amoniac đậm đặc. NH3 đậm đặc giúp kiềm hóa dịch acid, chuyển alkaloid dạng muối sang alkaloid dạng base.Chi tl n vớimlmlml chloroform V alkaloid dạng base tan trong dung môi hữu cơ k m phân cực nên dùng chloroform chiết alkaloid Chiết3 lần, lần sau sử dụng lượng dung môi t hơn lần trước để t ng hiệu suất chiếtL c các dung dịch chloroform trên c ng một ph u l c cnatri sulphat khan Natri sulphat khan giúp loại bỏ nước có l n trong dịch chloroform, cần ph i loại nước v nước có tsôi cao và tsôi CHCl3 < tsôi H2O nên khi bay hơi dung môi (bước sau), nếu dịch có l n nước th thời gian bay hơi lâu hơn và cần nhiệt độ cao hơn > nh hư ng đến hoạt chất R a ti p ph u l c hai l n m i l n với 4 ml chloroform để hòa tan và lấy được tối đa alkaloid còn d nh lại trên bông.Gộp các dịch chi t cloroform và dịch r ac hơi dung m i trên cách th y Thêmml ethanol trung tính đh a tan c nc hơi đ n khvà ti p t c đun n ng trongph t Để chắc chắn loại bỏ hoàn toàn nước v nước tan được trong ethanol và ethanol là chất dễ bay hơi nên có thể k o theo nước nếu cắn có l n nướcĐun nhẹ đh a tan c n trongml cloroform, cho thêm chínhácml dung dich acid sulfuricN (dung dịch chu n độ) đun cách th y cho c hơi h t chloroform đnguội ở nhi t độ ph ng Nếu cho nước acid vào cắn sẽ không hòa tan được cắn hoặc hòa tan rất t, có lợn cợn Cắn lúc này là alkaloid base nên dùng chloroform để hòa tan cắn sẽ dễ hơn và tạo thành hỗn hợp đồng nhất không bị lợn cợn Đun nhẹ để quá tr nh hòa tan dễ hơn và nhanh hơn Khi cho acid (chất thân nước) vào dịch chloroform (thân dầu) > tách lớp> đun cách thủy để bốc hơi chloroform do tsôi CHCl3 < tsôi nước acid, lúc này alkaloid sẽ phân tán đều vào lớp nước acidcid sulfuric có tác dụng chuyển alkaloid base trong dịch chloroform thành alkaloid dạng muốiThêm–gi t dung dịch đmethyl (ch t ch thị) Chu n động dung dịch NaOHN đ n khiu t hi n màu vàng Phương pháp định lượng là định lượng acid ase thừa trừ NaH sẽ ph n ứng với H2SO4 dư (dư lại sau khi đã chuyển alkaloid base thành muối) tạo muối và nước Khi ph n ứng hết với acid H2SO4 th 1 giọt dư Na H sẽ làm chất ch thị đỏ methyl chuyển sang màu vàng.Giải thích quy trình tiến hành định lượng alkaloid trong Cà độc dược

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG

Khoa Dược







BÁO CÁO THỰC TẬP

DƯỢC LIỆU 2

Bài 3 ĐỊNH LƯỢNG ALKALOID TRONG

CÀ ĐỘC DƯỢC

NHÓM 6- Sáng thứ 4

Lê Thị Hồng Duyên H1600037 Phạm Thị Thùy Linh H1600061 Nguyễn Thị Thúy Vy H1600014

Cân 10g bột Cà độc dược

Dược liệu đã làm ẩm

Dịch chiết

1 Sơ đồ định lượng alkaloid trong hoa Cà độc dược

Hỗn hợp ethanol – amoniac đậm đặc - ether (5:4:10)

Để yên 30 phút Chiết bằng phương pháp siêu âm với

dung môi ether

Dịch aicd sau khi bốc hơi

Dịch aicd sau khi lọc

+ 25 ml dung dịch acid sulfuric 0,5N Bốc hơi đến hết ether

Lọc qua bông dịch acid ấm

Cắn

Dịch sau cùng

+5 ml dd acid sulfuric 0,5N để rửa bã + 5 ml nước (2 lần) để rửa bã

L-L-E với chloroform 3 lần (10 ml, 5 ml, 5 ml)

Gộp dịch acid L-L-E với 10 ml acid sulfuric 0,1N

Dịch chloroform sau

khi gộp

Dịch acid còn lại

Dịch acid

Dịch acid

ở lớp trên

Dịch sau khi bỏ dung dịch NH3

Dịch chloroform

Gộp dịch acid

+ dung dịch NH 3 để trung hòa + 2ml dung dịch NH 3 đậm đặc

L-L-E với dung dịch CHCl 3

3 lần (20 ml, 15 ml, 15 ml)

Dịch acid sau khi gộp

Lọc với Na 2 SO 4 khan Rửa với 4 ml dd CHCl 3

(2 lần)

Bốc hơi

+ 3 ml ethanol trung tính

Bốc hơi

Dịch sau khi rửa

Cắn

Cắn

+ 2 ml dung dịch CHCl 3 , đun nhẹ + 20 ml H 2 SO 4 0,02N

+ Đun cách thủy đến bay hơi hết CHCl 3

Để nguội + 2-3 giọt dung dịch đỏ methyl

Chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,02N

Dịch acid

Dịch acid + methyl đỏ

Tính toán

Dịch sau khi chuẩn độ

2 Giải thích quy trình

- Làm m bằng hỗn hợp ethanol - amoniac đậm đặc - ether (5 4 10), để yên 12

giờ V alkaloid tồn tại trong Cà độc dược dạng muối nên làm ẩm với hỗn hợp trên để chuyển alkaloid dạng muối sang dạng base nhờ NH3 đậm đặc Sử dụng hỗn hợp trên để làm ẩm mà không dùng riêng ammonic v amoniac là chất thân nước nên khi cho nhiều ammonic th khi chiết bằng ether (chất thân dầu) sẽ có

sự tách lớp -> ethanol trong hỗn hợp đóng vai trò là chất trung gian hòa tan giữa chất thân nước với chất thân dầu -> tạo hỗn hợp đồng nhất

- Chi t ng ether l n mỗi lần 15 phút, lần 1 100ml ether, lần 2 và lần 3 50ml ether, chiết bằng phương pháp siêu m và có s d ng nhi t V alkaloid

dạng base tan trong dung môi hữu cơ k m phân cực nên dùng ether để chiết alkaloid t dược liệu Chiết 3 lần, lần sau sử dụng lượng dung môi t hơn lần trước để đ m b o chiết kiệt được hoạt chất đồng thời phương pháp siêu âm giúp rút ngắn thời gian và t ng hiệu suất chiết (do phương pháp siêu âm tạo các ung động vào tận bên trong tế bào dược liệu -> t ng sự hòa tan, khuyếch tán hoạt chất) Nhiệt độ giúp rút ngắn quá tr nh chiết uất

- c hơi dịch chi t trên cách th y cho ay hơi g n h t ether Không bốc hơi

hết dung môi v nếu bốc hơi hết ether ch còn lại cắn th khi cho H2SO4 vào sẽ khó hòa tan được cắn

- Thêm ml dung dịch acid sulfuric N ti p t c c hơi cho đ n h t

ether cid sulfuric 0,5 N giúp chuyển alkaloid dạng base t dịch chiết ether

sang alkaloid dạng muối Bốc hơi hết ether đến khi không thấy váng n i trên bề mặt là do ether là dung môi hữu cơ không phân cực, nước acid thân nước do đó ether và nước acid không hỗn hòa với nhau -> tách lớp, ether có t trọng nhỏ hơn nước acid nên n i lên trên

- L c dịch l c c n hơi m qua ng để loại tạp và lọc nóng giúp tránh kết tủa

alkaloid -> tránh mất một phần alkaloid do bị giữ lại trên bông

- R a ả cặn dược li u ng ml dung dịch acid sulfuric N và l n với

nước m i l n ml để đ m b o lấy được tối đa lượng alkaloid còn d nh lại trên

ch n sứ

- Gộp các nước r a với dung dịch acid vào trong b nh gạn V khi lắc phân bố

dịch chiết nước acid với ether sẽ không thể chiết kiệt được hết alkaloid có trong nước acid -> gộp nước rửa với dung dịch acid (sau khi lắc phân bố với ether) để tránh mất mác alkaloid trong dung dịch acid

- Chi t l n với chloroform với 10 ml, 5 ml, 5 ml cloroform đến khi

chloroform không còn có màu Chloroform có tác dụng loại bỏ các tạp tan trong dầu còn l n trong dịch chiết acid để thu được dịch chiết tinh khiết hơn và loại

bỏ sự nh hư ng của tạp trong quá tr nh định lượng

- Gộp các dung dịch chloroform và chi t ng ml dung dịch acid sulfuric

N g n lớp chloroform gộp các dịch chi t acid sulfuric l i V bước

trên khi loại tạp bằng chloroform một phần nhỏ alkaloid t dịch acid sẽ phân bố sang lớp chloroform -> lắc phân bố với acid sulfuric để lấy hết alkaloid có l n trong lớp chloroform

- Trung h a ng amoniac đậm đặc (pH = 7) và thêm ml amoniac đậm

đặc NH3 đậm đặc giúp kiềm hóa dịch acid, chuyển alkaloid dạng muối sang alkaloid dạng base

- Chi t l n với ml ml ml chloroform V alkaloid dạng base tan

trong dung môi hữu cơ k m phân cực nên dùng chloroform chiết alkaloid Chiết

3 lần, lần sau sử dụng lượng dung môi t hơn lần trước để t ng hiệu suất chiết

- L c các dung dịch chloroform trên c ng một ph u l c c natri sulphat

khan Natri sulphat khan giúp loại bỏ nước có l n trong dịch chloroform, cần

ph i loại nước v nước có tsôi cao và tsôi CHCl3 < tsôi H2O nên khi bay hơi dung môi (bước sau), nếu dịch có l n nước th thời gian bay hơi lâu hơn và cần nhiệt độ cao hơn -> nh hư ng đến hoạt chất

- R a ti p ph u l c hai l n m i l n với 4 ml chloroform để hòa tan và lấy

được tối đa alkaloid còn d nh lại trên bông

- Gộp các dịch chi t cloroform và dịch r a c hơi dung m i trên cách th y

Thêm ml ethanol trung tính đ h a tan c n c hơi đ n kh và ti p t c đun n ng trong ph t Để chắc chắn loại bỏ hoàn toàn nước v nước tan

được trong ethanol và ethanol là chất dễ bay hơi nên có thể k o theo nước nếu cắn có l n nước

- Đun nhẹ đ h a tan c n trong ml cloroform, cho thêm chính ác ml

dung dich acid sulfuric N (dung dịch chu n độ) đun cách th y cho

c hơi h t chloroform đ nguội ở nhi t độ ph ng Nếu cho nước acid vào

cắn sẽ không hòa tan được cắn hoặc hòa tan rất t, có lợn cợn Cắn lúc này là alkaloid base nên dùng chloroform để hòa tan cắn sẽ dễ hơn và tạo thành hỗn hợp đồng nhất không bị lợn cợn Đun nhẹ để quá tr nh hòa tan dễ hơn và nhanh hơn Khi cho acid (chất thân nước) vào dịch chloroform (thân dầu) -> tách lớp -> đun cách thủy để bốc hơi chloroform do tsôi CHCl3 < tsôi nước acid, lúc này alkaloid

sẽ phân tán đều vào lớp nước acid cid sulfuric có tác dụng chuyển alkaloid base trong dịch chloroform thành alkaloid dạng muối

- Thêm – gi t dung dịch đ methyl (ch t ch thị) Chu n độ ng dung

dịch NaOH N đ n khi u t hi n màu vàng Phương pháp định lượng là định lượng acid- ase thừa trừ Na H sẽ ph n ứng với H2SO4 dư (dư lại sau khi đã chuyển alkaloid base thành muối) tạo muối và nước Khi ph n ứng hết với acid H2SO4 th 1 giọt dư Na H sẽ làm chất ch thị đỏ methyl chuyển sang màu vàng

Khoảng đổi màu của Methyl red

3 Tính toán

- C ng thức

% alkaloid = ( )

Trong đó a (ml) thể t ch Na H

m (g) khối lượng bột Cà độc dược

- Tính toán

Với a = 17,4 (ml)

m = 10 (g)

% alkaloid = (20 − 17,4) * 6,068

10 𝑥 1000 𝑥 100 = 0,158 %

- Giải thích c ng thức

 Phương pháp định lượng là định lượng acid- ase thừa trừ

Na H sẽ ph n ứng với H2SO4 dư (H2SO4 dư sau khi đã chuyển hết alkaloid base thành alkaloid dạng muối)

 Do sử dụng Na H 0,02N để định lượng H2SO4 0,02N:

CN H2SO4= 0.02N => CM H2SO4= 0.01M

CN NaOH= 0.02N => CM NaOH= 0.02M

Ta có:

2NaOH + H2SO4 => Na2SO4 + 2H2O

x x/2

V NaOH =

V H2SO4 =

Nên lượng H2SO4 dư ch nh bằng thể t ch Na H dùng để chuẩn độ

 Ban đầu dùng 1 lượng dư H2SO4 là 20 ml

 VH2S 4 đã chuyển alkaloid base thành muối = 20 – a = 20 – 17,4 = 2,6 (ml)

 Theo Dược điển Việt Nam V 1ml dung dịch acid sulfuric 0,02N tương đương với 6,068 mg alkaloid tính theo scopolamine

Ban đầu cân 10 (g) = 10 1000 = 10 000 (mg) bột Cà độc dược

 Suy ra:

 Theo Dược điển Việt Nam V hàm lượng alkaloid trong dược liệu không

được dưới 0,30% t nh theo scopolamine t nh trên dược liệu khô kiệt

 K t luận: Hàm lượng alkaloid trong dược liệu nhỏ hơn hàm lượng alkaloid quy định trong Dược điển

x 0.02

x

2 x 0.01

4 i n luận k t quả

Hàm lượng alkaloid trong dược liệu nhỏ hơn hàm lượng alkaloid quy định trong Dược điển, có thể do các nguyên nhân sau đây

a) Nguyên nh n do dược li u

- Dược liệu thu hoạch ban đầu không có hàm lượng alkaloid đạt tiêu chuẩn

- Dược liệu không được chế biến đúng k thuật, không được b o qu n tốt

b) Nguyên nh n trong quá tr nh định lượng (dược liệu có hàm lượng

alkaloid đạt tiêu chuẩn)

- Thời gian làm ẩm và chiết uất không đủ theo yêu cầu của Dược điển -> không chiết kiệt được hoạt chất (nguyên nhân chủ yếu)

- Khi cho 25ml H2SO4 0,5N vào dịch ch n sứ đã bốc hơi gần hết ether, nếu bốc hơi quá nhiểu ether sẽ tạo cắn và dung dịch H2SO4 sẽ không hòa tan được cắn này -> mất một lượng alkaloid Khi rửa cặn bã dược liệu trên

ch n sứ bằng 5ml H2SO4 0,5N và 2 lần với 5ml nước th cũng không lấy hết được alkaloid trong cắn

- Số lần lắc phân bố cũng không đủ (Dược điển yêu cầu lắc phân bố 5 lần nhưng thực tập ch làm 3 lần) -> không chiết kiệt được hoạt chất

- Trong quá tr nh lắc phân bố nhiều lần th một phần alkaloid bị mất đi trong dịch bỏ

- Lọc sẽ bị mất một phần alkaloid do bị giữ lại trên bông

- Thao tác trong quá tr nh điều chế ra dịch alkaloid để định lượng và thao tác khi chuẩn độ chưa ch nh ác Canh lúc đ i màu của chất ch thị chưa

ch nh ác (để dung dịch chuyển màu quá vàng mới đọc số trên buret -> sai số th a)

- Sai số do dụng cụ

c) Nguyên nh n vừa do dược li u kh ng đ t yêu c u vừa do thao tác trong quá tr nh định lượng