Trầu (Piper betle L.) đã được sử dụng làm thuốc lâu đời tại Việt Nam. Nghiên cứu này sẽ đánh giá tác dụng kháng viêm và độc tính của 1 một chế phẩm thuốc nước chứa tinh chất lá Trầu (TK) trên chuột nhắt trắng.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Nghiên cứu Y học TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH CỦA THUỐC NƯỚC CHỨA TINH CHẤT LÁ TRẦU (PIPER BETLE L.) Võ Thị Anh Đào*, Lê Thị Lan Phương**, Nguyễn Lê Việt Hùng, Nguyễn Phương Dung TĨM TẮT Tình hình mục tiêu nghiên cứu: Trầu (Piper betle L.) sử dụng làm thuốc lâu đời Việt Nam Nghiên cứu đánh giá tác dụng kháng viêm độc tính chế phẩm thuốc nước chứa tinh chất Trầu (TK) chuột nhắt trắng Phương tiện pháp nghiên cứu: Chuột nhắt trắng trưởng thành phái, chủng Swiss albino, thể trọng 18-22 g, 6-8 tuần tuổi, khoẻ mạnh, viện Vaccin sinh phẩm Nha trang cung cấp Áp dụng mơ hình gây viêm cấp carrageenan, gây viêm mạn tạo u hạt thực nghiệm chuột nhắt trắng Chỉ tiêu theo dõi: Thể tích chân chuột sau tiêm carrageenan 1, 2, ngày, ngày; Trọng lượng u hạt, tươi khơ ngày thứ thí nghiệm gây viêm mạn Đánh giá độc tính cấp theo hướng dẫn OECD 423 áp dụng dịch chiết thảo dược Ghi nhận thay đổi hành vi, tỷ suất tử vong sau cho chuột uống liều thuốc thử nghiệm Thử nghiệm độc tính bán trường diễn: Chia chuột nhắt thành lô (1 chứng, thử), lô 10 chuột, dùng thuốc nghiên cứu liên tục 60 ngày, liều thử nghiệm 120 180 mg/kg Cân thể trọng hàng tuần Xét nghiệm huyết học, sinh hóa, vi thể gan, thận vào cuối thử nghiệm, 60 ngày sau uống thuốc Kết quả: Trên mơ hình gây phù chân chuột carageenin, thuốc nước chứa tinh chất Trầu (TK) thể tác dụng kháng viêm cấp liều uống 60 mg/kg, 120 mg/kg 180 mg/kg Trên mơ hình gây u hạt, thuốc nước TK thể tác dụng kháng viêm mạn liều uống 120 mg/kg LD50 đường uống thuốc nước TK 4069,23 mg/kg So với lô chứng, liều uống 120 mg/kg 180 mg/kg, thuốc nước TK không ảnh hưởng đến thể trọng, số huyết học, sinh hóa bản, hình thái vi thể gan thận chuột nhắt trắng Kết luận: Thuốc nước chứa tinh chất Trầu (TK) có tác dụng kháng viêm cấp mạn chuột nhắt trắng LD50 thuốc nước TK 4069,23 mg/kg (p.o) Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn cho thấy thuốc nước TK tương đối an toàn uống dài ngày, triển khai thử nghiệm người Từ khóa: Lá Trầu Piper betle leaves, carrageenan, u hạt, độc tính cấp, độc tính bán trường diễn ABSTRACT ANTI-INFLAMMATORY AND TOXICITY STUDIES OF THE PREPARATION FROM BETEL LEAVES EXTRACT (PIPER BETLE L.) Vo Thi Anh Dao, Le Thi Lan Phuong, Nguyen Le Viet Hung, Nguyen Phuong Dung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 19 - No - 2015: 111- 117 Background and Aims: Piper betle L leaves have long been used in Vietnam as a traditional medicine The present study was designed to evaluate the anti-inflammatory activities and the oral toxicity of the preparation from Betel leaves extract (TK) Materials and Methods: Swiss albino mice weight body 18–22g, 6-8 weeks age, purchased from the Institute of Vaccines and Medical Biological - Nhatrang The anti-inflammatory effects of the preparation from Betel leaves extract on acute (carrageenan-induced) and chronic (cotton pellet granule) phases of inflammation were investigated The mouse paw edema was measured plethysmometrically from 1, 2, hours and day, days * Khoa Sinh - Đại học Khoa học Tự nhiên TP.HCM Khoa Y học cổ truyền - Đại học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Phương Dung ĐT: 0988202625 Email: phuongdung463@gmail.com Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 111 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 after injection carrageenan Pellet granule was weighed on fresh and dried at the end of 8th day Study sample was followed OECD guidelines OECD 423 for assessing the acute oral toxicity of the plant extracts The behavior and mortality were examined for up to 14 days Sub-chronic toxicity test: groups of 10 animals were used Mice were treated daily for 60 consecutive days test groups received orally at the dose 120 and 180 mg/kg Body weight was measured weekly Hematological and biochemical parameters, relative organ weight were determined at the end of the 60 days administration Results: The preparation from Betel leaves extract at the dose of 60, 120 and 180 mg/kg was capable of reducing carrageenan-induced inflammation The TK preparation was showed a potent Antiproliferative effect (69.27%) in the chronic inflammation model (120 mg/kg, p.o) In acute toxicity study, LD50 of TK preparation was determined 4069.23 mg/kg (p.o) Sub-chronic toxicity study: Oral administration of the TK preparation at the dose 120 and 180 mg/kg did not induce death or significant changes in body weight, relative weight of vital organs, hematological parameters and was not associated with liver and kidney toxicity Conclusion: The findings of the study suggested that preparation from Betel leaves extract (TK) has antiinflammatory effects, confirming the traditional use of this plant for inflammatory pain Preparation from Betel leaves extract (TK) showed anti-inflammatory activity on mice Our study provides data for further investigations on detailed toxic effects of this preparation TK and its safe use in human Key words: Carrageenan, cotton pellet granule, anti-inflammatory, Piper betle L., Betel leave, acute toxicity, sub-chronic toxicity Trầu có khả rút ngắn thời gian hồi ĐẶTVẤNĐỀ phục bệnh Tay chân miệng (TCM) số Trầu (Piper betle L., họ Hồ tiêu, Piperaceae) trẻ nhỏ Cho thấy, Trầu trở thành nguồn loại thực vật dễ trồng, phân bố rộng rãi nguyên liệu để bào chế thuốc phòng chống lây nhiều nước châu Á, vùng nhiệt đới như: Việt lan điều trị bệnh TCM Vì thế, Trầu có Nam, Malaysia, Indonesia, Philippin… Ở Việt nhiều hứa hẹn trở thành nguồn nguyên liệu Nam, Trầu sử dụng từ thời Hùng để bào chế thuốc phòng chống lây lan điều Vương dựng nước để làm thuốc vệ sinh trị bệnh EV71 miệng Theo Y học cổ truyền, Trầu có Tuy nhiên, kết nghiên cứu kể vị cay nồng, tính ấm, vào kinh Phế, Tỳ, Vị, có dạng tiền đề, khảo sát hoạt cơng hạ khí, khái, tiêu viêm, sát tính in vitro dịch chiết Để trở thành trùng, trừ phong thấp, kích thích tiêu hóa sản phẩm thương mại, cần có nghiên thần kinh, phòng bệnh lam sơn chướng khí… cứu dạng bào chế, đánh giá hiệu in Kinh nghiệm dân gian dùng nước sắc, nước vitro, in vivo, độc tính tiền lâm sàng, hãm từ Trầu đề điều trị chứng viêm nghiên cứu hiệu quả, tính an tồn nhiễm ngồi da (chàm, rôm sảy, lở loét, mụn chế phẩm từ Trầu lâm sàng nhọt…) trẻ nhỏ(2,6) Với mục đích tìm kiếm chế phẩm Những nghiên cứu dược lý thực nghiệm chống lây lan điều trị bệnh Tay chân miệng tác giả nước cho thấy Trầu có tác (TCM) từ Trầu, phạm vi nghiên cứu dụng kháng khuẩn, kháng virus, kháng nấm, tiến hành đánh giá tác dụng kháng viêm, giảm đau, kích thích thần kinh kháng viêm cấp kháng viêm mạn, khảo sát trung ương, chống oxy hóa, ức chế phát độc tính cấp bán trường diễn chế phẩm triển tế bào ung thư Hela, MCF-7….(1,5,7,9) thuốc nước chứa tinh chất Trầu chuột Theo kinh nghiệm Nhóm nghiên cứu Chu nhắt trắng Phạm Ngọc Sơn Huỳnh Kỳ Trân, tinh dầu 112 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 PHƯƠNG TIỆN - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương tiện nghiên cứu Dung môi pha thuốc (C), không chứa tinh dầu Trầu, Công ty CPDP OPC sản xuất ngày 21/4/2014, sử dụng làm mẫu chứng thử nghiệm dược lý Thuốc nước TK1, TK2, TK3 chứa chứa 0,3%, 0,6%, 0,9% tinh dầu Trầu, Công ty CPDP OPC sản xuất ngày 21/4/2014 Thuốc nước TK20 chứa 6% tinh dầu Trầu, Công ty CPDP OPC sản xuất ngày 21/4/2014 Aspirin 81mg (Domesco), số lô 232023 Carrageenin (Sigma Aldrich - Mỹ), tác nhân gây viêm, pha dung dịch NaCl 0,9% trước thử nghiệm Máy đo thể tích phù Plethysmometer 7140 (Ugo Basile - Ý) Máy xét nghiệm huyết học Sysmex B2207, máy sinh hóa tự động 100277 Eos Bravo Plus (Hospitex Diagnostics - Ý) Nghiên cứu Y học giật, run rẩy, mồ hơi, tím tái tai, chân, đuôi, tư nằm, đứng… Ghi lại phần kết Xét nghiệm đại thể (gan, thận) sau chết chuột chết, sau kết thúc thí nghiệm chuột sống Theo dõi tỷ lệ chuột chết vòng 48 sau uống thuốc thử nghiệm Tính LD50 theo cơng thức Kaber-Behrens (9) Đánh giá tác dụng kháng viêm mơ hình carragenan(3,5,12) Chuột gây viêm cách tiêm vào gan bàn chân trái 0,025 mL dung dịch carrageenin 1% Đo thể tích chân chuột sau tiêm Các chuột tích chân sưng phù 50% so với bình thường lựa chọn cho thử nghiệm Chuột chia ngẫu nhiên thành lô, lô 8-10 chuột: Lô trắng (C): Uống dung môi dùng pha thuốc nước (không chứa tinh dầu Trầu) Lô đối chứng (As): Uống aspirin, 240mg/kg thể trọng Súc vật thử nghiệm: Chuột nhắt trắng trưởng thành phái, chủng Swiss albino, thể trọng 18-22 g, 6-8 tuần tuổi, khoẻ mạnh, viện Vaccin sinh phẩm Nha trang cung cấp Chuột ổn định ngày trước tiến hành thử nghiệm Trong suốt q trình thử nghiệm, chuột ni thực phẩm viên (mua Viện Pasteur Tp Hồ Chí Minh), nước uống theo nhu cầu, nhiệt độ chế độ chiếu sáng phòng Lơ thử (TK1): Uống thuốc TK1, uống liều 60mg/kg, tương đương 1/68 LD50 Phương pháp nghiên cứu Mức độ phù chân chuột tính theo cơng thức: X= (Vn – V0)/V0 x 100 Khảo sát độc tính cấp(6,10) Cho chuột nhịn ăn 12 trước thử nghiệm, uống nước tự Chia ngẫu nhiên chuột nhắt trắng làm nhiều lô, lô 10 – 14 chuột Dùng kim cong đầu tù chuột uống liều thuốc TK20 nhất, khoảng cách liều lô theo cấp số cộng Theo dõi triệu chứng bệnh lý gặp chuột khơng chết, trước chết: Gãi miệng liên tục, chạy hoảng loạn, ngã xiêu vẹo, co Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Lô thử (TK2): Uống thuốc TK2, uống liều 120mg/kg, tương đương 1/23 LD50 Lô thử (TK3): Uống thuốc TK3, uống liều 180mg/kg, tương đương 1/17 LD50 Theo dõi thể tích sưng phù chân chuột sau giờ, giờ, giờ, Trong đó, X: Mức độ phù chân chuột tính theo %; V0: Thể tích chân chuột trước gây viêm (đơn vị đo 1/100 mL) Vn: Thể tích chân chuột sau gây viêm (đơn vị đo 1/100 mL) Mức độ giảm phù chân chuột tính theo cơng thức: Y = [1 – (Vt/Vc)] x 100 Trong đó: Y: Mức độ giảm chân chuột phù tính theo % Vt: Thể tích chân chuột lô thử nghiệm (đơn vị đo 1/100 mL) Vc: Thể tích chân chuột lơ chứng (đơn vị đo 1/100 mL) 113 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Đánh giá tác dụng kháng viêm mạn mô hình u hạt thực nghiệm(4) Cắt sợi cotton thành đoạn ngắn, trọng lượng 20 ± mg, vê tròn, sấy khô nhiệt độ 600C đến trọng lượng không đổi Cạo lông vùng lưng chuột, dùng đầu kéo bấm lỗ nhỏ vùng da lưng chuột tách khỏi lớp cơ, cấy miếng cotton Khâu để nối liền vết mổ Chia ngẫu nhiên chuột thành lô, lô 10 chuột: Lô trắng (C): Uống dung môi dùng pha thuốc nước (không chứa tinh dầu Trầu) Lô đối chứng (As): Uống aspirin, 240mg/kg thể trọng Lô thử (TK2): Uống TK2, uống liều 120mg/kg, tương đương 1/23 LD50 Lô thử (TK3): Uống TK3, uống liều 180mg/kg, tương đương 1/17 LD50 Thể tích cho uống 0,2ml/10g, liên tục 60 ngày, ngày uống lúc 8-9 sáng, trước cho chuột ăn Mỗi tuần cân chuột, xác định thể trọng để điều chỉnh thể tích thuốc cho uống cho tuần Chỉ tiêu quan sát cuối thử nghiệm: Huyết học: Số lượng hồng cầu (triệu/mm3), Lô thử (TK2): Uống thuốc TK2, uống liều 120mg/kg, tương đương 1/23 LD50 số lượng bạch cầu (ngàn/mm3), tiểu cầu (ngàn/ Đến ngày thứ 8, mổ lấy khối u hạt, cân u hạt tươi Sấy u hạt nhiệt độ 600C đến trọng lượng khơng đổi cân Sinh hố: SGOT (U/L), SGPT (U/L), Creatinin Tác dụng ức chế u hạt biểu thị tỷ lệ % giảm trọng lượng trung bình u hạt lơ dùng thuốc thử nghiệm so với lô chứng Tỷ lệ ức chế u hạt tính theo cơng thức: mm3), hemoglobin (g/dl), hematocrit (%) (mg/dL) Mô học: Gan, thận Thống kê số liệu thực nghiệm Phương pháp thống kê mô tả sử dụng để tính giá trị trung bình lơ Dữ liệu X = Wc – Wt / Wc x 100 trình bày dạng số trung bình (Mean) ± Trong đó: X: Mức độ ức chế u hạt tính theo % Wc: Chênh lệch trọng lượng u hạt tươi khơ nhóm chứng Wt: Chênh lệch trọng lượng u hạt tươi khơ nhóm thử nghiệm SEM Sự khác biệt lơ phân tích Khảo sát độc tính bán trường diễn Chia ngẫu nhiên chuột nhắt trắng thành lô, lô 10 chuột: Lơ chứng (C): Uống nước cất chương trình MS Exell Áp dụng phép kiểm ANOVA yếu tố để so sánh trị số trung bình, t-student độc lập để so sánh trị số trung bình lơ khác nhau, t-student bắt cặp để so sánh trị số trung bình trước sau lơ p < 0,05 cho có ý nghĩa thống kê KẾT QUẢ Độc tính cấp Bảng Số chuột chết sau uống thuốc nước chứa tinh chất Trầu Lô 114 Liều Số chuột Số chuột Tỷ lệ tiêu phân Số chuột khó thở, Tỷ lệ khó thở, Số Tỷ lệ chuột (mg/kg) thử nghiệm tiêu phân lỏng lỏng (%) co giật co giật (%) chuột chết chết (%) 2700 10 50 0 0 3000 10 40 20 20 3300 10 60 10 10 3600 10 40 40 40 3900 10 0 80 80 4200 14 28,57 50 57,14 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Lô Nghiên cứu Y học Liều Số chuột Số chuột Tỷ lệ tiêu phân Số chuột khó thở, Tỷ lệ khó thở, Số Tỷ lệ chuột (mg/kg) thử nghiệm tiêu phân lỏng lỏng (%) co giật co giật (%) chuột chết chết (%) 4500 14 0 14 100 14 100 Sau 2-3 giờ, chuột giảm vận động, có tượng khó thở, co giật, tử vong vòng 24 liều khoảng 3000 - 4500 mg/kg Với chuột sống (liều 2700 - 4200 mg/kg), có tượng tiêu phân lỏng sau 24 Kết quan sát đại thể chuột chết: Gan, ruột bình thường; phổi trắng; dày căng, đầy hơi; tim thời kỳ tâm thu Áp dụng cơng thức Karber - Behrens tính liều gây chết 50% súc vật thử nghiệm thuốc nước chứa tinh chất Trầu: LD50 = 4069,23 mg/kg Chọn liều 1/23 1/34 LD50 tương đương 180 mg/kg 120 mg/kg để tiến hành thử nghiệm đánh giá độc tính bán trường diễn thuốc nước chứa tinh chất Trầu Chọn liều 1/23, 1/34 1/68 LD50 tương đương 180 mg/kg, 120 mg/kg 60mg/kg để tiến hành thử nghiệm đánh giá tác dụng kháng viêm thuốc nước chứa tinh chất Trầu Tác dụng kháng viêm cấp Bảng Thể tích chân chuột (mL) trước sau điều trị Thể tích chân chuột sau gây viêm (mL) giờ giờ C (n=10) 0,54 ± 0,03 0,95 ± 0,14 0,95 ± 0,11 0,92 ± 0,142 0,88 ± 0,109 0,83 ± 0,098 0,80 ± 0,10 As 240 mg 0,54 ± 0,03 0,89 ± 0,12 0,72 ± 0,67 ± 0,11 0,64 ± 0,62 ± 0,59 ± 0,06 /kg (n=8) 0,10*** *** 0,09*** 0,07*** *** TK1 60mg 0,54 ± 0,02 0,98 ± 0,11 0,90 ± 0,10 0,84 ± 0,10 0,78 ± 0,10 0,72 ± 0,66 ± /kg (n=10) 0,07*** 0,05*** TK2 0,55 ± 0,04 0,90 ± 0,13 0,71 ± 0,07 0,66 ± 0,62 ± 0,61 ± 0,57 ± 0,07 120mg /kg *** 0,08*** 0,09*** 0,08*** (n=10) TK3 180 0,53 ± 0,03 0,92 ± 0,10 0,78 ± 0,69 ± 0,63 ± 0,07** 0,60 ± 0,56 ± mg /kg 0,07*** 0,08*** 0,07*** 0,05*** (n=10) Lô Vo (mL) Vn (mL) 0,64 ± 0,04 0,59 ± 0,05 0,56 ± 0,04 0,55 ± 0,03 0,62 ± 0,05 0,61 ± 0,05 0,56 ± 0,04 0,54 ± 0,04 0,56 ± 0,03 0,54 ± 0,02 Chú thích: V0 thể tích chân chuột ban đầu (mL); Vn thể tích chân chuột sau sau tiêm carrageenin (mL) * p < 0,05; ** p < 0,01; ***p < 0,001 (khác biệt so với lô C uống dung môi) Sau tiêm carrageenan, thể tích chân chuột lơ chứng tăng 75,93% (p < 0,001), khơng trở giới hạn bình thường sau ngày, sau ngày cao mức bình thường 9,26% (p < 0.05) Thể tích chân chuột lơ uống aspirin (240mg/kg) tăng 64,81 % (p < 0,001), sau giảm dần trở giới hạn bình thường sau ngày, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p < 0,01) ngày, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng (p < 0,01) Thể tích chân chuột lơ uống thuốc TK2 (120 mg/kg) tăng 63,64% trở mức bình thường sau ngày, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng (p < 0,001) Thể tích chân chuột lô uống thuốc TK3 (180 mg/kg) tăng 73,58%, sau giảm dần phù 5,66 % sau cho uống, trở giới hạn bình thường sau ngày, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng (p < 0,01) Thể tích chân chuột lô uống thuốc TK1 (60 mg/kg) tăng đến 81,48% (p < 0,001), sau giảm dần trở giới hạn bình thường sau Bảng Độ phù chân chuột (%) so với ban đầu (V0) thời điểm Lô Vn Chứng (n=10) 75,93 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 75,93 70,37 Sau điều trị giờ 62,96 53,7 48,15 ngày 18,52 ngày 9,26 115 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Nghiên cứu Y học Lô Vn Aspirin 240 mg /kg (n=8) TK1 60mg /kg (n=10) TK2 120mg /kg (n=10) TK3 180 mg /kg (n=10) 64,81 81,48 63,64 73,58 33,33 66,67 29,09 47,17 24,07 55,56 20,00 30,19 Sau điều trị giờ 18,52 14,81 44,44 33,33 12,73 10,91 18,87 16,98 9,26 22,22 3,64 5,66 ngày 3,7 14,81 1,82 5,66 ngày 1,85 12,96 1,82 1,89 Sau điều trị giờ 30,34 31,46 20,41 26,53 31,11 32,22 31,52 33,7 34,83 32,65 36,67 39,13 ngày 38,2 36,73 37,78 39,13 ngày 39,33 37,76 37,78 41,30 Bảng Mức độ giảm phù chân chuột (%) sau điều trị Lô Vn Aspirin 240 mg /kg (n=8) TK1 60mg /kg (n=10) TK2 120mg /kg (n=10) TK3 180 mg /kg (n=10) 66,04 81,48 63,64 73,58 19,1 8,16 21,11 15,22 25,84 14,29 26,67 25,00 Thuốc nước Trầu thể tác dụng giảm phù chân chuột liều uống 60, 120 240 mg.kg Trong đó, liều 120 mg/kg 180 mg/kg có tác dụng kháng viêm cấp nhanh so với liều 60 mg/kg gần tương đương với aspirin (240 mg/kg) Không có khác biệt có ý nghĩa thống kê liều 120 180mg/kg tác dụng kháng viêm cấp Do đó, chúng tơi chọn liều 120 mg/kg để khảo sát tác dụng kháng viêm mạn Tác dụng kháng viêm mạn Bảng Trọng lượng u hạt tươi (mg) u hạt khô (mg) sau gây viêm mạn ngày Lô n Chứng Aspirin 240mg/kg TK2 120mg/kg 10 10 10 Trọng lượng Mức giảm trọng lượng u hạt tươi (mg) u hạt tươi so với lô chứng (%) 65,44 ± 7,85 49,35 ± 3,10*** 24,59 49,12 ± 3,73*** 24,94 Ở lô chuột uống aspirin (240 mg/kg), khối lượng u hạt tươi 24,59 %, u hạt khô 64,86 % so với lô chứng (p < 0,001) Ở lô chuột uống TK2 (120 mg/kg), trọng lượng u hạt tươi 24,94%, u hạt khô 69,27% so với lô chứng (p < 0,001) Trọng lượng Mức giảm trọng lượng u hạt u hạt khô (mg) khô so với lô chứng (%) 8,85 ± 1,72 3,11 ± 1,98*** 64,86 2,72 ± 0.99*** 69,27 Như vậy, thuốc nước Trầu làm giảm trọng lượng u hạt, thể tác dụng kháng viêm mạn liều uống 120 mg/kg, tác dụng tương đương aspirin 240 mg/kg Độc tính bán trường diễn Bảng Sự thay đổi thể trọng chuột (g) Lô Chứng TK2 (120mg/kg) TK3 (180 mg/kg) n 10 10 10 Ban đầu 19,83 ± 1,34 19,73 ± 1,22 19,82 ± 1,25 Sau 60 ngày uống thuốc trọng lượng chuột lô uống thuốc nước Trầu liều 120 mg/kg 180 mg/kg tăng so với ban đầu, tốc độ Sau 60 ngày 27,67 ± 2,49 25,82 ± 3,54 26,55 ± 2,98 Trọng lượng với ban đầu (%) 139,54% 130,87% 133,95% tăng trọng lô chứng 8,67% 5,59% (p > 0,05) Bảng Các trị số huyết học, sinh hóa chuột nhắt sau 60 ngày dùng thuốc Chỉ số Lô Chứng (n = 10) Hồng cầu (triệu/mm ) Bạch cầu (ngàn/mm ) 116 9,12 ± 0,29 11,88 ± 1,31 Lô nghiên cứu TK2 (120mg/kg) n = 10 TK3 (180mg/kg) n = 10 8,89 ± 0,64 9,02 ± 0,88 11,10 ± 2,35 10,78 ± 2,13 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Chỉ số Lô Chứng (n = 10) Hemoglobin (g/dL) Hematocrit (%) Tiểu cầu (ngàn/mm ) GPT (U/L) GOT(U/L) Creatinin (mg/dL) Protein (g/dL) 16,73 ± 0,36 0,50 ± 0,012 909,3 ± 54,6 54,6 ± 12,4 101,0 ± 15,1 0,88 ± 0,142 6,526 ± 0,831 Kết bảng cho thấy sau 60 ngày dùng thuốc nước Trầu liều 120 mg/kg 180mg/kg không làm thay đổi số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, hemoglobin, hematocrit, SGOT,SGPT, creatinin, protein toàn phần so với lơ chứng (p > 0,05) Hình ảnh vi thể gan, thận chuột uống thuốc nước Trầu biểu khác biệt so với lơ chứng Lơ nghiên cứu TK2 (120mg/kg) n = 10 TK3 (180mg/kg) n = 10 16,32 ± 0,84 16,48 ± 1,26 0,492 ± 0,028 0,493 ± 0,039 869,1 ± 41,4 914,6 ± 38,7 6,09 ± 9,81 55,59 ± 9,11 97,7 ± 14,5 90,4 ± 21,2 1,03 ± 0,29 0,93 ± 0,323 6,533 ± 0,294 6,419 ± 0,516 TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Trên mơ hình gây phù chân chuột carageenan, thuốc nước chứa tinh chất Trầu thể tác dụng kháng viêm cấp liều uống 60 mg/kg, 120 mg/kg 180 mg/kg Trong đó, liều 120 180 mg/kg thể tác dụng kháng viêm tốt liều 60 mg/kg tương tự aspirin 240 mg/kg Trên mơ hình gây u hạt, thuốc nước chứa tinh chất Trầu thể tác dụng kháng viêm mạn liều uống 120 mg/kg, tương tự aspirin 240 mg/kg Đã xác định LD50 đường uống thuốc nước chứa tinh chất Trầu 4069,23 mg/kg, gấp 68 lần liều có tác dụng kháng viêm 11 So với lô chứng, liều uống 120 mg/kg 180 mg/kg, thuốc nước chứa tinh chất Trầu khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê thể trọng, số huyết học, sinh hóa bản, hình thái vi thể gan thận chuột nhắt trắng Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu trân trọng cảm ơn tài trợ kinh phí Sở Khoa học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh q trình thực đề tài Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học 10 12 Abrahim NN, Kanthimathi MS, Abdul-Aziz A (2012) “Piper betle show antioxidant activities, inhibits MCF-7 cell proliferation and increases activities of catalase and superoxidase dismutase” BMC Complementary and Alternative Medicine; p.12-22 Đỗ Tất Lợi (2014) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, tr.118-119 Gerhard Vogel H et al (2008), Drug Discovery and Evaluation Pharmacological Assays, 3rd Edition Springer, p.1113 Goldstein SA, Shemano L, Daweo R, Betler J, (1996) “Cotton pellet ganuloma pou method for evaluation of antiinflammatory activity”, Arch Pharmacodynamic Ther; 165:725771 Lê Thị Lan Phương, Nguyễn Phương Dung (2012) “Đánh giá tác dụng kháng viêm, giảm đau viên nang PT5 chuột nhắt” Tạp chí Y học Tp Hồ Chí Minh, tập 19, số 1: 135-139 Organisation for Economic Cooperation and Development (2002) Guidelines for the testing of chemicals, Acute oral toxicity acute toxic class method, Paris, Fancer, Section Pradhan D, Suri A, Pradhan K, Biswasroy (2013), “Golden Heart of the Nature: Piper betle L.”, J Pharmacog and Phytochem;1(6) Rathee JS et al (2006), “Antioxidant activity of Piper betle leaf extract and its constituents” J Agric Food Chem; 54(24):90469054 Viện Dược liệu (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập II, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr.1007-1009 Viện Dược liệu (2004), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr.140-149 Widowati W et al (2013) “Antioxidant, anticancer, and appoptosis-inducing effects of Piper betle extracts in Hela cells” J Exp Integr Med;3(3):225-230 Winter CA et al (1962) “Carrageenan-induced edema in hind paw of the rat as an assay for anti-inflammatoty drugs” Proc Soc Exp Biol Med; 111:544-547 Ngày nhận báo: 27/02/2015 Ngày phản biện nhận xét báo: 18/05/2015 Ngày báo đăng: 08/09/2015 117 ... hình gây u hạt, thuốc nước chứa tinh chất Trầu thể tác dụng kháng viêm mạn liều uống 120 mg/kg, tương tự aspirin 240 mg/kg Đã xác định LD50 đường uống thuốc nước chứa tinh chất Trầu 4069,23 mg/kg,... miệng tác giả nước cho thấy Trầu có tác (TCM) từ Trầu, phạm vi nghiên cứu dụng kháng khuẩn, kháng virus, kháng nấm, tiến hành đánh giá tác dụng kháng viêm, giảm đau, kích thích thần kinh kháng viêm. .. chân chuột carageenan, thuốc nước chứa tinh chất Trầu thể tác dụng kháng viêm cấp liều uống 60 mg/kg, 120 mg/kg 180 mg/kg Trong đó, liều 120 180 mg/kg thể tác dụng kháng viêm tốt liều 60 mg/kg