Bài viết trình bày việc xác định tần số alen và phân bố kiểu gen của đa hình rs165599 gen catechol-Omethyltransferase ở bệnh nhân tâm thần phân liệt người Kinh. Đối tượng và phương pháp: nghiên cứu đối chứng trên 227 bệnh nhân và 92 người Kinh khỏe mạnh. Xác định kiểu gen đa hình rs165599 bằng kỹ thuật PCR-RFLP và xử lý kết quả theo tiêu chuẩn Chi bình phương.
Tạp chí y - dợc học quân số 8-2019 ĐẶC ĐIỂM ĐA HÌNH RS165599 COMT Ở BỆNH NHÂN TÂM THẦN PHÂN LIỆT NGƯỜI KINH Đinh Việt Hùng1; Đặng Tiến Trường2; Ngô Văn Nhật Minh2 Cao Tiến Đức1; Trần Hải Anh2 TÓM TẮT Mục tiêu: xác định tần số alen phân bố kiểu gen đa hình rs165599 gen catechol-Omethyltransferase bệnh nhân tâm thần phân liệt người Kinh Đối tượng phương pháp: nghiên cứu đối chứng 227 bệnh nhân 92 người Kinh khỏe mạnh Xác định kiểu gen đa hình rs165599 kỹ thuật PCR-RFLP xử lý kết theo tiêu chuẩn Chi bình phương Kết quả: tần số alen A bệnh nhân 72,36%, nhóm chứng 27,64%; tần số alen G bệnh nhân 69,94%; nhóm chứng 30,06% (p > 0,05) Đối với phân bố kiểu gen AA bệnh nhân 78,75% so với nhóm chứng 21,25%; phân bố kiểu gen AG bệnh nhân 66,05% so với nhóm chứng 33,95% phân bố kiểu gen GG bệnh nhân 74,03% so với nhóm chứng 25,97% (p > 0,05) Kết luận: khơng tìm thấy mối liên quan tần số alen, phân bố kiểu gen đa hình rs165599 bệnh tâm thần phân liệt người Kinh * Từ khóa: Tâm thần phân liệt; rs165599; COMT; Tần số alen; Phân bố kiểu gen; PCR-RFLP ĐẶT VẤN ĐỀ Gen catechol-O-methyl transferase (COMT) mã hóa enzym COMT, liên quan tới q trình thối hóa chất dẫn truyền thần kinh quan trọng dopamine, epinephrine, norepinephrine COMT gen nghiên cứu nhiều di truyền học hành vi liên quan đến chuyển hóa catecholamine, chất dẫn truyền thần kinh liên quan đến loạn thần điều trị tâm thần Nhiều nghiên cứu chứng minh gen COMT tương tác với yếu tố môi trường liên quan đến rối loạn tâm thần [1, 2] Gen COMT có số đa hình tập trung nghiên cứu rs4680, rs7378645 rs165599, rs4680 nghiên cứu nhiều [3] Đa hình rs165599 quan tâm đầu 3’ gen COMT, gần exon Mối liên quan rs165599 gen COMT biểu lâm sàng khác tâm thần phân liệt (TTPL) nghiên cứu cho nhiều kết luận không đồng [4, 5, 6, 7, 8, 9] Ở Việt Nam, chưa có nghiên cứu đánh giá mối liên quan đa hình rs165599 TTPL Nghiên cứu nhằm: Xác định tần số alen kiểu gen đa hình rs165599 bệnh nhân (BN) TTPL quần thể người Kinh ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành 227 BN TTPL 92 người Kinh khỏe mạnh Tất BN điều trị nội trú Khoa Tâm thần, Bệnh viện Quân y 103 chẩn đoán theo DSM Hiệp hội Tâm thần Hoa Kỳ Bệnh viện Quân y 103 Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Đinh Việt Hùng (bshunga6@gmail.com) Ngày nhận bài: 11/09/2019; Ngày phản biện đánh giá báo: 09/10/2019 Ngày báo đăng: 11/10/2019 37 Tạp chí y - dợc học quân số 8-2019 Phương pháp nghiên cứu * Phương pháp xác định kiểu gen rs165599: Thu thập 319 mẫu máu ngoại vi chống đông EDTA Tách ADN QIAGEN Blood Mini kit (QIAGEN, Đức) theo hướng dẫn nhà sản xuất lưu trữ -200C Khuếch đại đoạn gen có chứa rs165599 phản ứng PCR Phản ứng có tổng thể tích 25 µl bao gồm 20 ng genomic ADN làm khn, 0,2 µM primer (tổng hợp PHUSA BioChemistry Co., Ltd), Master mix QIAGEN kit 1X Thực phản ứng PCR máy Proflex x 32 (ABI, Mỹ) Chu trình nhiệt gồm biến tính ban đầu 940C phút; 35 chu kỳ gồm biến tính 940C 30 giây, gắn mồi 55°C 45 giây kéo dài chuỗi 72°C 60 giây; bước kéo dài cuối 720C 10 phút; bảo quản 40C Trình tự mồi xuôi ngược là: 5’-CGACTTAGTACATCCTTC-3’ 5’-GAGTAGAATCTTGGCTAG-3’ Sản phẩm PCR điện di gel agarose (1%) có độ dài 628 bp Xử lý sản phẩm PCR với emzym MSPI theo khuyến cáo nhà sản xuất, tóm tắt sau: µl sản phẩm PCR, 0,2 µl enzym, µl buffer nước vừa đủ 1,8 µl Ủ hỗn hợp 370C 10 phút Emzym MSPI cắt đoạn có trình tự CC/GG đoạn 628 bp, tạo thành đoạn có kích thước 403 bp 225 bp Thông qua điện di sản phẩm cắt xác định kiểu gen SNP rs165599 [10] * Xử lý số liệu: Xử lý số liệu theo tiêu chuẩn Chi bình phương kiểm tra cân HardyWeinberg nhóm bệnh nhóm chứng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết khuếch đại đoạn gen có chứa đa hình rs165599 Hình 1: Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen đích gel agarose 1% Các đường vạch trắng đồng cho thấy sản phẩm PCR đặc hiệu đủ lượng để thực kỹ thuật PCR–RFLP cho bước xác định kiu gen tip theo 38 Tạp chí y - dợc häc qu©n sù sè 8-2019 Kết xác định kiểu gen đa hình rs165599 Thực PCR-RFLP enzym cắt giới hạn điện di sản phẩm cắt keo agarose 1% tách băng sản phẩm 225 bp, 403 bp 628 bp xuất tùy vào kiểu gen đa hình rs165599 (hình 2) Hình 2: Kết xác định kiểu gen đa hình rs165599 Các mẫu xuất băng sản phẩm ba vạch 225, 403 628 bp tương ứng với kiểu gen AG; hai vạch 225 403 bp tương ứng với kiểu gen GG xuất vạch băng 628 tương ứng với kiểu gen AA Điều cho thấy phối hợp kỹ thuật enzym cắt giới hạn điện di sản phẩm cắt xác định kiểu gen đa hình Phân bố kiểu đa hình rs165599 tuân theo cân Hardy-Weinberg nhóm bệnh (χ = 0,73) nhóm chứng (χ2 = 3,57) Bảng 1: Tần suất alen đa hình rs165599 hai nhóm nghiên cứu Nhóm nghiên cứu Số alen (%) Tần suất alen [n (%)] A G TTPL (n = 227) 454 (110) 233 (51,32) 221 (48,68) Nhóm chứng (n = 92) 184 (110) 89 (48,37) 95 (51,63) 638 322 316 Tổng (n) χ = 0,456; p = 0,499 Khơng có khác biệt tần suất hai alen A G đa hình rs165599 hai nhóm nghiên cứu (p = 0,499 39 Tạp chí y - dợc học quân số 8-2019 Bảng 2: Tần suất alen đa hình rs165599 nam Tần suất alen [n (%)] Nhóm nghiên cứu Số alen A G TTPL 312 (100) 165 (52,88) 147 (47,12) Chứng 102 (100) 48 (47,06) 54 (52,94) 414 213 201 Tổng (n) χ = 1,044; p = 0,307 Không có khác biệt tần suất alen A G đa hình rs165599 nam hai nhóm nghiên cứu (p = 0,307) Bảng 3: Tần suất alen đa hình rs165599 nữ Tần suất alen [n (%)] Nhóm nghiên cứu Số alen A G TTPL 142 (100) 68 (47,89) 74 (52,11) Chứng 82 (100) 41 (50,00) 41 (50,00) 414 213 115 Tổng (n) χ = 0,093; p = 0,760 Khơng có khác biệt tần suất alen A G đa hình rs165599 nữ hai nhóm nghiên cứu (p = 0760) Bảng 4: Phân bố kiểu gen đa hình rs165599 hai nhóm nghiên cứu Số lượng kiểu gen Nhóm nghiên cứu Số mẫu AA AG GG TTPL 227 (100) 63 (22,75) 107 (47,14) 57 (25,11) Chứng 92 (100) 17 (18,48) 55 (59,78) 20 (21,74) 319 80 162 77 Tổng (n) χ = 5,355; p = 0,069 Kết cho thấy khơng có khác biệt phân bố kiểu gen AA, AG, GG đa hình rs165599 nhóm bệnh nhóm chứng (p = 0,069) 40 T¹p chÝ y - dợc học quân số 8-2019 Bng 5: Phân bố kiểu gen đa hình rs165599 nam Nhóm nghiên cứu Số lượng kiểu gen (%) Số mẫu AA AG GG TTPL 156 (100) 46 (29,49) 73 (46,79) 37 (23,72) Chứng 51 (100) (17,65) 30 (58,82) (12 (23,53) 207 55 103 49 Tổng (n) χ = 3,849; p = 0,146 Kết cho thấy khơng có khác biệt phân bố kiểu gen đồng hợp tử đa hình rs165599 nam hai nhóm nghiên cứu (p = 0,207) Bảng 6: Phân bố kiểu gen đa hình rs165599 nữ Nhóm nghiên cứu Số mẫu TTPL Chứng Tổng (n) Số lượng kiểu gen (%) AA AG GG 71 (100) 17 (23,94) 34 (47,89) 20 (28,17) 41 (100) (19.51) 25 (60,98) (19,51) 112 25 59 28 χ = 1,910; p = 0,385 Khơng có khác biệt phân bố kiểu gen đa hình rs165599 (p = 0,385) BÀN LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy khơng có mối liên quan mang ý nghĩa thống kê kiểu gen đa hình rs165599 với bệnh TTPL quần thể người Việt Nam Kết luận phù hợp với kết số nghiên cứu gần Nghiên cứu Acar CS (2015) quần thể người Thổ Nhĩ Kỳ cho thấy khơng có mối liên quan ba đa hình xem xét phổ biến rs4680, rs737865 rs165599 với bệnh TTPL [8] Ngoài ra, nghiên cứu tổng hợp từ 20 nghiên cứu độc lập mối liên quan đa hình rs165599 với TTPL đưa kết luận tương tự [9] Tuy nhiên, kết nghiên cứu không thống với số nghiên cứu trước quần thể người Israel, Iran [5, 6, 7] Nghiên cứu khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê tần số alen phân bố kiểu gen giới tính quan sát nhóm bệnh nhóm chứng Kết luận phù hợp không phù hợp với kết số nghiên cứu Kết phù hợp với nghiên cứu người Thổ Nhĩ Kỳ [8] không thống với kết thu nghiên cứu quần thể người Israel [5]: đa hình rs165599 có mối liên quan với TTPL lớn 41 T¹p chÝ y - dợc học quân số 8-2019 hn n Mt khác, số nghiên cứu đồng thuận khơng có mối liên quan kiểu gen đa hình rs165599 với TTPL nhóm nam, lại yếu tố liên quan nghiên cứu nhóm nữ, đặc biệt với alen G [9] Như vậy, với chưa thống mối liên quan đa hình rs165599 với TTPL nghiên cứu giới, nghiên cứu chúng tơi khơng có liên quan đa hình rs165599 TTPL quần thể người Việt Nam Kết ảnh hưởng nhiều yếu tố chủng tộc Vì vậy, việc nghiên cứu đa hình nguy nói chung đa hình rs165599 nói riêng, ảnh hưởng kết hợp chúng TTPL thiết thực, cần tiếp tục thực nghiên cứu KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy khơng có mối liên quan tần suất alen, phân bố kiểu gen đa hình rs165599 gen COMT bệnh TTPL quần thể người Kinh, Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Li T et al Preferential transmission of the high activity allele of COMT in schizophrenia Psychiatric Genetics 1996, (3), pp.131-133 42 Henquet C et al An experimental study of COMT Val158Met moderation of delta-9tetrahydrocannabinol-induced effects on psychosis and cognition Neuropsychopharmacology 2006, 31 (12), pp.2748-2757 Henquet C et al Cannabis use and expression of mania in the general population Journal of Affective Disorders 2006, 95 (1 - 3), pp.103-110 Truong T.D, Dam M.N et al Val158Met polymorphism in catechol-Omethyltransferase gene and schizophrenia in a Vietnamese population Journal of 108 Clinical Medicine and Pharmacy 2015, 12, pp.143-147 Shifman S et al A highly significant association between a COMT haplotype and schizophrenia 2002, 71 (6), pp.1296-1302 Ahmadi L et al Genetic variations of DAOA (rs947267 and rs3918342) and COMT genes (rs165599 and rs4680) in schizophrenia and bipolar I disorder 2018, (6), p.429 Behbahani P et al Association study of single nucleotide polymorphism rs165599 of COMT gene with schizophrenia and bipolar mood disorder in the south-west of Iran 2015, (2), p.67 Acar C et al Lack of association between COMT and schizophrenia in a Turkish population 2015, 40 (3), pp.205-209 Gozukara Bag, H.G.J.M.G, G Medicine Association between COMT gene rs165599 SNP and schizophrenia: A meta‐analysis of case‐control studies 2018, (5), pp.845-854 ... phẩm cắt xác định kiểu gen đa hình Phân bố kiểu đa hình rs165599 tuân theo cân Hardy-Weinberg nhóm bệnh (χ = 0,73) nhóm chứng (χ2 = 3,57) Bảng 1: Tần suất alen đa hình rs165599 hai nhóm nghiên... khác biệt phân bố kiểu gen đa hình rs165599 (p = 0,385) BÀN LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy khơng có mối liên quan mang ý nghĩa thống kê kiểu gen đa hình rs165599 với bệnh TTPL quần thể người Việt... suất alen, phân bố kiểu gen đa hình rs165599 gen COMT bệnh TTPL quần thể người Kinh, Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Li T et al Preferential transmission of the high activity allele of COMT in schizophrenia