Mục đích nghiên cứu: Xác định sự có mặt của Begomovirus trên các mẫu ớt thu thập tại miền Bắc, xác định đặc điểm sinh học và đánh giá tính gây bệnh của virus.
BỘ NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NƠNG THƠN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VN VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VN HÀ THỊ THỦY CHẨN ĐỐN VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA BEGOMOVIRUS HẠI ỚT LUẬN VĂN THẠC SĨ BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VN VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VN HÀ THỊ THỦY CHẨN ĐOÁN VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA BEGOMOVIRUS HẠI ỚT Ngành Mã số : Bảo vệ thực vật : 8.62.01.12 Người hướng dẫn khoa học : PGS. TS. Hà Viết Cường HÀ NỘI 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đây là cơng trình nghiên cứu của riêng tơi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng được cơng bố trong bất kỳ cơng trình khoa học nào khác. Tơi xin cam đoan rằng các thơng tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Tác giả Hà Thị Thủy LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tốt nghiệp ngoài sự cố gắng của bản thân em đã nhận được rất nhiều sự quan tâm giúp đỡ nhiệt tình của thầy cơ, bạn bè và người thân. Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Hà Viết Cường, người đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, khuyến khích em nỗ lực trong suốt q trình thực hiện luận văn này. Em xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới cán bộ công nhân viên thuộc Trung tâm nghiên cứu bệnh cây nhiệt đới – Trường Hoc viên nông nghiêp Viêt Nam, đã ̣ ̣ ̣ ̣ nhiệt tình giúp đỡ tơi trong suốt q trình tơi thực tập tại Trung tâm Em xin gửi lời cảm ơn tới các bà con nơng dân tại nhiều nơi đã tạo điều kiện thuận lợi cho em trong thời gian thực hiện đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình và bạn bè đã ln động viên, khích lệ, tạo điều kiện tốt nhất cho em hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Tác giả Hà Thị Thủy MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu A. tumefaciens AS ATP Bb CP CTAB ddNTP DNA Dntp dsDNA E. coli EDTA ICTV IR Kb LB ORF PCR RCA RE Rep RNA Rnase SDS SsDNA TAE Taq Vir β ME ChiVMV CMV PMMoV PepMoV PVMV PepYMV TMV TYLCTHV TYLCVs Từ viết tắt Agrobacterium tumefaciens Acetosyringone Adenosine triphosphate Base pair Capsid protein Cetryl Ammonium Bromide Dideoxynucleoside triphosphate Deoxyribonucleic acid Deoxynucleoside triphosphate Double strand DNA Escherichia coli Ethylene diamine tetra acetic acid International Committee on Taxonomy of Viruses Itergenic region Kilo base Luria and Bertani Open reading frame Polymerase Chain Reaction Rolling circle amplification Restriction enzyme Replication protein Ribonucleic acid Ribonuclease Sodium Dodecyl Sulphate Singe strand DNA Tris – acetate – EDTA Thermus aquatic Virulence region Beta Mercaptoethanol Chilli veinal mottle virus Cucumber mosaic virus Pepper mild mottle virus Pepper mottle virus Pepper veinal mottle virus Pepper yellow mottle virus Tobacco mosaic virus Tomato yellow leaf curl Thailand virus Tomato yellow leaf curl viruses DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hà Thị Thủy Tên Luận văn: Chẩn đốn và đặc điểm sinh học của Begomovirus hại ớt Ngành: Bảo Vệ Thực Vật Mã số: 8.62.01.12 Tên cơ sở đào tạo: Viện khoa học nơng nghiệp Việt Nam; Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Xác định sự có mặt của Begomovirus trên các mẫu ớt thu thập tại mi ền Bắc, xác định đặc điểm sinh học và đánh giá tính gây bệnh của virus Phương pháp nghiên cứu Trong nghiên cứu này, mẫu bệnh virus hại ớt được thu thập tại các vùng trồng ớt tại Hà Nội, sau đó được làm khơ bằng hạt silicagelkít. Các mẫu được kiểm tra ELISA phát hiện virus bằng các kit ELISA do Viện DSMZ của Đức cung cấp. Các mẫu có triệu chứng đặc trưng được kiểm tra PCR. Sử dụng cặp mồi chung BegoA Rev/For phát hiện begomovirus. Sử dụng cặp mồi đặc hiệu VNP93AF1/VNP1500 AR1 VNP1500BF1/VNP1500BR2 để phát đặc hiệu PepYLCVN Thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo dùng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens (agroinoculation) và lây nhiêm ̃ băng ̀ bọ phân ́ nhằm đánh giá tính gây bệnh của PepYLCVN trên cà chua và một số cây chỉ thị Kết quả chính và kết luận 1. Đã điều tra và thu thập các mẫu bệnh begomovirus trên ơt́ tại Ha Nơi ̀ ̣ năm 2017 vơi cac loai hinh triêu ch ́ ́ ̣ ̀ ̣ ưng ́ . Dạng triệu chứng điển hình là triệu chứng khảm lá. Tỉ lệ nhiễm virus cao nhất tại huyện Thach Thât trong giai đoan qua chin đat ̣ ́ ̣ ̉ ́ ̣ 43,2% 2. Đã kiểm tra ELISA trên 81 mẫu ơt thu thâp khăp ca n ́ ̣ ́ ̉ ươc, phát hi ́ ện 2 mẫu phản ứng dương tính ChiVMV, 5 mẫu phản ứng dương tính PMMoV, 1 mẫu phản ứng dương tính PepMoV, 1 mẫu phản ứng dương tính PepYMV và 1 mẫu phản ứng dương tính TYLCVs. 3. Kiểm tra PCR phát hiện begomovirus bằng cặp mồi chung BegoAF1 và BegoAR1 trên 14 ớt va 4 mâu ca chua. K ̀ ̃ ̀ ết quả kiểm tra cho thây co 6 mâu ́ ́ ̃ ớt va 4 ̀ mâu ca chua co phan ̃ ̀ ́ ̉ ứng dương Kiểm tra PCR phát hiện TYLCKaV băng căp môi đăc hiêu TYKaA–F ̀ ̣ ̀ ̣ ̣ 1/R1 trên 5 ớt va 4 mâu ca chua. K ̀ ̃ ̀ ết quả kiểm tra cho thây co 1 mâu ca chua co phan ́ ́ ̃ ̀ ́ ̉ ứng dương 5. Kiểm tra PCR phát hiện PepYLCVNV băng ̀ căp môi đ ̣ ̀ ặc hiệu VNP93–A F1/VNP1500–AR1 và cặp mồi 1500–B–F1/R2 trên 9 mẫu (5 ơt va 4 mâu ca chua) ́ ̀ ̃ ̀ Kết quả kiểm tra cho thây co 4 mâu ́ ́ ̃ ớt va 4 mâu ca chua co phan ̀ ̃ ̀ ́ ̉ ứng dương với cả DNAA và DNAB của PepYLCVNV Đã giải trình tự bổ sung nhận trình tự đầy đủ gen mẫu PepYLCVNV VNP1500 từ 2 cấu trúc xâm nhiễm. Phân tích bộ gen cho thấy bộ gen của virus trên cấu trúc xâm nhiễm là hồn chỉnh, đảm bảo sự xâm nhiễm hệ thống của virus trong cây. Kết hợp kết quả lây nhiễm nhân tạo và phân tích trình tự đã gợi ý có lẽ xuất hiện đột biến của virus trên cấu trúc xâm nhiễm liên quan cảm ứng triệu chứng thúc mã kết thúc TAA TGA TAG) đặc trưng các begomovirus, gồm 2 ORF trên sợi virus (AV2, AV1, cùng chiều kim đồng hồ) và 4 ORF trên sợi bổ sung với sợi virus (AC4, AC1, AC2, AC3, ng ược chi ều kim đồng hồ) Trên sợi virus, ORF AV2 (mã hóa cho protein AV2 có chức năng cảm ứng triệu chứng, di chuyển hệ thống và tích lũy DNA của virus) có kích thước 348 nt. Phía đầu 3’ của ORF AV2 là ORF AV1 (mã hóa cho protein vỏ CP) có kích thước 790 nt (263 aa) Tương tự như các begomovirus khác, trên sợi bổ sung, ORF lớn nhất là ORF AC1 (mã hóa protein Rep là protein có chức năng tái sinh và tương tác với protein của ký chủ điều khiển chu kỳ tế bào), có kích thước 1068 nt, ORF nhỏ nhất là ORF AC4 (mã hóa protein AC4 có chức năng cảm ứng triệu chứng và di chuyển hệ thống) có kích thước 291 nt. Hai ORF còn lại là AC2 (mã hóa protein TrAP có chức năng hoạt hóa phiên mã và ức chế phản ứng phòng thủ của cây) có kích thước 402 nt và AC3 có kích thước 402 nt (mã hóa protein REn). Cũng giống như tất cả các beomovirus, ORF AC4 và ORF AC2 ln nằm trên một khung đọc mã (c3). DNAA có một vùng liên gen khơng phiên mã (IR, Intergenic Region) kích thước khoảng 266 nt có vị trí tính từ đầu 5’ của ORF AC1 tới đầu 5’ của ORF AV2 tương tự như IR của các begomovirus khác. Giống như các begomovirrus có bộ gen kép khác, trên vùng IR của DNA A chứa một vùng chung CR có trình tự giống như vùng tương ứng trên DNA B Vùng này DNAA PepYLCVNV VNP1500 dài 174 nts chứa nguồn gốc tái bản (ori, origin of replication) với nhiều dấu hiệu quan trọng Bảng 4.17. Đặc điểm phân tử DNAA của mẫu PepYLCVNV VNP1500 Vị trí (từ nt đến nt) Kích thước (nt) DNAA Tồn bộ phân tử 2733 Vùng liên gen IR 2597 – 129 266 Vùng chung CR 260141 174 144 AV1(CP) 2901069 790 AV2 (AV2) 130477 348 AC1(Rep) 15292596 1068 AC2 (TrAP) 12071608 402 AC3 (REn) 10621463 402 AC4 (AC4) 21492439 291 Ghi chú: CP (coat protein), IR (intergenic region), CR (common region), Rep (replication associated protein), TrAP (transcriptional activator protein), REn (replication enhancer), nt là nucleotide DNAB (Bảng 4.18) DNAB của PepYLCVNV VNP1500 có kích thước 2715 nt và chỉ chứa 2 ORF tương tự như DNAB của các begomo có bộ gen kép khác. Trên sợi virus (chiều kim đồng hồ) là ORF BV1 mã hóa protein vận chuyển MP, có kích thước 831 nt. Trên sợi bổ sung, DNAB chứa 1 ORF là BC1 mã hóa protein nhập nhân (NSP) với kích thước 831 nt DNAB chứa một vùng liên gen khơng phiên mã IR lớn, có kích thước 1041 nts. Tương tự DNAA, vùng này chứa một đoạn ngắn dài 175 nt gọi là vùng chung (common region, CR) có trình tự bảo thủ cao với vùng chung CR của DNA A. Mức độ đồng nhất giữa vùng chung CR của 2 thành phần tới 96.6% (Hình 4.15) và do đó cũng chứng tỏ 2 thành phần này thuộc cùng 1 virus. Vì trình tự vùng chung này giống với của DNAA nên protein Rep được mã hóa trên DNAA có thể nhận biết để khởi đầu q trình tái sinh của DNAB Bảng 4.18. Đặc điểm phân tử DNAB của mẫu PepYLCVNV VNP1500 DNAB Tồn bộ phân tử Vùng liên gen IR Vùng chung CR BV1 (MP) BC1 (NSP) Vị trí (từ nt đến nt) Kích thước (nt) 1855180 258342 1811011 10241854 2715 1041 175 831 831 145 Hình 4.14. Tổ chức bộ gen của mẫu PepYLCVNV VNP1500 Hình 4.15. Vùng chung CR của mẫu PepYLCVNV VNP1500 với cấu trúc thứ cấp chứa điểm khởi đầu tái bản bộ gen được chỉ rõ Nhận xét: Phân tích đặc điểm phân tử mẫu virus PepYLCVNV VNP1500 chứng tỏ cấu trúc xâm nhiễm dựa trên mẫu virus này có bộ gen hồn chỉnh. Ngồi ra, cây nguồn cà pháo được lây nhiễm bằng agroinoculation có phản ứng PCR dương tính với cả 2 thành phần chứng tỏ virus đã có thể tái sinh và di chuyển hệ thống trong cây. Vì các mơ tiph chức năng liên quan tới cảm ứng triệu chứng của begomovirus khá đa dạng và nằm trên tất cả các gen 146 nên chúng tơi đã khơng thể xác định được các đột biến này chỉ dựa trên phân tích phân tử. Thiết kế lại cấu trúc có lẽ cần thiết để nghiên cứu đặc điểm sinh học của virus PepYLCVNV 147 PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. KẾT LUẬN Đã điều tra và thu thập các mẫu triệu chứng bệnh begomovirus trên ơt́ tại Ha Nơi ̀ ̣ năm 2017. Dạng triệu chứng điển hình là triệu chứng khảm lá. Tỉ lệ nhiễm virus cao nhất tại huyện Thach Thât vào giai đoan qua chin đat 43,2% ̣ ́ ̣ ̉ ́ ̣ Đã kiểm tra ELISA trên 81 mẫu ơt thu thâp khăp ca n ́ ̣ ́ ̉ ươc, phát hi ́ ện 2 mẫu phản ứng dương tính ChiVMV, 5 mẫu phản ứng dương tính PMMoV, 1 mẫu phản ứng dương tính PepMoV, 1 mẫu phản ứng dương tính PepYMV và 1 mẫu phản ứng dương tính TYLCVs. Kiểm tra PCR phát hiện begomovirus bằng cặp mồi chung BegoAF1 và BegoAR1 trên 14 ơt va 4 mâu ca chua, k ́ ̀ ̃ ̀ ết quả kiểm tra cho thây co 6 mâu ́ ́ ̃ ớt va 4 mâu ca chua thu t ̀ ̃ ̀ ại miền Trung và miền Nam co phan ́ ̉ ưng d ́ ương Dùng mồi đặc hiệu để kiểm tra 9 mẫu dương tính với begomovirus, kết quả kiểm tra PCR cho thấy chỉ co 1 mâu ca chua thu t ́ ̃ ̀ ại An Giang co phan ́ ̉ ưng ́ dương với Tomato yellow leaf curl Kachanaburi virus (TYLCKaV), có 8/9 mẫu nhiễm với cả DNAA và DNAB của Pepper yellow leaf curl Vietnam virus (PepYLCVNV) Đã giải trình tự bổ sung và nhận được trình tự đầy đủ bộ gen mẫu PepYLCVNV VNP1500 từ 2 cấu trúc xâm nhiễm. Phân tích bộ gen cho thấy gen của virus trên cấu trúc xâm nhiễm là hồn chỉnh, đảm bảo sự xâm nhiễm hệ thống của virus trong cây. Kết hợp kết quả lây nhiễm nhân tạo và phân tích trình tự đã gợi ý có lẽ xuất hiện đột biến của virus trên cấu trúc xâm nhiễm liên quan cảm ứng triệu chứng 148 5.2. KIẾN NGHỊ Tiếp tục xác định thành phần lồi virus trên cây ơt tai Ha Nơi ́ ̣ ̀ ̣ Nghiên cứu sâu đặc trưng sinh học, phân bố của PepYLCVNV 149 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT: 1. Bùi Bách Tuyến (1998). Bệnh hại cây ớt. Tài liệu hướng dẫn đồng ruộng (bản dịch tiếng việt). Trung tâm nghiên cứu và phát triển rau châu Á (AVRDC) 2. Bùi Thị Oanh (2010). Nghiên cứu ảnh hưởng của một số biện pháp kỹ thuật đến khả năng sinh trưởng, phát triển và năng suất của giống ớt lai số 03 năm 2009 2010 tại huyện Nam Đàn Nghệ An. tr. 522 3. Hà Viết Cường (2010). Bài giảng Công nghệ sinh học trong bệnh cây. Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội 4. Hà Viết Cường (2011).Virus thực vật, phytoplasma viroid Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 5. Vũ Triệu Mân va Lê L ̀ ương Tề (1999). Bệnh vi khuẩn và virus hại cây trồng. Nhà xuất bản Giáo dục, Hà Nội 6. Mai Thị Phương Anh, Trần Văn Lài, Trần Khắc Thi (1996). Rau và trồng rau giáo trình cao học nơng nghiệp. Nhà xuất bản Nơng nghiệp, Hà Nội 7. Mai Thị Phương Anh (1999). Kỹ thuật trồng một số loại rau cao cấp. N hà xuất bản Nơng nghiệp, Hà Nội 8. Nguyễn Thị Hà Un (2012). Xác định và đánh giá khả năng gây bệnh của một số begomovirus trên cây cà chua bằng phương pháp lây nhiễm nhân tạo dùng vi khuẩn Agrobacterium tumerfaciens. Nhà xuất bản Nơng nghiệp, Hà Nội 9. Nguyễn Văn Viên (1999). Nghiên cứu tình hình phát sinh phát triển và biện pháp phòng trừ một số bệnh nghiên cứu và bệnh xoăn lá hại cà chua vùng Hà Nội và phụ cận. Luận án Tiến sĩ nơng nghiệp 10 Vũ Triệu Mân va Lê L ̀ ương Tề chủ biên (2001). Giáo trình Bệnh cây Nơng Nghiệp. Nhà xuất bản Nơng nghiệp, Ha Nơi ̀ ̣ 11. Viên Bao vê th ̣ ̉ ̣ ực vât (2000). Ph ̣ ương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật. Nha xuât ban ̀ ́ ̉ Nông nghiệp, Ha Nôi.T ̀ ̣ ập 03. tr. 6061 150 TIẾNG ANH: 12 Avgelis A D (1986) A pepper strain of TMV who is new in Crete (Greece). Phytopathologia Mediterranea. 25(13). pp. 3338 13 Bérenger J., M. F. Fabre, A. Palloix and B. Moury (2008). Charactezation of a new potyvirus infecting pepper crops in Ecuador, Brief report. Archives of Virology 153(1). pp. 15431548 14 Boulton M. I. (1995). Agrobacteriummediated transfer of geminiviruses to plant tissues. Methods Mol Biol. 49(1). pp. 7793 15 Bosland P.W. (1996). Capsicums: Innovative uses of an ancient crop. In: J. Janick (ed.), Progress in new crops. ASHS Press, Arlington, VA. pp. 479487 16 Bosland P.W. and Votava 2000 Pepper: Vegetable and spice Capsicums. CABI Publishing. pp. 230 17. Briddon R., J. Brown, E. Moriones, J. Stanley, M. Zerbini, X. Zhou and C. Fauquet (2008). Recommendations for the classification and nomenclature of the DNAβ satellites of begomoviruses. Archives of virology. 153(4). pp. 763 18 Briddon R. W. (2003). Cotton leaf curl disease, a multicomponent begomovirus complex. Molecular Plant Pathology. 4(1). pp. 427434 19 Britton G. and D HorneroMéndez (1997). Carotenoids and Colour in Fruits and Vegetables. In: TomásBarberán FA, Robins RJ, editors. Photochemistry of Fruits and Vegetables. Oxford, England: Clarendon Press. pp. 11–28 20 Brunt A. A, K. Crabtree, M. J. Dallwitz, A. J. Gibbs, L. Watson (1996). Viruses of Plants: Descriptions and Lists from the VIDE Database. C.A.B. International, U.K. pp. 148 21 Brunt A.A. and R.H. Kenten (1972). Pepper veinal mottle virus, Descriptions of Plant Viruses, No. 104/1972. Dowload date 15/11/2017 from http://www.dpvweb.net/dpv/showdpv.php?dpvno=104 22 Cerkauskas R (2004) Pepper diseases, In the Fact Sheet, Asian Vegetable Research and Development Center. AVRDC Publication 04. pp. 586596 151 23 Chakraborty S., P. Pandey, M. Banerjee, G. Kalloo and C. Fauquet (2003). Tomato leaf curl Gujarat virus, a new begomovirus species causing a severe leaf curl disease of tomato in Varanasi, India. Phytopathology. 93(12). pp. 1485 24 Chomchalow N. (2001) Spice production in Asia An overview. AU journal of Technology. Vol 5, no 2. pp. 1 25 Doyle J. J. (1987). A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochem bull. Vol. 19 (1987). pp. 1115 26 FAO (2012). Ngày truy cập 17/12/2018 tại http://faostat.fao.org 27 FAO (2014). Ngày truy cập 20/12/2018 tại http://www.fao.org/faostat/en/#data/QC 28 Fauquet C. M. & Stanley J. (2003) Geminivirus classification and nomenclature: progress and problems. Annals of Applied Biology. 142(2). pp. 165189 29 Fauquet C. M., R. W. Briddon, J. K. Brown, E. Moriones, J. Stanley, M. Zerbini, X. Zhou (2008). Geminivirus strain demarcation and nomenclature. Arch Virol. 153(4). pp. 783821 30 Fauquet and Stanley (2005). Revising the way we conceive and name viruses below the species level: a review of geminivirus taxonomy calls for new standardized isolate descriptors. Archives of virology. 150(10). pp. 21512179 31 Pickersgill B (1997). Genetic resources and breeding of Capsicum spp. Euphytica. 96(1). pp. 129133 32 Gafni and Yedidya (2003). Tomato yellow leaf curl virus, the intracellular dynamics of a plant DNA virus. Molecular plant pathology. 4(1). pp. 915 33 Galanihe L. D., M. G. D. L. Priyantha, D. R. Yapa, H. M. S. Bandara, J. A. D. A. R. Ranasinghe (2004). Insect pest and disease incidences of exotic hybrids chilli pepper varieties grown in the low country dry zone of Sri Lanka. Annals of Sri Lanka Department of Agriculture. 6(1). pp. 99106. 34 Ghanim and Czosnek (2000). Tomato yellow leaf curl geminivirus (TYLCVIs) is transmitted among whiteflies (Bemisia tabaci) in a sexrelated manner. Journal of Virology. 74(10). pp. 47384745 152 35 Gibbs A. J., Trueman J. W. H., Gibbs M. J. (2008). The bean common mosaic virus lineage of potyviruses: where did it arise and when?. Arch Virol 153. pp. 2177–2187 36 Green S.K. and J.S. Kim (1991). Characteristics and control of viruses infecting peppers: a literature review, Asian Vegetable Research and Development Center, Technical Bulletin. AVRDC Publication. No. 18 37 Green S.K. (1992a). Integrated control of diseases of vegetables in Taiwan, Asian Vegetable Research and Development Center, Tainan, Taiwan AVRDC Publication. pp. 3568 38 Green S.K (1992b) Virus in Asia Pacific region In the Proceedings of the Coference on chilli pepper production in the tropics, 1314 October, 1992, Kuala Lumpua, Malaisia. pp. 99129 39 Green S. K. (1993). Pepper virus research in Taiwan and other Asian countries. In the Proceedings of the Symposium on Plant viruses and Virus – like diseasea, Council of Agriculture Plant Protection. AVRDC Publication. Series No.1. pp. 213 – 243. 40 Green S., W. Tsai, S. Shih, L. Black, A. Rezaian, M. Rashid, M. Roff, Y. Myint and L Hong (2001) Molecular characterization of begomoviruses associated with leafcurl diseases of tomato in Bangladesh, Laos, Malaysia, Myanmar, and Vietnam. Plant Disease. 85(2). pp. 12861286 41 Gutierrez C., E. RamirezParra, M. Mar Castellano, A. P. SanzBurgos, A. Luque, and R. Missich (2004). Geminivirus DNA replication and cell cycle interactions. Veterinary microbiology. 98(2). pp. 111119 42 Ha C (2007) Detection and identification of potyviruses and geminiviruses in Vietnam. A thesis submitted for the degree of Doctor of Philosophy to the Queensland University of Technology. pp. 203215 43 Ha C., S. Coombs, P. Revill, R. Harding, M. Vu and J. Dale (2008). Molecular characterization of begomoviruses and DNA satellites from Vietnam: additional evidence that the New World geminiviruses were present in the Old World prior to continental separation. Journal of General Virology. 89(1). pp. 312326 153 44 Harrison and Robinson (2005) Another quarter century of great progress in understanding the biological properties of plant viruses. Annals of applied biology. 146(1). pp. 1537 45 Hellens R., P. Mullineaux and H. Klee (2000). Technical Focus:a guide to Agrobacterium binary Ti vectors. Trends Plant. Sci 5. pp. 446451 46 HorneroMéndez D., J. CostaGarcía , M I MínguezMosquera (2002). Characterization of carotenoids highproducing Capsicum annuum cultivars selected for paprika production. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50(20) pp. 5711–5716 47 Hussain M., S Mansoor, S Iram, Y Zafar, R W Briddon (2004). First report of Tomato leaf curl New Delhi virus affecting chilli pepper in Pakistan. Plant Pathology. 53(1). pp. 794 48 Inoue N. A. K., M. E. N. Fonseca, R. O. Resend, L. S. Boiteux, D. C. Monte, A. N. Dusi, A. C. de Avila and R. A. A. vanderVlugt(2002). Pepper yellow mosaic virus, a new potyvirus in sweet pepper Capsicum annuum Brief report, Archives of Virolog. 147(4). pp. 849855. 49 Jones D. R. (2003). Plant viruses transmitted by whiteflies. European Journal of Plant Pathology. 109(3). pp. 195 50 Than Po Po , Haryudian Prihastuti, Sitthisack Phoulivong, Paul, W.J. Taylor and Kevin D Hyde (2008) Chilli anthracnose disease caused by Colletotrium species. J Zhejiang Univ Sci B. pp. 764778 51 Tsai W S., S L Shih, S K Green, A Rauf, S H Hidayat, F J Jan (2006). Molecular characterization of Pepper yellow leaf curl Indonesia virus in leaf curl and yellowing diseased tomato and pepper in Indonesia Plant Disease. 90(1). pp. 247 52 Jacquemond M. (2012). Cucumber mosaic virus. Adv Virus Res. Vol 84. pp. 439504 154 53 Khan M. S., S. K. Raj, R. Singh (2006). First report of Tomato leaf curl New Delhi virus infecting chilli in India. Plant Pathology. 55(1). pp. 289 54 KheyrPour A., M. Bendahmane, V. Matzeit, G P. Accotto, S Crespi and B. Gronenborn (1991) Tomato yellow leaf curl virus from sardinia is a whitefly transmitted monoparatite geminivirus. Nucleic Acids Research 19(24). pp. 6763 6769 55 Lipert L. F., P. G. Smith and B. O Bergh (1996). Cytogenertics of thevegetable crops. Garden pepper, Capsicum ssp. Botanical Rev. 32(1). pp. 2455 56 Markham P., I Bedford, S Liu, D Frolich, R Rosell and J Brown (1996). Transmission of geminiviruses by biotypes of Bemisia tabaci (Gennadius). Bemisia: 1995, taxonomy, biology, damage, control and management. pp. 6975 57 Martínez Y., M. Quiđones, D. Fonseca, J. Potter J, D. P. Maxwell (2002). First report of Tomato yellow leaf curl virus infecting bean (Phaseolus vulgaris) in Cuba. Plant Disease. 86(7). pp. 814 58 Martínez ‐ Ayala A., S Sánchez ‐ Campos , F Cáceres, J Navas ‐ Castill, E. Moriones (2013). Characterisation and genetic diversity of pepper leafroll virus, a new bipartite begomovirus infecting pepper, bean and tomato in Peru Annals of Applied Biology. 164 (1). pp. 6272 59 Moury B., A. Palloix, C. Caranta, P. Gognalons, S. Souche, S. K. Gebre and G. Marchoux (2005). Serological, molercular and pathotype diversity of Pepper veinal mottle virus and Chilli veinal mottle virus. Phythopathology. 95(1). pp. 227232 60 Moriones E and J NavasCastillo (2000) Tomato yellow leaf curl virus, an emerging virus complex causing epidemics worldwide. Virus Research. 71(12). pp. 123134 61 Murugan and Uthamasamy (2001). Dispersal behaviour of cotton whitefly Bemisia tabaci (Genn.) under cotton based gardenland agro ecosystem of Coimbatore, Tamil Nadu. Madras agricultural journal. 88(1/3) . pp. 16 155 62 Navas Castillo J., G. P. Accotto, E. Noris, E. Moriones and D. Louro (2000). Typing of Tomato yellow leaf curl viruses in Europe. European Journal of Plant Pathology. 106(2). pp. 179186 63 Navot N., E. Pichersky, M. Zeidan, D Zamir and H Czosnek (1991) Tomato yellow leaf curl virus: a whiteflytransmitted geminivirus with a single genomic component. Virology 185(1). pp. 151161 64 Padidam M., S. Stanley and C. M. Fauquet (1999). Possible emergence of new geminiviruses by frequent recombination. Virology 265(2). pp.: 218225 65 Perry L., S. Zamillo, Host, D. M. Pearsall, D. R. Pipemo and M. J. Berman (2007). Starch fossils and the domestication and dispersal of chili peppers (Capsicum spp. L.) in the Americas. Science. 315(5814). pp. 986988 66 PérezGálvez A., H. D. Martin, H. Sies, W Stahl (2003) Incorporation of carotenoids from paprika oleoresin into human chylomicron. British Journal of Nutrition. 89(6) . pp. 787–793 67 Picó B., Díez M. J. and F. Nuez (1996). Viral diseases causing the greatest economic losses to the tomato crop. II. The Tomato yellow leaf curl virusa review. Scientia Horticulturae. 67(34). pp. 151196 68 Purcifull D.E. and E. Hiebert (1982). Tobacco etch virus. Descriptions of Plant Viruses Retrieved on 10 November 2017 at http://www.dpvweb.net/dpv/showdpv.php?dpvno=258 69 Quiñones M., D Fonseca, G P Acotto, Y Martínez (2002). Viral infection associated with the presence of Begomoviruses in pepper plants in Cuba. Plant Disease. 86(2). pp. 73 70 Rashid M. H., K. M. Khalequzzaman, M. S. Alam, S. A. Uddin and S. K. Greenn (2007). Screening of different sweet pepper lines against Cucumber mosaic virus and Chili veinal mottle virus, Int. J. Sustain. Crop Prod. 2(3). pp. 14 71 Ravi K. S., J. Joseph, N. Nagaraju, P. S. Krishna, H. R. Reddy and H. S. Savithri (1997) Characterization of Pepper vein banding virus from chili pepper in India. Plant Disease. 81(6). pp. 673 676 156 72 Rochester D. E., W. Kositratana and R. N. Beachy (1990). Systemic movement and symptom production following agroinoculation with a single DNA of tomato yellow leaf curl geminivirus (Thailand). Virology 178. . pp. 520526 73 Rybicki (1994). A phylogenetic and evolutionary justification for three genera of Geminiviridae."Archives of Virology . 139(12). pp. 4977 74 Sarkar K. and K. Kulshreshtha (1978). Crotalaria striata DC. a new natural host of bean common mosaic virus. Current Science. 47(7). pp. 241 75 Shih S. L., W. S. Tsai, S. K. Green (2003). Molecular characterization of tomato and chilli leaf curl begomoviruses from Pakistan. Plant Disease 87. pp. 200 76 Shih S. L., W. S. Tsai, L. M. Lee, J. T. Wang, S. K. Green, and L. Kenyon (2010). First Report of Tomato yellow leaf curl Thailand virus Associated with Pepper Leaf Curl Disease in Taiwan First Report of Tomato yellow leaf curl Thailand virus Associated with Pepper Leaf Curl Disease in Taiwan. Volume 94, Number 5. pp. 637 77 Stanley J., D M. Bisaro, R. W. Briddon, J. K. Brown, C. M. Fauquet, B D. Harrison, E P Rybicki and D C Stenger (2005) Geminiviridae In: Virus Taxonomy. VIIIth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. (C.M Fauquet, M.A Mayo, J Maniloff, U Desselberger and L.A Ball, eds). London, UK: Elsevier/Academic Press. pp. 301 326 78 Varma A and V. G. Malathi (2003). Emerging geminivirus problems: A serious threat to crop production. Annals of Applied Biology. 142(2). pp. 145164 79 Wang M. Qi and A. J. Cutler (1993). A simple method of preparing plant samples for PCR. Nucleic Acids Research. 21(17). pp. 41534154 80 Wang T C., R D. Cardiff, L. Zukerberg, E. Lees , A. Arnold and E V. Schmidt (1994). Mammary hyperplasia and carcinoma in MMTVcyclin D1 transgenic mice. US National Library of Medicine National Institutes of Health . 369 (6482). pp. 669 671 81 Wetter C., M Conti, D Altschuh, R Tabillion, M H V Regenmortel (1984). Pepper mild mottle virus, a tobamovirus infecting pepper cultivars in Sicily. Phytopathology. 74(4). pp. 405410 157 82 Wijs J. (1973). Pepper veinal mottle virus in Irovy Coast. Netherlands Journal of Plant Pathology.79(5). pp. 189 – 193 83 Yoon J. Y., S. K. Green, A. T. Tschanz, S. C. S. Tson and L. C. Chang (1990). Pepper improvement for the tropics: problems and the AVRDC approach, In: Tomato and Pepper production in the tropics. Asian Vegetable Research and Development Center, Tainan, Taiwan. pp. 8698 84 Zhang C., Wege and H Jeske (2001) Movement proteins (BC1 and BV1) of Abutilon mosaic geminivirus are cotransported in and between cells of sink but not of source leaves as detected by green fluorescent protein tagging. Virology. 290(2) . pp. 249260 85 Zhang D. Y., Y. Liu, C. R. Zhuang, W. S. Tsai, S. L. Shih, L. M. Lee, J. T. Wang and S K Green (2006) Survey for virusesparticularly begomovirses infecting pepper crops in China. Agricultural Science and Technology. 7(4). pp. 24 158 ... TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hà Thị Thủy Tên Luận văn: Chẩn đốn và đặc điểm sinh học của Begomovirus hại ớt Ngành: Bảo Vệ Thực Vật Mã số: 8.62.01.12 Tên cơ sở đào tạo: Viện khoa học nơng nghiệp Việt Nam; Học viện Nơng nghiệp Việt...BỘ NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NƠNG THƠN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VN VIỆN KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP VN HÀ THỊ THỦY CHẨN ĐỐN VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA BEGOMOVIRUS HẠI ỚT Ngành Mã số : Bảo vệ thực vật : 8.62.01.12... sinh học, đặc biệt là phổ ký chủ của virus vẫn chưa được nghiên cứu Dựa trên cơ sở khoa học và thực tiễn trên, chúng tơi tiến hành thực hiện đề tài: Chẩn đốn và đặc điểm sinh học của Begomovirus hại ớt ” 1.2.