Nhân nhanh giống hoa thu hải đường (Begonia Tuberous) bằng phương pháp nuôi cấy mô lá và kỹ thuật trồng, chăm sóc hoa thương phẩm nhằm đáp ứng nhu cầu hiện nay của các cơ sở kinh doanh hoa chậu tại thành phố Đà Lạt.
26(3): 56-63 9-2004 Tạp chí Sinh học NHÂN NHANH GIốNG HOA THU HảI đờng (begonia tuberous) phơng pháp nuôi cấy mô kỹ thuật trồng, chăm sóc hoa thơng phẩm đinh văn khiêm, lê thị nh lan, dơng nhựt Phân viện Sinh học Đà Lạt mai xuân lơng Trờng đại học Đà Lạt Trong số nhiều loại hoa nhập nay, hoa thu hải đờng (Begonia tuberous) (THĐ) (họ Thu hải đờng Begoniaceae) loại hoa đợc a chuộng vẻ đẹp màu sắc hình dáng nh độ bền hoa Tuy nhiên, để có đợc giống hoa này, ngời ta phải nhập hạt giống với giá thành cao, thời gian gieo kéo dài (2-3,5 tháng), tỷ lệ nảy mầm thấp nên THĐ cha đợc trồng phổ biến số lợng giống ít, giá thành lại cao Cây THĐ loại hoa phân bố rộng vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Trung Mỹ, Nam Mỹ, châu Âu châu Phi Hoa THĐ đợc dùng làm hoa trồng vờn, chậu hoa cắm bình Đ có số tác giả nghiên cứu vi nhân giống số loại THĐ [1] Bằng phơng pháp nuôi cấy mẫu ban đầu từ lá, nhân nhanh lợng lớn THĐ, đáp ứng đợc nhu cầu sở kinh doanh hoa chậu thành phố Đà Lạt I phơng pháp nghiên cứu Vật liệu Đối tợng nghiên cứu loài hoa thu hải đờng (Begonia tuberous) Mẫu nuôi cấy ban đầu mô non mẹ khỏe mạnh, có nguồn gốc từ gieo hạt (nhập nội) Phơng pháp a) Khử trùng mẫu Các non THĐ cha trải phẳng đợc rưa s¹ch b»ng cån 70o Sau 56 đó, mẫu đợc khử trùng dung dịch 2% hypochlorit canxi (CaOCl2) 5-7 phút, đợc rửa nớc cất vô trùng Sau mẫu đ tiến hành cắt mẫu thành mảnh có kích thớc khoảng cm2 dùng làm nguyên liệu cho việc nuôi cấy b) Tái sinh mẫu ban đầu từ mô non Tiến hành thử nghiệm môi trờng 1/2MS [2] MS [2] có bổ sung nồng độ từ 0,01,0 mg/l 6-benzyladenin (BA), g/l agar, 30 g/l ®−êng độ pH môi trờng đợc điều chỉnh đến 5,8 Khi đ xác định đợc nghiệm thức có hàm lợng khoáng nồng độ BA thích hợp tiếp tục khảo sát ảnh hởng việc bổ sung thêm 0,01-0,1 mg/l axit -napthalen axetic (NAA), nhằm tìm môi trờng tối u cho việc nuôi cấy khởi đầu từ mô non THĐ Mẫu cấy đợc nuôi điều kiện chiếu sáng: 12 giờ/ngày, cờng độ chiếu sáng: 3000 lux, nhiệt độ 25oC1 c) Nhân nhanh chồi Trên sở thí nghiệm tạo mẫu ban đầu, tiếp tục khảo sát môi trờng tối u cho trình nhân nhanh chồi THĐ Tiến hành thí nghiệm môi trờng 1/2 MS MS có bổ sung 0,5-1,5 mg/l BA Trên môi trờng nghiệm thức tối u thí nghiệm trên, tiếp tục khảo sát bổ sung thêm 0,1-0,7 mg/l NAA 0,1-0,7 mg/l axit indol-3-butyric (IBA) d) Tái sinh rễ để tạo hoàn chỉnh Khảo sát khả tái sinh rễ để tạo THĐ hoàn chỉnh môi trờng 1/2 MS, có bổ sung riêng rẽ NAA IBA nồng ®é: 0,0; 0,3; 0,5; 0,7 vµ 1,0 mg/l vµ phèi hợp NAA/IBA nồng độ: 0,3/0,5; 0,3/0,7; 0,5/0,3 0,7/0,3 mg/l M«i tr−êng cã chøa 20 g/l sucroza, g/l agar 1g/l than hoạt tính Mục đích thí nghiệm nhằm xác định môi trờng tối u cho giai đoạn tái sinh rễ đ) Giai đoạn đa vờn ơm Để theo dõi tỷ lệ sống tốc độ sinh trởng sau ống nghiệm, tiến hành đa có rễ khỏe mạnh, có 3-5 chiều cao từ 3-5 cm trồng vờn ơm Đất để ơm trồng hỗn hợp gồm 70% đất mùn, 20 % tro trấu 10 % phân bò hoai, có bổ sung phân bón NPK (loại phân hiệu đầu trâu có tỷ lệ N : P : K = 16 : 16 : nhà máy phân bón Bình Điền sản xuất) vôi để có EC = 0,8-1,0, độ pH = 5,8-6,5 Điều kiện trồng: nhà ơm đợc che mát lới đen 40%, tránh nắng ma trực tiếp Giữ ẩm thờng xuyên cách tới phun sơng 2-4 lần/ngày tùy điều kiện thời tiết Giảm tối đa bốc nớc bề mặt vật liệu che chắn (nh nilông) Nhiệt độ trồng giai đoạn vờn ơm 18-20oC Thí nghiệm đợc tiến hành 100 cây, với lần lặp lại nhằm xác định tỷ lệ sống sót giai đoạn vờn ơm = 0,8 - Phân hợp chất supe 10 : : (N : P : K = 10 : : 8, Cropmaster, Mü), nång ®é: ml/lÝt (0,2%), EC = 0,8 - Grow more (N:P:K = 30:10:10, Mü), nång ®é g/lÝt (0,1%), EC = 0,8 Sư dụng ba loại phân phun tới cho tuần lần kể từ chuyển trồng chậu Mỗi lô thí nghiệm thực 30 chậu, lặp lại lần để thu kết II kết biện luận ảnh hởng hàm lợng khoáng nồng độ BA NAA lên trình nuôi cấy khởi đầu Các nghiệm thức hàm lợng khoáng nồng độ BA đợc thể bảng Các nghiệm thức khác cho kết tái sinh khác môi trờng dinh dỡng khoáng 1/2 MS, mẫu có khả tái sinh bỉ sung nång ®é BA tõ 0,5-1,0 mg/l Nång độ BA thích hợp 0,7 mg/l (nghiệm thức A4), cho tû lƯ t¸i sinh cao nhÊt (20%) Nh»m bớc đầu theo dõi khả sinh trởng phát triển THĐ giá thể, việc khảo sát ảnh hởng số loại phân bón thờng dùng đợc thực hiện: môi trờng dinh dỡng khoáng MS, mẫu có khả tái sinh bỉ sung nång ®é BA tõ 0,3- 0,7 mg/l; tiếp tục tăng nồng độ BA lên làm ức chế mẫu tái sinh Từ kết trên, chọn đợc môi trờng nuôi cấy có hàm lợng dinh dỡng khoáng 1/2MS có bổ sung 0,7 mg/l BA để tiếp tục khảo sát ảnh hởng lên trình nuôi cấy khởi đầu kết hợp với NAA nồng độ: 0,01-0,1 mg/l Khi kết hợp BA với NAA, nghiệm thức cho kết tái sinh tăng theo tỷ lệ thuận so với nồng độ NAA, nhiên tỷ lệ tái sinh tăng chậm nồng độ NAA ®¹t tíi 0,07- 0,1 mg/l ë nång ®é NAA tõ 0,01-0,03 mg/l, kết thu đợc qua trình phát sinh hình thái chồi bất định Tại nghiệm thức A12, tỷ lệ tái sinh chồi bất định cao (85,0%) Khi nồng độ NAA tiếp tục tăng lên đến 0,05-0,1 mg/l mẫu cấy tái sinh callus ®¹t cao nhÊt t¹i nghiƯm thøc A15 (cã thĨ ®¹t 95,0%) - Nitr«phètka (N : P : K = 15 : : 20, Behn Meyer, CHLB Đức), nồng độ: g/lít (0,1%), EC Nh vậy, giai đoạn nuôi cấy khởi đầu, tuỳ theo mục đích mà ta sử dụng e) Giai đoạn trồng thử nghiệm môi trờng Cây THĐ vi nhân giống sau đợc trồng vờn ơm khoảng 30 ngày, đ trở nên cứng cáp, đạt trạng thái khỏe mạnh có rễ phát triển tốt, đợc chuyển trồng thử nghiệm hai loại giá thể 100% đất mùn 100% dớn Cả hai loại giá thể đợc trộn thêm phân bón vôi, cho đạt EC = 0,8-1,0, độ pH = 5,8-6,5 57 Bảng ảnh hởng hàm lợng khoáng nồng độ BA lên mẫu cấy sau 45 ngày nuôi cấy Môi trờng 1/2MS MS Nghiệm thức BA (mg/l) Tỷ lệ mẫu tái sinh sau 45 ngày (%) A1 0,0 0,0 A2 0,3 0,0 A3 0,5 11,7 A4 0,7 20,0 A5 1,0 6,7 A6 0,0 0,0 A7 0,3 8,3 A8 0,5 16,7 A9 0,7 5,0 A10 1,0 0,0 Bảng ảnh hởng BA NAA lên khả tái sinh từ mô non THĐ sau 45 ngày nuôi cấy Nghiệm thức BA (mg/l) NAA (mg/l) Tû lƯ mÉu t¸i sinh (%) A11 0,7 0,01 56,7 Tái sinh chồi bất định A12 0,7 0,03 85,0 Tái sinh chồi bất định A13 0,7 0,05 91,7 T¸i sinh callus A14 0,7 0,07 93,3 T¸i sinh callus A15 0,7 0,10 95,0 Tái sinh callus Kết phát sinh hình thái loại môi trờng nuôi cấy để thu đợc sản phẩm chồi bất định (nghiệm thức A12) callus (nghiệm thức A15) ảnh hởng phối hợp môi trờng dinh dỡng khoáng kết hợp với nồng độ BA, NAA IBA lên khả tạo cụm chồi Để tiếp tục khảo sát, tiến hành tạo callus b»ng m«i tr−êng cđa nghiƯm thøc A15 (1/2MS cã bỉ sung 0,7 mg/l BA, 0,1 mg/l NAA) Khi đạt số lợng callus cần thiết tiến hành cấy chuyền lên môi trờng tái sinh chồi Chồi đợc hình thành ngẫu nhiên môi trờng chất kích thích sinh trởng sau 45-60 ngày nuôi cấy Từ đây, chồi đợc dùng làm nguyên liệu để khảo sát giai đoạn nhân nhanh chồi dùng để tái sinh rễ tạo hoàn chỉnh Tiến hành khảo sát ảnh hởng hàm lợng dinh dỡng khoáng nồng độ BA lên khả nhân nhanh cụm chồi THĐ Các nghiệm thức đợc bố trí nh bảng Mẫu nuôi cấy môi trờng 1/2MS sinh trởng so với môi trờng MS Trên môi trờng dinh dỡng khoáng 1/2MS, số chồi cao nghiệm thøc B3 (12 chåi) nh−ng chåi nhá vµ yÕu; chåi xanh tèt t¹i nghiƯm thøc B2 nh−ng sè chåi thÊp (8 chồi) Trên môi trờng MS, số chồi đạt cao nhÊt (16 chåi) t¹i 58 nghiƯm thøc B6 nh−ng chåi nhá vµ u; nghiƯm thøc B5 cho sè chồi (14 chồi) nhng xanh tốt, đợc chọn làm nguyên liệu cho thí nghiệm sau Bảng ảnh hởng hàm lợng dinh dỡng khoáng BA tới khả nhân nhanh chồi THĐ Môi trờng 1/2MS MS Nghiệm thức BA (mg/l) Chiều cao trung b×nh chåi (cm) Sè chåi trung b×nh/b×nh chåi B1 0,5 2,5±0,05 5±0,1 B2 1,0 2,8±0,05 8±0,1 B3 1,5 2,6±0,05 12±0,1 B4 0,5 2,7±0,05 8±0,1 B5 1,0 2,9±0,05 14±0,1 Chåi xanh tèt B6 1,5 2,3±0,05 16±0,1 Chåi nhá Ghi chó Chåi xanh tèt Chåi nhá T¹i nghiƯm thøc B5, chiỊu cao trung bình chồi đạt cao (2,9 cm) Dựa vào nghiệm thức để khảo sát ảnh hởng NAA IBA lên khả tạo chồi Các nghiệm thức đợc bố trí nh bảng BA với 0,3 mg/l NAA cho số chồi cao (đạt 25 chồi/bình) Ngoài chồi lớn thu đợc, cấy tạo rễ thu đợc thêm lợng cụm thể chồi nhỏ dùng làm nguyên liệu để tiếp tục nhân nhanh Các kết cho thấy việc phối hợp BA NAA (ở nghiệm thức B7-B10) cho kết nhân chồi nh số vỊ chiỊu cao cđa chåi, tû lƯ t¹o thĨ chåi cao nghiệm thức kết hợp BA IBA (nghiƯm thøc B11-B14) T¹i nghiƯm thøc B8, phèi hợp 1,0 mg/l ảnh hởng NAA IBA đến khả rễ THĐ Tiếp tục khảo sát ảnh hởng NAA IBA đến khả rễ chồi thu đợc từ nghiệm thức B8 Các nghiệm thức đợc bố trí nh b¶ng B¶ng ¶nh h−ëng cđa BA kÕt hợp với NAA IBA lên khả nhân nhanh chồi THĐ KTST Số chồi bình Tỷ lƯ t¹o thĨ chåi (%) BA (mg/l) NAA (mg/l) IBA (mg/l) ChiỊu cao trung b×nh chåi (cm) B7 1,0 0,1 0,0 3,1±0,2 17±0,1 75 B8 1,0 0,3 0,0 3,3±0,2 25±0,1 97 B9 1,0 0,5 0,0 3,2±0,2 22±0,1 98 B10 1,0 0,7 0,0 2,9±0,2 20±0,1 100 B11 1,0 0,0 0,1 2,9±0,2 15±0,1 73 B12 1,0 0,0 0,3 3,1±0,2 20±0,1 85 B13 1,0 0,0 0,5 3,0±0,2 19±0,1 87 B14 1,0 0,0 0,7 2,9±0,2 17±0,1 86 NghiƯm thøc Ghi chó Chåi xanh, mËp 59 Bảng ảnh hởng NAA IBA đến khả rễ THĐ KTST NAA (mg/l) IBA (mg/l) Tû lƯ mÉu t¹o rƠ (%) C1 0,0 0,0 27 1-2 C2 0,3 0,0 65 1-3 C3 0,5 0,0 89 4-7 C4 0,7 0,0 92 5-10 C5 1,0 0,0 95 6-11 C6 0,0 0,3 32 1-2 C7 0,0 0,5 49 1-4 C8 0,0 0,7 75 3-5 C9 0,0 1,0 79 3-9 C10 0,5 0,3 100 15-20 C©y xanh tốt C11 0,7 0,3 100 12-17 Cây vàng, yếu C12 0,3 0,5 95 5-12 C13 0,3 0,7 97 4-9 Nghiệm thức Tỷ lệ rễ số lợng rễ/mẫu tăng dần theo nồng độ NAA IBA sử dụng riêng lẻ; nhiên, nồng độ nh (mg/l), tác dụng NAA lên khả rễ mẫu cấy mạnh tác dụng IBA Khi sử dụng phối hợp NAA IBA, đ tăng đợc đáng kể số lợng rễ/mẫu nh tû lƯ mÉu t¹o rƠ Tû lƯ mÉu t¹o rƠ cao nghiệm thức C10 C11, đạt 100 % mẫu rễ sau 45 ngày nuôi cấy; số lợng rễ/mẫu hai nghiệm thức đạt cao Tuy nhiên, nghiệm thức C11, vàng yếu nghiệm thức C10, cho kết tốt nhất, khỏe, xanh tốt rễ khỏe, thích hợp cho giai đoạn khảo sát trồng vờn ơm Số lợng rễ/cây Ghi Giai đoạn trồng vờn ơm Cây THĐ in vitro cao từ 3-5 cm, có đủ thân, lá, rễ, khỏe mạnh, đợc rút khỏi ống nghiệm, rửa môi trờng bám quanh gốc trồng giá thể đất mïn víi ®é pH b»ng 5,8-6,5, EC = 0,8-1,0 Khi trồng, gốc ngập sâu giá thể 0,5-1,0 cm Cây đợc tới giữ ẩm 2-4 lần/ngày, tùy điều kiện thời tiết giảm thiểu khả nớc điều kiện nhà kính Kết thu đợc sau 30 ngày nh bảng Kết bảng cho thấy khả sống THĐ in vitro, đa cao, tỷ lệ sống đạt tới 95%: giai đoạn từ 1-10 10-20 ngày tuổi, Bảng Khả sinh trởng THĐ giai đoạn vờn ơm 60 Thời gian (ngày) Tỷ lệ sống (%) Chiều cao (cm) Số trung bình/cây (lá) 10 99 4,80,1 40,1 20 95 5,10,1 50,1 30 95 5,50,1 60,2 bắt đầu thích nghi với môi trờng bên nên tăng trởng chậm, thêm giai đoạn từ 20-30 ngày tuổi, bắt đầu tăng trởng chiều cao (5,5 cm) số trung bình (6 lá) Mặc dù tăng trởng giai đoạn không lớn so với giai đoạn trớc, nhiên giai đoạn có khác biệt rõ nét hình thái, thể qua khỏe mạnh, cứng cáp, có nhiều rễ màu xanh đậm Lúc này, đ đủ tiêu chuẩn để trồng chậu trồng đồng ruộng ảnh hởng kết hợp giá thể trồng phân bón giai đoạn trồng chậu Trong khảo sát này, bố trÝ hai thÝ nghiƯm ThÝ nghiƯm lµ sù kÕt hợp giá thể mùn phân bón, nghiệm thức đợc bố trí nh bảng Thí nghiệm kết hợp giá thể dớn phân bón, nghiệm thức đợc bố trí nh bảng Kết thu đợc nghiệm thức thể bảng Bảng ảnh hởng giá thể mùn phân bón lên trình sinh trởng phát triển THĐ Loại phân bón giá thể đất mùn Nitrôphốtka Grow more Supe Thời gian (tuần) Chiều cao (cm) Diện tích (cm2) Số cành hoa/cây (cành) Số hoa/cành (hoa) Thời gian hoa (tuÇn) 12 18 12 10,8±0,1 13,2±0,1 16,5±0,1 12,3±0,1 16,7±0,1 39,1±0,2 96,5±0,2 95,3±0,2 45,5±0,2 107,4±0,2 0 0 0 10 0 0 14 0 18 12 18 18,2±0,1 11,7±0,1 14,1±0,1 17,2±0,1 105,7±0,2 44,2±0,2 98,6±0,2 102,1±0,2 0 0 16 0 15 B¶ng ảnh hởng giá thể dớn phân bón lên trình sinh trởng phát triển THĐ Loại phân bón giá thể dớn Thời gian (tuần) Chiều cao (cm) Diện tích (cm2) Số cành hoa/cây (cành) Số hoa/cành (hoa) Thời gian hoa (tuần) Nitr«phètka 12 8,9±0,1 11,7±0,1 31,2±0,2 93,5±0,2 0 0 0 18 12 18 12 13,1±0,1 10,3±0,1 13,7±0,1 16,2±0,1 10,1±0,1 12,5±0,1 91,3±0,2 42,5±0,2 103,4±0,2 100,7±0,2 41,2±0,2 95,1±0,2 0 0 0 0 15 0 18 0 18 14,2±0,1 97,3±0,2 16 Grow more Supe 61 Trong suốt trình sinh trởng phát triển, THĐ đợc trồng đất mùn phát triển tốt hơn, thể hiƯn qua chiỊu cao cđa c©y so víi chiỊu cao trồng giá thể dớn, chiều cao tăng từ 2-5 cm tùy giai đoạn phát triển Giá thể đất mùn có tác động thuận lợi cho THĐ giá thể dớn; tổng số nh diện tích tăng Diện tích tăng từ 5-10 cm2, số nhiều từ 2-3 Tại tất thời điểm theo dõi, nghiệm thức bón phân Grow more có số đo chiều cao cây, diện tích lớn hai loại phân lại nhng dạng cao, yếu ớt, đốt thân kéo dài, có màu xanh nhạt dễ bị ảnh hởng, điều kiện môi trờng thay đổi Lô bón nitrôphốtka có chiều cao diện tích nhỏ nhng khỏe mạnh, cứng cáp, khó bị ng đổ, có màu xanh đậm, thích nghi tốt với thay đổi điều kiện môi trờng bên thời tiết khí hậu nh: nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng Số lợng cành hoa nghiệm thức dùng phân bón nitrôphốtka chậu nh số lợng hoa cành nhiều nhất, màu sắc hoa sáng đẹp, độ bền hoa lâu thời gian hoa sớm nghiệm thức khác (14 tuần) III kết luận Từ kết thu đợc, đa quy trình nhân trồng giống hoa THĐ nh sau: Giai đoạn nuôi cấy khởi đầu: sử dụng môi trờng tái sinh chồi bất định môi trờng 1/2MS, có bổ sung 0,7 mg/l BA 0,03 mg/l NAA môi trờng tái sinh callus môi trờng 1/2MS có bổ sung 0,7 mg/l BA vµ 0,1 mg/l NAA Giai đoạn nhân nhanh chồi: sử dụng môi trờng MS, có bỉ sung mg/l BA vµ 0,3 mg/l NAA Giai đoạn tái sinh rễ, tạo hoàn chỉnh, sử dơng m«i tr−êng 1/2MS, cã bỉ sung 0,5 mg/l NAA 0,3 mg/l IBA Giai đoạn sau ống nghiệm: THĐ sinh trởng phát triển tốt giá thể đất mùn Phân bón thích hợp THĐ giai đoạn sau ống nghiệm loại phân bón có hàm lợng N thích hợp K2O cao Loại phân giúp cho sinh trởng phát triển tốt, nâng cao chất lợng sản phẩm thu hoạch tài liệu tham khảo Parthasarathy V A., Bose T K and Das P., 2000: Biotechnology of Horticultural Crops, 3: 271-272 Murashige T and Skoog F., 1962: Physiol Plant, 15: 473-479 RAPID MICROPROPAGATION OF BEGONIA TUBEROUS by YOUNG LEAF TISSUE culture AND ACCLIMATIZATION IN GREENHOUSE Dinh Van Khiem, Le Thi Nhu Lan, Duong Tan Nhut, Mai Xuan Luong Summary In this paper, the protocol for the rapid micropropagation of Begonia tuberous are presented The shoot regeneration was carried out on 1/2MS medium, plus 0.7 mg/l BA and 0.03 mg/l NAA Furthermore, the callus formation was obtained on 1/2MS medium supplemented with 0.7 mg/l BA and 0.1 mg/l NAA For the shoot multiplication, single shoots were cultured on MS medium, plus mg/l BA and 0.3 mg/l NAA The root formation was obtained on 1/2MS medium, plus 0.5 mg/l NAA and 0.3 mg/l IBA To increase the growth and development possibility of Begonia tuberous in the greenhouse, we can use some chemical fertilizers (nitrophoska, Grow more, super) at a suitable dosage Ngµy nhËn bµi: 6-5-2003 62 Cây hoa thu hải đờng sinh trởng phát triĨn èng nghiƯm vµ trång ngoµi nhµ kÝnh (a-f) (a)Tạo callus từ mô non môi trờng 1/2 MS bỉ sung 0,7 mg/l BA vµ 0,1 mg/l NAA sau 45 ngày nuôi cấy; (b) Cụm chồi THĐ môi trờng MS có bổ sung mg/l BA 0,3 mg/l NAA sau 75 ngày nuôi cấy; (c) Cây THĐ in vitro môi trờng 1/2 MS cã bỉ sung 0,5 mg/l NAA vµ 0,3 mg/l IBA sau 45 ngày nuôi cấy; (d) Cây THĐ in vitro sau 30 ngày trồng giá thể đất mùn vỉ xốp; (e) Cây THĐ in vitro 11 tuần tuổi kÓ tõ chuyÓn tõ vØ xèp chËu nhà kính; (f) Cây THĐ in vitro 14 tuần tuổi trång nhµ kÝnh 63 ... trình nhân trồng giống hoa THĐ nh sau: Giai đoạn nuôi cấy khởi đầu: sử dụng môi trờng tái sinh chồi bất định môi trờng 1/2MS, có bổ sung 0,7 mg/l BA 0,03 mg/l NAA môi trờng tái sinh callus môi... Cây hoa thu hải đờng sinh trởng phát triển ống nghiệm trồng nhà kính (a-f) (a)Tạo callus từ mô non môi trờng 1/2 MS bỉ sung 0,7 mg/l BA vµ 0,1 mg/l NAA sau 45 ngày nuôi cấy; (b) Cụm chồi THĐ môi... dinh dỡng khoáng nồng độ BA lên khả nhân nhanh cụm chồi THĐ Các nghiệm thức đợc bố trí nh bảng Mẫu nuôi cấy môi trờng 1/2MS sinh trởng so với môi trờng MS Trên môi trờng dinh dỡng khoáng 1/2MS,